核心蛋白多糖对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的探讨核心蛋白多糖(Decorin)对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系,为药物防治后发性白内障提供新的选择。方法 MTT比色法分别测定不同浓度的Decorin(0.1mg·L-1、1.0mg·L-1、10.0mg·L-1)作用于LEC不同时间后的细胞生长抑制率;采用流式细胞技术测定细胞周期,用ELISA法检测各组培养液上清中TGF-β的水平,RT-PCR测定TGF-βmRNA的表达,免疫细胞化学观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。结果 ELISA示每100万个细胞中对照组TGF-β含量为(427.24±41.34)ng,0.1mg·L-1、1.0mg·L-1和10.0mg·L-1Decorin组TGF-β的含量分别为(236.01±28.63)ng、(117.86±18.14)ng、(111.72±26.72)ng,与对照组比较差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。MTT比色法实验结果显示,作用24h对照组抑制率为(3.62±1.34)%,0.1mg·L-1、1.0mg·L-1和10.0mg·L-1Decorin组抑制率分别为(4.14±2.08)%、(12.93±2.47)%、(23.47±1.78)%,LEC生长抑制率增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);随着Decorin作用时间延长,生长抑制率增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。随药物浓度及作用时间延长,LEC出现明显的G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞所占比例明显升高(P<0.05)。RT-PCR示Decorin组TGF-βmRNA表达明显减少,与MTT法检测结果呈现大致相同的趋势,免疫细胞化学观察,对照组α-SMA表达较多,细胞肥大,细胞质呈棕色,Decorin组α-SMA较少表达。Decorin表现出明显的抑制作用。结论 Decorin对LEC有抑制增生和诱导凋亡作用,且呈明显的剂量-效应与时间-效应关系,可望成为后发性白内障的防治药物。     

核心蛋白多糖对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用

背景 研究发现,白内障囊外摘出术后组织修复反应可诱导房水中活性转化生长因子β(TGF-β)的增加,残留的晶状体上皮细胞(LECs)移行、分化,细胞外基质沉积,引起上皮-间质转化,导致后囊膜混浊(PCO)的发生.寻求有效的抑制LECs增生的药物对于临床上防治PCO的发生具有重要意义. 目的 探讨核心蛋白多糖( decorin)对兔LECs增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系. 方法 兔LECs细胞株进行培养和传代,将处于指数生长期的细胞以8×106个/L密度接种于96孔板,将0.1、1.0、10.0 mg/Ldecorin分别加入培养基中培养24、48、72 h,加入体积分数0.1％ DMSO培养的细胞为阳性对照组,常规培养基培养的细胞为空白对照组.MTT比色法分别测定不同质量浓度的decorin作用于LECs不同时间后的细胞生长抑制率;采用流式细胞技术测定各组细胞的细胞周期,用ELISA法检测各组培养液上清中TGF-β的水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-βmRNA在LECs中的表达,免疫细胞化学法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 ELISA检测结果表明,各组培养基上清液中TGF-β表达量的差异有统计学意义(F=39.24,P=0.03),不同质量浓度组TGF-β水平均明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),1.0 mg/L、10.0 mg/L decorin组TGF-β水平均明显低于0.1 mg/L decorin组(P＜0.05).MTT比色法结果显示,≥1.0 mg/L decorin组LECs增生的抑制率明显高于空白对照组,各质量浓度decorin组药物作用48 h和72 h后LECs增生的抑制率明显高于24 h的值,药物作用72 h后LECs增生的抑制率明显高于48 h的值,差异均有统计学意义(P＜0.05),各质量浓度decorin组G0/G1期LECs所占比例均较空白对照组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示,TGF-β mRNA的表达随着decorin质量浓度的升高而降低.免疫组织化学染色表明,10.0 mg/L decorin组α-SMA在LECs中的表达明显弱于空白对照组. 结论 Decorin可以抑制LECs的增生,也可以诱导LECs凋亡,其效应呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为最具潜力的防治PCO的药物之一.     

原代培养兔晶状体上皮细胞的环境和细胞状态的变化

目的:探讨体外原代培养的兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)分泌活性转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和异常表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的状况变化方法:体外原代培养兔眼LEC,当细胞接近融合时转板培养,观察细胞转板培养后1,6,12d的状态变化,并采用ELISA法检测各时项培养液上清中TGF-β1的水平,免疫细胞化学和计算机图像分析统计各时项细胞中α-SMA的表达水平。结果:转板培养12d的细胞活性TGF-β1的水平明显高于转板培养1和6d的水平(均P<0.05),同时转板培养12d的细胞表达α-SMA的水平分别明显高于转板培养1和6d的水平(P<0.05);而且α-SMA的表达量随着TGF-β1水平的升高而升高,两者高度正相关(r=0.995,P<0.01)。结论:原代培养的LEC活性TGF-β1逐渐增多,向表达有α-SMA的肌成纤维细胞转分化。     

年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中bFGF、α-SMA的表达及临床意义

目的探讨年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达及临床意义。方法选取2010年3月至2011年10月在本院治疗的年龄相关性白内障患者43例(79眼),根据白内障类型分为核性白内障组(A组)及皮质性白内障组(B组)。应用免疫组化检测两组患者LEC中α-SMA及bFGF的表达,并对结果进行比较。结果 bFGF在A组LEC中呈强阳性表达,在B组中呈阳性表达;α-SMA在A组LEC中呈阳性表达,在B组呈弱阳性表达。A组LEC中bFGF、α-SMA的阳性表达率分别为60.0%、35.0%,B组分别为35.1%、20.3%,A组均显著高于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论α-SMA及bFGF在不同类型白内障的表达不同,对了解白内障发生机制及指导临床治疗具有重要的意义。     

多聚赖氨酸-乙二胺四乙酸交联物抑制兔晶状体上皮细胞生长的研究

背景后囊膜混浊（PCO）是现代白内障囊外摘出术后引起视力下降的主要原因。研究证实多聚赖氨酸-乙二胺四乙酸（EDTA）交联物（PLE）能够降低兔PCO的发生率。目的研究PLE对体外培养的兔晶状体上皮细胞（LECs）生长的抑制作用及有效药物浓度。方法取3月龄新西兰白兔晶状体前囊膜进行体外植块培养获得兔LECs并进行传代,取第2～3代传代培养的LECs消化后按1×10^5个／ml密度接种于96孔培养板中。在培养皿中加入12．5、25．0、50．0、100．0μmol／L的PLE,培养皿中加入DMSO培养液作为对照组。PLE作用48h用MTT比色法测定PLE对兔LECs增生的抑制作用并计算各浓度PLE组的吸光度（A490）值及其抑制率。结果≤25．0μmol／LPLE组可见细胞生长及形态改变不明显。≥50．0μmol／LPLE各组可见细胞生长及形态有明显改变,增生缓慢,生长差,数量减少,贴壁能力减弱。12．5、25．0、50．0、100．0μmol／L的PLE组LECs的A490值分别为0．278±0．013、0．266±0．028、0．260±O．022和0．247±0．012,均明显低于DMSO对照组的O．311±0．038（P=0．035、0．011、0．009、0．013）,且呈明显的剂量一效应依赖关系。12．5、25．0、50．0、100．0μmol／LPLE组对兔LECs的抑制率分别为10．61％、14．47％、16．40％和20．58％。结论PLE可以浓度依赖的方式抑制兔LECs的生长,可为临床筛选出防治PCO的药物提供依据。     

TGFβ和bFGF对晶状体上皮细胞的转分化作用

晶状体上皮细胞的转分化是后发性白内障和前囊下白内障的主要病理改变.目前研究发现有多种调控因素参与晶状体上皮细胞转分化的发生发展过程,其中转化生长因子β(TGFβ)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等生长因子在此过程中起着至关重要的作用,另外细胞外基质等一些因素也与之密不可分.本文就近年来关于TGFβ和bFGF对晶状体上皮细胞的转分化作用、两者的协同作用的研究作一综述.     

CTGF作用于体外培养牛晶状体上皮细胞的研究

目的观察结缔组织生长因子（CTGF）在体外培养牛晶状体上皮细胞（LECs）迁移和转分化中的作用。方法将体外培养的第2～3代牛LECs分为对照组和实验组,实验组分别经0.1×10^6、0.5×10^6、1.0×10^6ng/LCTGF处理24h后,采用半定量RT-PCR和Westernblot技术检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA以及蛋白表达的变化。迁移实验中,利用transwell小室对LECs的移行能力进行检测。结果与空白对照组相比,CTGF能够明显促进α-SMAmRNA以及蛋白的表达（F=66.56,P〈0.01;F=65.43,P〈0.01）。迁移实验发现,CTGF能够促进LECs的移行,与空白对照组相比差异有统计学意义（t=51.7,P〈0.01）。结论CTGF以剂量依赖的方式促进牛LECs的分化和迁移,可能在后囊膜混浊（PCO）的LECs移行、转分化以及细胞外基质沉积的过程中发挥重要作用。     

Lumican及其在晶状体上皮细胞的上皮间质转分化中的作用

Lumican是在全身多种组织中广泛表达的一种蛋白质,在细胞增殖迁移分化及组织修复中起着重要作用。Lumican在晶状体上皮细胞（LECs）发生上皮间质转分化（EMT）中大量表达,并具有时间依赖性,有可能对该过程起着关键的调控作用。如果Lumican缺失,则LECs的上皮间质转分化受到明显抑制,从而对抑制后发性白内障的发生具有重要的意义。因此如何调控Lumican的表达已成为研究的热点,例如通过抑制转化生长因子p2的途径下调Lumican表达已被证实是调控的途径之一。但目前有关Lumican调控的研究大多集中于肿瘤和角膜,在LECs上皮间质转分化的调控作用靶点及如何量化还需要进一步研究。     

8-氯腺苷对抑制人晶状体上皮细胞增生的体外研究

目的探讨8-氯腺苷(8-chloroadenonosine)是否对体外培养的晶状体上皮细胞增生有抑制作用。方法取第2、3代传代培养的晶状体上皮细胞做药物抑制试验。加入不同浓度的8-氯腺苷(2,4,8,16μmol/L)作用24、48、72和96小时后,用MTT比色测定法和流氏细胞仪检测法确定药物对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用。结果 8-氯腺苷在4-16μmol/L的浓度下能抑制晶状体上皮细胞的增生。并且其抑制程度呈时间、剂量依赖性。结论该结果可为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

葡萄糖浓度对培养的兔晶状体上皮细胞的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖培养基对培养的兔晶状体上皮细胞形态、生长状态、细胞分化及TGF-β 2表达的影响.方法：以4.5,9,18和36g/L葡萄糖培养基处理原代培养的第2代兔晶状体上皮细胞,MTT法检测细胞生长状态,免疫组化法检测TGF-β2,α-SMA及PCNA.结果：相对于4.5g/L葡萄糖培养基,高浓度葡萄糖培养基可增强晶状体上皮细胞α-SMA与TGF-β 2的表达,而PCNA的表达无明显差异;MTT所反映的细胞生长状态呈下降趋势.结论：高浓度葡萄糖培养基可促进晶状体上皮细胞分化,对细胞的增殖有抑制作用,在此过程中TGF-β 2可能发挥着重要的作用.     

tTG小干扰RNA对人晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质沉积的抑制作用

目的探讨RNA干扰抑制组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,tTG)的表达对人转化生长因子β2(transforming growth factor-beta2,TGF-β2)诱导的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)转分化和细胞外基质沉积的抑制作用。方法设计并合成针对tTG的3对小干扰RNA(siRNA):tTG-siRNA-1、tTG-siRNA-2、tTG-siRNA-3,用Real-time PCR和Western blot检测转染了siR-NA后HLE-B3细胞表达tTG mRNA和tTG蛋白的变化。然后将体外培养的HLE-B3细胞分为正常对照组、TGF-β2组和TGF-β2+siRNA组。48h后,用Western blot检测各组tTG、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronec-tin,FN)和Ⅳ型胶原(collagenⅣ,Col-Ⅳ)的表达。结果转染tTG-siRNA-1、tTG-siRNA-2、tTG-siRNA-348h后,tTG mRNA的表达分别下降为空白对照组的46.60%、12.84%、66.75%(均为P<0.05);tTG蛋白的表达量分别下降为空白对照组的60.49%、27.87%、55.91%(均为P<0.01)。Real-time PCR与Western blot检测结果一致显示了tTG-siRNA-2对tTG基因的抑制效果最佳。与正常对照组相比,TGF-β2组中tTG、α-SMA、FN、Col-Ⅳ的表达量均明显增加(均为P<0.01);与TGF-β2组相比,TGF-β2+tTG-siRNA-2组中tTG、α-SMA、FN、Col-Ⅳ的表达量均明显减少(均为P<0.01)。结论靶向tTG的siRNA可以显著降低tTG的表达水平,同时可以明显抑制TGF-β2诱导的HLE-B3细胞合成α-SMA、FN、Col-Ⅳ。提示tTG是介导TGF-β2诱导人LEC转分化和细胞外基质沉积的重要分子。     

TGF-β2对晶状体上皮细胞增生和上皮间质转分化的实验研究

目的探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对晶状体上皮细胞(LECs)增生和上皮间质转分化的影响。方法体外培养的人LECs株HLE-B3,加入不同质量浓度的TGF-β2进行处理,分别采用MTT法测定其对细胞增生的影响;采用PI细胞周期染色分析检测细胞周期的改变;应用Western blot及免疫荧光分别检测connexin43、fibronectin及integrinβ1等转分化相关蛋白表达的变化。结果经TGF-β2处理后的细胞增生受到抑制,呈TGF-β2质量浓度和时间依赖性;细胞周期中S期细胞的比例明显降低;connexin43表达随TGF-β2处理时间的增加而逐渐降低,fibronectin及integrinβ1的表达则随TGF-β2处理时间的增加而逐渐上升。结论TGF-β2抑制了LECs的增生,显著下调LECs connexin43的表达,促进了细胞外基质的过度沉积,对后发性白内障的防治具有一定的应用前景。     

MTT比色法检测苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响

目的研究苦参碱对体外培养的兔晶状体上皮细胞增生的影响,探索白内障术后晶状体后囊浑浊的治疗药物。方法取第2代对数生长期的兔晶状体上皮细胞,培养24h后,加入不同浓度的苦参碱(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mg/mL)作用24h后,采用MTT法观察苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响。结果苦参碱随着浓度的增加,其抑制兔晶状体上皮细胞增生的作用逐渐增强,增生抑制率的升高呈现明显的剂量依赖性。结论苦参碱能有效抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞增生,在防止白内障术后晶状体后囊浑浊方面有一定的应用前景。     

骆驼蓬总碱及其脂质体对兔晶状体上皮细胞的抑制作用

探讨骆驼蓬总碱及其脂质体对兔后囊混浊形成的影响。方法 用改良冻融法制备ＬＴＡＨ。１０只健康纯种新西兰白兔分别每眼行晶状体囊外摘出术并分别注入０．１ｍｌ浓度为０．２ ＴＡＨ及ＬＴＡＨ。观察术后后囊,手术前后眼压,角膜内皮细胞,视网膜电图及组织病理学变化。     

5-Fu纳米毫微粒的制备及体外对晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的制备5氟尿嘧啶(5fluorouracil,5Fu)聚乳酸纳米毫微粒并观察其表征及体外对兔晶状体上皮细胞的抑制作用。方法采用复乳法制备5Fu聚乳酸纳米毫微粒,观察毫微粒的大小、表面形态和结构,毫微粒载药率和体外药物释放曲线。取传3代晶状体上皮细胞进行对比试验,设5Fu纳米毫微粒、5Fu原药、空载纳米毫微粒组、空白对照组。设0.5～62.5mg·L-14个剂量组,作用24h、72h、120h、168h后光镜下观察细胞性状,MTT法检测抑制作用。结果(1)制备的5Fu纳米毫微粒平均粒径(191.000±0.202)nm;载药率为8.1%;首日药物突释率为38.3%,缓释时间20d;(2)5Fu纳米毫微粒和5Fu原药对兔晶状体上皮细胞均有抑制作用,并随时间和剂量的增加而增加。空载聚乳酸纳米毫微粒对细胞无抑制作用;(3)作用初期各剂量组5Fu纳米毫微粒的抑制作用低于或等于原药,随时间延长分别在不同时间点超过原药,差异有显著性。结论5Fu聚乳酸纳米毫微粒性状稳定,可长期释放药物,有效抑制兔晶状体上皮细胞的增生,随时间延长作用明显高于原药,可以作为靶向缓释药物载体。     

苦参碱对体外培养的兔晶状体上皮细胞的影响

目的探讨苦参碱（matrine,Mat）对体外培养的兔晶状体上皮细胞（rabbit lens epithelial cell,RLEC）的影响。方法MTT测定0.5g·L^-1、1.0g·L^-1、1.5g·L^-1的Mat分别作用RLEC12h、24h、36h、48h、72h后细胞增生的情况,流式细胞术检测不同浓度的Mat分别作用RLEC6h、12h、24h、48h、72h后增生细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果MTT法结果表明,经0.5g·L^-1Mat处理RLEC12h、24h、36h、48h、72h后,细胞增生抑制率分别为11.64%、20.47%、35.42%、45.82%、52.04%;经1.0g·L^-1Mat处理后分别为27.37%、41.01%、49.99%、63.26%、70.80%;而经1.5g·L-1Mat处理后分别为46.98%、64.36%、73.09%、81.64%、89.32%.随着作用时间的延长和浓度的增加,Mat对rhEGF诱导的RLEC增生的抑制率逐渐增大,呈明显的剂量-效应关系和时间-效应关系。流式细胞术检测表明,Mat能明显抑制体外培养的RLEC内PCNA蛋白表达,也呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系。结论Mat能有效抑制体外培养的RLEC增生和RLEC内PCNA的表达。