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相似文献
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1.
高糖对视网膜Müller细胞VEGF,EPO和EPOR mRNA表达的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:观察高糖条件下VEGF mRNA,EPO mRNA和EPORmRNA在体外培养的Mller细胞中的表达情况。方法:胰蛋白酶将新生小鼠视网膜组织吹打消化后,制成单细胞悬液,体外培养Mller细胞,RT-PCR测定高糖条件下视网膜Mller细胞VEGF,EPO和EPOR基因的表达。结果:成功获得视网膜Mller细胞,传代后90%以上的细胞呈兔抗鼠谷氨酰胺合酶(GS)染色阳性。Mller细胞VEGF mRNA,EPO mRNA和EPOR mRNA在高糖条件下表达升高,且呈浓度依赖性(P<0.05),但糖浓度50mmol/L组较40mmol/L组差异无统计学意义,无明显时间依赖性。结论:Mller细胞在高糖条件下VEGF,EPO,EPOR的表达增加。  相似文献   

2.
目的 观察1,25(OH)2D3对高糖诱导牛视网膜血管内皮细胞(BRECs)中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平变化及对细胞凋亡水平的影响.方法 将分离培养的BRECs分为三组,分别为正常糖组、高糖组和高糖处理组.正常对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖,高糖组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖,高糖处理组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖和50nM,1,25(OH)2D3.培养48 h后收集细胞蛋白.蛋白免疫印迹法检测细胞VEGF及细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达水平;PI/Hoechst双染色法检测细胞凋亡.结果 相比于正常糖组,高糖组中VEFG水平和Bax/Bcl-2比值显著增加;而在高糖处理组中表达水平远远低于高糖组,差异均有统计学意义(P<0.05).高糖的细胞凋亡水平高于正常糖组,而经过1,25(OH)2D3处理后,其细胞凋亡水平则有所下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 1,25(OH)2D3可以抑制高糖诱导BRECs中VEGF表达增加及细胞凋亡.  相似文献   

3.
曹亮  宋愈  吴莹  黄黎黎 《国际眼科杂志》2013,13(10):1965-1969
目的:观察正常和高糖条件下人参皂甙Rg3对人视网膜血管内皮细胞血管新生作用的影响。方法:在正常和高糖条件的培养基中,分别加入0.1mmol/L和0.5mmol/L的人参皂甙Rg3,在24h,48h和72h用MTT检测细胞的增殖情况,用Transwell小室检测细胞迁徙情况,用Matrigel检测细胞管腔形成的情况,用实时定量RT-PCR和Western-Blot检测细胞中血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达情况。结果:在正常和高糖条件下,人参皂甙Rg3对于人视网膜血管内皮细胞增殖、细胞迁徙和细胞内皮管腔形成均具有抑制作用,且呈浓度与时间依赖性;且人参皂甙Rg3具有抑制人视网膜血管内皮细胞VEGF蛋白和mRNA表达的作用。结论:通过抑制VEGF的表达,人参皂甙Rg3可抑制人视网膜血管内皮细胞增殖、迁徙和管腔形成,进而抑制新生血管的形成。  相似文献   

4.
背景 视网膜血管内皮细胞(RVECs)是视网膜微血管的主要成分,通过增生、迁移以及血管发生等生物行为在糖尿病视网膜病变(DR)的发生和发展中发挥关键作用.载脂蛋白A-Ⅰ (ApoA-Ⅰ)是高密度脂蛋白中主要的载脂蛋白,既往研究表明ApoA-Ⅰ在糖尿病患者视网膜组织内呈高表达,且在不同微环境中对RVECs发挥不同作用,但其在高糖环境下与RVECs生物学行为的关系仍不清楚. 目的 研究ApoA-Ⅰ对高糖环境下培养的人RVECs(hRVECs)生物行为及血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用. 方法 用含体积分数10%胎牛血清的DMEM体外培养hRVECs并传代,取3~6代细胞用于实验.将培养的细胞分为低糖组、低糖+ApoA-Ⅰ组、高糖组和高糖+ApoA-Ⅰ组,按照分组分别在DMEM中添加葡萄糖和ApoA-Ⅰ,低糖浓度为5 mmol/L,高糖浓度为25 mmol/L,ApoA-Ⅰ终质量浓度为30 μg/ml.采用细胞计数试剂盒-8、CCK-8法检测细胞增生能力(吸光度,A值);采用细胞划痕法检测细胞的迁移率;采用管腔形成实验检测培养细胞的体外成管能力;分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测各组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量.结果 高糖组细胞增生值(A值)和细胞迁移率明显高于低糖组,高糖+ApoA-Ⅰ组细胞增生值和细胞迁移率明显低于高糖组,差异均有统计学意义(A值:P=0.001、0.033;迁移率:P=0.001、0.010).低糖组、低糖+ApoA-Ⅰ组、高糖组和高糖+ApoA-Ⅰ组管腔数分别为(7.250±2.217)、(9.250±2.630)、(19.000±3.916)和(11.500±3.697)个,组间总体比较差异有统计学意义(F=10.335,P=0.001).高糖组管腔数较低糖组显著增加,高糖+ApoA-Ⅰ组较高糖组管腔数显著减少,差异均有统计学意义(P=0.001、0.037).低糖组、低糖+ApoA-Ⅰ组、高糖组和高糖+ApoA-Ⅰ组细胞中VEGF mRNA相对表达量分别为0.944±0.083、1.117±0.204、1.768±0.164和1.301±0.077,VEGF蛋白相对表达量分别为1.000±0.130、1.217±0.152、1.871+0.101和1.609±0.087,组间总体比较差异均有统计学意义(mRNA:F=18.640,P=0.001;蛋白:F=10.335,P=0.001),其中高糖组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量均明显高于低糖组和高糖+ApoA-Ⅰ组,差异均有统计学意义(mRNA:P=0.000、0.004;蛋白:P=0.000、0.029). 结论 ApoA-Ⅰ对高糖环境下hRVECs的增生、迁移及管腔形成具有抑制作用,可能与其下调细胞VEGF的表达有关.  相似文献   

5.
目的 探讨高糖对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮源性生长因子(PEDF)的干预作用.方法 采用HRPE细胞株,将细胞分为正常对照组(NG,5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,15、20、30 mmol/L葡萄糖)、高渗组(HM,24.4 mmol/L甘露醇+5.6 mmol/L葡萄糖).应用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测VEGF及PEDF mRNA的表达.用ELISA技术检测细胞上清液中VEGF蛋白的表达.结果 高糖作用下VEGFmRNA和蛋白表达显著增高,PEDFmRNA的表达受到显著抑制.结论 高糖可从转录水平及蛋白水平诱导HRPE细胞VEGF的表达,并抑制PEDF的表达.  相似文献   

6.
目的探讨高浓度胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法采用免疫细胞化学法、原位杂交法及ELISA法,定性、定量测定在不同浓度胰岛素条件下,体外培养的兔视网膜Müller细胞表达VEGF的变化.结果胰岛素能明显增强VEGF的表达,并通过转录水平调节.结论高浓度胰岛素可能通过刺激Müller细胞编码VEGF基因的转录,增强VEGF蛋白的表达,从而加速糖尿病视网膜病变的新生血管形成.  相似文献   

7.
目的 探讨缺氧和高糖对体外培养的大鼠视网膜胶质细胞色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法 采用RT-PCR和Wesern blot法分别对缺氧和高糖条件下大鼠视网膜胶质细胞PEDF mRNA及蛋白表达水平进行测定.结果 缺氧1 h、3 h,PEDF表达无明显变化.缺氧6 h后PEDF mRNA及蛋白表达明显下降,缺氧24 h下降最明显(P<0.01).不同浓度葡萄糖(30、40、50 mmol/L)培养48 h后,PEDF的表达水平均明显下降(P<0.05).结论 体外培养的大鼠视网膜胶质细胞在缺氧和高糖环境下PEDF表达明显下降.PEDF表达水平的下调可能参与了糖尿病视网膜病变新生血管的形成过程.  相似文献   

8.
目的:探讨在高浓度胰岛素条件下,体外培养的兔视网膜Muller细胞的血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)的变化.方法:在不同浓度胰岛素条件下(4,8,12kU/L),体外培养兔视网膜Muiler细胞,采用免疫细胞化学法、原位杂交法,定性测定Muller细胞分泌VEGF的变化,采用ELISA方法,定量测定Muiler细胞分泌VEGF的变化.结果:高浓度胰岛素能明显增强VEGF的表达(P<0.05).结论:高浓度胰岛素可能通过刺激Miiller细胞编码VEGF基因的转录,进而增强VEGF蛋白的表达,而在糖尿病视网膜病变的新生血管生成中发挥重要作用.  相似文献   

9.
目的:观察高糖条件下VEGFmRNA,EPOmRNA和EPORmRNA在体外培养的Muiler细胞中的表达情况。方法:胰蛋白酶将新生小鼠视网膜组织吹打消化后,制成单细胞悬液,体外培养Muller细胞,RT.PCR测定高糖条件下视网膜Mailer细胞VEGF,EPO和EPOR基因的表达。结果:成功获得视网膜Muller细胞,传代后90%以上的细胞呈兔抗鼠谷氨酰胺合酶(GS)染色阳性。Muller细胞VEGFmRNA,EPO mRNA和EPORmRNA在高糖条件下表达升高,且呈浓度依赖性(P〈0.05),但糖浓度50mmol/L组较40mmol/L组差异无统计学意义,无明显时间依赖性。结论:Muller细胞在高糖条件下VEGF,EPO,EPOR的表达增加。  相似文献   

10.
夏蔚  夏静  张晓峰  钟蕾  孙正太  王英明 《眼科研究》2014,32(11):998-1003
背景 视网膜M&#252;ller细胞可通过表达血管内皮生长因子(VEGF)参与糖尿病视网膜病变(DR)的病理过程.FK506可抑制实体肿瘤及实验性角膜新生血管中VEGF的表达,但其对视网膜M&#252;ller细胞中VEGF的表达是否有抑制作用鲜见文献报道.目的 观察FK506对高糖培养的大鼠视网膜M&#252;ller细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将大鼠永生化视网膜Müller细胞系进行常规培养并将对数生长期的Müller细胞分别接种到96孔培养板中,分别在培养液中加入800.00、400.00、200.00、100.00、75.00、50.00、25.00、12.50和6.25 pg/ml FK506 100 μl/孔(细胞密度为1×10^4个/ml),MTT比色法确定Müller细胞半数抑制浓度(IC50)的最适FK506质量浓度.将大鼠视网膜Müller细胞系分为正常对照组、FK506组、高糖组和高糖+ FK506组,分别用高糖DMEM培养液(含50 mmol/L D-葡萄糖)和正常DMEM培养基(含5.5 mmol/L D-葡萄糖)进行培养,并分别在培养基中加入FK506,至质量浓度为75 pg/ml.ELISA法检测培养细胞上清液中VEGF的质量浓度;分别采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot法检测各组大鼠视网膜Müller细胞中VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量,分别以目的基因与内参β-actin吸光度(A)比值和灰度比值表示.结果 光学显微镜下正常对照组、FK506组、高糖组及高糖+Fk506组培养12、24、48 h的大鼠视网膜Müller细胞均呈多角形,大小一致.致大鼠视网膜Müller细胞IC50的FK506质量浓度为75 pg/ml.正常对照组、FK506组、高糖组和高糖+FK506组细胞上清中VEGF蛋白的质量浓度分别为(966.46±13.59) pg/ml、(1 059.42±67.43) pg/ml、(16 243.11±3 926.38)pg/ml和(9 467.25±1 525.56) pg/ml,总体差异有统计学意义(F=20.51,P=O.00),其中高糖组细胞上清中VEGF的质量浓度明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.00);高糖+FK506组较高糖组细胞上清中VEGF的质  相似文献   

11.
目的探讨高糖条件下促红细胞生成素(EPO)受体mRNA及蛋自在人脐静脉内皮细胞(UVECs)的表达差异。方法体外常规培养人UVECs细胞株,实验组分别给予22mmol/L葡萄糖作用12、24、48、72h,5.5mmol/L葡萄糖组(生理糖浓度)设为正常对照组,5.5mmol/L葡萄糖+16.5mmol/L甘露醇组为渗透压对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)、免疫细胞化学法对高糖条件下人UVECsEPO受体mRNA和蛋白的表达进行检测。结果正常对照组和渗透压对照组相比,人UVECsEPO受体mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(P〉0.05)。人UVECs在22mmol/L高糖作用12、24、48、72h后,EPO受体mRNA和蛋白表达均显著高于正常对照组(P〈0.05),且随着时间的延长,EPO受体mRNA和蛋白的表达均逐渐增加。结论高糖条件下人UVECsEPO受体mRNA和蛋白表达均增强,且呈时间依赖性。人UVECs在22mmol/L高糖条件下EPO受体mRNA及蛋白表达的增加与渗透压无关。  相似文献   

12.
目的观察缺氧、高糖及高胰岛素对视网膜Muller细胞胞浆内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用组织块悬浮贴壁法原代培养兔视网膜Miiller细胞,于正常和缺氧条件下分别分为对照组、高糖组、高浓度胰岛素组、高糖高浓度胰岛素组,通过AO/EB染色法观察不同缺氧时相Mtiller细胞的凋亡情况,免疫细胞化学染色测定各组Mailer细胞胞浆内VEGF的表达。结果免疫细胞化学技术测定结果显示缺氧条件下1、2、3d各实验组与对照组相比VEGF表达量增加差异均有统计学意义(P〈0.05)。缺氧2d、3d各实验组与正常条件下各实验组相比VEGF表达增加,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论缺氧条件下高糖及高胰岛素环境刺激Mtiller细胞VEGF表达作用增强。  相似文献   

13.
目的 观察高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(HRECs)脯氨酸羟化酶2(PHD2)的表达变化和对内皮细胞屏障功能的影响。方法 将培养至融合的HRECs分为三组,分别为正常对照组、甘露醇对照组与高糖组。正常对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖,甘露醇对照组细胞培养液含5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇,高糖组细胞培养液含30 mmol/L葡萄糖。培养24、48 h后收集细胞蛋白、上清液及RNA。蛋白免疫印迹法检测细胞PHD2、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及紧密连接蛋白occludin的蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的含量;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因的转录水平;相对分子质量7×104的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖检测细胞旁通透性。结果 与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs中PHD2蛋白表达水平均先降低后升高,HIF-1α表达升高,occludin表达降低;高糖组细胞上清液中VEGF含量增加,差异均有统计学意义(PHD2:F=7.618、8.627,P<0.05;HIF-1α:χ2=7.692、7.652,P<0.05;occludin:F=23.23、7.317,P<0.05;VEGF:F=10.768、4.562,P<0.05)。与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组HRECs的PHD2、HIF-1α、VEGF及occludin基因转录水平升高,差异均有统计学意义(PHD2:F=5.69、14.27,P<0.05;HIF-1α:F=6.07、10.47,P<0.05;VEGF:F=12.31、9.14,P<0.05;occludin:F=8.77、8.00,P<0.05)。与正常对照组相比,甘露醇对照组与高糖组细胞旁通透性增加,差异有统计学意义(χ2=20.57、F=56.09,P<0.05)。结论 高糖诱导HRECs PHD2表达发生变化。PHD2可能在内皮细胞屏障破坏中发挥一定的调控作用,其机制与HIF-1α、VEGF有关。  相似文献   

14.
目的 观察不同浓度乳酸对培养的大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 2周龄Sprague-Dawley大鼠36只,根据培养液中乳酸含量分为10、20、30 mmol/L乳酸组,每组均为12只大鼠.处死大鼠,摘出眼球剥离视网膜,将视网膜置入插入式培养皿中培养24 h.培养皿中培养液分别为含10、20、30 mmol/L乳酸的Dulbecco改良Eagle培养液+2%胎牛血清.光学显微镜观察视网膜结构、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测VEGF的表达.结果 光学显微镜组织病理学观察结果显示,视网膜层次清晰,结构完整,未见明显细胞溶解和坏死.RT-PCR检测结果显示,10、20、30 mmol/L乳酸组VEGF mRNA表达量分别为0.74±0.06、0.99±0.12、1.45±0.17;Western blot检测结果显示,10、20 mmol/L乳酸组和30 mmol/L乳酸组视网膜VEGF表达量分别为0.34±0.15、0.54±0.16、0.93±0.23.RT-PCT和Western blot检测结果均显示30 mmol/L乳酸组较10 mmol/L乳酸组VEGF表达明显升高.结论 乳酸诱导视网膜VEGF表达有浓度依赖性.  相似文献   

15.
PURPOSE: To investigate effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) on glucose transport and GLUT1 glucose transporter expression in primary bovine retinal endothelial cell (BREC) cultures. METHODS: Glucose transport in control and VEGF-treated BREC cultures was determined by measurement of [14C]-3-O-methylglucose (3MG) uptake. GLUT1 protein and mRNA was determined by Western and Northern blot analyses, respectively. Protein kinase C (PKC) activity was measured in control and VEGF-treated cultures, and glucose transport was determined with and without prior PKC depletion and PKC inhibition. RESULTS: Dose-dependent increases in 3MG uptake were seen in the VEGF-treated cultures, with an increase of 69% after a 24-hour exposure to 50 ng/ml VEGF (P < 0.001). Total cellular GLUT1 mRNA or protein, however, was unchanged. Western blot analysis of plasma membrane fractions revealed a 75% increase in plasma membrane GLUT1 in VEGF-treated cultures (P = 0.02), suggesting that the VEGF-stimulated increase in glucose transport was due to a translocation of GLUT1 to the cell membrane. VEGF stimulated a 90% increase in PKC activity in membrane fractions from cultures treated with VEGF, and VEGF-stimulated enhancement of glucose transport was abolished by cellular PKC depletion and by general and PKC beta inhibition. CONCLUSIONS: The present study demonstrates VEGF-mediated enhancement of retinal endothelial cell glucose transport and suggests that this increase is due to PKC beta-mediated translocation of cytosolic GLUT1 to the plasma membrane surface. Upregulation of retinal endothelial cell glucose transport by various factors associated with the development of retinopathy may be responsible for the metabolic derangements observed in the diabetic inner blood-retinal barrier in vivo.  相似文献   

16.
目的:探讨高糖培养牛视网膜微血管周细胞β-catenin表达。方法:原代培养周细胞,用免疫细胞化学和Westernblot方法检测高糖诱导的牛视网膜微血管周细胞β-catenin蛋白表达。结果:视网膜微血管周细胞在5mmol/LD-葡萄糖培养72h后,β-catenin免疫反应性主要表现在细胞质,在30mmol/LD-葡萄糖培养72h后,β-catenin免疫反应性显著增加,β-catenin免疫反应性主要表现在细胞核和细胞质;Westernblot发现高糖组周细胞培养48,72h后β-catenin蛋白活性和表达较对照组显着增加。结论:高糖诱导的视网膜微血管周细胞β-catenin表达和活性显著增加。  相似文献   

17.
白细胞介素-2对高糖状态下人视网膜色素上皮细胞的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究白细胞介素-2(IL-2)对高糖状态下人视网膜色素上皮(RPE)细胞的增殖及其分泌和表达血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法MTT自动比色法观察IL-2浓度对高糖状态下RPE细胞增殖的作用;ELISA法测RPE细胞分泌VEGF的变化;免疫组化观察RPE细胞表达VEGF的变化。结果0.1~10μg/L的IL-2均能明显促进高糖状态下RPE细胞的增殖,并能明显提高RPE细胞分泌VEGF的水平及提高VEGF在细胞中的表达。结论高糖状态下,IL-2可明显促进人RPE细胞的增殖并能提高RPE细胞分泌VEGF的水平和提高VEGF在RPE细胞中的表达,IL-2可能在增殖性糖尿病视网膜病变中起一定的作用。  相似文献   

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