地塞米松诱导的人小梁网基因表达谱变化及生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法分析地塞米松诱导的人小梁网基因表达谱变化,揭示激素性青光眼(GIG)发病过程中可能涉及的机制。方法:从公共基因芯片数据库(GEO)获取基因表达数据集GSE37474,GEO2R筛选地塞米松组和正常小梁网之间的差异表达基因。使用DAVID数据库对差异基因进行GO功能注释和KEGG通路富集分析,使用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络(PPI),利用CytoHubba插件筛选关键枢纽基因,最后对关键枢纽基因的mRNA表达进行RT-PCR验证。结果:与正常小梁网组织相比,地塞米松处理的小梁网组织有252个基因存在差异表达,其中141个为上调基因,111个为下调基因。GO功能注释显示差异基因主要定位于细胞外基质,参与炎症的正调控和细胞外基质重塑等生物学过程。KEGG通路富集分析显示差异基因主要参与血管平滑肌收缩、花生四烯酸代谢、醚脂质代谢和胆碱代谢。从PPI网络中筛选出7个关键枢纽基因,包括3个上调基因EDN1、FOS、LPL和4个下调基因CCL2、IGF1、PTGS2、CCL5,RT-PCR验证结果和基因表达谱芯片一致。结论:地塞米松可引起小梁网基因表达谱发生显著变化,差异基因富集到的通路及筛选到的一些关键枢纽基因在细胞外基质重塑和房水流出调控中起着重要作用,这将有助于更全面地认识GIG的分子机制。     

基于加权基因共表达网络分析非动脉炎性前部缺血性视神经病变的关键基因

目的：挖掘非动脉炎性前部缺血性视神经病变的关键基因,为研究非动脉炎性前部缺血性视神经病变的发病机制提供生物信息学支持。

方法：从GEO数据库中下载大鼠GSE43671芯片数据集,使用R语言WGCNA包对基因进行分析并筛选出与临床表型相关度高的模块基因,使用ClusterProfiler包对特异性模块进行基因本体论分析(GO)及京都基因与基因组百科全书分析(KEGG),用Cytoscape软件筛选模块内关键基因并构建关键基因-miRNA互作网络。

结果：采用WGCNA方法从GSE43671数据集中识别出22个模块,其中蓝色模块相关性系数最高。GO富集分析结果显示,模块内基因主要表现在上皮管形态发生等生物过程上,受体复合体等细胞成分上,眼晶状体结构组成等分子功能上。KEGG结果显示,模块内基因主要与神经活性配体-受体互作信号通路、人乳头瘤病毒信号通路、MAPK信号通路、PI3K/Akt信号通路等信号通路有关。通过PPI网络和Cytoscape软件筛选得到的排名前10的关键基因为Psmb9、Psma7、Map3k14、Psme1、Nfkb1、Rela、Psma5、Relb、Psmb4、Nfkb2; 预测得到6个miRNA为miR-383-5p、miR-9a-5p、miR-155-5p、miR-223-3p、miR-495、miR-325-3p。

结论：使用WGCNA方法筛选出非动脉炎性前部缺血性视神经病变的相关通路、关键基因和微小RNA,为其发病机制和治疗方法的探索提供理论依据,但该结论尚待动物实验和细胞实验加以验证。     

db/db小鼠糖尿病视网膜病变相关基因表达及通路的生物信息学分析

目的:通过分析C57BL/KsJ-db/db小鼠的基因表达数据库确定与糖尿病视网膜病变(DR)相关的生物标志物、蛋白质编码基因、转录因子和生物通路。方法:从基因表达综合数据库中选择并获得db/db小鼠GSE55389芯片数据集,鉴定视网膜中差异表达基因(DEGs),采用基因本体(GO)分析、KEGG通路富集分析、基因集富集分析(GSEA)、蛋白质相互作用(PPI)网络的构建和转录因子(TFs)预测等综合生物信息学分析方法阐明所鉴定基因的生物学功能。结果:db/db小鼠模型病变视网膜中发现38个上调、28个下调DEGs。GO分析表明,下调基因在眼发育功能中较丰富,差异基因没有发现明显的KEGG通路。蛋白质相互作用网络显示DR中有7个hub基因,GSEA分析在P<0.1下发现12条上调和6条下调通路。预测了5种上调和8种下调的转录因子及其结合位点。结论:鉴定DR相关基因及通路有助于了解DR的发展机制,预测部分转录因子如Runx2、Ppara、MafA、Gata2、Hoxa13可能是治疗DR的有效靶标。     

SIRT1、PGC-1α在原发性开角型青光眼患者小梁网组织中的表达及意义

目的　检测原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma，POAG）患者小梁网组织中沉默信息调节因子2相关酶1（silent information regulator factor 2 related enzyme 1，SIRT1）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α，PGC-1α）表达水平，探讨其与POAG小梁网组织功能损伤的关系。方法　收集2017年1月至2018年4月在海南医学院第一附属医院手术切除确诊为POAG 40例（40眼）患者的小梁网组织为POAG组样本，另取30例眼球供体的小梁网组织为对照组样本，采用RT-PCR法检测2组小梁网组织中SIRT1、PGC-1α mRNA表达，免疫组织化学染色法检测SIRT1、PGC-1α蛋白表达，同时检测过氧化物酶（peroxidase dismutase，POD）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平。结果　POAG组小梁网组织中SIRT1、PGC-1α mRNA表达水平（0.11±0.03、0.32±0.10）均低于对照组（0.24±0.07、0.67±0.21）（均为P＜0.05）；POAG组小梁组织中SIRT1表达与PGC-1α表达呈正相关关系（r=0.759，P＜0.05）；POAG组小梁网组织中POD水平［（102.59±22.37）×10³ U·L^-1］高于对照组［（73.46±15.81）×10³U·L^-1］（P＜0.05），SOD水平［（347.62±50.73）U·L^-1］低于对照组［（412.57±61.25）U·L^-1］（P＜0.05）；POAG组小梁网组织中SIRT1、PGC-1α表达与POD水平均呈负相关关系（r=-0.636、-0.737，均为P＜0.05），与SOD水平均呈正相关关系（r=0.662、0.614，均为P＜0.05）。结论　POAG患者小梁网组织中SIRT1和PGC-1α表达水平降低，可能在线粒体功能失调和氧化应激对小梁网的损伤中发挥重要调控作用。     

视网膜母细胞瘤基因表达谱的生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法探寻促进视网膜母细胞瘤发生的关键基因与分子标记。方法:检索Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中的视网膜母细胞瘤表达谱芯片对肿瘤组织与正常视网膜组织的差异基因进行GO与KEGG聚类分析,构建蛋白-蛋白相互作用网络并筛选关键节点,利用受试者工作曲线(ROC)评估临床诊断效能。应用qRT-PCR在正常RPE细胞系与视网膜母细胞瘤细胞系中验证枢纽基因的RNA表达情况结果:在视网膜母细胞瘤数据集GSE97508与GSE110811中获得二者差异表达基因的交集共121个,KEGG分析显示差异基因富集于光传导通路、细胞周期与p53通路上,PPI网络筛选并与上述两个数据集中差异最大的30个基因取交集得到MCM6、DTL、UBE2T、TOP2A、NUSAP1、CENPK、RRM2、RLBP1、RHO共9个关键基因。在独立验证数据集GSE24673中确认以上9个基因的表达差异。利用ROC曲线发现UBE2T、RRM2与RHO的AUC≥80%且具有统计学意义(P>0.05)。在视网膜母细胞瘤细胞系中确认UBE2T与RRM2的mRNA水平均显著高于对照A...     

SIRT1调节人小梁网细胞中lncRNA相关信号通路的初步研究

目的探讨沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)调节人小梁网细胞功能的可能通路机制。方法实验研究。分别将SIRT1过表达慢病毒(SIRT1过表达组)和对照慢病毒(空载体对照组)按照最佳感染复数转染人小梁网细胞系,提取两组样本的总RNA进行长链非编码RNA(lncRNA)芯片检测。通过生物信息学技术对芯片差异性lncRNA进行分析,并用实时定量PCR法对筛选的差异性lncRNA进行验证。两组间比较采用独立样本t检验。结果lncRNA表达谱显示与空载体对照组相比,SIRT1过表达组人小梁网细胞有636个lncRNA上调和2246个lncRNA下调(差异倍数绝对值>2,均P<0.05)。基因本体分析显示SIRT1对人小梁网细胞外基质、细胞代谢、增殖、凋亡等有调节作用。京都基因与基因组百科全书生物学通路分析显示差异性lncRNA涉及19个信号通路,主要包括Notch信号通路、丝裂原激活蛋白激酶信号通路、酪氨酸酶相关蛋白通道的炎性反应介质调节以及细胞外基质受体的相互作用等。结论SIRT1能通过调节Notch、丝裂原激活蛋白激酶等多个信号通路的lncRNA影响小梁网细胞的功能。(中华眼科杂志,2021,57:215-222)     

可溶性CD44分子对人眼小梁网细胞凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad表达的影响

背景 研究表明可溶性CD44分子(sCD44)在原发性开角型青光眼(POAG)患者眼中的质量浓度高于正常人,POAG患者房水中sCD44水平与小梁网细胞凋亡相关蛋白的表达是否有关及其对POAG的共同作用机制至今尚不明确. 目的 探讨不同质量浓度的sCD44对POAG患者小梁网细胞凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad表达的影响.方法 收集POAG患者行小梁切除术中切除的小梁网组织,采用组织块培养法原代培养小梁网细胞,并用免疫细胞化学法对培养细胞进行鉴定,将第3代的小梁网细胞按随机数字表法随机分为6个组,分别在无血清培养基中加入含终质量浓度为0(对照组)、1、5、10、25、50 μg/L的sCD44,培养细胞48 h.采用细胞计数试剂8(CCK-8)法和ELISA法检测小梁网细胞中凋亡调节蛋白bc1-2相关死亡因子bad蛋白的表达.结果 培养的细胞经层黏连蛋白(LM)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体、纤维连接蛋白(FN)免疫组织化学染色呈阳性反应.CCK-8法检测0、l、5、10、25、50μg/L sCD44作用48 h后小梁网细胞吸光度(A450)值分别为:0.2460±0.0019、0.1874±0.0015、0.1570±0.0016、0.1302±0.0019、0.1084±0.0018、0.0940±0.0020,差异有统计学意义(F=14.922,P=0.000),各实验组A450值均低于对照组,差异均有统计学意义(P=0.013、0.008、0.011、0.005、0.004).ELISA法检测表明,0、l、5、10、25、50 μg/LsCD44作用48 h后小梁网细胞中bad蛋白质量浓度分别为(114.8461±2.9560)、(137.8270±2.4259)、(161.4194±3.7381)、(170.9453±3.2006)、(221.2252±4.3738)、(324.6167±4.4220) ng/L,差异有统计学意义(F=16.610,P=0.000),各实验组小梁网细胞中bad蛋白质量浓度均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P=0.017、0.013、0.008、0.007、0.006).结论 sCD44在一定质量浓度范围内可促进POAG小梁网细胞的凋亡,并且能上调凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad蛋白的表达.     

眼表外胚层与表面外胚层转录组差异分析

目的：通过RNA-seq分析眼表外胚层(OSE)与表面外胚层(SE)转录组表达差异,揭示OSE转录组景观及转录调控网络。

方法：人类胚胎干细胞(hES)被分化成OSE细胞和SE细胞,利用RNA-seq分析了OSE与SE之间差异表达的基因(DEGs)。基于这些差异表达基因,进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集以及蛋白质-蛋白质交互作用(PPI)网络分析,并筛选出了关键的转录因子(TFs)和枢纽基因。使用NetworkAnalyst平台构建了TF-基因和TF-miRNA调控网络。

结果：OSE与SE共筛选出4 182个差异基因,OSE细胞中上调基因2 771个,下调基因1 411个。GO-BP富集分析显示OSE上调基因主要集中在离子跨膜转运的调节、轴突发育、调节化学突触传递等相关生物学进程,下调基因主要富集在核分裂、染色体分离、细胞周期相变的调控等生物学进程; KEGG富集分析显示OSE上调基因主要富集在可卡因成瘾、轴突导向、苯丙胺成瘾等通路,下调基因主要富集于癌症中的蛋白聚糖、ECM-受体相互作用、蛋白质消化和吸收、细胞因子-细胞因子受体相互作用等通路。与SE相比,OSE细胞中有204个TFs(FOS、EGR1、POU5F1、SOX2和PAX6等)上调,80个TFs(HAND2、HOXB6、HOXB5、HOXA5和HOXB8等)下调。在OSE细胞中发现了6个上调和9个下调枢纽基因,并根据这些枢纽基因构建了TF-基因和TF-miRNA调控网络。

结论：RNA-seq分析阐明了OSE和SE细胞的转录组特征,这些数据可为OSE及角结膜上皮发育调控及体外定向诱导等研究提供指导。     

我国原发性开角型青光眼患者TIGR基因突变筛选、克隆及序列分析

目的　研究我国原发性开角型青光眼 (primaryopenangleglaucoma,POAG)患者小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白 (trabecularmeshworkinducedglucocorticoidresponseprotein ,TIGR)基因的突变情况。方法　 (1)应用聚合酶链式反应 (polymerasechainreaction ,PCR)方法扩增 70例POAG患者、2 0例正常对照组的TIGR基因 3个外显子 (7对引物 )的各个片段 ,应用单链构像多态 (single strandedconformationpolymorphism ,SSCP)筛选可能突变的PCR产物。 (2 )将筛选出的样本 (PCR产物 ) ,克隆到PT Adv载体 ,以EcorI酶切鉴定重组质粒 ,然后用ABI 373自动测序仪行双向测序。结果　 (1)用SSCP方法筛选的 2例POAG患者在TIGR基因第 3外显子中部 (第 6对引物 )片段出现单链带型异常 ;正常对照组未见异常。 (2 )克隆测序的 2例样品 ,1例在 388密码子位置出现由GAT突变为AAT ,氨基酸由天冬氨酸替换为天冬酰胺 ,即Asp388Asn ;另 1例碱基序列无变化。提示我国POAG患者TIGR基因突变仅为 1 4% (1/ 70 ) ,远较国外为低。结论　我国POAG患者的发病机制可能与TIGR基因突变有关 ,但突变率较国外低 ,提示POAG发病存在地区或种族之间的差异。     

生物信息法推算青光眼小鼠视乳头及视网膜功能变化

目的：本研究运用生物信息学软件,利用数据库资料,推测青光眼早期小鼠视乳头及视网膜可能的信号路径及基因生物功能模块,为研究青光眼发病机制提供新的途径。方法：本研究的数据是从美国生物技术信息中心GEO基因表达数据库获得。利用美国昂飞公司 Expression Console软件对原始的CEL数据进行标准化及对数化转换处理。利用以t检验为基础的基因表达差异显著性分析方法SAM对基因芯片数据进行显著性差异分析,分析后筛选显著性差异表达基因,采用GNRInfer软件构建了小鼠视乳头及视网膜前50个有显著差异表达基因的调控网络,同时我们利用 MAS3.0分子注释系统软件及DAVID软件这两种在线分析平台中进一步富集基因信号通路。
　　结果：青光眼各组视乳头和视网膜及其相对应组的显著性差异基因分析表明,在青光眼早期视乳头组及视网膜组较之正常组相比视乳头组显著性差异基因数量明显增多,青光眼视乳头及视网膜网络构建显示,视乳头基因网络中主要调控节点基因包括 Unc13 c、Kif5 a、TRPM1、PANX;视网膜基因网络中主要调控节点基因包括POU4 F1、NEFL、BC03870、CALB2。 MAS在线信号通路分析显示,视乳头组织中主要的信号代谢通路包括肌萎缩侧索硬化代谢通路、神经退行性紊乱、白细胞穿内皮性迁移及前列腺癌信号通路。视网膜组织主要代谢通路包括肌萎缩侧索硬化代谢、酪氨酸代谢、黑色素生成、氮代谢、缝隙连接、白细胞穿内皮迁移。
　　结论：早期青光眼阶段视乳头较视网膜对眼压更为敏感,特别是Tyrp1基因在早期高眼压的表达能否作为青光眼早期生物学指标有待进一步探讨。在青光眼高眼压压力下,节点分子生物学功能显示在视乳头组织中,细胞骨架的重排、生物驱动马达动力、物质代谢及运输力均为增强;而在视网膜组织中,最突出的表现在细胞的再生、分化及修复作用,此结果提示我们在青光眼的研究中应重视哺乳动物视网膜损伤后自身修复的研究。代谢通路富集分析显示,炎性反应在视乳头及视网膜的病理反应中均起到非常重要的作用,而在视乳头中由于其狭窄而拥挤的解剖结构在青光眼发病中存在营养代谢及物质转运障碍。     

miR-17-5p对小梁网细胞外基质蛋白表达的调控作用及其机制

目的　探讨miR-17-5p对小梁网细胞外基质（ECM）蛋白表达的调控作用及其机制。方法　收集原发性开角型青光眼（POAG）患者和正常小梁网组织,利用RT-PCR和Western blot分别检测miR-17-5p和Smad3表达;将人小梁网细胞（HTMCs）分为miR-17-5p mimics和miR-17-5p NC组,分别转染载有miR-17-5p mimics组和miR-17-5p NC的载体,Western blot检测HTMCs中ECM蛋白纤连蛋白（FN）、胶原蛋白I（CoL-I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;靶基因预测库预测miR-17-5p靶基因,荧光素酶报告载体联合Western blot鉴定靶基因。HTMCs中共转染miR-17-5p mimics和Smad3过表达载体,Western blot检测各转染组细胞中Smad3、FN、CoL-I、α-SMA的蛋白表达。结果　正常小梁网组织中miR-17-5p表达量为1.16±0.11,高于POAG小梁网组织的0.19±0.04,差异有统计学意义（t=10.641,P<0.001）;正常小梁网组织中Smad3蛋白表达量为0.31±0.06,低于POAG小梁网组织的0.86±0.07,差异有统计学意义（t=8.105,P<0.001）。miR-17-5p mimics组HTMCs中FN、CoL-I和α-SMA蛋白表达均低于miR-17-5p NC组,差异均有统计学意义（均为P<0.001）;靶基因预测库预测及荧光素酶报告载体联合Western blot鉴定证实Smad3为miR-17-5p下游靶基因;miR-17-5p+Smad3转染组HTMCs中Smad3、FN、CoL-I和α-SMA蛋白表达均高于miR-17-5p+vector转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。结论　miR-17-5p 能抑制HTMCs的ECM蛋白表达,这一过程可能是通过靶向抑制Smad3表达而实现的。     

IL-6对体外培养的牛眼小梁细胞中纤维连接蛋白的影响

目的：探讨不同浓度白细胞介素-6(IL-6)刺激下体外培养的牛眼小梁细胞中纤维连接蛋白的表达变化。

方法：采用组织块培养法取新鲜牛眼的小梁网组织,提取并培养第3代牛眼小梁细胞,采用细胞形态学对细胞进行鉴定。经终浓度为0、0.1、0.5、1ng/mL的IL-6药物刺激24h后,采用荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测各浓度IL-6刺激下牛眼小梁细胞中FN mRNA和蛋白的表达。

结果：培养出的牛眼小梁细胞符合第3代牛眼小梁细胞形态特征。实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法显示,不同浓度IL-6刺激下的牛眼小梁细胞所产生的FN mRNA量分别为1.000±0.000、0.213±0.004、0.056±0.001、0.019±0.002,FN蛋白表达量分别为1.167±0.012、0.662±0.009、0.238±0.011、0.061±0.011,均呈下调趋势(r_s=-0.713、-0.901,均P<0.05),4组间FN mRNA和蛋白表达均有差异(P<0.05)。

结论：体外培养的牛眼小梁细胞在外源性IL-6刺激下影响FN mRNA和蛋白的表达,且IL-6浓度与蛋白表达呈负相关性,推测IL-6可能通过影响FN基因与蛋白的表达,进而改变小梁网组织结构。     

Effect of high glucose on fibronectin expression and cell proliferation in trabecular meshwork cells.

PURPOSE: Increased fibronectin accumulation in the trabecular meshwork of glaucomatous eyes may contribute to the resistance of aqueous outflow and the development of primary open-angle glaucoma (POAG). Because the glucose level is increased in the aqueous humor of patients with diabetes, this study was conducted to determine whether a high-glucose condition alters fibronectin expression and contributes to cell loss in trabecular meshwork. METHODS: The fibronectin mRNA level was determined using RT-PCR in bovine trabecular meshwork cells grown in normal (5 mM) or high (30 mM)-glucose medium for 7 days, and cell counts were measured during this period. Distribution and the relative amount of fibronectin protein were determined in these cells by immunofluorescence microscopy and Western blot analysis. RESULTS: Fibronectin mRNA level in cells grown in high-glucose medium was significantly upregulated two- to threefold compared with cells grown in normal medium (P < 0.05). In cells grown in high-glucose medium, fibronectin immunofluorescence was more intense, and the relative amount of fibronectin protein was significantly increased (131% +/- 15% of control, P < 0.05) compared with the amount in cells grown in normal medium. A moderate decrease in cell number was observed in cells grown in high-glucose medium (78% +/- 7% of control, P < 0.05) CONCLUSIONS: These findings indicate that a high glucose level in aqueous humor of patients with diabetes may increase fibronectin syntheses and accumulation in trabecular meshwork and accelerate the depletion of trabecular meshwork cells, a characteristic feature of the outflow system in POAG. The striking similarity between high glucose-induced alterations in trabecular meshwork cells and those of vascular endothelial cells may represent a common biochemical link in the pathogenesis of POAG and diabetic microangiopathy.     

Modulation of extracellular matrix turnover in the trabecular meshwork

Intraocular pressure (IOP) is the most critical risk factor for primary open angle glaucoma (POAG). In most cases of POAG, IOP is increased because of an abnormally high aqueous humor outflow resistance in the juxtacanalicular region of the trabecular meshwork. A distinct structural change in the trabecular meshwork of patients with POAG is the increase in fibrillar extracellular matrix in the juxtacanalicular region of the trabecular meshwork. Our knowledge on the molecular factors that govern turnover of the extracellular matrix in the trabecular meshwork has increased considerably in recent years. It has become clear that quality and quantity of the extracellular matrix in the trabecular meshwork are regulated by several signaling molecules that interact with each other to promote its synthesis, degradation, or extracellular modification. Transforming growth factor-β1 and β2 (TGF-β1 and TGF-β2) which derive from the aqueous humor or may be locally expressed induce in cultured trabecular meshwork cells the expression of a variety of extracellular matrix molecules. The action of TGF-βs very likely requires local activation by thrombospondin-1 and is partly mediated by its downstream mediator connective tissue growth factor, both of which are constitutively expressed in the trabecular meshwork. Bone morphogenetic proteins (BMP)-7 and -4 effectively antagonize the effects of TGF-β2 on matrix deposition. The antagonizing effects of BMP-7 are mediated in trabecular meshwork cells through Smad7. Smad7 is a key molecular switch to inhibit TGF-β2 signaling in the trabecular meshwork.     

The Effect of Dexamethasone on Integrin and Laminin Expression in Cultured Human Trabecular Meshwork Cells

Glucocorticoid treatment in vivo can produce a glaucoma similar in many ways to POAG. Treatment of trabecular meshwork cells in culture with dexamethasone allows the study of biochemical aspects of this disease process. The effects of dexamethasone on the expression of integrins and laminin in both normal and glaucomatous cultured human trabecular meshwork cells were evaluated. Human trabecular meshwork cell lines were cultured for 18 days in the presence or absence of 10⁻⁷mdexamethasone. Radioimmunoprecipitation was used to determine the relative expression of five αintegrin subunits. Laminin expression was evaluated with Western blots. Laminin was increased in all cell lines following dexamethasone treatment. α2, α5 and αV integrin chains showed consistent dexamethasone-induced changes in expression, while α3 and α4 subunits did not. There were no differences in the expression patterns for any of these integrin subunits between normal and glaucomatous cell lines. Increased laminin deposition as seen in this study with dexamethasone treatment may be partially responsible for the decreased outflow facility seen in both steroid-induced glaucoma and in POAG.     

葡萄糖对POAG患者小梁网细胞凋亡的影响

目的探讨不同浓度葡萄糖对POAG患者小梁网细胞凋亡的影响,研究葡萄糖与POAG以及糖尿病与POAG之间的关系,进一步探讨POAG的发病机制。方法实验研究。采用组织块培养法原代培养POAG患者小梁网细胞,取传代的小梁网细胞分别加入含葡萄糖终浓度为0.0（对照组）、5.5、45.0 mmol/L的无血清培养基,分别培养48 h后,采用CCK-8和流式细胞仪法检测不同浓度葡萄糖对小梁网细胞的影响。数据采用单因素方差进行分析。结果通过CCK-8检测发现,随着浓度的增加,葡萄糖对小梁网细胞的增殖抑制作用增强,可促进细胞凋亡,且各实验组与对照组之间相比差异有统计学意义（F=13.87,P＜0.01）;通过流式细胞仪法检测葡萄糖浓度为5.5、45.0 mmol/L实验组小梁网细胞凋亡率分别为10.65%±0.03%、25.74%±0.02%,均高于对照组（4.02%±0.03%）,且差异有统计学意义（F=25.34,P＜0.01）。结论高糖可以使小梁网细胞的增殖能力下降,凋亡率增加,从而可能导致小梁网细胞网状结构改变,房水流出途径的阻力增加。     

Detection of differentially expressed glycogenes in trabecular meshwork of eyes with primary open-angle glaucoma

PURPOSE: To identify differentially expressed glycogenes in trabecular meshwork (TM) of eyes with primary open-angle glaucoma (POAG). METHODS: Total RNA was isolated from TM of cadaveric eyes derived from donors with diagnosed glaucomas of different etiologies and from normal control subjects. RNA was amplified and hybridized to the GLYCOv2 oligonucleotide microarray that contains probes for carbohydrate-binding proteins, glycosyltransferases, and other genes involved in the regulation of glycosylation. Statistical analysis was used to identify differentially expressed genes between normal and POAG samples. RESULTS: This study revealed that POAG TM and normal TM have distinct gene expression profiles. Of the 2001 genes on the array, 19 genes showed differential expression of greater than 1.4-fold in POAG. Mimecan and activinA, which have been shown to be upregulated in models of glaucoma, were both found to be elevated in POAG TM. Many genes were identified for the first time to be differentially regulated in POAG. Among the upregulated genes were: (1) cell adhesion molecules including platelet endothelial cell adhesion molecule-1 and P-selectin, both of which are targets of NFkappaB, which has been shown to be activated in glaucomatous TM; (2) lumican, a core protein of keratan sulfate proteoglycans; and (3) the receptor for IL6, a cytokine that has been shown to be upregulated in TM in response to elevated intraocular pressure. Among the downregulated genes were chondroitin-4-O-sulfotransferase involved in the synthesis of chondroitin sulfate chains and the receptor for PDGFbeta, a growth factor that has been shown to stimulate both TM cell proliferation and phagocytic activity. Results for several genes were confirmed by RTq-PCR. CONCLUSIONS: Microarray technology was used to show, for the first time, that POAG TM has a distinct glycogene expression profile. Differentially expressed glycogenes identified in this study have not been previously investigated for their role in the pathogenesis of POAG and thus are novel factors for further study of the mechanism of the disease and for their possible use as diagnostic markers.