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1.
目的:利用丙烯醛建立ARPE-19细胞氧化应激模型,观察补肾养血明目方含药血清对丙烯醛诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用。
  方法:制备SD 大鼠补肾养血明目方含药血清及空白血清,通过CCK-8检测不同浓度(2.5%,5%,10%,20%,40%)血清对细胞活性的影响,预先加入1.25%,2.5%,5%等不同浓度的含药血清处理24 h 后,将终浓度为75μmol/L的丙烯醛加入对数生长期的ARPE-19细胞中处理24h, CCK-8法检测含药血清对细胞活力的影响, DAPI染色观察细胞核形态。
  结果:CCK-8结果示:低浓度(2.5%,5%)血清对细胞活性影响不大( P>0.05),高浓度(10%,20%,40%)血清降低细胞活性(P<0.05),补肾养血明目方含药血清中、高剂量组细胞活性较空白血清组有统计学意义(P<0.05);
  结论:补肾养血明目方对丙烯醛诱导的ARPE-19细胞损伤有保护作用。  相似文献   

2.
目的 研究槲皮素磷脂复合物对叔丁基氢过氧化物(tert-butyl hydroperoxide,tBHP)诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用及相关机制.方法 采用溶剂法制备槲皮素磷脂复合物,并测定磷脂复合物在水和氯仿中的溶解度.实验细胞分组:溶媒对照组、模型对照组、槲皮素及其磷脂复合物组(含400μmol·L-1、200 μmol·L-1和100 μmol·L-1三个浓度).MTr法检测细胞活力,AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡,酶标仪检测细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛、总抗氧化能力水平,荧光素DCFH-DA探针法测定细胞内活性氧含量,Real time PCR、Western Blot检测细胞核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶一1、醌氧化还原酶一l和谷氨酸半胱氨酸连接酶的表达水平.结果 形成磷脂复合物后槲皮素在水和氯仿中的溶解度分别为(38.36±2.91) μg·mE-1、(1351.27±28.12)I μg·mL-1,较单体显著提高;浓度为400 μmol·L-1、200 μmol·L-1和100 μmol·L-1的槲皮素及其磷脂复合物对氧化损伤ARPE-19细胞有保护作用,而且高、中浓度的槲皮素磷脂复合物的作用优于单体;浓度为200 μmol·L-1的槲皮素及其磷脂复合物均能降低氧化损伤ARPE-19细胞的凋亡率,槲皮素磷脂复合物作用明显优于单体;槲皮素磷脂复合物能显著提高细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低细胞内活性氧、丙二醛水平,槲皮素单体则不能,但槲皮素及其磷脂复合物能提高细胞内总抗氧化能力;槲皮素及其磷脂复合物能诱导Nrf2核转位,激活Nrf2通道,上调血红素加氧酶-1、醌氧化还原酶-1和谷氨酸半胱氨酸连接酶的表达.结论 槲皮素形成磷脂复合物后,水溶性、脂溶性提高,对氧化损伤ARPE-19细胞的保护作用比单体强,其作用机制与激活Nrf2信号通路,上调下游Ⅱ相代谢酶和抗氧化酶的表达有关.  相似文献   

3.
背景 细胞因子失衡所导致的视网膜色素上皮(RPE)细胞的异常增生和迁移是增生性玻璃体视网膜病变( PVR)的主要病理变化之一.三氧化二砷(As2O3)是中国传统中药中的有效成分,可有效抑制肿瘤细胞的增生和迁移.但As2O3对细胞生长因子引起的RPE细胞增生和迁移的影响尚未明确. 目的 探讨As2O3对表皮生长因子(EGF)诱导的ARPE-19细胞增生和迁移的影响.方法 用无血清培养基对RPE细胞系ARPE-19细胞进行培养,将终浓度为0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0 μmol/L的As2O3分别加入到无血清培养基和含10 mg/L EGF的ARPE-19细胞培养液中作用24 h和48 h,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测各培养组ARPE-19细胞活性的吸光度(A)值,以探讨As2O3对细胞的药物毒性作用,并筛选安全、有效的As2O3作用浓度.用10 mg/L EGF加入培养基诱导ARPE-19细胞迁移,分别在培养板中加入0、0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3 作用24 h和48 h,并通过划痕试验和Transwell试验检测As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞迁移的影响.结果 MTT法检测发现不同浓度As2O3组作用24 h和48 h后,无血清培养组细胞A值随As2O3浓度的升高而逐渐下降,总体差异有统计学意义(F浓度=38.269,P=0.000;F时间=0.874,P=0.358).与空白对照组(0μmol/LAs2O3组)比较,0.5~ 5.0 μmol/L As2O3组ARPE-19细胞A值的差异均无统计学意义(P>0.05).对含10 mg/LEGF组的ARPE-19细胞,药物对细胞A值的影响呈现浓度和时间依赖性(F浓度=152.155,P=0.000;F时间=51.649,P=0.000).与对照组比较,0.5~2.0μmol/L As2O3加入24 h和48 h后,A值的变化差异均无统计学意义(P>0.05),而0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3加入10 mg/L EGF诱导的ARPE-19细胞中作用24h和48 h后,A值的变化差异均无统计学意义(F浓度=2.215,P=0.126;F时间 =2.230,P=0.155).5.0 ~20.0 μmol/L As2O3作用于EGF诱导的ARPE-19细胞中作用后,细胞A值明显下降,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),5.0~20.0 μmol/L As2O3作用24 h后,对EGF诱导的ARPE-19细胞增生抑制率分别为12%、32%、37%;作用48 h后细胞抑制率分别为39%、44%和53%.划痕试验结果显示,0.5~2.0 μmol/L As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞的横向迁移具有抑制作用.Transwell试验结果表明,0.5~2.0 μmol/L As2O3对10 mg/L EGF诱导的ARPE-19细胞纵向迁移有明显的抑制作用,0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3作用12h对ARPE-19细胞的抑制率分别为22%、33%和46%. 结论 As2O3在一定浓度范围内对ARPE-19细胞无毒性作用,2.0 μmol/L以下浓度的As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞增生无明显影响,但可影响细胞的迁移能力,5.0 μmol/L以上浓度的As2O3可明显抑制ARPE-19细胞的增生.  相似文献   

4.
目的 观察二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)诱导人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)-1的分子机制.方法 培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,加入30~ 100μmol·L-1 DHA作用4~24 h.ELISA法检测Rac1的活性,Western blot检测HO-1的表达及NADPH氧化酶p47phox亚基和p38的磷酸化;荧光探针H2DCFDA检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;采用Rac1抑制剂NSC23766、NADPH氧化酶抑制剂DPI、ROS清除剂NAC预处理细胞,检测其对HO-1表达的影响.结果 30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100 μmol·L-1 DHA作用ARPE-19细胞10 min后,Rac1的活性分别为(126.41±11.25)%、(185.05±15.41)%和(260.52±17.83)%,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<O.05).同时,100 μmol·L-1 DHA也能诱导p47 phox亚基磷酸化.30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100μmol·L-1 DHA处理4h后,细胞内ROS的含量分别为(132.52±8.33)%、(177.94±10.24)%和(211.62±7.14)%,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P <0.05).对照组细胞中磷酸化p38含量为0.16±0.01;当给予30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100 μmol·L-1 DHA处理30 min后,磷酸化p38含量分别为0.28 ±0.03、0.37±0.02和0.45±0.00,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P<0.05);采用Rac1抑制剂NSC23766或NADPH氧化酶抑制剂DPI处理后,p47phox亚基的磷酸化水平和细胞内ROS水平显著降低;而采用NAC处理后,可抑制DHA诱导ARPE-19细胞表达HO-1.结论 DHA可能通过Rac1/NAPDH氧化酶/ROS/p38通路途径诱导视网膜色素上皮细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.  相似文献   

5.
目的 探讨过氧化氢诱导的急性氧化应激对人晶状体上皮细胞形态、生存率及衰老标记蛋白30(senescence marker protein30,SMP30)表达的影响.方法 采用不同浓度过氧化氢(0μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、300 μmol·L-1)处理人晶状体上皮细胞24 h,建立不同浓度急性氧化应激模型,通过光镜观察、MTT分析细胞形态、生存率,Western blot检测SMP30蛋白的表达情况.结果 不同浓度过氧化氢处理细胞24 h后,100 μmol·L-1处理组和200 μmol·L-1处理组细胞密度、生长活力下降,细胞形态改变,开始出现变圆变大的细胞,胞体拉长,边界不清;300 μmol·L-1处理组细胞密度明显降低,细胞出现破碎,溃解.随着过氧化氢浓度的增高,细胞生存率逐渐下降,各处理组与对照组(Oμmol·L-)间相比,差异均有统计学意义(均为P <0.05).在对照组及100 μmol·L-1处理组、200 μmol·L-1处理组晶状体上皮细胞SMP30蛋白相对表达量分别为0.273±0.055、0.464±0.058、0.442±0.050,100 μmol·L-1处理组、200 μmol·L-处理组SMP30蛋白的表达均较对照组提高,差异均有统计学意义(均为P <0.05),100 μmol·L-1处理组和200 μmol·L-1处理组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 在急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞形态改变,生存率下降,SMP30蛋白表达上调,SMP30蛋白可能参与晶状体上皮细胞急性氧化应激损伤过程.  相似文献   

6.
目的 探讨青蒿素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化应激损伤的抑制作用。方法 将ARPE-19细胞接种于96孔板,每孔7×103个细胞,细胞贴壁后分别加入不同浓度青蒿素,筛选对细胞增殖有效的最佳药物浓度。将APRE-19细胞分成4组。对照组:不做特殊处理;过氧化氢组:加入100 μmol·L-1过氧化氢作用细胞24 h;青蒿素组:加入青蒿素30 μmol·L-1,作用细胞24 h;青蒿素预保护组:加入30 μmol·L-1青蒿素预保护细胞24 h后加入100 μmol·L-1 过氧化氢作用24 h。利用MTT法筛选青蒿素对ARPE-19细胞作用的最佳药物浓度;通过Hoechst33342染色及线粒体膜电位观测细胞凋亡情况;检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)阳性细胞数;Western blot法检测相关蛋白表达水平。结果 MTT法检测发现,30 μmol·L-1的青蒿素对细胞增殖作用最强 (均为P<0.01)。青蒿素预保护组与过氧化氢组相比,细胞增殖率升高,凋亡细胞数显著减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。线粒体膜电位染色显示,青蒿素预保护组与过氧化氢组相比绿色染色减少,红色染色增多,说明青蒿素预保护组凋亡细胞数减少。与对照组相比,青蒿素组ARPE-19细胞中SOD含量显著增加(P<0.05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组细胞内SOD含量明显增高(P<0.05),说明青蒿素能增加细胞内抗氧化物质,减少细胞凋亡。与对照组相比,青蒿素组ROS阳性细胞减少(P<0.05);与过氧化氢组相比,青蒿素预保护组ROS阳性细胞亦明显减少(P<0.05),说明青蒿素可减少过氧化氢诱导的活性氧物质积聚。通过Western blot检测发现,青蒿素能促进ARPE-19细胞内AKT的磷酸化,过氧化氢组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、 Keap1相对表达升高,Bcl-2、Nrf2、HO-1降低;青蒿素预保护组ARPE-19细胞内Caspase-3、PARP、 Keap1相对表达降低,Bcl-2、Nrf2、HO-1升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 青蒿素通过调节Nrf2/keap1信号通路来减小过氧化氢诱导的ARPE-19细胞的氧化应激损伤。  相似文献   

7.
目的 探讨过氧亚硝酸根(peroxynitrite,ONOO-)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,bFGF)共同作用对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的影响.初步探讨ONOO-导致白内障发生的可能机制.方法 将培养的HLEC细胞分为4组,对照组(未经ONOO-和bFGF处理)、bFGF单独处理组、bFGF+ONOO-处理组[bFGF预处理1h后加入不同浓度ONOO-(50 μmol·L-、100μmol·L-1、200 μmol·L-1)处理1 h]和ONOO-+ bFGF处理组[不同浓度ONOO-(50 μmol·L-1、100 μmol· L-1、200 μmol·L-1)预处理1h后加入bFGF处理1h].检测各组细胞内ERK磷酸化水平的变化.结果 bFGF单独处理组和bFGF+ONOO-(50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1)处理组中磷酸化ERK相对表达值分别为5.17±0.35、4.42±0.12、3.91±0.15和0.49±0.08,与对照组(1.00±0.05)相比差异有统计学意义(F=402.83,P<0.001),结果显示ONOO-可以抑制由bFGF诱导的ERK磷酸化水平的增加(F=310.34,P<0.05).ONOO-(50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-)+ bFGF处理组中磷酸化ERK相对表达值分别为3.36±0.04、3.32±0.06和2.92±0.08,与对照组(1.00±0.02)相比,所有处理组的ERK磷酸化水平均显著增加(F=518.94,P<0.001);50 μmol·L-1和100 μmol·L-1ONOO-处理细胞后经bFGF处理,ERK磷酸化水平较bFGF单独处理组(3.04±0.05)显著增加(F=35.53,P<0.05),而200 μmol·L-1 ONOO-处理组与bFGF单独处理组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 ONOO-诱导的白内障的发生可能与ERK磷酸化的紊乱有关.  相似文献   

8.
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对过氧化氢(H2O2)诱导人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)氧化损伤的保护作用.方法 HLEC传代培养24h后,分别加入不同浓度(5μmol·L-1、10 μmol·L-1、20 μmol·L-1、40 μmol·L-1) RES预处理12 h后,加入100 μmol·L-1 H2O2继续孵育24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,MTT比色法检测RES对H2O2诱导的HLEC活力的影响,流式细胞仪检测HLEC细胞凋亡率,比色法检测凋亡相关因子caspses-3及caspase-9的表达.结果 氧化损伤可以诱导HLEC形态改变,RES处理后,细胞形态逐渐得到改善.MTT结果显示RES对HLEC活性无抑制作用,RES(5μmol·L-1、10 μmol· L-1、20 μmol· L-1、40 μmol·L-1)孵育24 h后细胞存活率分别为(101.30±4.49)%、(100.31±3.53)%、(101.71±3.33)%、(99.30±3.00)%,与对照组(99.67±2.67)%比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05);模型组HLEC经氧化损伤处理后,细胞存活率(34.33±3.71)%明显下降,用20 μmol·L-1及40 μmol·L-1 RES处理后,HLEC存活率分别提高到(57.33±5.61)%和(72.67±6.98)%,与模型组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05).流式细胞计数结果显示:对照组HLEC凋亡率为(1.99±0.17)%,经H2O2处理后,模型组HLEC凋亡率为(51.73±4.97)%,20μmol·L-1、40 μmol·L-1 RES处理后,HLEC凋亡率分别为(34.43±3.67)%、(26.55±2.07)%,与模型组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05).此外,RES还可以减少H2O2所致HLEC内caspses-3及caspase-9的表达.结论 RES可以明显抑制HLEC凋亡,其抑制凋亡的作用可能是其防止和延缓白内障发生发展的细胞学基础,从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据.  相似文献   

9.
目的 研究溪黄草乙素对人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞生长的影响.方法 MTT法测定不同浓度(5μmol·L-1、10 μmol·L-1、20 μmol·L-1、40μmol·L-1和80 μmol·L-1)和不同时间(分别作用24 h和48 h)溪黄草乙素对人Rb细胞株增殖的影响;碘化丙啶染色,流式细胞术观察溪黄草乙素对Rb细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 溪黄草乙素各个剂量组对Rb细胞的增殖均有显著抑制作用,OD值随溪黄草乙素浓度升高而下降,抑制率随浓度增加而增加.溪黄草乙素对Rb细胞株的IC50为130 μmol·L-1,且随着溪黄草乙素剂量增加对Rb细胞株抑制作用增强.不同剂量组(对照组、5 μmol·L-1组、10 μmol·L-1组、20 μmol·L-1组、40μmol·L-1组、80 μmol·L-1组)溪黄草乙素作用Rb细胞24 h后,细胞凋亡率分别为:(1.07±0.03)%、(5.13±0.82)%、(8.67±1.20)%、(14.39±2.07)%、(26.45±3.01)%、(34.18±1.25)%;作用Rb细胞48 h后,细胞凋亡率分别为:(2.36±0.27)%、(6.49±1.15)%、(11.90±1.54)%、(19.21±2.66)%、(37.10±3.62)%、(47.55±3.19)%.表明溪黄草乙素作用Rb细胞24 h和48 h后Rb细胞的凋亡率在各个剂量组均显著升高,也呈现一定的剂量-效应关系,提示溪黄草乙素对Rb细胞凋亡率的影响随着剂量增加而升高.结论 溪黄草乙素可阻滞细胞进入C2/M期,进而诱导Rb细胞株凋亡.  相似文献   

10.
目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对高糖诱导视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用.方法 体外培养大鼠RGC细胞株RGC-5细胞,50 mol·L-1葡萄糖孵育细胞诱导损伤.应用CCK-8法测定并计算细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,全自动氨基酸分析仪测定细胞谷氨酸(glutamic acid,Glu)释放量,测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性.结果 高糖(50 mol·L-1)以时间依赖的方式抑制了RGC-5细胞的生长,高糖处理24 h、48 h和72 h生长抑制率分别为(22.37±3.49)%、(42.18±6.34)%和(57.33±5.39)%(均为P <0.05);与高糖组比较,高糖+不同浓度RSG组(0.1×10-6 mol·L-1、10-6 mol·L-1、10×10-6 mol·L-1)处理48 h以剂量依赖的方式降低了高糖诱导的RGC-5细胞生长:生长抑制率高糖组(42.18±6.34)%,高糖+不同浓度RSG组分别为(35.66±4.73)%、(27.35±4.15)%和(25.17±3.42)%(均为P<0.05).与对照组比较,高糖处理24 h、48 h和72 h以时间依赖的方式促进了细胞凋亡(均为P<0.05);与高糖组比较,高糖+不同浓度RSG组(0.1×10-6 mol·L-1、10-6 mol·L-1和10×10-6mol·L-1)处理48 h以剂量依赖的方式降低了高糖诱导的RGC-5细胞凋亡:高糖组凋亡率为(31.55±5.34)%,高糖+不同浓度RSG组分别为(23.75±3.72)%、(18.75±2.17)%和(17.53±3.05)%(均为P<0.05).与对照组比较,高糖组Glu释放量显著增加:2组分别为(85.64±12.75)μg·L-1和(246.84±33.48)μg·L-1(P<0.05).与高糖组比较,高糖+不同浓度RSG(0.1×10-6mol·L-1、10-6 mol·L-1和10×10-6mol·L-1)处理48 h组Glu的释放以剂量依赖的方式减少:高糖组Glu释放量为(246.84 ±33.48)μg·L-1,高糖+不同浓度RSG组分别为(175.34±23.69)μg·L-1、(117.25±18.76) μg·L-1和(109.34±15.54) μg·L-1(均为P<0.05).与对照组比较,高糖组SOD活性显著降低:分别为(3.06±0.38) kU·g-1和(0.56±0.07)kU·g-1(均为P<0.05),而MAD水平显著增加:分别为(5.67±0.76) μmol·g-1和(37.64±4.37) μmol·g-1(均为P<0.05).与高糖组相比较,高糖+不同浓度RSG处理48 h组细胞中SOD活性以剂量依赖的方式增加(均为P<0.05),而MAD水平显著降低(均为P<0.05).结论 RSG抑制了高糖诱导的RGC损伤,其机制与RSG减少了RGC中Glu的释放和抑制氧化应激有关.  相似文献   

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