防腐剂对兔角结膜上皮细胞毒性及玻璃酸钠保护作用的实验研究

目的 观察玻璃酸钠(sodium hyaluronate,SH)对3种眼科常用防腐剂致兔角膜和结膜上皮细胞毒性的保护作用.方法 体外常规方法培养兔角膜和结膜上皮细胞,将不同浓度防腐剂羟苯乙酯(0.3 g·L-1、0.6 g·L-1和1.2 g·L-1)、山梨酸(1 g·L-1和2 g·L-1)以及苯扎溴铵(0.025 g·L-1、0.05 g·L-1和0.1 g·L-1)分别单独和联合4 g·L-1 SH与培养细胞作用,并于作用后1 h、3 h、5 h,利用LIVE/DEAD细胞活性/毒性检测方法,观察细胞酯酶及细胞膜透通性变化,计算细胞存活率.结果 3种防腐剂与细胞作用不同时间后,角膜和结膜上皮细胞存活率均低于对照组,并且与浓度和作用时间呈依赖关系(P＜0.05).其中0.1 g·L-1苯扎溴铵对细胞存活率影响最大,作用1 h后,角膜和结膜上皮细胞存活率均为0;0.3 g·L-1羟苯乙酯影响最小,作用5 h后角膜和结膜上皮细胞存活率分别为(80.89±7.81)%和(55.00±7.81)%;二者相比差异均有统计学意义(P＜0.05).各时间点结膜上皮细胞的存活率均低于角膜上皮细胞(P＜0.05).在各时间点羟苯乙酯-SH组及山梨酸-SH组,角膜和结膜上皮细胞存活率均高于同浓度防腐剂组(P＜0.05).作用3 h后,0.05 g·L-1浓度苯扎溴铵-SH组与同浓度防腐剂组相比,细胞存活率明显增高(P＜0.05),其余浓度的苯扎溴铵-SH组与同浓度防腐剂组相比,细胞存活率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种防腐剂中苯扎溴铵对角结膜的毒性最大,羟苯乙酯毒性最小.3种防腐剂对结膜上皮细胞的毒性作用大于角膜上皮.SH对羟苯乙酯和山梨酸所致细胞毒性均有较好的保护作用,但其保护作用随防腐剂作用时间的增加而减弱.     

汉防己甲素对兔眼毒性作用的初步研究

目的 运用描述性毒理学初步探讨汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对兔眼的毒性作用.方法 健康新西兰大耳白兔30只,随机分为4组,1 g·L-1组、3 g·L-1组、9 g·L-1组及正常对照组,模拟临床连续用药3个月.进行急性眼刺激性实验,临床裂隙灯观察,A超测量角膜厚度,考马斯亮兰测房水蛋白浓度,角膜内皮细胞茜素红台盼兰联合染色及组织病理学和透射电镜检查.结果 1 g·L-1、3 g·L-1 Tet对眼均无刺激性;9 g·L-1 Tet有轻度刺激性.临床裂隙灯观察,1 g·L-1组眼前节正常,3 g·L-1、9 g·L-1组出现不同程度角膜水肿,9 g·L-1组出现明显炎症反应.1 g·L-1组与正常对照组比较,角膜厚度、房水蛋白含量、角膜内皮细胞活性率均无显著性差异(P>0.05);3 g·L-1、9 g·L-1组与正常对照组比较,角膜厚度、房水蛋白含量显著增加,内皮细胞活性率显著降低(P<0.05).组织病理及超微结构检查示:1 g·L-1组无病理及超微结构改变;3 g·L-1组可见角膜水肿,睫状体上皮水肿,晶状体上皮细胞胞核出现核沟;9 g·L-1组可见角膜上皮细胞、角膜细胞和内皮细胞水肿、变性、坏死,虹膜和睫状体上皮细胞水肿,晶状体上皮细胞胞质出现半透明空化区,线粒体肿胀.结论 Tet的浓度、用药时间与刺激性及毒性呈正相关,1 g·L-1浓度Tet对眼组织无刺激性、毒性,应可安全应用于眼部.     

氧化石墨烯对大鼠角膜上皮细胞的致损伤作用

目的 探讨氧化石墨烯(oxidation of graphene,GO)对大鼠角膜上皮细胞的毒性作用.方法 体外培养Wistar雌鼠角膜上皮细胞分为正常对照组、GO干预组,正常对照组不做任何处理,GO干预组在培养时加入不同浓度(0.005 μg·L-1、0.010μg·L-1、0.020 μg·L-1、0.050 μg·L-1、0.100μg·L-1)的GO.MTT法绘制角膜上皮细胞的生长曲线、检测细胞活性;流式细胞术检测细胞的状态分布;HE染色后显微镜下观察亚细胞结构;用DAPI/PI双染以及台盼兰染色的方法进一步验证经GO干预后的细胞状态.结果 经GO干预后的角膜上皮细胞通过HE染色发现细胞内有GO的进入与残留,且细胞形态发生不规则改变,伪足部分出现纤维状结构;MTT结果显示随着GO浓度的增加,细胞活性由(81.55±1.31)％降低至(64.08±0.27)％,随着最低有效浓度的GO(O.005 μg·L-1)干预时间的增加,细胞活性由(82.61±1.36)％降低至(47.92±1.06)％;流式细胞术显示细胞破碎、死亡的比例随着GO浓度的升高,由52.9％上升至92.8％,而凋亡细胞的比例未发生明显变化;DAPI/PI双染及台盼兰染色结果均显示经GO干预后细胞死亡数目的比例急剧升高(均为P＜0.01).结论 GO对大鼠角膜上皮细胞具有毒性作用,提示GO的生物安全性存在隐患.     

丝裂霉素对体外培养兔角膜内皮细胞的毒性影响

目的探讨丝裂霉素C(mitomycinC,MMC)对角膜内皮细胞的毒性作用。方法体外培养家兔角膜内皮细胞,接种于96孔板,加入不同浓度的MMC,分别为1×10-6g·L-1、1×10-5g·L-1、1×10-4g·L-1、1×10-3g·L-1、1×10-2g·L-1、1×10-1g·L-1,动态观察细胞的形态变化和增殖情况,加药22h后MTT法检测吸光度值,应用t检验比较各组间的差异。结果10-2g·L-1、10-1g·L-1浓度组8h后细胞部分死亡,20h细胞几乎全部死亡,其余各组变化不明显。统计学结果显示:10-6g·L-1、10-5g·L-1组和对照组比较无显著性差异(P>0.05),10-4g·L-1组有显著性差异(0.01相似文献   

去整合素对人眼晶状体上皮细胞的粘附移行作用

目的研究去整合素对体外培养的人眼晶状体上皮细胞生长的抑制作用。方法对先天性白内障患者术中环行撕前囊膜,进行原代培养并传代,取第2代细胞用于实验。抗粘附实验:将悬浮的细胞与不同浓度的去整合素(5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)在37℃、50mL·L-1CO2条件下一起孵育30min。然后接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板。8h后,用HBSS轻洗各孔2次,MTT法测定粘附细胞的吸光度。抗移行实验:对融合的细胞进行划线,80μg·L-1的去整合素进行干预,24h、48h、72h后,细胞计数法观察裸露区内细胞的移行数量。结果不同浓度的去整合素(20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)对晶状体上皮细胞的粘附均具有抑制作用且呈剂量依赖性。与对照组相比,24h、48h、72h内80μg·L-1的去整合素可显著抑制晶状体上皮细胞的移行。结论去整合素抑制体外培养的人眼晶状体上皮细胞的粘附及移行。     

新型纳米材料在干眼中的应用进展

局部点药是眼部用药最常见的方式,但一般药物通过角膜困难,药物生物利用度低。纳米载体药物于80年代开始用于眼部,脂质体和类脂质囊泡(niosomes)与眼表的黏蛋白相互作用,延长药物在眼表的停留时间。纳米乳剂(nanoemulsion)的表面活性剂可以松解角膜上皮细胞紧密连接,形成转运开口,抑制细胞表面糖蛋白酶P(glycoprotein P,Pgp)降解药物活性蛋白。纳米粒子(nanoparticles)通过角膜上皮和结膜上皮而不会引起毒性。纳米胶囊(nanocapsules)更深地内化到角膜上皮(50μm处)。聚合物胶束(polymeric micelles)自组装成核-壳纳米载体增强药物渗透角膜的能力。阴离子高代聚酰氨基胺(poly-amidoamine,PAMAM)树枝状大分子增强药物通透性,中性和阳离子低代树枝状大分子通过网格蛋白途径介导药物更高的通透性。纳米晶体(nanocrystal),除增强药物溶解度和溶解速率之外,它的高黏附能力帮助药物保留和渗透到眼组织中。纳米结构材料与干眼关联密切,为干眼的治疗、诊断提供手段。     

转化生长因子β1对牛角膜内皮细胞外基质合成的影响

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对体外培养的牛角膜内皮细胞细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)合成的影响。方法将体外培养的牛角膜内皮细胞分为实验组和对照组,经0μg·L-1(对照)、0.1μg·L-1、1.0μg·L-1、10.0μg·L-1、100.0μg·L-1浓度的TGF-β1处理48h后,用SABC免疫组化法分别检测角膜内皮细胞纤维连接蛋白和层粘连蛋白的合成情况。结果与对照组相比,一定浓度(1.0μg·L-1及10.0μg·L-1)的TGF-β1能明显促进体外培养的角膜内皮细胞纤维连接蛋白及层粘连蛋白的合成,且呈剂量依赖性。但浓度为0.1μg·L-1及100.0μg·L-1的TGF-β1组OD值与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论一定浓度(1·0μg·L-1及10.0μg·L-1)TGF-β1能促进牛角膜内皮细胞ECM的合成,提示TGF-β1可能在角膜内皮细胞损伤修复中扮演重要角色。     

左氧氟沙星白芨多糖滴眼液的眼部药物代谢动力学研究

目的评价5g.L-1左氧氟沙星白芨多糖滴眼液(左氧白芨滴眼液)滴兔眼后,药物在眼部的药物代谢动力学,以及与5g.L-1左氧氟沙星滴眼液(可乐必妥)比较其相对生物利用度。方法新西兰大白兔64只(128眼),平均分为2组,实验组给予左氧白芨滴眼液50μL滴眼,对照组给予可乐必妥50μL滴眼。分别于不同时间点取房水和角膜,应用高效液相色谱法测定左氧氟沙星浓度。采用DASver2.0药物代谢动力学程序计算各药物代谢动力学参数。结果所建立的高效液相色谱法能将左氧氟沙星与其他杂质很好地分离,其最低定量浓度为53.95μg.L-1,组织中回收率稳定。左氧白芨滴眼液与可乐必妥在房水中的半衰期(t1/2)分别为90.512min和106.480min,达峰时间(tmax)分别为45.000min和60.000min,达峰浓度(Cmax)分别为2318.973μg.L-1和1111.457μg.L-1(P<0.05);角膜中t1/2分别为109.400min和64.956min,tmax分别为10.000min和15.000min,Cmax分别为23.012μg.g-1和16.389μg.g-1。左氧白芨滴眼液组房水和角膜中药物...     

体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究

目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。     

人间充质干细胞横向诱导分化为角膜上皮细胞及角膜缘干细胞的体外研究

目的 探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外向角膜上皮细胞及角膜缘干细胞横向分化的可能性.方法 从成人骨髓中分离培养出具有MSCs特性的细胞,经过5次传代培养纯化后使用以下5种培养基对MSCs进行诱导分化:1组:DMEM/F12、体积分数10?S;2组:DMEM/F12、体积分数10?S、5 μg·L-1 表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF);3组:DMEM/F12、体积分数10?S、10 μg·L-1 EGF;4组:DMEM/F12、体积分数10?S、15 μg·L-1 EGF;5组:DMEM/F12、体积分数10?S、体积分数50%条件培养基、10 μg·L-1 EGF.其中第1组为对照组,使用的培养基为培养MSCs的培养基.各组细胞培养30 d后,取出细胞爬片进行AE1、AE5和P63的免疫组化染色.结果 从成人骨髓中分离培养出的细胞绝大部分具有MSCs的特性.各诱导分化组的细胞经过AE1染色后计算的细胞诱导转化率分别为:0、(5.28±0.90)%、(15.65±1.65)%、(27.35±2.36)%、(15.53±1.61)%,第2、3、4组着色细胞的数量和着色深度递增,第5诱导分化组的染色情况和第3组相近,对照组染色为阴性.各组AE5染色均为均匀淡染.各组P63染色均为阴性.结论 5～15 μg·L-1 EGF能诱导MSCs横向分化为角膜上皮细胞,而且在此浓度范围内EGF的诱导作用随浓度升高逐渐增强.用成人角膜缘干细胞的培养液制成的体积分数50%条件培养基对诱导MSCs横向分化为角膜上皮细胞无明显促进作用,本实验方法不能将MSCs诱导分化为角膜缘干细胞.     

Minimal-invasive Therapie der Epiphora durch Ballonkatheterdilatation und Stentimplantation

ZusammenfassungHintergrund Untersuchung der klinischen Effizienz der Ballonkatheterdilatation bzw. Stentimplantation bei Obstruktionen des Tränengangsystems.Methode Bei insgesamt 63 Patienten wurden wegen Epiphora 69 Tränenapparate mittels Ballonkatheterdilatation bzw. Stentimplantation behandelt. In 55 Fällen lag der Symptomatik eine Stenose, in 14 Fällen ein Verschluss des Tränengangsystems zugrunde. In allen Fällen erfolgte präinterventionell die diagnostische Dakryozystographie zur Beurteilung des Stenosegrades und der Lokalisation. Ergebnisse Die Intervention war bei 61 Tränenapparaten technisch erfolgreich. Innerhalb des Nachbeobachtungszeitraumes von maximal 3,5 Jahren betrug die klinische Erfolgsrate bei den Tränenwegsstenosen 83,6%, bei den Verschlüssen 42,9%.Schlussfolgerungen Die Dakryozystoplastie in Form der durchleuchtungskontrollierten Ballondilatation sowie ggf. nachfolgender Stentimplantation stellt im Vergleich zur operativen Therapie ein minimal-invasives Verfahren dar, das bei vergleichbaren technischen und klinischen Erfolgsraten zunehmend als Alternative zur Behandlung der symptomatischen Tränenwegsstenosen und Verschlüsse eingesetzt werden kann.     

Elemental concentrations in ocular tissues of various species

An investigation was undertaken to expand the data base for elemental concentrations within eye tissues of different species. This report provides data on the distribution of calcium, copper, iron and zinc in human, dog, bovine, bird, amphibian and fish ocular tissues. The variation between different eyes of the same individual and different individuals was calculated for each metal. Elemental concentrations between the left and right eyes of an individual were usually closer in value than between two eyes of different individuals.