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相似文献
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1.
目的 探讨转化生长因子β2(transforming growth factor beta 2,TGF-β2)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts,HTFs)生物学行为及表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的影响.方法 组织块贴壁法培养原代HTFs,免疫荧光染色鉴定波形蛋白和角蛋白.MTT法检测不同浓度TGF-β2对HTFs细胞的促增殖作用,RT-PCR检测TGF-β2作用前后α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)、ILK mRNA的表达,Western Blot检测α-SMA、ILK、E-cadherin蛋白的表达,细胞免疫荧光染色检测α-SMA、E-cadherin蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,TGF-β2作用48 h、72 h,5.0 μg· L-1及10.0 μg· L-1诱导下的OD值显著高于0.1μg·L-1、1.0 μg·L-1组及空白对照组(均为P<O.05),5.0 μg·L-1及10.0 μg·L-1作用48 h及72 h的OD值显著高于24 h(均为P<0.05).RT-PCR检测结果显示,5.0μg·L-1TGF-β2诱导48 h后,α-SMA mRNA及ILK mRNA水平和空白对照组相比明显上调,差异均有统计学意义(均为P<0.05).Western Blot检测结果显示,ILK、α-SMA及E-cadherin在空白对照组和5.0 μg· L-1TGF-β2处理组均有表达,但TGF-β2能够明显上调三者的表达,5.0 μg·L-TGF-β2处理48 h组与空白对照组差异均有统计学意义(均为P<0.05).细胞免疫荧光染色结果显示,TGF-β2处理组α-SMA、E-cadherin均有荧光表达,其中oα-SMA表达在细胞质中,而E-cadherin在细胞质和细胞核中均有表达.结论TGF-β2可以诱导体外培养HTFs增殖,转分化及黏附性增强,同时促进ILK的高表达,提示ILK在青光眼术后瘢痕化过程中可能也起到一定作用.  相似文献   

2.
目的 探讨重楼皂苷Ⅰ对人视网膜色素上皮细胞系(ARPE-19)的增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度(1.5 mg·L-1、3.0 mg·L-1、6.0 mg·L-1)重楼皂苷Ⅰ作用下的ARPE细胞,CCK-8法检测重楼皂苷Ⅰ对ARPE-19细胞增殖的影响;流式细胞仪检测ARPE-19细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blot检测ARPE-19细胞内Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyclin D1、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达.结果 1.5 mg· L-1、3.0 mg·L-1、6.0 mg·L-1重楼皂苷Ⅰ处理后细胞存活率分别为(68.945±5.647)%、(58.637±5.266)%、(47.338±6.493)%,均低于空白对照组的(98.600±7.803)%;凋亡率分别为(9.622±0.315)%、(26.123±0.331)%、(34.345±0.621)%,均高于空白对照组的(4.512±0.213)%;G0/G1期比例分别为(68.520±2.630)%、(75.222±2.627)%、(81.792±3.931)%,均高于空白对照组的(54.632±2.506)%.重楼皂苷Ⅰ处理对ARPE-19细胞ERK1/2蛋白表达无明显影响,但下调Cyclin D1、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白的表达,上调Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达.结论 重楼皂苷Ⅰ通过下调Cyclin D1的表达将ARPE-19细胞阻滞于G1期,抑制细胞增殖.通过抑制ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.本研究为中药重楼治疗增生性玻璃体视网膜病变提供了依据.  相似文献   

3.
目的 研究纳米材料氧化锌在有/无紫外线B(ultraviolet B,UVB)照射下对人晶状体上皮细胞系B-3(human lens epithelial cell B-3,HLEB-3)细胞质膜Ca2+-ATP酶1(plasma membrane calcium ATPase1,PMCA1)表达的影响.方法 HLEB-3细胞进行培养和传代,在有/无UVB照射情况下,加入不同浓度的氧化锌,利用DAPI染色细胞核;Annexin V/PI染色检测细胞凋亡;Fluo-3/AM染色检测细胞内Ca2浓度的变化;实时荧光定量PCR检测PMCA1 mRNA表达水平;Western blot方法检测PMCA1蛋白表达水平.结果 DAPI细胞核染色结果显示,氧化锌以浓度依赖方式使HLEB-3细胞产生典型的细胞凋亡反应;UVB照射可增加氧化锌对HLEB-3细胞的毒性效应;在UVB照射下,经氧化锌(2.5 μg· mL-1、5.0 μg·mL-1、10.0 μg· mL-1)处理的HLEB-3细胞凋亡及细胞内Ca2浓度增加(均为P<0.05),细胞内Ca2水平分别从(156.34±4.59) nmol·L-增加到(173.88±7.17)nmol· L-1、(289.02±9.09)nmol·L-1、(488.36±48.16) nmol·L-,差异均有统计学意义(均为P<0.05);在无UVB照射下,2.5 μg· mL-1、5.0 μg· mL-1、10.0μg·mL-1氧化锌组细胞PMCA1 mRNA表达分别是0μg·mL-1氧化锌组的0.75倍、0.57倍和0.41倍,差异均有统计学意义(均为P <0.05);而在有UVB照射下,各浓度氧化锌组细胞PMCA1 mRNA表达分别是0μg·mL-1氧化锌组的0.64倍、0.24倍和0.09倍,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 氧化锌和UVB照射通过Ca2信号转导通路对HLEB-3细胞有协同抑制作用,提示氧化锌在有UVB照射的情况下对后发性白内障的治疗有巨大潜在作用.  相似文献   

4.
目的 探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对H2O2诱导人晶状体上皮细胞(SRA01/04)氧化应激损伤的保护作用.方法 将SRA01/04细胞传代培养24h后,加入不同浓度(50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1、400 mg·L-1、800 mg·L-1和1600 mg·L-1)LBP预处理24 h,之后加入200 μmol·L-1H2O2继续培养24 h,用CCK-8检测LBP对H2O2诱导的SRA01/04细胞活力的影响并筛选出LBP最佳保护浓度用于后续实验.采用流式细胞仪检测SRA01/04细胞凋亡率和线粒体膜电位变化情况,Western blot检测各组凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达情况.结果 CCK-8检测结果显示:LBP浓度为200 mg·L-1和400 mg·L-1时,能够促进SRA01/04细胞增殖,细胞存活率分别为(121.10±5.56)%和(128.20 ±3.79)%,与对照组(99.98±4.73)%比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05).H2O2模型组SRA01/04细胞经氧化应激损伤后,细胞存活率(51.67±4.91)%明显降低,与对照组(99.67±2.52)%相比,差异有统计学意义(P <0.001).用200 mg·L-1和400mg·L-1 LBP预处理后,SRA01/04细胞存活率明显提高至(74.01±3.21)%及(84.67±4.33)%,与H2O2模型组比较差异均有统计学意义(均为P<0.01).400 mg·L-1 LBP对RA01/04细胞氧化应激损伤保护作用最大.流式细胞仪检测结果显示:对照组细胞凋亡率为(5.1±1.2)%;H2O2模型组细胞凋亡率为(25.9±1.5)%;400 mg·L-1 LBP预处理后,细胞凋亡率降至(13.8±1.2)%,与H2O2模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01).线粒体膜电位检测结果显示:对照组阳性细胞数最多,线粒体膜电位高;H2O2模型组阳性细胞数最少,线粒体膜电位低;400 mg·L-1 LBP预处理后,阳性细胞数增多及线粒体膜电位升高,与H2O2模型组相比,差异有统计学意义(P<0.001).Western blot检测显示:与对照组相比,H2O2模型组Bcl-2表达下降,Bax表达上升(P<0.01);经400 mg·L-1 LBP预处理后,Bcl-2表达上升,Bax表达下降,与H2O2模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 LBP对H2O2诱导人晶状体上皮细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可抑制细胞凋亡.  相似文献   

5.
王亮  田莹  程钰  赵俊宏  曹燕  郭建强 《眼科新进展》2018,(11):1037-1040
目的 研究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对过氧化氢(H2O2)致视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)损伤的保护作用,为LCA在青光眼治疗方面的应用提供初步的实验依据。方法 体外培养RGC-5细胞,随机分为对照组(正常培养基培养)、H2O2组(培养基中加入200 μmol·L-1 H2O2)、LCA组(培养基中除加入200 μmol·L-1 H2O2外,还分别加入10 μmol·L-1、20 μmol·L-1、40 μmol·L-1的LCA溶液),CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果 CCK-8法检测结果显示,10 μmol·L-1、20 μmol·L-1和40 μmol·L-1LCA组的细胞存活率分别为(63.7±5.4)%、(78.8±6.3)%和(72.3±6.9)%,与H2O2组的(54.3±3.9)%相比,20 μmol·L-1 LCA组增殖最显著(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,10 μmol·L-1、20 μmol·L-1和40 μmol·L-1LCA组细胞凋亡率分别为(21.1±1.9)%、(12.3±1.3)%和(14.8±2.0)%,与H2O2组的(29.3±2.0)%比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与H2O2组比较,不同浓度LCA组Bcl-2蛋白的表达均增加,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA法检测结果显示,与H2O2组比较,不同浓度LCA组RGC-5的丙二醛含量均降低,但超氧化物歧化酶活性均显著增加(均为P<0.05)。结论 LCA能缓解H2O2诱导的RGC损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和氧化应激有关。  相似文献   

6.
目的观察不同浓度17β-雌二醇对H2O2诱导的雌性大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的调控,探讨不同浓度雌激素对晶状体上皮细胞凋亡的作用及其机制,为合理应用雌激素防治白内障提供实验依据。方法摘取健康成年雌性SD大鼠的透明晶状体48枚,随机分为6组培养:17β-雌二醇+H2O2组1、17β-雌二醇+H2O2组2、17β-雌二醇+H2O2组3、17β-雌二醇+H2O2组4、H2O2组以及空白对照组。除空白对照组外,其他组以终浓度为300μmol.L-1过氧化氢制作晶状体上皮细胞凋亡模型,并分别加入不同终浓度17β-雌二醇干预,17β-雌二醇+H2O2组1至4的17β-雌二醇干预浓度分别为1×10-8mol.L-1、1×10-7mol.L-1、1×10-6mol.L-1、1×10-5mol.L-1。于细胞恒温培养箱中孵育24h后,撕取各组晶状体前囊及赤道部囊膜铺片,采用TUNEL法检测晶状体上皮细胞凋亡率,免疫组织化学SP法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的阳性表达率。结果 TUNEL法检测晶状体上皮细胞凋亡率结果显示:17β-雌二醇+H2O2各组晶状体上皮细胞凋亡率(0.4508±0.0203、0.4245±0.0196、0.4077±0.0163、0.3770±0.0205)均显著低于H2O2组(0.9048±0.0186),差异均具有显著统计学意义(均为P=0.000),并且与17β-雌二醇的浓度呈负相关。免疫组织化学SP法检测Bcl-2及Bax阳性表达率结果显示:在空白对照组晶状体上皮细胞中,Bcl-2和Bax均有表达,且Bcl-2的表达(0.8907±0.0190)远较Bax表达(0.0777±0.0234)强;H2O2可明显降低Bcl-2表达(0.0930±0.0110),提高Bax表达(0.9248±0.0238);与H2O2组比较,17β-雌二醇可明显提高Bcl-2表达(0.5662±0.0564、0.5872±0.0441、0.6212±0.0548、0.6682±0.0568),降低Bax表达(0.4677±0.0352、0.4472±0.0451、0.4077±0.0154、0.3587±0.0310),差异均有显著统计学意义(均为P=0.000)。结论 17β-雌二醇对H2O2诱导的离体培养雌性大鼠晶状体上皮细胞的凋亡有抑制作用,此抑制作用在一定范围内与17β-雌二醇的浓度呈正相关;对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的调控可能是17β-雌二醇抑制晶状体上皮细胞凋亡的分子机制之一。  相似文献   

7.
目的 探讨黄芩苷对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激的影响,并探讨其可能机制。方法 以人晶状体上皮细胞系HLE-B3为研究对象,用不同浓度黄芩苷处理后,采用CCK-8法检测细胞活力以筛选黄芩苷最佳作用浓度用于后续实验。将细胞随机分为正常组、高糖组、黄芩苷组,采用CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测Kelch样ECH相关蛋白1 (Keap1)、NQO1、核因子红细胞2相关因子2 (Nrf2)、HO-1、Bax、Bcl-2的mRNA相对表达量,Western blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平,酶标法检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果 CCK-8法检测结果显示,5 μmol·L-1黄芩苷可以显著增强HLE-B3细胞活力,随着黄芩苷浓度升高,细胞活力下降,故以5 μmol·L-1黄芩苷进行后续实验。与正常组HLE-B3细胞活力[(100.00±0.00)%]相比,高糖组细胞活力[(73.52±1.71)%]显著降低(P<0.01);与高糖组相比,黄芩苷组细胞活力[(92.36±3.61)%]显著升高(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,与正常组HLE-B3细胞凋亡率[(7.93±0.22)%]相比,高糖组细胞凋亡率[(57.12±2.63)%]显著升高(P<0.01);与高糖组相比,黄芩苷组细胞凋亡率[(42.09±1.04)%]显著降低(P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,与正常组相比,高糖组HLE-B3细胞中Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2 mRNA相对表达量均显著降低,Keap1、Bax mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.05);与高糖组相比,黄芩苷组HLE-B3细胞中Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2 mRNA相对表达量均显著升高,Keap1、Bax mRNA相对表达量均显著降低(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,高糖组HLE-B3细胞中Keap1、Bax蛋白相对表达量均较正常组显著升高,黄芩苷组Keap1、Bax蛋白相对表达量均较高糖组显著降低(均为P<0.05);高糖组HLE-B3细胞中Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白相对表达量均较正常组显著降低,而黄芩苷组Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白相对表达量均较高糖组显著升高(均为P<0.05)。酶标法检测结果显示,高糖组HLE-B3细胞中SOD活力、GSH-Px含量均较正常组降低,MDA含量较正常组升高(均为P<0.05);黄芩苷组HLE-B3细胞中SOD活力、GSH-Px含量均较高糖组明显升高,MDA含量较高糖组降低(均为P<0.05)。结论 低浓度黄芩苷可抑制高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激,其作用机制可能与Keap1-Nrf2-ARE信号通路有关。  相似文献   

8.
目的 研究Edaravone对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响.方法 健康Wistar大鼠36只随机分为3组:空白对照组、模型组和Edaravone治疗组.空白对照组不做任何处理,模型组和Edaravone治疗组均采用前房加压法建立大鼠RIRI模型,Edaravone治疗组于缺血前30 min行腹腔注射Edaravone(3 mg·kg-1),恢复灌注30min后再行腹腔注射Edaravone (3 mg· kg-1).免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜缺血-再灌注后24 h视网膜神经节细胞Bcl-2和Bax的表达情况.结果 空白对照组未见Bcl-2和Bax表达.再灌注后24h,模型组Bcl-2表达为0.406±0.022,Bax表达为0.661±0.034,Bcl-2/Bax为0.609±0.015;Edaravone治疗组Bcl-2表达为0.581±0.031,Bax表达为0.491±0.017,Bcl-2/Bax为1.104±0.094.与模型组比较,Edaravone治疗组Bcl-2表达明显增强(P<0.05),Bax表达明显减弱(P<0.05),Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05).结论 Edaravone对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有明显的保护作用,其机制可能与上调Bc1-2表达及下调Bax的表达有关.  相似文献   

9.
目的 观察微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)和沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)在不同浓度H2O2诱导的人晶状体上皮细胞(SRA01/04细胞)氧化应激中的表达变化.方法 用不同浓度的H2O2(0μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、300 μmol·L-1、400 μmol·L-1)处理细胞24 h后,用CCK-8检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和RT-PCR检测miR-34a/SIRT1的表达.结果 CCK-8检测结果显示:100~400 μmol·L-1 H2O2对SRA01/04细胞有增殖抑制作用,且呈剂量依赖关系,与0μmol·L-1 H202组相比差异均有统计学意义(均为P<0.01);流式细胞仪凋亡检测结果显示:0μmol·L-1 H2O2组细胞凋亡率为(6.1±1.2)%;100 μmol·L-1、200μmol·L-1、300 μmol·L-1 H2O2组细胞凋亡率分别为(26.3±1.8)%、(32.5±2.2)%、(64.7±5.3)%,各组与0μmol·L-1H2O2组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.01).RT-PCR检测结果显示:不同浓度H2 O2处理SRA01/04细胞后,细胞中的miR-34a表达水平呈剂量依赖性升高,而SIRT1表达水平呈相应下降,与0μmol·L-1 H2O2组相比差异均有统计学意义(均为P <0.001).结论 在一定浓度H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激中,miR-34a表达水平显著增加,而SIRT1表达水平显著下降.下调miR-34a表达可增加氧化应激人晶状体上皮细胞存活率.  相似文献   

10.
背景 青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增生是滤过泡功能下降的主要原因,羟喜树碱是诱导肿瘤细胞及多种非肿瘤细胞凋亡的药物.目前已有羟喜树碱诱导成纤维细胞凋亡的相关报道,但其作用机制尚不完全清楚. 目的 探讨羟喜树碱是否能诱导HTFs凋亡并研究其作用机制.方法 取离体<6h的供体结膜囊组织,以组织块培养法原代培养HTFs,用含质量分数10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基继续传代培养,用波形蛋白及角蛋白对培养的细胞进行鉴定,取3~6代细胞进行实验.分别将0.01、0.05、0.10 g/L羟喜树碱加入培养基中作用5 min,未加入羟喜树碱的细胞作为对照组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测各组细胞的增生能力并进行比较.用0.10 g/L羟喜树碱处理细胞,继续培养24 h,用annexinV/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,用JC-1染色检测HTFs线粒体膜电位,采用Western blot法检测HTFs中半胱氨酸天冬酶-3(caspase-3)、caspase-9及线粒体/细胞质中细胞色素C(cyt C)蛋白的表达,对各组中的测量结果进行比较.结果 0、0.01、0.05、0.10 g/L羟喜树碱组的HTFs增生值(A450)分别为0.9716±0.0608、0.8035±0.0346、0.7048±0.0446和0.6265±0.0286,总体差异有统计学意义(F=26.372,P=0.002),0.01、0.05、0.10 g/L羟喜树碱组HTFs A450值均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),以0.10 g/L羟喜树碱组HTFs A450值最低.Annexin V/PI双染色检测发现,0.10 g/L羟喜树碱组HTFs凋亡率为(18.72±1.41)%,明显高于对照组的(3.67±0.36)%,差异有统计学意义(t=-10.374,P=0.001);0.10 g/L羟喜树碱组HTFs中caspase-3、caspase-9蛋白的表达强度明显强于对照组.JC-1染色发现,0.10 g/L羟喜树碱处理5 min后细胞质中单体JC-1的绿色荧光明显强于对照组,而线粒体中聚合态JC-1的红色荧光弱于对照组.Western blot检测发现,0.10 g/L羟喜树碱组HTFs线粒体中cyt C蛋白表达灰度值为0.0124±0.0016,高于对照组的0.0216±0.0096,雨0.10 g/L羟喜树碱组HTFs细胞质中cyt C蛋白表达灰度值为0.0605士0.0022,低于对照组的0.0301±0.0016,差异均有统计学意义(线粒体:t=4.865,P=0.014;细胞质:t=-11.177,P=0.001).结论 羟喜树碱诱导HTFs凋亡,引起线粒体的稳态破坏,激活线粒体凋亡途径.  相似文献   

11.
目的 研究补肾活血中药血清对加压纯化培养视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡模型PI3K/Akt信号转导通路主要成员PDK及Akt表达的影响,探索补肾活血法保护RGCs的机制.方法 制备补肾活血中药含药血清,体外纯化SD大鼠RGCs,采取开放式压力控制培养系统建立体外加压培养RGCs凋亡模型,以50g·L-1、100g· L-1、200g· L-1血清浓度梯度补肾活血中药血清分别处理.将RGCs分为5组,分别为正常培养组(N组)、对照组(C组)、50 g· L-1补肾活血中药血清组(50 g·L-1BSHX组)、100g· L-1补肾活血中药血清组(100 g·L-1BSHX组)、200g·L-1补肾活血中药血清组(200 g·L-1BSHX组),Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测补肾活血中药血清对RGCs PDK及AktmRNA表达水平的影响,Western blot检测各组PDK、Akt蛋白表达量.结果 Q-PCR检测各组mRNA结果:C组(0.04±0.01)与N组(1.00±0.04)相比,RGCs中PI3K、Akt的mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(均为P <0.05),而50 g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-BSHX组(0.18±0.01、0.21±0.02,0.22±0.01、0.36±0.01,0.84±0.10、1.07±0.17)与C组相比,PI3K、Akt mRNA含量逐渐升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05).Western blot检测各组蛋白表达,C组与N组相比,细胞PI3K、Akt的蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),而50 g·L-1、100 g·L-1、200 g·L-BSHX组与C组相比,PI3K、Akt蛋白表达量逐渐升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 补肾活血中药血清抑制加压诱导的RGCs凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关.  相似文献   

12.
目的 探讨过氧化氢诱导的急性氧化应激对人晶状体上皮细胞形态、生存率及衰老标记蛋白30(senescence marker protein30,SMP30)表达的影响.方法 采用不同浓度过氧化氢(0μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、300 μmol·L-1)处理人晶状体上皮细胞24 h,建立不同浓度急性氧化应激模型,通过光镜观察、MTT分析细胞形态、生存率,Western blot检测SMP30蛋白的表达情况.结果 不同浓度过氧化氢处理细胞24 h后,100 μmol·L-1处理组和200 μmol·L-1处理组细胞密度、生长活力下降,细胞形态改变,开始出现变圆变大的细胞,胞体拉长,边界不清;300 μmol·L-1处理组细胞密度明显降低,细胞出现破碎,溃解.随着过氧化氢浓度的增高,细胞生存率逐渐下降,各处理组与对照组(Oμmol·L-)间相比,差异均有统计学意义(均为P <0.05).在对照组及100 μmol·L-1处理组、200 μmol·L-1处理组晶状体上皮细胞SMP30蛋白相对表达量分别为0.273±0.055、0.464±0.058、0.442±0.050,100 μmol·L-1处理组、200 μmol·L-处理组SMP30蛋白的表达均较对照组提高,差异均有统计学意义(均为P <0.05),100 μmol·L-1处理组和200 μmol·L-1处理组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 在急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞形态改变,生存率下降,SMP30蛋白表达上调,SMP30蛋白可能参与晶状体上皮细胞急性氧化应激损伤过程.  相似文献   

13.
车选义  赵清侠  李迪 《眼科新进展》2017,(11):1027-1031
目的 研究载脂蛋白2(lipocalin 2,Lcn 2)对缺氧诱导视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cells,RGC-5)损伤的抑制作用及可能机制.方法 将RGC-5细胞置于缺氧环境下处理(0h、4h、8h、12 h、24 h、48 h),采用实时定量PCR和Western blot 法检测Lcn 2的表达水平.将细胞分为4组:对照组、缺氧组、siNC+缺氧组(转染siRNA阴性对照后进行缺氧处理24 h)和siL-cn2+缺氧组(细胞转染Lcn 2 siRNA后进行缺氧处理24 h).ELISA检测细胞凋亡率和Caspase-3活性,DCFH-DA试剂盒检测活性氧(reactive oxygen speciesin,ROS)产生情况,线粒体膜电位检测试剂盒评价线粒体膜电势,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3,c-Caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP,c-PARP)、Bax、Bcl-2和细胞色素C(cytochrome C,Cyto C)蛋白表达.结果 与0h组相比,缺氧组(4h、8h、12h、24 h和48 h)Lcn 2 mRNA表达水平均升高(均为P<0.05),同时缺氧组(12 h、24h和48 h)的Lcn 2蛋白表达水平均较0h组升高(均为P<0.05).与对照组细胞凋亡率(99.66%±2.86%)比较,缺氧组(138.33%±13.76%)显著升高(P<0.05);siLcn 2+缺氧组细胞凋亡率(105.02%±8.60%)较siNC+缺氧组(142.33%±6.54%)显著下降(P<0.05).此外,缺氧组较对照组Caspase-3相对活性增强、c-Caspase-3和c-PARP表达均上调(均为P<0.05),与siNC+缺氧组比较,siLcn 2+缺氧组Caspase-3相对活性水平、c-Caspase-3和c-PARP相对表达水平均降低(均为P<0.05).与对照组ROS相对荧光强度(1.03±0.11)比较,缺氧组(4.26±0.63)增强(P<0.05),siLcn 2+缺氧组ROS相对荧光强度(3.10±0.24)较siNC+缺氧组(4.73±0.26)显著减弱(P<0.05).且siLen 2+缺氧组较siNC+缺氧组线粒体膜电势增加、Cyto C蛋白表达水平及Bax和Bcl-2相对比率减少(均为P<0.05).结论 沉默Lcn 2抑制缺氧诱导的细胞凋亡及ROS产生,可能是通过抑制线粒体凋亡信号通路实现的.  相似文献   

14.
目的 研究秋水仙碱对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTCFs)增殖及凋亡的影响.方法 体外培养HTCFs,并对传代培养的细胞进行鉴定;采用MTS法检测不同浓度的秋水仙碱对HTCFs增殖的抑制作用;以Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测秋水仙碱对细胞凋亡的影响;使用蛋白质印迹法检测秋水仙碱对凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Caspase-9、Caspase-3及active-Caspase-3表达的影响.结果 MTS检测显示秋水仙碱对HTCFs具有明显抑制作用,并呈剂量及时间依赖性.流式细胞术检测发现秋水仙碱作用48 h可诱导HTCFs发生剂量依赖性凋亡,与对照组相比,5μmol·L-1、10 μmol·L-1、20μmol·L-1的秋水仙碱作用HTCFs的凋亡率分别为(18.37±4.26)%、(33.80±5.02)%及(52.00±2.00)%,差异具有统计学意义(F=91.59,P<0.00l).蛋白质印迹法检测结果显示,秋水仙碱可诱导细胞内凋亡关键蛋白Caspase-3及PARP的活化.结论 秋水仙碱可以明显抑制HTCFs的体外增殖,其机制可能与线粒体凋亡途径的激活而诱导细胞发生凋亡相关.  相似文献   

15.
背景 青光眼滤过性手术后手术区域瘢痕化是导致抗青光眼手术失败的主要因素,因此越来越多的研究关注瘢痕形成的原因和过程. 目的 比较青光眼滤过术后滤过区人瘢痕组织来源成纤维细胞(HSFs)与人正常Tenon囊来源成纤维细胞(HTFs)增生迁移能力的差异以及微小RNA200a(miR-200a)对结膜成纤维细胞生物学行为的抑制作用,并探讨产生这种差异的可能机制. 方法 收集斜视手术过程中切取的正常Tenon囊组织和青光眼滤过术后手术区瘢痕组织,对成纤维细胞进行原代培养,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测不同来源成纤维细胞的增生能力;采用细胞划痕试验检测细胞的相对迁移距离;采用实时荧光定量PCR法检测不同来源成纤维细胞中转化生长因子-B1(TGF-β1)mRNA和miR-200a mRNA的表达.于HTFs培养基中分别加入0、1、2和5 ng/ml TGF-β1拟似物,于HSFs培养基中分别加入0.00、0.25、0.50、1.00μs/mlTGF-β1抑制剂,细胞处理24 h,采用CCK8法检测细胞增生能力;用2 ng/ml TGF-β1拟似物处理HTFs,用1.00 μg/ml TGF-β1抑制剂处理HSFs,分别采用划痕法检测不同处理组细胞的相对迁移距离,采用实时荧光定量PCR法检测不同处理组细胞中miR-200a mRNA的相对表达量. 结果 原代培养的细胞胞体较大,呈纺锤形或星形,细胞核呈卵圆形,对角蛋白抗体呈弱阳性反应,对波形蛋白抗体呈阳性反应.HSFs的增生值(A值)为1.476±0.110,明显高于HTFs的0.958±0.074,差异有统计学意义(t=24.900,P=0.016);HSFs中TGF-β1 mRNA相对表达量高于HTFs,是HTFs的(1.739±0.205)倍,差异有统计学意义(t=6.358,P=0.024);HSFs中miR-200a mRNA的相对表达量明显低于HTFs,是HTFs的(46.23±10.78)%,差异有统计学意义(t=7.394,P=0.018).与添加2 ng/ml TGF-β1拟似物的HTFs相比,添加TGF-β1拟似物的HSFs相对迁移距离增加了(3.533±0.402)倍,miR-200a mRNA相对表达量低至(45.4±7.3)%,差异均有统计学意义(均P<0.05);与添加1.00 μg/ml TGF-β1抑制剂的HTFs相比,培养基中添加TGF-β1抑制剂后,HSFs的相对迁移距离幅度降低至(64.3±6.5)%,miR-200a mRNA相对表达量明显增加(3.106±0.415)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 HSFs的增生及迁移能力均明显强于HTFs,可能与HSFs中miR-200a表达量低有关.MiR-200a与TGF-β1在调控成纤维细胞的增生和迁移能力方面发挥相反的作用.  相似文献   

16.
目的探讨血管内皮生长因子-B(vascular endothelial growth factor-B,VEGF-B)对高糖环境下诱导的人视网膜色素上皮细胞(cultured human retinal pigmentepithelial cells-19,ARPE-19)凋亡的保护作用及其机制。方法将ARPE-19细胞分为正常组(体积分数10%胎牛血清+5.6 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(体积分数10%胎牛血清+30 mmol·L^-1葡萄糖)、药物组(100μg·L^-1 VEGF-B+体积分数10%胎牛血清+30 mmol·L^-1葡萄糖)、抑制组20μmol·L^-1 PD98059(ERK1/2阻滞剂)+100μg·L^-1 VEGF-B+体积分数10%胎牛血清+30 mmol·L^-1葡萄糖。倒置显微镜观察细胞的形态变化;CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测蛋白Bcl-2、Bax及细胞外信号调节激酶1/2(extracelluar regulated protein 1/2,ERK1/2)、p-ERK1/2表达水平;实时荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达。结果倒置显微镜发现,高糖组细胞皱缩变小变圆,正常组及药物组细胞体积大、有突起,抑制组细胞形态及数量接近正常组,少许细胞皱缩变圆,体积变小。CCK-8法检测显示,高糖组细胞较正常组存活率降低,药物组较高糖组细胞存活率升高,抑制组细胞存活率介于高糖组和药物组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测显示,高糖组较正常组细胞正常细胞率下降、细胞凋亡率升高,药物组较高糖组正常细胞率升高、细胞凋亡率下降,抑制组细胞凋亡率介于高糖组和药物组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot和实时荧光定量PCR检测显示,高糖组较正常组Bcl-2蛋白及Bcl-2 mRNA表达减少、Bax蛋白及Bax mRNA表达增多、Bcl-2/Bax蛋白及mRNA比值均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);药物组较高糖组Bcl-2蛋白及Bcl-2 mRNA增多、Bax蛋白及Bax mRNA减少、Bcl-2/Bax蛋白及mRNA比值均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖组p-ERK1/2表达量较正常组增多、药物组p-ERK1/2较高糖组表达增多、抑制组p-ERK1/2表达量介于药物组和高糖组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05),四组总ERK1/2表达量不变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-B具有抑制高糖环境培养的ARPE-19细胞凋亡作用,其作用机制部分是通过ERK1/2信号通路,调节Bcl-2和Bax基因表达而实现。  相似文献   

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