卵巢组织冷冻移植过程中抗卵泡凋亡的研究进展

卵巢组织冷冻和移植在女性生育力保存中具有重要作用,但卵巢组织冷冻和移植过程会 导致大量卵泡凋亡,缩短了移植物存活时间,严重影响卵巢组织移植后生殖内分泌功能的维持时间, 从而限制了卵巢组织冷冻和移植技术的临床应用。 卵巢组织移植后早期经历缺血缺氧及再灌注损 伤,是造成卵泡大量凋亡的重要因素。 因此,卵巢组织移植后尽快促进血管生成,恢复血供,减轻氧 化应激,降低缺血再灌注损伤是移植成功的关键。 本文综述在卵巢组织冷冻和移植过程中,添加凋 亡抑制剂、促血管生成因子、抗氧化剂,应用干细胞、中药以及联合治疗,是否能促进移植组织血管生 成,减轻局部氧化应激及炎症反应,抑制卵泡凋亡,改善冻融卵巢组织移植存活率,为卵巢组织冷冻 和移植技术临床应用提供依据。     

荷人卵巢上皮癌裸鼠冻融卵巢组织移植的效果评价

目的:获取人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁正常卵巢组织,经安全筛查并冻融后移植至去势裸鼠体内,探讨移植后效果,为临床应用提供依据。方法:将人卵巢上皮癌OVCAR3细胞种植于裸鼠皮下以获取瘤源,并进行卵巢原位移植,建立卵巢癌原位移植瘤模型,解剖裸鼠获取癌旁正常卵巢组织。癌旁组:取筛选后的癌旁卵巢组织进行玻璃化冷冻,复苏后分别进行皮下及原位移植,各20例;对照组:同龄正常裸鼠卵巢组织,皮下移植及原位移植各20例;去势裸鼠组:20只同龄去势裸鼠;正常卵巢组:20只同龄正常裸鼠。移植12周后,分析各组裸鼠卵巢组织内卵泡形态及激素分泌功能。结果:40只人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中共获取35份活检正常的癌旁卵巢组织,获取率87.5%(35/40)。玻璃化冷冻前后卵巢组织中卵泡形态及各级卵泡比例均无显著差异(P>0.05),癌旁冷冻组织和癌旁新鲜组织的异常卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冷冻组织以初级卵泡及次级卵泡等窦前卵泡为主。癌旁组皮下移植组织存活率80%(16/20),对照组皮下移植组织存活率90%(18/20),癌旁组原位移植组织存活率90%(18/20),对照组原位移植组织存活率95%(19/20)。移植后组织内卵泡以次级卵泡及窦状卵泡为主,各级卵泡的形态及构成比和未移植的同龄正常裸鼠卵巢相似(P>0.05);癌旁组卵泡数明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植组织内的各级卵泡数差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁组卵泡刺激素水平明显低于去势裸鼠组,而雌二醇水平明显高于去势裸鼠组(P<0.01);癌旁组卵泡刺激素水平明显高于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01),而雌二醇水平明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植的卵泡刺激素水平和雌二醇水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癌旁卵巢组织冻融移植后有正常卵泡发育及激素分泌功能;皮下移植和原位移植均可取得较好的效果;癌旁卵巢组织冻融移植有望作为卵巢上皮癌患者治疗后恢复卵巢内分泌功能的有效手段。     

冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应

目的 探讨冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应.方法 将36只性成熟雌性小白鼠随机分为新鲜移植组、冻融移植组和对照组,每组12只.新鲜移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,立即移植人双侧肾被膜下;冻融移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,采用玻璃化冷冻方法冷冻保存,2周后将冷冻卵巢组织复苏,移植入小鼠双侧肾被膜下.卵巢组织移植2周后,新鲜移植组和冻融移植组每组随机取6只小鼠应用7.5 IU人绝经期促性腺激素及10 IU绒毛膜促性腺激素,观察移植后的卵巢组织对促性腺激素的反应.同时应用免疫组化染色方法观察各组卵泡中卵泡刺激素受体的表达情况.结果 新鲜移植组、冻融移植组和对照组未应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为2.3%、2.3%和2.6%,应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为4.2%、4.0%和5.8%,各组内分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);新鲜移植组和冻融移植组与对照组比较,差异均元统计学意义(P＞0.05).新鲜移植组、冻融移植组和对照组卵泡刺激素受体表达积分吸光度值在窦状卵泡中分别为9408±2777、9175±3093和8838±2064,在窦前卵泡中分别为4531±1903、4808±1386和5516±1136,各组间分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 卵巢组织冷冻保存、复苏及移植过程未影响卵巢卵泡刺激素受体的表达,冻融后移植的小鼠卵巢组织对外源性促性腺激素的反应未受冷冻、复苏及移植等过程影响.     

整体卵巢冷冻及移植的研究进展

卵巢组织冷冻是保存女性生育能力和内分泌功能的一种极具潜力的方法。卵巢组织移植后的缺血损伤导致卵泡大量丢失,同时由于小块卵巢组织所含的卵泡少,因此移植术后难以长久维持卵巢功能。整个卵巢行显微血管吻合移植术可避免移植后的缺血性损伤。适宜的整体卵巢的冷冻保存方法是施行整体卵巢移植的难点,目前未有统一的标准方法。综述国内外对整体卵巢冷冻及移植的研究进展,探讨如何选择合适的冷冻方法。     

人类卵巢组织异种移植的影响因素及研究进展

人类卵巢组织异种移植目前已广泛用于观察卵泡的发育和评估卵巢冷冻等其他相关保存女性生育能力措施的一种实验手段。有许多因素影响移植的效果,如动物受体、卵巢组织的准备、移植后血管的形成、促性腺激素的使用等。虽然目前的研究表明,卵巢组织异种移植技术能保护女性的生育能力、恢复卵巢内分泌和生殖功能,但是,由于安全和伦理的限制它目前只在实验条件下进行。本文对影响人卵巢组织异种移植的因素及近年来的研究进展作一综述。     

卵巢移植的研究进展

卵巢移植是伴随肿瘤治疗技术的发展而逐渐建立起来的一项技术。卵巢组织冷冻及移植后健康婴儿的出生证明了此技术的可行性,特别是近年癌症患者低龄化趋势渐趋明显,以及大剂量放化疗导致的患者生育力严重下降、丧失,内分泌失调等诸多副作用,严重影响了癌症幸存者的生活质量。因此,作为一种年轻女性生育力的保存方法,卵巢组织冻存和移植技术成为近年的研究热点。目前该技术尚未完全成熟,移植效果会因冷冻方法、卵巢组织块大小、移植部位、抗氧化损伤、生长因子、机械因素等诸多因素的影响而不易确定。此外,卵巢移植技术也面临成功率较低,移植后将冻存卵巢组织内残存肿瘤细胞重新植入体内的风险,以及移植相关的伦理问题等许多亟待解决的问题。总之,目前尚未形成规范、统一的卵巢组织冻存、移植技术和效果评定标准,但可以相信,随着医学技术的发展和进步,卵巢组织冷冻及移植技术将会为女性肿瘤患者生育力和内分泌功能的保存带来福音。     

冻存卵巢组织移植的影响因素

冻存卵巢组织移植作为一种保存年轻女性生殖内分泌功能的治疗方法,正日益受到重视,但其影响因素众多,技术程序有待进一步优化.检索综述中英文文献,探索冻存卵巢组织移植的影响因素发现,冻存卵巢组织移植的影响因素包括冷冻保存过程、移植部位、抗氧化损伤、生长因子、激素、机械因素、临床因素等.目前卵巢移植还存在许多亟待解决的问题,随着冷冻保存技术、血管吻合技术和辅助生殖技术的发展,冻存卵巢组织移植将成为解决卵巢早衰、保存年轻癌症患者生殖内分泌功能的有效途径.     

骨髓间充质干细胞移植修复化疗所致卵巢损伤的实验研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对化疗所致卵巢损伤的影响。方法:采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立化疗所致大鼠卵巢损伤模型,并随机分为模型组、实验对照组及移植组。同龄正常大鼠作为空白对照组。移植组在建模结束后每侧卵巢注射绿色荧光标记约1×106个MSCs。于移植后1、15、30、45天及60天,留取各组血标本,并于后4个时间点分批处死大鼠,留取卵巢标本。荧光显微镜下观察绿色荧光及其分布情况。阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期的变化;以化学发光法检测雌二醇(E2)浓度,放射免疫法检测卵泡刺激素(FSH)浓度;计数各级卵泡数。结果:移植MSCs后15天,移植组卵巢组织内可见到明亮的绿色荧光,持续至移植后2月。绿色荧光分布在卵巢间质组织。移植组30%(6/20)的大鼠在移植后15~30天内恢复正常的动情周期,在移植后30~60天内又有4只大鼠恢复正常的动情周期。移植后15、30、45天和60天时,移植组E2浓度高于实验对照组相应时间点E2浓度,而FSH浓度则低于实验对照组相应时间点FSH浓度,差异有显著性。移植45、60天时,移植组各级卵泡数目均高于模型组和实验对照组,低于空白对照组。结论:骨髓间充质干细胞可以在环磷酰胺损伤的大鼠卵巢组织中存活、迁移,但其分化为卵泡组分的可能性小。骨髓间充质干细胞移植可修复环磷酰胺损伤的卵巢组织,部分改善卵巢内分泌功能。     

玻璃化冷冻保存羊卵巢组织异种移植的实验研究

目的:探讨羊卵巢组织玻璃化冷冻复苏后异种移植的卵泡生长发育情况。方法:取绵羊的卵巢,将卵巢皮质切块,应用玻璃化快速冷冻法保存。羊卵巢组织片复苏后在裸鼠的颈部皮下移植,每只裸鼠移植2块组织,于移植1个月后获取移植物,HE染色观察存活卵泡的情况。结果:共移植组织16块,取材时肉眼可见其中一块组织纤维化萎缩,镜下见此块组织纤维化,移植组织存活率87.5%(14/16)。HE染色观察每只移植小鼠的2块移植物中基本只有1块有可视卵泡。1只鼠未见可视卵泡;1只鼠见1个不典型原始卵泡;1只鼠有2个不典型原始卵泡;余下5只鼠的移植卵巢组织中均可见多个典型的存活卵泡。结论:羊卵巢组织经冷冻复苏后能够成功移植于裸鼠的颈部皮下,大部分卵泡处于良好的存活状态。     

卵巢组织冻存与移植的发展现状

卵巢组织冻存(OTC)与移植目前主要用于青春期前或需尽快接受抗癌治疗的年轻肿瘤患者生育力保存，至今已有二十余年的历史，通过冻存卵巢组织再移植获得的活产已有超过200例的报道，近年来OTC与移植得到了快速发展，但仍存在许多亟待解决的问题。有效性方面，大部分患者自体冻存卵巢组织再移植后，卵巢内分泌功能可恢复至正常，活产率高达40%,然而冻存卵巢组织的回输利用率仍处于较低水平。安全性方面，通过卵母细胞体外成熟、人工卵巢等新兴技术减少肿瘤细胞在卵巢组织移植中转移、复发的风险是近年来众多研究者关注的方向。如何最大限度地保证OTC与移植过程中卵泡的存活也一直是研究的重点，目前有添加生长因子、激素、抗凋亡药物、干细胞等多种方法防治卵泡的凋亡和丢失。然而这些新兴技术大多尚处于实验室阶段，未来期待更多基础和临床研究来为OTC与移植这项生育力保存技术提供更多的有效性和安全性保障。     

母兔卵巢异体异位移植的实验研究

目的:建立雌兔异体卵巢组织移植模型,探索非血管吻合卵巢组织移植的可行性。方法:以雌兔为实验动物,A组:阳性对照,不做任何处理;B组:阴性对照,切除双侧卵巢;C组:卵巢组织异体异位移植组,分离卵巢组织,切成约1mm×1mm×1mm大的组织块,移植于异体颈部皮下,术后观察阴道脱落细胞涂片变化,同时于移植后第18、25、35、45、55天检测血清E2及P水平,60天处死母兔,对移植物及子宫内膜进行组织学检查。结果:(1)C组3只雌兔阴道呈红色或粉红色、湿润、肿胀,进入发情期;(2)A、C组术后25天血清E2及P水平均高于B组,并逐渐下降,35天达到最低水平,随后又呈上升趋势,至55天已明显高于B组(P<0.05),B组则始终维持在较低水平,未出现升高趋势;(3)A、C组卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡。结论:兔卵巢组织异体异位移植后移植物可存活,并释放内源性激素,对靶器官产生作用。     

两种冷冻保护剂玻璃化冷冻小鼠卵巢的比较研究

目的:探讨两种玻璃化冷冻保护剂对小鼠卵巢组织学和功能的影响。方法:将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢移植组(6只)、去势组(5只)、EG40组(6只)和ED20组(6只)。EG40组和ED20组分别应用乙二醇(EG)和联合应用EG与二甲基亚砜(DMSO)玻璃化冷冻小鼠卵巢组织,一周后解冻,将一部分复苏卵巢组织自体移植入小鼠肾被膜下,另一部分组织行组织学观察。移植术后5d开始观察所有小鼠的动情周期,一个月后处死小鼠,对存活的卵巢组织行组织学观察。结果:EG40组、ED20组和新鲜卵巢移植组小鼠动情周期出现率均为100%,出现动情周期的天数分别为10.2±1.2d、8.0±0.9d和6.8±1.0d,EG40组动情周期出现天数明显多于新鲜卵巢移植组(P<0.01);ED20组与新鲜卵巢移植组差异无显著性(P>0.05)。移植存活的卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡,形态正常,但冻融卵巢组织内卵泡数量比新鲜组织少。结论:联合应用玻璃化冷冻保护剂EG和DMSO对小鼠卵巢组织学和功能的影响较小。     

银制封闭式冷冻载体改善人卵巢组织异种移植效果的研究

目的:探讨银制封闭式玻璃化冷冻载体促进人卵巢组织冷冻后移植严重免疫缺陷(SCID)鼠新生血管效果。方法:收集2015年4月至2016年6月在我院妇科手术治疗的患者卵巢组织共8例,每例患者标本随机等量分配到银制封闭式冷冻管及传统封闭式冷冻管玻璃化冷冻保存。选取40只SCID鼠,分为银制封闭式玻璃化冷冻管组及传统封闭式玻璃化冷冻管组(每组20只),分别移植两种封闭式玻璃化冷冻法复苏后的卵巢皮质到SCID鼠皮下,测定CD31反映卵巢皮质新生血管,比较两组人卵巢组织冷冻复苏后移植SCID鼠皮下保存效果。结果:移植后3天和7天,两组中卵巢皮质新生血管数差异无统计学意义(P0.05);移植后14天和21天,银制封闭式玻璃化冷冻管组中卵巢皮质新生血管数高于传统封闭式玻璃化冷冻管组(P0.05)。结论:银制封闭式玻璃化冷冻管与传统封闭式玻璃化冷冻管相比能更好地保存卵巢皮质功能,在深低温保存人卵巢组织中具有应用价值。     

两种玻璃化法冻存小鼠卵巢的研究

目的:探讨2种玻璃化法对小鼠卵巢组织、器官形态和功能保存作用的影响。方法:以改良的DMEM-F12为玻璃化液,分别采用常规玻璃化法(A组)和超速玻璃化法(B组)冻存小鼠卵巢组织及器官,解冻后通过组织学观察、卵巢组织异体、卵巢器官自体肾被膜下移植,观察动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况,并分别以新鲜卵巢组织异体移植、卵巢器官自体移植(C组)为对照,评价2种玻璃化法的冻存效果。结果:①A组、B组、C组卵巢组织异体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别10.5±5.4d、8.0±2.2d、6.3±1.0d。A组与C组比,差异显著(P<0.05);B组与C组无差异,A组与B组间也无差异(P均>0.05)。②A组、B组、C组卵巢器官自体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别为9.4±0.9d、6.9±1.1d、6.1±1.1d,A组与B、C组相比有统计学差异(P<0.05),而B组与C组间无差异(P>0.05)。移植存活的卵巢组织、器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常。结论:2种玻璃化法可有效地冻存卵巢组织及器官,但超速玻璃化法效果较优。     

卵巢组织体外培养及冻融技术的研究进展

癌症患者治疗前行卵巢组织冷冻保存、待其病情稳定后,重新进行卵巢组织移植,可使其保持女性的正常生殖内分泌功能,并能够进行正常生育。目前常用的冷冻方案包括慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻,其中慢速程序化冷冻是卵巢组织冷冻的标准方法,但近年来玻璃化冷冻由于其方便、高效,越来越受到关注。卵巢组织冷冻保存作为癌症患者保留生育能力的一种选择具有广泛的应用前景。虽然卵巢组织移植已用于临床,并有成功分娩的报道,但卵巢组织体外培养技术尚处于研究阶段,仍不够成熟。本文旨在对卵巢组织体外培养及冻融技术的方法改进以及现阶段的研究情况作一综述。     

卵巢组织冻存移植保护女性生育力的临床应用

近年来,随着癌症诊断、治疗技术的进步和患者生存率的提高,以及国家三孩政策的放开,女性生育力保护和保存已成为国际和国内的热点。卵巢组织冻存移植技术是儿童及抗癌治疗无法延迟的育龄女性生育力保护的惟一方法。文章主要聚焦于卵巢组织冻存移植生育力保护技术的临床应用。     

冻存卵巢组织移植成功——首次报道

目的通过卵巢组织冻存技术及自体移植手术保护癌症患者生育力与内分泌功能。方法对1例40岁宫颈鳞癌IIb期患者在放化疗前进行卵巢组织取材、冻存,待其癌症痊愈后进行冻存卵巢组织自体移植手术,随访监测患者的激素水平、卵泡发育情况、月经恢复情况以及绝经相关症状。结果卵巢组织移植4个月后,改良Kupperman评分由20分降低至5分,绝经相关症状基本消失,卵泡刺激素(FSH)降低至22.79 IU/L,此后继续下降至6 IU/L,雌二醇(E_2)由11.8 ng/L升高至84.46 ng/L,B超监测到有卵泡发育且月经恢复。结论卵巢组织冻存移植4个月后卵巢功能恢复正常,证明卵巢组织在临床上移植成功。     

人子宫内膜在体培养的动物模型

本文报道将人子宫内膜移植到雌性金黄地鼠(Mesocricetus auratus)颊囊部位的塑料小窗内,并观察了移植组织血管形成及生长情况。正常地鼠在移植后第7天,移植组织内血管形成网状;去卵巢后皮下埋植17β-雌二醇和孕酮硅胶管的地鼠,当血浆激素水平相当于人黄体期水平时,移植组织的血管网形成比正常动物提前约24小时。正常动物及去卵巢用激素处理的动物,增生期和分泌期人子宫内膜的生长均在第7天达最大面积,9天以后逐渐萎缩。此动物模型对开展子宫内膜生理学方面的研究提供了较为科学的手段。     

大鼠胚胎卵巢冻存前后异体异位移植的实验研究

目的 :研究胚胎卵巢冷 解冻移植后的生存、生长及功能恢复情况。方法 :将冻存大鼠胚胎卵巢植入去势成年雌鼠皮下 ,观察阴道脱落细胞变化。以新鲜胚胎卵巢移植作为对照。术后 3个月 ,取移植卵巢及自身子宫进行组织学研究 ,并测定血清雌二醇(E2 )水平。结果 :移植卵巢内可见不同阶段的发育卵泡 ,并可见间质腺和黄体。阴道上皮细胞及子宫内膜有雌激素效应。血清学研究显示 ,移植卵巢具有与正常卵巢接近的内分泌功能。结论 :冻融胚胎卵巢移植后能在异体异位存活、生长发育并具有内分泌功能     

卵巢移植的研究进展

卵巢是女性重要的生殖内分泌器官,除激素替代疗法,卵巢移植技术为失去卵巢功能的患者提供了新的恢复生殖功能和内分泌功能的方法.卵巢移植研究可分为3个部分:卵巢异种移植,卵巢异体移植和卵巢自体移植.目前自体卵巢移植技术已较为成熟,但应用有限;异体卵巢移植适应性较广,却面临很多问题.总结卵巢移植临床应用受限的主要原因,展望其发展前景,提出卵巢移植成功的关键因素.