复发性自然流产患者外周血淋巴细胞Fas表达及其与NK细胞毒性的相关性研究

目的:探讨复发性自然流产(RSA)患者的外周血淋巴细胞Fas表达并分析NK细胞毒性与其Fas表达的相关性。方法:应用流式细胞仪技术检测25例RSA患者外周血淋巴细胞Fas表达及NK细胞毒性,对NK细胞Fas表达与其毒性进行相关性分析。结果:正常组表达Fas的CD4+T淋巴细胞为21.06%±4.36%,RSA组为18.27%±4.81%,两组比较无统计学差异(P>0.05)。RSA组表达Fas的CD8+T淋巴细胞为12.32%±2.78%,较正常组(7.78%±2.17%)高,差异有统计学意义(P<0.01)。RSA组表达Fas的NK细胞为14.23%±3.67%,较正常组(8.87%±2.95%)高,差异有统计学意义(P<0.01)。表达Fas的NK细胞含量与NK细胞毒性呈显著正相关。效应细胞:靶细胞为25:1时,相关系数r=0.693,(P<0.01)。效应细胞:靶细胞为50:1时,r=0.672(P<0.01)。结论:RSA患者存在CD8+T淋巴细胞和NK细胞的异常激活,外周血NK细胞毒性增高与表达Fas的NK细胞增多有关。     

免疫治疗原因不明习惯性流产后外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的:探讨原因不明习惯性流产患者外周血T淋巴细胞亚群在主动和被动免疫治疗前后的变化。方法:采用流式细胞仪对2 5例被动免疫治疗和38例主动免疫治疗的原因不明性习惯性流产患者作治疗前后外周血T淋巴细胞亚群含量对比,并选择2 0例正常妊娠者作对照组。结果:①被动与主动免疫组治疗前后CD3+细胞无明显差异。②被动和主动组治疗后CD4 +细胞较治疗前有明显减少。③CD8+细胞在被动免疫治疗和主动免疫治疗后较治疗前有明显升高。④CD4 +/CD8+比率在被动免疫治疗和主动免疫治疗后较治疗前明显下降。结论:主动和被动免疫治疗后,外周血T淋巴细胞亚群有了明显变化,更利于妊娠发展。     

反复胚胎种植失败免疫治疗疗效及淋巴细胞免疫表型变化的研究

目的:探讨淋巴细胞主动免疫治疗不明原因反复胚胎种植失败(RIF)患者的疗效及治疗前后外周血淋巴细胞免疫表型的变化。方法:对研究组83例不明原因RIF的患者进行淋巴细胞主动免疫治疗(LIT);对照组96例不明原因RIF患者移植前不给予特殊处理。并按照胚胎移植属性分为鲜胚移植和冻胚移植,所移植胚胎均为卵裂期优质胚胎,接受LIT后新鲜胚胎移植为研究组A(51例);未行LIT接受新鲜胚胎移植为对照组A(57例)。接受LIT后冷冻胚胎移植为研究组B(32例),未行LIT接受冷冻胚胎移植为对照组B(39例)。比较各组的临床妊娠情况,并观察LIT治疗前后外周血淋巴细胞免疫表型变化。结果:(1)研究组A的临床妊娠率(47.06%)高于对照组A(22.81%),研究组B的临床妊娠率(46.88%)高于对照组B(23.77%),差异有统计学意义(P0.05);研究组A的临床妊娠率与研究组B比较,差异无统计学意义(P0.05)。(2)与治疗前相比,LIT后外周血CD3~+CD4~+T细胞占淋巴细胞的比率下降,CD3~+CD8~+T细胞占淋巴细胞的比率上升、CD4~+/CD8~+比值下降,NK细胞(CD3-CD16~+CD56~+)占淋巴细胞的比率下降,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:淋巴细胞主动免疫治疗对RIF患者成功妊娠有促进作用,淋巴细胞主动免疫治疗可能促使外周血淋巴细胞免疫表型向增强母胎免疫耐受的方向改变。     

原因不明复发性流产主动免疫治疗前后CD4+ CD25+调节性T细胞表达频率的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr）在原因不明复发性流产（URSA）患者主动免疫治疗中的作用。方法上海交通大学医学院附属仁济医院对2004-03—2005-05就诊于门诊的18例URSA患者，采用双荧光标记流式细胞分析技术，检测其淋巴细胞主动免疫治疗前后外周血CD4^＋CD25^＋Tr细胞表达频率的变化。结果主动免疫治疗后URSA组外周血中CD4^＋CD25^＋种Tr较治疗前明显增加（P〈0．05），CD4^＋CD25^＋较治疗前降低（P〈0．05）。主动免疫治疗后，妊娠成功的妇女CD4^＋CD25^brightTr显著多于妊娠失败者。结论主动免疫治疗可提高外周血CD4^＋CD25^brightTr数量，CD4^＋CD25^brightTr可能是调控母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素，有可能成为URSA患者主动免疫治疗的监测指标之一。     

主动免疫治疗复发性流产妊娠结局与调节性T细胞关系初探

目的:探讨主动免疫治疗原因不明复发性流产患者妊娠结局与调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的关系.方法:采用流式细胞仪测定主动免疫治疗前后复发性流产患者外周血CD4+CD25+Treg比例.结果:主动免疫治疗后CD4+CD25+Treg 的表达较治疗前增高(P＜0.05),且治疗后妊娠成功组与治疗后妊娠失败组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:主动免疫治疗可上调CD4+CD25+Treg的表达,可能与妊娠结局有一定相关性.     

原因不明复发性流产与蜕膜CD4~+ CD25~+ T调节细胞和CD8~+ CD28~- T细胞的关系

目的:探讨原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)与蜕膜CD4+ CD25+ T细胞和CD8+ CD28-T细胞的关系。方法:采用流式细胞四色荧光法,检测原因不明复发性流产17例(URSA组)和正常早孕人流20例(对照组)的蜕膜CD4+ CD25+ T细胞及其FoxP3(+)表达,CD8+ CD28- T细胞及其表面CD95、CD95L表达。结果:两组蜕膜中CD4+ CD25+ T细胞比例无明显差异(P>0.05),URSA组蜕膜CD4+ CD25+ T细胞中FoxP3阳性率明显低于对照组(P<0.0001)。两组蜕膜CD8+ CD28- T细胞比例及其细胞表面CD95和CD95L的阳性表达率均无明显差异(P>0.05);结论:蜕膜CD4+ CD25+ FoxP3(+)T调节细胞明显减少,是导致URSA患者母胎界面免疫耐受异常的重要原因。     

调节性T细胞和Notch1信号通路在原因不明复发性自然流产中的作用

目的探讨调节性T细胞(Treg)和Notch1信号通路在原因不明复发性自然流产(URSA)中的作用。方法流式细胞仪检测URSA患者(URSA组)及正常妊娠妇女(对照组)蜕膜CD4~+CD25~+T细胞Treg表达比例,real time RT-PCR及Western blotting检测蜕膜中CD4~+T细胞中Notch1信号通路和叉头转录因子家族3(Foxp3)表达情况。结果 URSA组CD4~+CD25~+T细胞/淋巴细胞、CD4~+Foxp3~+T细胞/淋巴细胞和CD4~+Foxp3~+T细胞/CD4~+T细胞比例均低于对照组(P0.05)。URSA组CD4~+T细胞中Notch1-Ic、RBPJκ、Foxp3 m RNA及蛋白表达均低于对照组。结论 URSA患者蜕膜CD4~+T细胞中Notch1信号通路和Foxp3表达下调,CD4~+CD25~+T细胞表达比例下降,提示URSA患者Notch1信号通路和Foxp3表达下调可能阻碍CD4~+T细胞转化为CD4~+CD25~+T细胞,进而诱发免疫排斥,诱导流产。     

子痫前期患者外周血协同刺激分子CD28/CTLA-4的表达研究

目的:研究子痫前期患者外周血协同刺激分子CD28、CTLA-4、CD28/CTLA-4在CD3+CD4 +T细胞和CD3+ CD8+T细胞上的表达,探讨CD28/CTLA-4在子痫前期发病中的作用.方法:采集22例正常妊娠妇女(正常妊娠组),45例子痫前期患者(子痫前期组)外周血,用流式细胞技术分别检测外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+的表达和CD28、CTLA-4、CD28/CTLA-4在CD3+ CD4+T细胞和CD3+ CD8+T细胞上的表达.结果:子痫前期组外周血T淋巴细胞中CD3+及CD8+的表达低于正常妊娠组(P＜0.05),而CD4+及CD4 +/CD8+的表达高于正常妊娠组(P＜0.05).与正常妊娠组相比,子痫前期组CD28在CD3+ CD4+T细胞和CD3+ CD8+T细胞上的表达低于正常妊娠组,但差异无统计学意义(P＞0.05);CTLA-4在CD3+ CD4+T细胞和CD3+ CD8+T细胞上的表达高于正常妊娠组,且重度子痫前期组高于轻度子痫前期组,差异均有统计学意义(P＜0.05);CD28/CTLA-4比率在CD3+ CD4+T细胞和CD3+ CD8+T细胞上的表达低于正常妊娠组,且重度子痫前期组低于轻度子痫前期组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:子痫前期患者外周血T细胞亚群明显偏移,且协同刺激分子CD28/CTLA-4表达异常,高表达的CTLA-4导致T淋巴细胞亚群失衡,这可能是促使子痫前期发生的重要原因之一.     

原因不明复发性流产患者淋巴细胞主动免疫治疗前后细胞亚群的变化

目的探讨淋巴细胞主动免疫治疗对原因不明复发性流产的疗效及在主动免疫治疗前后患者微量淋巴细胞毒实验淋巴细胞亚群的变化。方法应用荧光染色法和流式细胞术,分别对2009年4月至2010年12月在安徽医科大学第一附属医院行主动免疫治疗的48例原因不明复发性流产患者治疗前后的淋巴细胞坏死率和CD3、CD4、CD8及CD16+CD56+NK细胞的比率进行测定;同时随访其预后。结果 43例成功妊娠至孕12周之后,5例患者在孕12周前流产,主动免疫治疗成功率89.6%(43/48)。治疗后患者淋巴细胞坏死率上升,CD3、CD4和CD16+CD56+NK亚群比率下降,CD8亚群比率上升,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论淋巴细胞主动免疫治疗对原因不明复发性流产治疗效果满意,CD8亚群的升高可能有利于妊娠。     

原因不明复发性流产蜕膜CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg细胞对自然杀伤细胞的功能调控

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自然杀伤(NK)细胞的功能调控。方法留取2007年2月至2009年2月上海交通大学医学院仁济医院5例URSA患者(URSA组)和5例正常早孕人流妇女(对照组)蜕膜组织,制备成单个核细胞悬液,用免疫磁珠分离法分离出CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞和NK细胞,将CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞和NK细胞共培养,用LDH释放实验测定共培养后NK细胞毒性变化,FCM法测定共培养后NK细胞胞内IFN-γ、穿孔素(perforin)产生情况。结果共培养后对照组和URSA组NK细胞的毒性均比单独纯化NK细胞的毒性明显降低(P=0.002,P=0.03),URSA组NK细胞毒性较对照组高(P0.001);对照组和URSA组NK细胞内细胞因子INF-γ、perforin的水平分别较单独纯化NK细胞内细胞因子水平明显降低[INF-γ(P=0.001,P=0.02);perforin(P=0.01,P=0.03)],URSA组NK细胞INF-γ、perforin的表达较对照组高(P0.001,P0.001)。结论 CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对NK细胞功能有抑制作用;URSA中Treg细胞免疫抑制功能的下降,是NK细胞的活化异常和毒性增加的原因之一。