人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻妊娠结局分析

目的探讨人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局。方法回顾性分析434个卵裂期胚胎（卵裂组）和102个囊胚解冻周期（囊胚组）的临床资料,比较采用玻璃化冷冻解冻后的复苏率及妊娠结局。结果囊胚组患者的临床妊娠率和胚胎种植率分别为63.73%（65/102）和45.79%（87/190）,卵裂组分别为42.82%（185/432）和24.17%（241/997）,两组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）;囊胚组患者的复苏率、流产率和异位妊娠率分别为98.45%（190/193）、12.31%（8/65）和0（0/65）,卵裂组分别为97.55%（997/1 022）、13.51%（25/185）和2.16%（4/185）,两组比较,差异均无统计学意义（P均〉0.05）。卵裂组中,卵裂球完全存活患者的临床妊娠率和胚胎种植率分别为44.62%（170/381）和25.57%（224/876）,非完全存活者分别为29.41%（15/51）和14.05%（17/121）,两组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）。结论囊胚解冻移植的妊娠结局优于卵裂期胚胎,卵裂期胚胎解冻后胚胎的完整性影响胚胎种植。     

囊胚和卵裂期胚胎的早期胚胎流产率比较

目的:探讨辅助生殖技术中囊胚培养是否能够筛选出更加具有发育潜能的胚胎,降低胚胎的早期流产率。方法:回顾性分析因单纯输卵管因素或/及男性因素接受囊胚期与第3日卵裂期胚胎移植获得妊娠后患者的流产率。总周期数1 673个,其中新鲜胚胎移植周期(fresh embryotransfer)932个(囊胚移植139个周期,卵裂期胚胎移植793个周期),冻融胚胎移植周期(frozen-thawed embryo transfer)741个(囊胚移植211个周期,卵裂期胚胎移植530个周期)。结果:Logistic回归分析表明无论新鲜胚胎移植组还是冻融胚胎移植组,囊胚期胚胎受孕后的早期胚胎流产率均低于第3日的卵裂期胚胎,并且囊胚移植和卵裂期胚胎移植的流产率均与妇女年龄呈正相关。结论:无论新鲜胚胎移植组还是冻融胚胎移植组,囊胚移植均比第3日卵裂期胚胎移植流产风险降低。年龄仍是影响移植后妊娠早期流产的重要因素。     

Ⅱ、Ⅲ级胚胎活检后体外发育能力的研究

目的:探讨形态学评价质量较差的胚胎有无活检价值,活检后能否正常发育。方法: 160个IVF和ICSI周期剩余的Ⅱ级、Ⅲ级胚胎,来自同一例患者分级相同的胚胎配对,随机分为实验组和对照组。实验组采用喷酸透明带打孔法取出1个卵裂球,对照组继续培养,对比两组囊胚的形成率、孵化率、囊胚细胞总数,并观察不同形态学特征的胚胎活检后的发育情况。结果:活检组胚胎囊胚形成率,囊胚总细胞数与对照组相比没有差别,但囊胚第6天孵出率活检组明显高于对照组;Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率、第6天孵化率、囊胚总细胞数均明显低于Ⅱ级胚胎;活检前细胞数少于7个的胚胎,活检后发育能力显著降低。结论:活检不影响胚胎体外继续发育的能力;Ⅱ级胚胎活检后具有较好的发育潜力,Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率较低,即使形成囊胚,细胞数也较少,不能正常发育;第3天活检时具有7个或7个以上卵裂球的胚胎具有较好的继续发育能力。     

一种改良冻存方法提高活检的人卵裂期胚胎的存活力

胚胎植入前遗传学诊断(PGD)和IVF相结合可及早发现并防止多种遗传病发生。但由于活检和冷冻均可明显削弱胚胎的存活力,阻碍PGD的运用,通过改进常规冻存技术可提高活检胚胎冻存后的存活力。     

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果的比较

目的:比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法:对265个玻璃化冷冻周期和276个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、胚胎种植率和临床妊娠率等指标。结果:玻璃化冷冻复苏265个周期,解冻809个胚胎,存活710个(87.8%),移植259个周期,临床妊娠98个周期(37.8%),其中双胎妊娠26例,三胎妊娠3例。程序冷冻复苏276个周期,解冻968个胚胎,存活532个(55.0%),移植246个周期,临床妊娠70例(28.5%),其中双胎妊娠4例,三胎妊娠1例。玻璃化冷冻后的胚胎存活率和完整性胚胎存活率均显著高于程序化冷冻,复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻,而临床妊娠率则明显高于程序化冷冻,差异均有统计学意义(P<0.05)。但2种方法的胚胎种植率无统计学差异(P>0.05)。结论:玻璃化法能够较好地避免冷冻引起的损伤,适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。     

4-细胞胚胎卵裂球全能性的体外实验研究

目的 对体外培养的4－细胞人类胚胎卵裂球发育及分化情况进行观察和研究。方法 采用控制性促超排卵获取人类卵子,体外受精获得早期胚胎,待发育到4－细胞阶段时将透明带去除,分散成为单个卵裂球进行培养,观察卵裂球发育及分化的情况。结果 20个4－细胞、2个3－细胞人类早期胚胎分散后获得单个卵裂球83个,经体外培养后有35个发育成为扩张囊胚。结论 4－细胞人类胚胎卵裂球具有发育成为完整囊胚的能力。     

玻璃化法冻融小鼠桑葚胚期和囊胚期胚胎的效果观察

目的 比较玻璃化法冻融小鼠桑葚胚期、囊胚早期和囊胚期胚胎后,胚胎存活及继续发育的能力。方法应用6 mol/L乙二醇和1 mol/L蔗糖的玻璃化冷冻液,冻融小鼠142个桑葚胚期、135个囊胚早期和148个囊胚期胚胎,观察冻融后胚胎存活及继续发育的情况。结果 小鼠桑葚胚期、囊胚早期和囊胚期胚胎的存活率分别为88.0％、73.3％和60.1％,囊胚孵出率分别为73.9%、61.5％和49.3％。桑葚胚期的胚胎存活率及囊胚孵出率均高于囊胚早期,囊胚早期高于囊胚期,各期胚胎存活率、囊胚孵出率比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论 玻璃化法冻融桑葚胚期的效果好于囊胚早期及囊胚期,桑葚胚期是卵裂期后胚胎玻璃化冻融的最佳阶段。     

卵裂球数量及胚胎碎片对人冻胚卵裂球存活状况的影响

目的:探讨卵裂球数量及胚胎碎片对人冻胚卵裂球存活状况的影响。方法:取110例FET(frozen embryo transfer)周期的冻融胚胎,根据卵裂球数量及胚胎碎片分为5组:6～8细胞无碎片组(A组,n=102),4～5细胞无碎片组(B组,n=54),6～8细胞<10%碎片组(C组,n=75),4～5细胞<10%碎片组(D组,n=57),6～8细胞10%～25%碎片组(E组,n=28)。计算各组的胚胎存活率、卵裂球全存活率及卵裂球全死亡率。结果:110个FET周期共解冻胚胎316枚,复苏率68.7%。相同胚胎碎片条件下,6～8细胞与4～5细胞两组间胚胎存活率、卵裂球全存活率、卵裂球全死亡率均无显著差异(P>0.05)。6～8细胞胚胎中,碎片越多,胚胎存活率越低,卵裂球全死亡率越高(P<0.01),而卵裂球全存活率无差异(P>0.05);4～5细胞胚胎中,碎片越多,胚胎存活率(P<0.05)、卵裂球全存活率越低(P<0.01),而卵裂球全死亡率无差异(P>0.05)。结论:胚胎碎片是影响人冷冻胚胎中卵裂球存活状态的重要因素,而卵裂球数量对卵裂球存活无明显影响。     

添加抗氧化物维生素E对人类胚胎体外发育的影响

目的:探讨抗氧化物维生素E添加与人类胚胎体外发育潜力之间的关系.方法:选择2009年10月至2010年5月在我院进行常规体外受精-胚胎移植和卵胞浆内单精子注射的不孕患者106例,116个周期,共432个正常受精2个原核(2PN)来源的废弃胚胎,随机分为对照组和维生素E组,在维生素E组受精后第3天(D3)废弃胚胎的培养液中添加100 μmol维生素E,对照组不添加.观察两组囊胚的形成情况,并通过荧光染料Hoechst33342对胚泡进行染色,检测囊胚的总细胞数.结果:维生素E组的早期囊胚、扩张囊胚、孵化囊胚发育率均高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);维生素E组孵化囊胚细胞总数(80.42±0.60)%高于对照组(76.11±0.82)%,差异有统计学意义(t=-7.365,P＜0.05).结论:添加维生素E能提高人类胚胎的体外发育率和胚胎质量.     

晚卵泡期血清孕酮升高对卵裂期胚胎移植的临床妊娠结局的影响

目的:探讨晚卵泡期血清孕酮(P)升高对卵裂期胚胎移植的临床妊娠结局的影响.方法:我院2010年1月至2011年12期行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的卵裂期胚胎移植2345个周期,根据注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)日P水平分为P正常组(P≤4.77 nmol/L) 2045个周期,P升高组(P ＞4.77 nmoL/L)300个周期,比较两组的IVF-ET的临床妊娠结局.结果:P正常组与P升高组获卵数分别为10.72±4.67、12.94±5.30;临床妊娠率分别为55.35％(1132/2045)、46.67％ (140/300);异位妊娠率分别为2.83％ (32/1132)、7.86％ (11/140),差异均有统计学意义(P＜0.01).P正常组与P升高组的受精率、胚胎种植率及早期流产率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:晚卵泡期P升高可降低卵裂期胚胎移植的临床妊娠率,并增加其异位妊娠风险.     

重组人白血病抑制因子对体外移植前鼠胚发育的影响

目的：观察重组人白血病抑制因子（rhLIF)对体外移植前鼠胚发育的影响。方法：将36只小鼠随机分成3组,每组12只。组I（体内对照）小鼠注射人绒毛膜促性腺激素（hCG)116-120h后处死,组Ⅱ及组Ⅲ（体外对照）小鼠注射hCG44-48h后处死,收集组Ⅱ及组Ⅲ的2细胞期鼠胚,组Ⅱ的鼠胚用人输卵管液（HTF）＋10％人血清培养,组Ⅲ的鼠胚用HTF＋10％人血清＋rhLIF(1000U/ml）培养,观察并记录各细胞期鼠胚发育的数目。结果：（1）组Ⅱ和组Ⅲ发育到4细胞期、8细胞期、桑椹胚阶段的鼠胚百分率（分别为93．4％、87．7％、75．0％和94．5％、91．2％、85．4％）相似,差异无显著性（P＞0．05）。（2）组Ⅱ发育到囊胚期、扩张囊胚期和孵出期的鼠胚百分率低于组Ⅲ（分别为48．1％、32．1％、18．4％和82．3％、59．7％、36．3％）,差异有显著性（P＜0．05）。（3）组I和组Ⅲ发育到囊胚期的鼠胚百分率（分别为86．0％和82．3％）相比,差异无显著性（P＞0．05）。结论：rhLIF对鼠胚的早期发育没有显著影响,但能促进移植前晚期鼠胚的生长、分化和孵出。     

慢速程序化冷冻与玻璃化冷冻对第3天分裂期胚胎发育潜能的影响

目的比较慢速程序化冷冻法（慢速法）和玻璃化冷冻法（玻璃化法）对第3天分裂期胚胎发育潜能的影响。方法选择因输卵管阻塞或男性少弱精因素行体外受精（IVF）或卵母细胞胞质内单精子注射（ICSI）治疗的患者,挑选在行IVF或ICSI后第3天剩余优质胚胎数目超过4个者80例进入本研究。随机将每例患者的2个胚胎用玻璃化法冷冻,另外2个用慢速法冷冻;冷冻复苏后随机抽取40例患者移植慢速法冷冻的胚胎,另40例患者移植玻璃化法冷冻的胚胎,比较2种冷冻方法对胚胎发育潜能的影响。结果冷冻复苏后待移植的胚胎共160个,其中慢速法冷冻80个,复苏后存活73个（91％,73／80）,移植后40例患者中15例（38％,15／40）获得临床妊娠,其中3例（20％,3／15）为双胎妊娠,余为单胎妊娠,胚胎着床率为25％（18／73）;玻璃化法冷冻胚胎80个,复苏后存活71个（89％,71／80）。移植后40例患者中19例（48％,19／40）获得临床妊娠,其中9例（47％,9／19）为双胎妊娠,余为单胎妊娠,胚胎着床率为39％（28／71）,与慢速法相比,玻璃化法的临床妊娠率和双胎妊娠率均有提高,但差异无统计学意义（P〉0．05）,而胚胎着床率则显著提高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论玻璃化法能够更好地保存胚胎复苏后的发育潜能,更适合第3天分裂期胚胎的冷冻保存。     

玻璃化冷冻人早期胚胎的效果观察

目的探讨玻璃化冷冻人早期胚胎的临床应用价值。方法采用由5．5mol／L乙二醇及1．0mol／L蔗糖制成的冷冻保护液,于0．25ml冷冻麦管中,冷冻经体外受精一胚胎移植第2天或第3天后剩余的胚胎;对新鲜周期胚胎移植后未妊娠的胚胎,至少3个月或3个月以上施行胚胎复苏,观察胚胎复苏后的临床妊娠效果。结果共行胚胎复苏219例,957个胚胎,胚胎复苏后存活691个,胚胎存活率为72．2％（691／957）;移植胚胎178例,临床妊娠35例,临床妊娠率为19．7％（35／178）。35例中,分娩16例,流产6例,继续妊娠13例。结论玻璃化冷冻法简便,胚胎存活率高,是一种可用于临床的人早期胚胎冷冻的方法。     

卵裂期发育延缓胚来源的人类胚胎干细胞系的建立

目的观察体外受精（IVF）周期中24h内不发生卵裂的第3天（D3）发育延缓胚的体外发育潜能,为建立人胚胎干细胞库提供新的材料来源。方法通过囊胚序贯培养法将卵裂期发育延缓胚培养至囊胚,观察囊胚形成率及囊胚质量。用逐步logistic回归分析囊胚形成率与卵裂球数、卵裂球对称性及卵裂球碎片比率的相关性。用免疫外科法去除滋养细胞,将得到的原代克隆接种于小鼠胚胎成纤维细胞上,体外传代并鉴定。结果120枚卵裂期发育延缓胚培养出囊胚22枚（囊胚形成率18．7％）。第6天早期囊胚、囊胚、满囊胚、扩张胚、孵化胚及孵化后囊胚的比率分别为5．9％、23．5％、35．3％、23．5％、5．9％及5．9％。内细胞团分级及滋养外胚层分级均仅有1个为A级,其余均为B或C级。发育延缓胚的囊胚形成率与卵裂球数、卵裂球对称性相关,而与卵裂球碎片比率无关。获得内细胞团7个,原代克隆3个,成功培养出2株人类胚胎干细胞系（hESC）,并具有hESC的生物学特性：碱性磷酸酶（AKP）、阶段特异性胚胎抗原（SSEA）4、肿瘤排斥抗原（TRA）1-60、TRA-1-81呈阳性;悬浮培养可形成拟胚体;在严重免疫缺陷（SCID）小鼠体内可形成畸胎瘤;分别传45及35代后核型正常。结论部分发育延缓胚可以发育为囊胚,从而可为建立人胚胎干细胞系提供新的材料来源。     

Effect of removal of cumulus cells from one-cell mouse embryos on in vitro development

The effects of the removal of cumulus cells from fertilized mouse oocytes (one-cell embryos) and the presence of streptomycin in culture medium on in vitro development were studied. Ham's F-10 medium with (0.075 g/liter) or without streptomycin was supplemented with human serum (15%). Cumulus-intact embryos were harvested from oviducts after mice were superovulated with pregnant mare's serum gonadotropin (PMSG) and human chorionic gonadotropin (hCG). Hyaluronidase (300 IU/ml) was used to remove the cumuli. Embryos were cultured (i) with cumulus/without streptomycin (n=238), (ii) with cumulus/with streptomycin (n=185), (iii) without cumulus/with streptomycin (n=210), and (iv) without cumulus/without streptomycin (n=218). Embryonic development was assessed 24, 96, and 120 hr after initiation of culture. Percentage two cells and percentage small or expanded blastocysts were not different (P>0.05) among experimental groups. Percentages hatched blastocysts for the four groups were (i) 36±8 and 54±7, (ii) 35±8 and 55±6, (iii) 19±5 and 42±6, (iv) 23±5 and 47±5 at 96 and 120 hr, respectively. Percentages all (small, expanded, and hatched combined) blastocysts were (i) 74±5 and 74±5, (ii) 74±9 and 72±5, (iii) 56±6 and 63±5, and (iv) 61±5 and 63±5 at 96 and 120 hr, respectively. A greater (P<0.05) percentage of embryos developed to blastocysts and hatched by 96 and 120 hr, when they were cultured with the cumulus intact. There was no effect of streptomycin on embryonic development. Cumulus cells may act as nurse cells during a critical stage of the development of the embryo.     

卵泡发育迟缓者在体外受精中延长使用促性腺激素的临床疗效观察

目的探讨体外受精（IVF）周期中,卵泡发育迟缓者延长使用促性腺激素（Gn）的临床效果。方法将552个IVF周期按Gn用药时间、剂量和获卵数分组,观察组（69个取卵周期,66个移植周期）：Gn起始用量为75IU／d-300IU／d,用药时间≥16d,用至卵泡达到取卵标准为止,获卵数≥4个;对照组（483个取卵周期,464个移植周期）：Gn起始用量为150IU／d～300IU／d,用药时间≤15d,且总Gn用量≤3300IU,获卵数≥4个。比较两组患者的Gn用量及用药时间、获卵数、临床妊娠率、胚胎着床率及治疗结局。结果观察组和对照组的临床妊娠率分别为45．5％（30／66）和51．7％（240／464）;胚胎着床率分别为28．0％（46／164）和30．5％（385／1262）;分娩率分别为37．9％（25／66）和39．4％（183／464）;两组患者的临床妊娠率、胚胎着床率、分娩率等比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。观察组和对照组的多囊卵巢（PCO）和（或）多囊卵巢综合征（PCOS）患者的比例分别为55．1％（38／69）和20．1％（97／483）;基础窦卵泡数分别为（20±11）个和（15±6）个;Gn用药时间分别为（20．8±4．2）d和（10．3±1．8）d;Gn用药总量分别为（3090±1140）IU和（2302±862）IU;血清雌二醇峰值分别为（4595±5181）pmol／L和（7272±6320）pmol／L;获卵数分别为（10±6）个和（14±7）个;移植胚胎数分别为（2．5±0．6）个和（2．7±0．5）个;两组上述各指标比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论对IVF周期中卵泡发育迟缓的患者,延长使用Gn有效、方便,能获得满意的临床结局。     

体外受精-胚胎移植过程中多原核孕卵生成的影响因素

目的 探讨体外受精－胚胎移植（ＩＶＦ－ＥＴ）过程中多原核孕卵生成的影响因素及降低该类异常受精的方法。方法 应用多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归方法,分析１４５个ＩＶＦ－ＥＴ周期、１１６８个卵细胞的资料,研究多原核孕卵生成率与夫妇年龄,促超排卵方案,穿刺卵泡数,获取卵细胞数,授精前孵育时间,精液精子与授精精子质量和数量以及卵细胞受精率的关系。结果 成熟卵多原核孕卵生成率与女方年龄和可穿刺卵泡数呈显著性负相     

Effects of charcoal-extracted serum as a growth medium supplement on in vitro development of mouse embryos

Two-cell mouse embryos (N=952) were cultured in modified Ham's F-10 medium supplemented with 15% charcoal-extracted serum or 15% nonextracted serum from 17 patients. Each sample was assayed independently and all experiments run in duplicate. Ten nonextracted samples inhibited development to the blastocyst stage compared to controls in F-10 alone. Charcoal extraction significantly improved (P<0.05) development compared to nonextracted serum in eight of these samples. Seven samples supported development and no difference was noted between F-10 alone and extracted and nonextracted serum-supplemented media in this group. In conclusion, charcoal extraction significantly reversed the embryotoxic effects of some sera in the two-cell mouse embryo model.