生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测与分布

目的：应用多重聚合酶链反应（PCR）,检测生牛奶中16种金黄色葡萄球菌肠毒素（SE）基因的分布状况。方法：应用多重PCR的方法,对55个生牛奶样本中经分离鉴定的金黄色葡萄球菌菌株进行肠毒素基因SEA-SE lQ扩增,电泳检测扩增结果。利用16S rRNA基因片段在多重PCR中作为内部阳性参照,同时,所有菌株经反向乳胶凝集试验（reverse passive latex agglutination,RPLA）测定传统的肠毒素型SEA-SED。结果：从生牛奶中分离鉴定的金黄色葡萄球菌,含传统的毒素基因类型SEA-SEE,SEG-SEI基因的菌株仅占25.45%,携带新发现的毒素基因SE lJ-SE lQ的菌株占56.36%。毒素基因携带率为56.36%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占25.45%。结论：应用多重PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因型,具有敏感、快速、特异的特点,同时适用于传统和新型毒素基因。研究表明,生牛奶中分离的金黄色葡萄球菌带毒素基因阳性率高,而且携带新发现的肠毒素基因的亦占多数,应予以重视。     

金黄色葡萄球菌食品和病人分离株肠毒素基因和耐药性比较

目的：对金黄色葡萄球菌食品（不含生牛奶）分离株和病人分离株的肠毒素基因进行分型和耐药性检测,比较两种分离菌株的肠毒素基因分布和耐药性差异。方法：用国标方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,VITEK32生化验证,PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因（肠毒素SEA-SEJ基因）,VITEK32测定分离菌株抗生素的耐药性。结果：从病人分离的80株金黄色葡萄球菌检测到9种基因。肠毒素基因携带率为85.0%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占76.3%,含传统肠毒素基因（SEA-SEE）的菌株占43.8%,有新发现肠毒素基因（SEG-SEJ）的菌株占71.3%。从食品中分离的51株金黄色葡萄球菌检测到7种肠毒素基因。肠毒素基因携带率为68.7%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占21.6%。有SEA基因的占27.5%,含其它传统的毒素基因类型（SEB-SEE）基因的菌株占23.5%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI的菌株只占9.8%。金黄色葡萄球菌病人分离株与食品分离株的耐药谱和耐药率有较大差异。结论：金黄色葡萄球菌食品分离株和病人分离株的肠毒素基因分布不同,其耐药性有明显区别。     

应用实时荧光PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:建立一种简便、特异的荧光PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。方法:按金黄色葡萄球菌SEA～SEE型肠毒素基因序列设计引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。结果:46株金黄色葡萄球菌中检出22株携带肠毒素基因,阳性率为47.83%。以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%;不同来源的分离株携带肠毒素基因的比例不同,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占27.27%。结论:荧光PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法具有快速、敏感、特异性高的特点,适用于肠毒素基因的分型与分布的研究,适合基层疾控部门使用。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR快速检测法

目的 建立食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR快速检测方法.方法 根据公布的金黄色葡萄球菌肠毒素基因A～D型序列,分别设计引物并验证引物的特异性,建立多重PCR方法,检测食品风险监测和食物中毒事件中分离得到的165株金黄色葡萄球菌肠毒素基因A～D型.结果 165株金黄色葡萄球菌有95株携带肠毒素基因,毒素基因携带率为57.6％(95/165),携带一种基因型的占42.4％(72/165),同时携带两种以上毒素基因的占13.9％(23/165).结论 该方法具有简便快速、灵敏度高、特异性强等特点,适用于食源性金黄色葡萄球菌和食物中毒中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.     

PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的研究

目的建立一种检测金黄色葡萄球菌肠毒素C的快速敏感PCR方法。方法根据金黄色葡萄球菌肠毒素C基因编码序列,设计1对PCR引物来特异性扩增靶基因片段,片段长度为600 bp,通过对1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株和5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株进行检测来评价该方法的特异性;对金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株做一系列10倍稀释后进行PCR检测,并对其进行敏感性分析,对PCR扩增产物进行电泳和测序鉴定。结果1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应呈阳性,5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应为阴性;通过基因测序证实了PCR产物的特异性;PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的检测下限为1.5×10^2cfu/ml。结论本研究建立了一个快速、特异、敏感的金黄色葡萄球菌肠毒素C基因PCR检测方法。     

多重PCR检测金葡菌肠毒素基因型的研究

目的 应用多重聚合酶反应(PCR)，建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)基因方法。方法 用溶菌素和蛋白酶K制备模板DNA，用多重聚合酶链反应扩增的方法，对临床分离的金黄色葡萄球菌130株进行扩增。结果 金黄色葡萄球菌肠毒素血清型A(SEA)阳性的占23．1％(30／130)，血清型B(SEB)阳性的占43．1％(56／130)，血清型C(SEC)阳性的占11．6％(15／130)，血清型D(SED)阳性的占6．12％(7／130)，血清型EA(SEE)阳性的占2．31％(3／130)；femA基因片段在多重PCR中作为内部参照避免了假阴性结果的出现。结论 多重PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因型，具有敏感、快速、特异的特点，是一种可靠的实验诊断手段。     

金黄色葡萄球菌食物中毒菌株肠毒素检测及基因分析

目的:了解一起食物中毒中分离到的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的生物学特性及其肠毒素基因检测。方法:采用VITEK-32全自动微生物鉴定/药敏分析系统对分离到的金黄色葡萄球菌菌株进行生化鉴定和药敏试验,并采用mini-VIDAS全自动荧光酶标免疫仪对菌株进行肠毒素检测,再采用PCR技术对产肠毒素的菌株进行基因分型。结果:总共分离到的19株金黄色葡萄球菌,所有分离株均对青霉素G耐药,均分泌β-内酰胺酶,肠毒素基因分型检测均为SEA与SEE。结论:19株分离株均携带肠毒素,经鉴定均为SEA与SEE肠毒素混合型,由此对食物中毒的原因有一个较圆满的解释。     

一起食物中毒金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测

目的：检测从食物中毒中分离的金黄色葡萄球菌的肠毒素基因，明确肠毒素的基因型。对所分离的金黄色葡萄球菌进行药敏试验，检测其耐药性。方法：应用PCR扩增金黄色葡萄球菌SEA—SEJ基因，电泳检测扩增结果；用VITEK32检测药敏结果。结果：检测到金黄色葡萄球菌的肠毒素基因SEG和SEI，菌株的耐药性不强。结论：金黄色葡萄球菌的肠毒索SEG和SEI可能是这起食物中毒的因子。     

临床患者标本金黄色葡萄球菌肠毒素基因及耐药性的检测分析

目的 了解临床标本分离的金黄色葡萄球菌的产肠毒素携带情况及耐药现状.方法 应用mini-VIDAS仪器检测金黄色葡萄球菌肠毒素、PCR扩增肠毒素基因sea～see(sea、seb、sec、sed、see)、seg～sej(seg、she、sei、sej)和tsst基因,电泳检测扩增产物,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测用检测头孢西丁方法,药敏试验采用琼脂稀释法进行.结果 55株金黄色葡萄球菌中40株携带肠毒素基因,占72.73％,主要为sea型14.55％(8/55)、sec型12.73％(7/55)、seb型9.10％ (5/55),同时携带≥2种肠毒素的占9.09％(5/55);另外,19株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)有17株(89.47％)携带肠毒素基因,以sea为主,占26.32％ (5/19);甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA) 36株,肠毒素基因携带率63.89％(23/36),毒素基因以sec为主,占16.67％(6/36).金黄色葡萄球菌除对呋喃妥因敏感外,对青霉素、苯唑西林等11种抗菌素均有耐药性,且MRSA的耐药性MSSA的强.结论 应重视对金黄色葡萄球菌肠毒素和MRSA的检测,合理使用抗菌素,以利于医院MRSA感染的控制.     

食源性金黄色葡萄球菌9种肠毒素基因的多重PCR检测

目的 建立多重PCR方法检测食源性金黄色葡萄球菌9种肠毒素基因,了解其在食源性金黄色葡萄球菌中的分布状况.方法 建立多重PCR方法检测144株食源性金黄色葡萄球菌的9种肠毒素基因,对其分布状况进行研究.结果 建立的多重PCR方法特异、高效,9种肠毒素基因在144株食源性金黄色葡萄球菌中的检出率由高到低依次为SEU (25.69％)、SEG (22.22％)、SEM (20.83％)、SEK (20.14％)、SEQ (18.06％)、SEH (15.97％)、SEN (10.42％)、SEJ (8.33％)、SEL(5.56％);52.78％的菌株含有该9种肠毒素基因中的至少1种,34.03％的菌株含有9种肠毒素基因中的两种或两种以上.结论 该多重PCR方法特异性高,快速简便,可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布研究;144株食源性金黄色葡萄球菌中9种肠毒素基因均有检出,其中以SEU、SEG、SEM、SEK检出率较高.     

Prevalence of enterotoxin and toxic shock syndrome toxin genes in Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with mastitis

Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with mastitis were evaluated for the prevalence of 16 enterotoxin genes (sea-see and seg-seq) and toxic shock syndrome toxin gene (tsst-1). Of 78 S. aureus examined, 73 (93.6%) were positive for one or more enterotoxin genes and these were divided into 36 groups by the presence of different enterotoxin genes. Enterotoxin genes including sen (84.6%), sem (71.8%), sei (60.3%) and sed (52.6%) were found frequently, while seg (24.4%), seq (16.7%), seo (12.8%), and seb (1.3%) were found at lower frequencies. Toxic shock syndrome toxin (tsst-1) gene was detected in 20 (25.6%) isolates and was always found in combination with other enterotoxin genes. The majority (88.5%) harbored more than one enterotoxin gene in different combinations. Eight S. aureus isolates (10.3%) were positive for sed, sei, sem, and sen; six (7.7%) possessed sed, seg, sei, sem, sen, and tsst-1; five (6.4%) had sei, sem, and sen; and four (5.1%) had sei, and sen. One isolate was positive for seb along with other SE genes including sed, seh, sem, sen, seq, and tsst-1. None of the isolates carried other enterotoxin genes (sea, sec, see, sej, sek, sel, and sep). PFGE profiles revealed 15 distinct pulsotypes among the 78 S. aureus isolates evaluated. PFGE and enterotoxin gene profiles did not match with each other because a single pulsotype carried different combinations of enterotoxin genes. The majority of S. aureus isolated from milk of mastitic cows carried newly described SE genes sem, sen and sei along with classical SE genes, sed and tsst-1. This is the first report describing the high prevalence of newly described enterotoxin genes, sem and sen in S. aureus from bovine mastitis. The high prevalence of enterotoxin genes and tsst-1 in S. aureus may be important as it is relevant to udder pathogenicity and food hygiene.     

HIV感染人群鼻腔携带的MRSA与MSSA菌株耐药谱及毒素基因分布特征

目的 探究广州市HIV感染人群鼻腔携带耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin - Resistant Staphylococcus aureus, MRSA)与甲氧西林敏感性葡萄球菌(Methicillin Sensitive Staphylococcus Aureus, MSSA)的耐药谱和毒素基因分布特征。方法 于2017年6 - 8月,便利抽取广州市某医院门诊就诊的1 001名HIV感染者并采集其鼻拭子样本,根据传统实验室方法分离鉴定出253株金黄色葡萄球菌,对鉴定出的菌株进行药物敏感性试验,利用头孢西丁纸片法和mecA扩增法鉴定MRSA,采用多重聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR) 检测毒素基因。结果 253株SA菌株中,检出MRSA 119 (47.04%) 株,MSSA 134(52.96%)株。60.08%(152/253) 金黄色葡萄球菌为多重耐药SA(Multi - Drug Resistant, MDRSA)。 MRSA菌株和MSSA菌株耐药率最高的抗生素均为青霉素(89.08%,84.33%),其次为红霉素(61.34%, 53.73%)。MRSA菌株对头孢西丁、利福平、氯霉素、四环素和米诺环素的耐药率高于MSSA菌株,差异具有统计学意义。MRSA菌株毒素基因pvl和tst检出率均为4.20%,未检出eta和etb。MSSA菌株毒素基因pvl、tst、eta和etb的检出率分别为2.99%、1.49%、2.24%和0.75%。结论 HIV感染人群鼻腔携带金黄色葡萄球菌中的MRSA和MDRSA检出率高,但MRSA和MSSA菌株pvl、 tst、eta和etb检出率低。     

食源性金黄色葡萄球菌流行特征、产肠毒素特性及耐药性研究

目的：了解食源性金黄色葡萄球菌流行特点及产肠毒素特性及其耐药性，为制定HACCP以防止金黄色葡萄球菌的食源性疾病提供依据。方法：采集8类食品1243件分离金黄色葡萄球菌并进行产肠毒素A—E试验及药物敏感试验。结果：从生肉、熟食、生奶、及水产品中分别分离出40株（10．96％）、12株（3．13％）、34株（16．27％）及1株（1．12％）金黄色葡萄球菌，相应的产肠毒素率分别达到52．50％、58．33％、61．76％、0．oo％；对青霉素、四环素、凝固酶阴性苯唑西林耐药率分别高达93．10％、49．43％、37．93％；79．31％菌株对2种以上的药物多重耐药，最多耐药种类达7种，表现出30种耐药谱。结论：扬州市食品中存在着较严重的金黄色葡萄球菌潜在的危害，主要来源于生肉、生奶及熟食；食源性金黄色葡萄球菌产毒素能力较强。金黄色葡萄球菌对多种药物的耐药性提示安全应用治疗药物的重要性。     

47株金黄色葡萄球菌临床血流感染分离株的基因分型研究

目的 研究金黄色葡萄球菌临床血流感染分离株的分子流行病学特征.方法 收集2006年1月至2008年12月解放军总医院分离的临床血流感染金黄色葡萄球菌菌株(共47株),标本来源均为患者静脉血.采用琼脂稀释法检测所有菌株对多种抗生素的耐药性,PCR方法 检测pvl毒素基因,DiversiLab~(TM)Rep-PCR分型系统分析菌株的同源性;对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行葡萄球菌染色体/mec(SCCmec)分型以及ST239型别的快速筛查;综合分型和药敏试验结果,挑选部分代表菌株进行多位点序列分型(MLST).结果 47株血流感染金黄色葡萄球菌中,pvl基因检出率为4.3%.MRSA占51.1%.MRSA均为SCCmec Ⅲ型菌株;Rep-PCR分为A～L共12个型,其中A型为最主要的型,共22株(46.8%),所有的MRSA均属于A、B两型.结论 47株临床血流感染金黄色葡萄球菌中的MRSA绝大部分为多重耐药克隆ST239-MRSA-SCCmecⅢ型.     

中国15个地区分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型研究

目的 研究中国2006年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的来源和遗传背景.方法 收集2006年1-12月15个地区17家医院连续分离的非重复MRSA 302株,通过多重PCR对MRSA进行染色体mec(SCCmec)分型,葡萄球菌A蛋白(Spa)分型和多位点序列分型(MLST).结果 SCCmec分型Ⅲ型为76.8%,不能分型为7.9%.从广州地区分离株中发现2株Ⅳ型,Ⅱ型为14.6%;而大连地区分离株中Ⅱ型为75.0%,与其他地区菌株分型的差异存在统计学意义(P<0.005).MLST共有4种分型,其中序列分型(ST)239(46.7%)、ST5(44.4%)、ST59(6.7%)、ST88(2.2%).Spa分型共有14种,其中t30(52.6%)、t37(27.2%)、t2(12.9%)、t632(2.3%)、t437(1.3%)和t570、t601(各0.7%)及t377、t459、t796、t899、t1152、t2649(各0.3%),未分型占0.3%.未检出pvl以基因.结论 调查的15个地区MRSA主要克隆株为ST239-MRSA-SCCmecⅢ-t30和ST5-MRSA-SCCmecⅡ-t2,具有独特的地理分布.     

多重PCR技术在检测食源性金黄色葡萄球菌 肠毒素基因中的应用

摘要:目的　金黄色葡萄球菌A、B、C、D和E型肠毒素是引起食源性疾病的主要类型,采用多重PCR技术分析食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素基因携带状况。方法　以19株食源性金黄色葡萄球菌分离株为研究对象,利用多重PCR技术对核酸酶基因以及肠毒素A、B、C、D和E型基因进行检测。结果　19株菌中均检出金黄色葡萄球菌特异性核酸酶基因,与传统菌落分离培养鉴定结果一致;9株菌含肠毒素SEA基因,1株同时含SEA和SEB基因,没有检测到肠毒素C、D和E基因。结论　在19株食源性金黄色葡萄球菌分离株中,10株携带肠毒素基因,以携带肠毒素A基因为主。     

Antimicrobial susceptibility testing and genotypic characterization of Staphylococcus aureus from food and food animals

Staphylococcus aureus is commonly present in humans and animals. The aim of this study was to investigate antimicrobial resistance and genetic characteristics of S. aureus from food and food animals in Shaanxi Province in China. A total of 332 nasal swabs, breast skin swabs, raw milk, and pork samples were collected from local pig, dairy farms, or local grocery stores and screened for the presence of S. aureus. S. aureus isolates were characterized using antimicrobial susceptibility, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) analysis, and polymerase chain reaction for detecting pvl and mecA genes. Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains were additionally tested for SCCmec type and exfoliative toxin genes. The prevalence of S. aureus was 30.6% in pig nasal swabs, 32.5% in pork, 25.7% in cow nasal swabs, 30.8% in cow breast skin swabs, and 29.3% in milk samples. Resistances were common among isolates tested against erythromycin (65.7%), tetracycline (65.7%), ciprofloxacin (52.7%), followed by gentamicin (36.7%), chloramphenicol (23.1%), cefoxitin (8.3%), and oxacillin (7.7%), but no isolate was resistant to vancomycin, amikacin, or cefoperazone. pvl gene was found in the isolates from all types of samples except from cow nasal swabs. Fourteen isolates from pig nasal swabs contained mecA gene and were considered as MRSA. PFGE analysis showed that nasal isolates differed from food isolates, but isolates from the same animal source appeared to cluster closely. The PFGE patterns of MRSA isolates were different from other S. aureus isolates from pig nasal cavity even though they were from the same source. All the MRSA isolates belonged to SCCmec type IV(b). No isolates contained exfoliative toxin genes. These findings indicated that S. aureus, including multidrug-resistant S. aureus, are widely spread in food animals and animal-derived foods in Shaanxi Province, China. MRSA isolates from pigs may pose potential health risks for workers in swine farms and the community at large.