青蒿琥酯对高温复合内毒素致细胞凋亡保护作用

目的 探讨高温复合内毒素(LPS)作用下,青蒿琥酯(AR)对RAW264.7细胞热休克蛋白70(HSP70)合成及细胞凋亡的影响.方法采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞.分为空白对照组、高温复合内毒素组、AR组(又分为4个亚组),于40℃、95%O2、5%CO2条件下共同孵育24h.用RT-PCR技术检测细胞内HSP70mRNA及其蛋白的表达量,用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 空白组和高温复合内毒素组HSP70m RNA的表达率分别为10%,23%,而AR组可显著提高HSP70mRNA的表达率,为54%,并与高温内毒素组差异有统计学意义(P＜0.05).HSP70蛋白的表达情况与HSPT0mRNA一致,而细胞凋亡率的变化则呈相反趋势.结果 AR进一步诱导高温复合内毒素作用下RAW264.7细胞HSP70m RNA和HSP70蛋白的表达,且可明显降低细胞的凋亡率,可能是其抗损伤保护作用的机制之一.     

HSP 70高表达对射线诱导的前体血细胞凋亡的保护作用

目的研究诱导热休克蛋白(HSP70)高表达对射线引起的前体血细胞凋亡的保护作用。方法前体血细胞分别在41℃温浴2h和加入砷酸钠诱导HSP70，然后射线辐照。对照前体血细胞则只是射线辐照而不预热。并用HSP70反义寡核苷酸链抑制HSP70合成，进一步观察HSP70与细胞凋亡的关系。利用DNA碎片检测法检测细胞凋亡，HSP70的量利用Western Blotting检测。结果预热和砷酸钠都可以诱导前体血细胞HSP70高表达；预热同时可以增加细胞凋亡的基础量．HSP70高表达可以明显减少辐射诱导的细胞凋亡。在预热前导入HSP70反义核酸链到前体血细胞，就可以减少HSP70的抑制细胞凋亡的作用。结论不论何种因素诱导的HSP70高表达都可以保护前体血细胞因为辐射引起的细胞凋亡。     

预热对白血病患者胸腔渗出细胞H2O2的影响

目的探讨预热对肿瘤细胞过氧化氢敏感性的影响及其机制。方法将白血病患者胸腔渗出细胞(K562)在40℃预热不同时间，诱导细胞热应激蛋白70(HSP70)高表达，用RT—PCR检测细胞HSP70 mRNA水平；将细胞暴露于0．1．0．2，0．4．0．8mmol的H2O2 16h，用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力，观察预热对不同水平H2O2敏感性的影响；保持H2O2浓度为0．2mmol不变。观察不同预热时间对细胞H2O2敏感性的影响。结果40℃预热后细胞的HSP70含量升高，在预热120min后达到最高，以后缓慢下降，可维持10h以上；预热细咆对不同浓度H2O2的敏感性均显著低于未预热细胞；对于相同浓度的H2O2而言，预热120min的细胞对敏感性最低。结论预热可以引起细胞HSP70表达增高。降低细胞对H2O2的敏感性。     

HSP70高表达对K562细胞化疗敏感性研究

目的：研究化学因素引起的热应激蛋白70（HSP70）升高对K562细胞化疗药物体外敏感性的影响。方法：用氯化镉诱导K562细胞使其HSP70高表达，在高表达细胞中分别加入甲氨蝶呤（MTX）、丝裂霉素C（Mitomycin C）、顺氯氨铂（PDD）、平阳霉素（Bleomycin）等4种化疗药物，药物浓度以临床一次用量的1／250为中剂量，中剂量的1／10、10倍分别为低剂量和高剂量，作用16h后用MTT比色法检测细胞活力；HSP70用RT－PCR检测。结果：氯化镉可诱导细胞HSP70高表达，其中作用4h后表达最高；HSP70高表达可以降低细胞对化疗药物的敏感性，HSP70表达水平越高，细胞对化疗药物的敏感性越低。结论：非热诱导的HSP70高表达可以降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，其结果与热诱导的作用相似。     

HSF1/HSP70通路抑制c-Jun氨基末端激酶的活化保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

目的观察热休克转录因子1(HSF1)与热休克蛋白70(HSP70)对紫外线A(UVA)诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立8mJ/cm2UVA辐射损伤HaCaT细胞的病理模型。将细胞随机分为对照组、8mJ/cm2UVA照射组、HSP70转录抑制剂组(50μmol/L槲皮素)。Honechst 33258荧光染色观察细胞凋亡;蛋白质印迹法检测UVA辐射HaCaT细胞后p-HSF1和HSP70蛋白的经时变化及UVA辐射后孵育6h JNK(c-Jun氨基末端激酶)、p-JNK的蛋白表达;Real-Time PCR检测HSP70 mRNA的表达。结果 UVA辐射后HaCaT细胞内p-HSF1、HSP70蛋白表达量均出现先增加后减少的时间依赖性趋势,其中p-HSF1于1h开始增加,3h达高峰,HSP70于6h达高峰,24h基本恢复原始水平;UVA辐射前预先加入HSP70转录抑制剂槲皮素能显著抑制HSP70 mRNA的表达,增加p-JNK的表达量,同时Honechst 33258荧光染色观察其与UVA辐射组比较凋亡率明显升高。结论 8mJ/cm2UVA辐射HaCaT细胞在一定时间内可使HSF1活化致HSP70表达增加。HSF1/HSP70通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,其机制与HSP70大量表达后抑制JNK的活化有关。     

热应激蛋白70在苯致小鼠骨髓细胞凋亡中的作用

目的 探讨苯是否可导致细胞凋亡和热应激蛋白70（HSP70）在这一过程中的作用。方法 取小鼠骨髓细胞，体外33℃，5%CO2孵箱中孵育过夜后，随机分为；普通组，以不同渡（0，2，10mmol/L)的苯染毒2h；热应激组，细胞40℃受热1h,33℃恢复1h，再以不同浓度（0，2，10mmol/L)的苯染毒2h，同时分别设立不染毒细胞组用以观察HSP70表达，采用Western blot和流式细胞术检测HSP70表达水平和小鼠骨髓细胞凋亡程度。结果 热应激后HSP70表达增加；热应激组细胞除0剂量染毒组外，其他剂量组细胞发生凋亡百分比均高于普通组。结论 热应激后细胞HSP70的增加不能抑制苯所致小鼠骨髓细胞凋亡的发生。     

热应激作用下人肺腺癌A549细胞中HSP70B’的动态表达

[目的]探讨热休克蛋白70B’（HSP70B’）的产生条件，分析HSP70B’在人肺腺癌A549细胞中的表达特征。[方法]采用Western-blot方法检测正常培养细胞（37℃）和不同温度（38、39、40、41、42、43、44、45℃）下热应激1h；选择HSP70B’表达最高的温度42℃，应激1h后恢复培养（37℃，5％CO2）不同时间（0、3、6、9、12、15、18、24h）；在42℃应激不同时间（0、20、40、60、80、100、120、140、180min）恢复培养6h的肺腺癌A549细胞中HSP70B’蛋白的表达水平。[结果]HSP70B’在正常状态的A549细胞中不表达；在不同应激温度作用下，HSP70B’在39℃开始表达，在42℃时表达量达到最高水平；细胞维持42℃应激后恢复培养不同时间作用下，HSP70B’表达在恢复培养6h后达最高，恢复培养24h后降到最低水平；在42℃应激不同时间后均恢复培养6h作用下，热应激60min时HSP70B’表达最高。[结论]肺腺癌细胞株A549细胞中HSP70B’产生的最优条件是42℃应激60min后37℃恢复培养6h。HSP70B’在热应激后的A549细胞中迅速表达，其在细胞热应激中的作用及意义有待进一步研究。     

预热适应对NIH-3T3细胞的保护作用

目的建立小鼠成纤维细胞系NIH-3T3预热适应细胞模型,探讨应激与适应对细胞活性和热休克蛋白90(HSP90)合成的影响。方法通过预热适应(42℃,20 min)建立应激适应细胞模型,并通过再次热应激时(44℃,40min)细胞膜损伤指标、DNA损伤指标的变化综合评价适应效果。以Western blot法检测应激及适应对细胞内HSP90合成的影响。结果结合预热适应后再次热应激所致的细胞膜损害和HSP90合成情况,初步确定预热适应后6 h为最佳应激保护时间。预热适应6 h后,再次热应激时,培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出变化率为15．4%±2．6%,对照组为41．2%±5．1%；DNA受损细胞所占百分比为15．1%,较直接热应激组(26．3%)轻。OD_(HSP90)/OD_(control)变化趋势显示热应激40min后细胞内HSP90含量均呈下降趋势,直接热应激组为0．82±0．18,预热适应组为1．70±0．52,预热适应+热应激组为1．41±0．16。结论通过对NIH-3T3细胞进行预热处理,确定应激保护的时间点,建立了细胞应激适应模型；初步确认HSP90在该模型中的保护作用。     

蛋白激酶C激活在高温诱导海马神经细胞凋亡中保护作用的研究

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)在高温诱导的海马神经细胞凋亡中的作用,为防治高温致脑损伤提供实验依据。方法 通过建立体外高温诱导海马神经细胞原代培养的凋亡模型,应用PKC特异性抑制剂chelerythrine chloride(CTC),观察其对细胞凋亡率及对HSP70表达的影响。结果 高温处理后,海马神经细胞凋亡率显著升高,37℃培养加CTC组与正常培养组相比,凋亡率差异具有显著性;免疫组织化学结果显示,高温作用后海马神经细胞内HSP70表达明显升高,而应用CTC后,其表达则明显下降。结论 高温和CTC均能够诱导海马神经细胞凋亡,PKC激活在高温诱导的海马神经细胞凋亡中具有重要的保护作用。     

高温、苯并芘-7,8-二醇-9,10-环氧化物单独作用对人肺腺癌细胞Hsp27、Hsp70表达的影响

目的研究不同温度和不同浓度B(a)P7,8二醇9,10环氧化物(BPDE)作用A549细胞后,热休克蛋白27(HSP2)、热休克蛋白70(Hsp70)的表达规律。方法体外培养的A549细胞分为高温应激组和BPDE组。37℃培养的细胞作对照,高温应激组细胞置于高温(39℃、42℃、43℃)应激2小时。BPDE组用不同浓度的BPDE(0、2、4、8μmolL)染毒2h。利用Westernblot技术分析A549细胞株中Hsp27、Hsp70的表达水平。结果高温应激组细胞Hsp27的表达较37℃对照明显升高,差异均有显著性(P<0.05)。在39℃,Hsp27的表达水平达到峰值。高温处理后,Hsp70的表达也增加,在42℃达到最高,且与对照相比差异有显著性(P<0.05)。BPDE组Hsp27、Hsp70的表达均较对照明显升高,其中Hsp27的表达水平在实验用最高浓度8μmolL达到最高,且与对照比较差异有显著性(P<0.05),但仍处于上升阶段。Hsp70在4μmolL达到最高,在4μmolL和8μmolL时,Hsp70的表达水平与对照比较差异有显著性(P<0.05)。结论高温和BPDE均能诱导A549细胞Hsp27、Hsp70的表达。高温应激时,Hsp27和Hsp70的表达水平分别在39℃和42℃达到峰值。BPDE处理时,Hsp27在8μmolL时表达最高,但仍处于上升趋势,而Hsp70在4μmolL时表达最高。     

预热对K562细胞肿瘤坏死因子α敏感性的影响

为探讨预热对肿瘤细胞肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）敏感性的影响及其机理,将白血病患者胸腔渗出细胞系（Ｋ５６２细胞）在４０℃预热不同时间（０,３０,６０,９０,１２３０,１５０和１８０ｍｉｎ）,使细胞热应激蛋白７０（ＨＳＰ７０）高表达;然后将预热６０ｍｉｎ细胞和未预热细胞分别暴露于５０,１００,２００和４００Ｕ／ｍｌ的ＴＮＦ－α１６小时,用ＭＴＴ比色法检测细胞活力。保持ＴＮＦ－α浓度为１００Ｕ／ｍｌ,     

预热对K_(562)细胞化疗药物体外敏感性的影响

目的：研究预热对肿瘤细胞化疗药物敏感性的影响并初步探讨其可能机理。方法：对Ｋ５６２细胞预热应激,用ＲＴ－ＰＣＲ检测细胞热应激蛋白７０（ＨＳＰ７０）,并用ＭＴＴ比色法观察细胞对化疗药物体外敏感性的变化。结果：预热使Ｋ５６２细胞ＨＳＰ７０明显增多,且在预热２ｈ后达到最高;在常规剂量下（临床一次用量的１／２５０）未预热Ｋ５６２细胞对阿霉素（ＡＤＭ,０．４ｍｇ／Ｌ）及环磷酰胺（ＣＴＸ,０．８ｍｇ／Ｌ）中度敏感;预热应激后,Ｋ５６２细胞对这两种同剂量药物均轻度敏感或不敏感;并检测了这两种药物的浓度梯度。结论：热应激可以降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性;推测ＨＳＰ７０表达增强可能是肿瘤热疗效果和化疗药物敏感性降低的直接原因。     

HSP70高表达对K562细胞热耐力的影响

为探讨ＨＳＰ７０高表达与细胞热耐力的关系,用硫酸镉诱导细胞ＨＳＰ７０高表达;ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平;观察ＨＳＰ７０水平对细胞热耐力的影响。结果：硫酸镉作用于细胞１ｈ后,细胞的ＨＳＰ７０水平显著增高,ＨＳＰ７０水平高的细胞其热耐力明显强于ＨＳＰ７０水平低的细胞组;ＨＳＰ７０水平于细胞热耐力间正相关。结论：化学因素诱导的ＨＳＰ７０表达增高可以保护热暴露细胞,提高细胞热耐力。     

HSP70高表达对K_(562)细胞热耐力的影响

用硫酸镉诱导细胞ＨＳＰ７０ 高表达,ＲＴ—ＰＣＲ 检测ＨＳＰ７０ｍ ＲＮＡ 水平并观察ＨＳＰ７０ 水平对细胞热耐力的影响。发现硫酸镉作用于细胞１ｈ 后,细胞的ＨＳＰ７０ 水平显著增高, ＨＳＰ７０ 水平高的细胞其热耐力明显强于ＨＳＰ７０ 水平低的细胞组;ＨＳＰ７０ 水平与细胞热耐力间正相关。提示化学因素诱导的ＨＳＰ７０ 表达增高可以保护热暴露细胞,提高细胞热耐力     

过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制。方法用0．01、0．1、1mmol／L的H2O2处理K562细胞10、30、60、180min建立氧化损伤模型;用0．1mmol／L H2O2处理不同时间(6～48h)和不同浓度(0．5～1000μmol／L)的H2O2处理48h分别诱导K562细胞凋亡,然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平。结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0．01mmol／L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似。结论JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关。     

HSP70过表达对紫外线C致DNA损伤的影响

[目的]研究HSP70过表达对紫外线致DNA损伤的影响.[方法]设A549、A549/pcDNA、A549/HSP70 3个组,分别用不同紫外线照射剂量(0、10、20、40、80 J/m2)照射HSP70表达正常和过表达的A549细胞株,用Western-blot检测HSP70的水平,用碱性单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况.[结果]DNA损伤的彗星率随紫外线照射的剂量增加而逐渐加重.当在相同剂量40J/m2时,A549/HSP70组的彗星率为24 %、尾矩为14.31±1.60,A549相应为40 %、18.83±0.41,A549/pcDNA为40%、18.67±0.81.在40 J/m2照射所致的Olive尾矩明显减少,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01).[结论]HSP70能保护细胞免受一定剂量范围内的紫外线引起的DNA损伤.     

诱导分化剂和热应激对K562细胞JWA和热应激蛋白70表达的影响

目的　研究诱导K5 6 2细胞分化和热应激过程中 ,JWA表达的特点 ,探讨JWA与热应激蛋白 (Hsp70 )表达的关系以及参与诱导分化和热应激可能的机制。方法　分别建立K5 6 2细胞诱导分化和热应激模型 ,采用Western blot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子 (HSF1)、HSF2蛋白表达水平。结果　 (1)佛波酯 (TPA ,10 0ng ml)、氯化高铁血红素 (hemin ,3× 10 - 5mol L)、阿糖胞苷 (Ara C ,80ng ml)、阿霉素 (adriamycin ,4× 10 - 8mol L)、全反式维甲酸 (ATRA ,1× 10 - 6 mol L)、三氧化二砷 (As2 O3,1× 10 - 6 mol L)分别诱导K5 6 2细胞 4 8h ,JWA、Hsp70蛋白表达水平均明显增加 ;HSF2在hemin、Ara C、ad riamycin诱导下表达增加 ;(2 )在 4 2℃不同时间 (10、2 0、30、4 5、6 0、90min)和不同温度 (39℃、4 2℃、4 5℃ )处理下 ,Hsp70表达水平的变化与JWA蛋白表达水平的变化趋势基本相似 ,且HSF1在热应激早期表达。结论　在诱导分化、热应激过程中 ,JWA与Hsp70蛋白表达水平均明显上调 ,且变化趋势有一定的相似 ,但所涉及的细胞内信号转导通路可能不是惟一的。JWA表达与HSF1或HSF2似乎没有直接的特征性联系。     

苯并(a)芘代谢产物作用下人胚肺细胞热应激蛋白70表达与DNA损伤

目的 探讨苯并（ａ）芘（ＢａＰ）代谢产物作用下,人胚肺细胞ＨＳＰ７０表达与ＤＮＡ损伤的关系。方法 选用正常人胚肺（ＨＥＬ）二倍体细胞,进行如下处理：一般处理组,以０、１０、５０、１００、２００ｕｍｏｌ／Ｌ ＢａＰ染毒３ｈ（体外经大 地Ｓ９－ｍｉｘ活化诱导）,单细胞凝胶电泳技术检测ＤＮＡ损伤情况;热应激组,细胞预热应激（４１℃１ｈ,３７℃２ｈ）,再以同样浓度的ＢａＰ染毒３ｈ,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和单细胞凝胶电泳技术检测ＨＳＰ７０表达与ＤＮＡ损伤情况。结果 一般处理组ＢａＰ在５０ｕｍｏｌ／Ｌ时可引起ＨＥＬ细胞ＤＮＡ的明显损伤,且随ＢａＰ染毒剂量增加,ＤＮＡ损伤级别加重;接受预热应激的细胞经不同浓度ＢａＰ染毒３ｈ后,与对照组比,ＨＳＰ７０表达水平降低,ＢａＰ在１０ｕｍｏｌ／Ｌ时可见明显的ＤＮＡ损伤,随染毒剂量