介孔纳米SiO2致小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞毒性与氧化损伤

[目的]探讨介孔纳米SiO2对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞的毒性和氧化损伤作用。[方法]设4个浓度组（2.5、10、50、100I.tg／mL）和生理盐水对照组,染毒24h后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法观察细胞毒性,并根据染毒后细胞的总蛋白（TP）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的变化情况分析介孔纳米SiO2的细胞毒性和氧化损伤作用。[结果]10、50和100μg／mL浓度组细胞存活率随着染毒浓度的升高而降低,差异有统计学意义;50、100μg／mL浓度组细胞及其上清液中TP、LDH、NO和MDA含量随染毒浓度增加而升高,而GSH和SOD含量降低;而且与细胞发生融解破碎、间隙加大等形态学改变情况相符。[结论]介孔纳米SiO2对体外培养巨噬细胞株RAW264.7具有细胞毒性和氧化损伤作用,且随剂量的加大而增强。     

硫酸铟对小鼠成纤维细胞毒性作用的研究

[目的]了解硫酸铟对小鼠成纤维细胞（L929）的细胞毒性、DNA损伤及活性氧含量的影响。[方法]以体外培养的L929细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色分析法（MTT法）观察不同染毒浓度（1、2、4、8mmol／L硫酸铟）在不同时间段（2、24、48h）染毒对L929细胞的毒性作用;采用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测在2h作用下,不同浓度（1、2、4mmol／L硫酸铟）染毒致DNA损伤的情况及活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量的变化。[结果]硫酸铟对L929细胞生长具有抑制作用,在各个浓度及时间段内光密度值随染毒浓度增加及染毒时间延长而降低,阴性组与染毒组差异有统计学意义（P〈0．05）。单细胞凝胶电泳结果显示,彗星拖尾率、彗尾DNA％、尾长、Olive尾矩随染毒浓度增加而增加,阴性组与染毒组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）,且ROS含量随染毒浓度增加表现递增。[结论]本实验条件下,硫酸铟能够明显抑制L929细胞增殖,存在明显的剂量-效应关系和时间-效应关系,并在短时间内能够引起DNA单链断裂及ROS含量增多。     

纳米二氧化钛与醋酸铅联合诱导人胚肝细胞氧化应激作用

[目的]研究纳米二氧化钛（TiO2）与醋酸铅（PbAc）联合作用于人胚肝细胞（L-02）,对细胞内活性氧（ROS）、氧化应激作用及细胞活性的影响。[方法]以1．000mg／LPbAc和10．000、1．000、0．100、0．010、0．001mg／LTi02单独以及1．000mg／LPbAc及前述浓度Ti02混合处理L-02细胞24h,以体积分数为0．1％二甲基亚砜为阴性对照,30gmol／LH2O2为阳性对照。用噻唑蓝法检测细胞毒性,采用流式细胞术检测胞内ROS水平,检测谷胱甘肽（GSH）与超氧化物歧化酶（SOD）以评价细胞内抗氧化物质水平。[结果]与阴性对照、PbAc染毒组及其他浓度TiO。染毒组相比,10．000mg／LTi02染毒组细胞活力明显降低（P〈0．05）。与阴性对照、PbAc染毒组和其他浓度混合物染毒组相比,10．000mg／L混合物染毒组细胞活性明显降低（P〈0．05）;1．000、0．100mg／L混合物染毒组细胞活力也明显低于阴性对照组（P〈0．05）。与阴性对照、PbAc染毒组相比,各浓度混合物染毒组细胞ROS水平均明显增加（P〈0．05）.与阴性对照相比,1．000至0．010mg／L混合物染毒组细胞GSH水平均明显升高（P〈0．05）,0．100、0．010mg／L混合物染毒组细胞SOD活性也明显升高（P〈0．05）。[结论]本研究条件下,低剂量纳米TiO2和PbAc共同作用于L-02,可增加活性氧水平,同时诱导细胞增加GSH和SOD水平以自我保护;随着染毒剂量升高,ROS水平明显增加,抗氧化能力下降,导致细胞活力下降。     

纳米二氧化钛对小鼠睾丸支持细胞的细胞毒性研究

目的 探讨纳米二氧化钛对小鼠睾丸支持细胞(TM4)的毒性作用。方法 用浓度为0、25、50和100μg/ml的纳米二氧化钛染毒TM4细胞24h。使用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK8) 检测细胞存活率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,试剂盒检测超氧化歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的水平。结果 与对照组相比,随着纳米二氧化钛染毒浓度的升高,TM4细胞存活率逐渐下降,当浓度达到100μg/ml时,细胞存活率下降明显(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,与对照组相比,随着染毒剂量的增加,各个染毒组的细胞凋亡率和ROS水平逐渐增加(P<0.05)。细胞SOD活性和GSH含量随着染毒浓度的增加而逐渐降低,且在100 μg/ml 剂量组与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 纳米二氧化钛可以抑制睾丸支持细胞TM4的活性,诱导细胞凋亡,其毒性机制可能与细胞发生氧化应激有关。     

亚砷酸钠致SV-HUC-1细胞氧化应激作用的研究

目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1的氧化应激作用.方法 以不同浓度NaAsO_2(0、0.1、0.2、0.5、1、2、4、6、8、10、20 μmol/L)对SV-HUC-1细胞进行染毒,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活力,利用2',7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,分别应用DTNB比色法、硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 与空白对照组比较,全部染毒组细胞活力均下降(P<0.05);染毒24 h后,全部染毒组ROS水平均显著升高(P<0.05);2、4 μmol/LNaAsO_2组细胞GSH含量显著升高(P<0.05);全部染毒组细胞MDA含量均无变化(P>0.05);全部染毒组细胞SOD活力均显著降低(P<0.05).结论 氧化应激可能是NaAsO_2致SV-HUC-1细胞毒性作用的机制之一.     

PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用

目的：探讨大气中的PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用。方法：采用0,30,60,120和200 μg/mL 5个浓度的PM2.5对HTR8-SVneo细胞染毒24 h,以0 μg/mL浓度为对照组,其余浓度为不同剂量PM2.5染毒组,通过CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒测定细胞存活率;激光全息细胞分析及成像系统观察细胞3D形态及动态监测24 h内各组细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞生长周期;彗星试验检测细胞DNA损伤水平;活性氧簇（ROS）检测试剂盒测定细胞内ROS水平。结果：60,120和200 μg/mL浓度组细胞存活率及增殖能力低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;PM2.5可使HTR8-SVneo细胞的生长周期阻滞在G2/M期（P＜0.05或P＜0.01）;不同浓度PM2.5染毒组彗尾DNA百分比均高于对照组（P＜0.01）,且呈剂量依赖性。各浓度染毒组细胞中ROS的产生均高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。结论：PM2.5对 HTR8-SVneo细胞有一定毒性作用,造成DNA的损伤,阻碍细胞生长周期,这种毒性作用可能与氧自由基的产生增多有关。     

上海市吴淞地区大气PM2.5两种提取成分的细胞毒性研究

[目的]研究上海市吴淞地区大气细颗粒物（PM2.5）两种提取成分（有机和无机提取成分）的细胞毒性。[方法]采用滤膜法采集上海市吴淞地区大气中PM2.5，以中国仓鼠肺成纤维细胞（chinese hamsterfibroblast cell line，CHL）为靶细胞研究PM2.5，有机及无机提取成分对细胞活力、代谢的影响及氧化损伤毒性，具体包括细胞形态、活力和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、乳酸（LD）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平的测定。[结果]上海市吴淞地区大气PM2.5的有机和无机两种提取成分分别以10、50、100、200μg/ml浓度染毒CHL细胞10h，结果显示随着染毒剂量的增加细胞形态损伤加剧，细胞存活率、SOD含量呈下降趋势，LD和MDA则呈上升趋势，LDH则呈现先升后降趋势。与阴性对照组相比，200μg／ml染毒组的LD含量的升高同100、200μg/ml组的LDH和MDA含量的升高及SOD水平的下降均具有统计学显著性（P〈0．05）～除200μg/ml染毒组，有机提取成分要高于无机提取成分所染毒细胞的生长抑制率外，其他各染毒浓度组的氧化损伤及代谢指标水平在两种染毒成分之间尚不能认为有差别。[结论]上海市吴淞地区PM2.5，的有机及无机提取成分均具有一定的细胞毒性。     

柴油车尾气颗粒物提取物对V79细胞的毒性

目的 观察柴油车尾气颗粒物提取物(DEPE)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)增殖、细胞膜完整性及氧化损伤的毒性。方法 DEPE染毒不同浓度或时间后，通过检测V79细胞的细胞生存率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的变化规律及相互的关系，评价DEPE对细胞的一般毒性和氧化损伤作用。结果 在该实验条件下，DEPE可致细胞生存率降低，半数抑制浓度(IC50)约为6400μ/ml；细胞内LDH漏出率增加，GSH含量下降，并伴随着GSH—Px活力升高。结论 一定剂量下，DEPE可降低细胞生存率，损伤细胞膜，致细胞氧化损伤。     

氟致小鼠小胶质细胞的活化及氧化损伤的研究

目的观察氟诱导小胶质细胞(MG)活化及其所致氧化损伤情况,探讨氟致中枢神经损伤的机制。方法培养小鼠小胶质细胞(BV-2),按0、0.5、1、2、10、50、100mg/L的氟化钠浓度染毒,采用细胞免疫化学方法测定小胶质细胞标记物OX-42的阳性表达情况,了解BV-2细胞活化状态:同时检测BV-2细胞或培养液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、过氧化氢(H2O2)和活性氧(ROS)含量。结果 5mg/L以上浓度氟化钠处理细胞24h后能够引起小胶质细胞的活化,OX-42表达的阳性细胞增加。50mg/L以上NaF染毒组细胞活力在氟处理24、48h后,显著降低,20mg/L以上NaF染毒组细胞活力在氟处理72h后显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。细胞染毒24h后,50、100mg/LNaF处理组细胞SOD活力显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);50mg/LNaF处理组细胞内的MDA含量显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);1、10、100mg/LNaF染毒组细胞内NOS和10、50、100mg/LNaF染毒组细胞培养液中NOS含量也显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论一定剂量的氟可激活MG,释放活性氧自由基,可能在氟所致的中枢神经系统损伤中起一定的作用。     

单壁碳纳米管诱导人支气管上皮细胞的氧化损伤和凋亡

[目的]研究单壁碳纳米管（single-walled carbon nanotubes,SWCNTs）对人源支气管上皮细胞株（BEAS-2B）氧化应激和细胞凋亡的影响。[方法]采用生长状态良好的BEAS．2B,分别以含0、10、50、100、200μg／mLSWCNTs的培养液处理24、48h。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测SWCNTs对BEAS-2B细胞活力的影响;采用荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸（DCFH-DA）进行活性氧（ROS）检测;采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性;采用可见光法测定过氧化氢酶（CAT）活性;采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）的含量;采用二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;采用阳离子荧光染料罗丹明123测定线粒体膜电位;采用pNA法检测细胞内caspase-3的蛋白活性;Real-timePCR测定细胞内bax和bcl-2基因的表达变化。[结果]当处理浓度大于10p#mL时,SWCNTs可诱导BEAS-2B细胞存活率下降,细胞内ROS含量增加,线粒体膜电位减低,MDA升高,抗氧化酶系（SOD、CAT、GSH-Px）酶活性降低,caspase-3蛋白活性增加,bax在转录水平上表达量增加,bcl-2表达量降低,各实验结果均呈效应随浓度变化的趋势（P〈0．05）。[结论]SWCNTs能够诱导BEAS-2B细胞的氧化损伤和细胞凋亡。     

二甲基甲酰胺致心肌细胞氧化损伤的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)对小鼠心肌细胞(H9c2)的氧化损伤作用及维生素C(vitamin C,VitC)的保护效应.方法 使用不同剂量梯度DMF作用心肌细胞24 h、48 h、72 h,同时分别用含有DMF(100 mM)和0.025 mM、0.050 mM、0.100 mM、0.250 mM的VitC培养液培养心肌细胞24 h、48 h、72 h,采用试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量以观察细胞氧化应激状态和VitC的保护效应.结果 不同浓度的DMF分别作用于心肌细胞24h、48 h和72 h后使SOD和GSH含量降低,MDA含量升高,产生了明显脂质过氧化并呈现一定的剂量-时间效应关系.保护组VitC在低浓度(0.025 mM、0.050 mM、0.100 mM)时对DMF对心肌细胞的氧化损伤具有保护作用,使SOD和GSH含量升高,MDA降低.保护组VitC在高浓度(0.250 mM)时反而加重DMF对心肌细胞的氧化损伤.结论 二甲基甲酰胺(DMF)对小鼠心肌细胞细胞(H9c2)产生了明显的氧化损伤,从而证实DMF所致的氧化应激是其引起细胞毒性的重要机制.小剂量VitC对DMF致心肌细胞的氧化损伤具有明显的保护作用.     

７ 羟胆固醇对神经细胞氧化损伤作用的研究

摘要：目的　探讨２７ 羟胆固醇（２７ ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ,２７ ＯＨＣ）对神经细胞的氧化损伤作用。方法　以
神经细胞（ＳＨ ＳＹ５Ｙ 细胞系）为研究对象,共分４组：对照组、２７ ＯＨＣ５μｍｏｌ／Ｌ 组、２７ ＯＨＣ１０μｍｏｌ／
Ｌ 组、２７ ＯＨＣ２０μｍｏｌ／Ｌ 组。用化学荧光法检测神经细胞活性氧（ＲＯＳ） 水平;用ＷＳＴ １法检测神经细
胞中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力;用微量酶标法检测还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）水平;用ＥＬＩＳＡ 法检测８
羟基脱氧鸟苷（８ ＯＨｄＧ） 水平。实验结果采用ＳＰＳＳ１８．０ 进行数据录入和单因素方差分析（ＡＮＯＶＡ）。
结果　随着２７ ＯＨＣ 浓度升高,各组细胞ＲＯＳ水平逐渐升高,２０μｍｏｌ／Ｌ 组（４０８５．３３±１０５９．２３） 较对
照组（２５３８．６７±２０８．６９）和５μｍｏｌ／Ｌ 组（２５９７．００±３０１．０４） 差异均有统计学意义（犘＜０．０５）; 各组
ＳＯＤ 活力（１１．８６±０．４３,１０．６７±０．０３,１０．１５±０．１４ Ｕ／ｍｇ蛋白） 较对照组（１４．９４±０．３５ Ｕ／ｍｇ蛋白）
逐渐降低,差异均有统计学意义（犘＜０．０５）,１０μｍｏｌ／Ｌ 组和２０μｍｏｌ／Ｌ 组较５μｍｏｌ／Ｌ 组差异有统计学意
义（犘＜０．０５）;各组ＧＳＨ 水平较对照组（２２７５．２５±１２３．０１μｍｏｌ／ｇ 蛋白） 逐渐降低（犘＜０．０５）,１０
μｍｏｌ／Ｌ 组（１８６４．２３±１４５．８９μｍｏｌ／ｇ蛋白）、２０μｍｏｌ／Ｌ 组（１７５６．４４±１８１．８２μｍｏｌ／ｇ蛋白）较对照组和
５μｍｏｌ／Ｌ 组（２１５８．５９±２４１．３３μｍｏｌ／ｇ 蛋白） 差异均有统计学意义（犘＜０．０５）; 各组８ ＯＨｄＧ 浓度
（２．８９±０．３２,４．０２±０．１１,４．１６±０．０９μｇ／Ｌ）较对照组（２．３０±０．１４μｇ／Ｌ）均显著升高（犘＜０．０５）,１０
μｍｏｌ／Ｌ 组和２０μｍｏｌ／Ｌ 组较５μｍｏｌ／Ｌ 组差异有统计学意义（犘＜０．０５）。结论　２７ 羟胆固醇对神经细胞具
有氧化损伤作用,体现在增加神经细胞ＲＯＳ、８ ＯＨｄＧ 水平,降低神经细胞ＳＯＤ 活力和ＧＳＨ 水平。
关键词：２７ 羟胆固醇;神经细胞;氧化损伤
中图分类号：Ｒ１５１．２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０６ ０５７６ ０６     

富勒烯对中国仓鼠肺成纤维细胞的氧化损伤作用

目的探讨富勒烯（C60）对中国仓鼠肺成纤维（CHL）细胞的氧化损伤作用。方法用不同浓度的C60（0、1．25、2．5、5、10、20和40μg／mL）染毒24h,四甲基偶氮唑盐实验检测C60对CHL细胞的增殖抑制作用,并检测细胞内LDH释放率及SOD、CAT活性和GSH、MDA、ROS含量。结果C60染毒组细胞生存率下降,10、20、40μg／mLC60染毒组细胞存活率与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。CHL细胞中LDH释放量上升,且各染毒组与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．01）。各染毒组随染毒浓度增加SOD、CAT活性降低,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．01）。GSH含量降低,但仅C6040μg／mL染毒组,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。MDA含量增加,10、20、40μg／mL剂量组,与对照组比较差异均具有统计学意义（P〈0．01）。ROS含量有不同程度的升高,与对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论C60可引起中国仓鼠肺成纤维细胞损伤,可能是通过氧化应激介导。     

三氯乙烯对大鼠肝细胞DNA损伤和氧化应激的影响

目的研究三氯乙烯对大鼠肝细胞DNA损伤和肝组织氧化应激的作用。方法选用雄性SD大鼠,每组5只,用1500和3000mg／kg的三氯乙烯经口灌胃染毒,48h处死动物。用单细胞凝胶电泳（彗星实验）检测肝细胞DNA损伤,并检测肝组织中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。结果三氯乙烯在1500和3000ms／ks剂量条件下,肝细胞DNA的Olive尾矩增加,DNA损伤细胞率分别为41．96％和54．13％,也明显高于对照组的9．30％（P〈0．01）;大鼠肝组织中的ROS、MDA均较对照组显著增高（P〈0．01）,同时GSH又较对照组明显下降（P〈0．01）。结论三氯乙烯在1500和3000mg／kg剂量条件下染毒大鼠后,造成肝组织明显的氧化应激并引起肝细胞DNA损伤。     

单壁碳纳米管对血管外膜成纤维细胞的毒性作用

目的 探讨不同剂量单壁碳纳米管(SWCNTs)对原代培养大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)的毒性作用,为SWCNTs的毒理学及生物安全性研究提供参考.方法 将SWCNTs制成颗粒悬液,设9个剂量组(0.80、1.60、3.20、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00μg/ml)对原代培养...     

盐酸吡格列酮对高糖培养的肾小球MCs氧化应激的影响

目的观察盐酸吡格列酮对高糖培养的肾小球系膜细胞（mesangialcells,MCs）氧化应激的影响,探讨其。肾脏保护机制。方法体外培养MCs随机分组为正常糖（normalglucosegroup,NG）组、高糖（highglucosegroup,HG）组及高糖＋不同浓度吡格列酮（P1、P2、P3）组。培养48h后,收集各组细胞及上清液。以2’,7’-二氯双氢荧光素二乙酸酯（2’,7’dichlorofluorescindiacetate,DCFH—DA）为荧光探针,采用流式细胞仪法检测MCs内活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）水平。采用比色法检测MCs上清液中的脂质过氧化物丙二醛（rnalondialdehyde,MDA）含量和超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,sot））活性。结果与NG组比较,高糖刺激后MCs内ROS水平明显增加,上清液中MDA含量显著增高、SOD活性下降,差异有统计学意义（P〈0．001）;吡格列酮干预后可明显抑制高糖刺激下的MCs上述变化,且呈浓度依赖性。结论盐酸吡格列酮可抑制高糖诱导的大鼠MCs氧化应激,且呈浓度依赖性,该作用可能部分与其肾脏保护有关。