HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测方法的建立及应用

目的建立HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测的酶免疫检测方法,用于HIV感染的实验室诊断,缩短HIV感染的检测窗口期。方法制备抗HIVP24单克隆抗体和多克隆抗体,联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,建立联合检测HIV1/2抗体和P24抗原的ELISA方法,并对其特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0.2ng/ml;检测187份HIV阳性血清、210份其他疾病患者血清和520份正常人血清,其敏感性和特异度分别为100%和99.62%。同时重复12次检测4份HIV阳性血清,变异系数均小于10%。结论本方法可以在1.5h内一步同时检出特异性HIV-1/2抗体和HIVP24抗原,缩短了HIV感染的检测窗口期,具备快速、简便、特异、敏感等优点,适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。     

2472例HIV抗体筛查(ELISA)与免疫印迹试验的对比研究

目的 对比分析HIV抗体筛查(ELIA)与免疫印迹试验结果,探讨两种方法检测HIV抗体的差异性.方法 参照2004年<全国艾滋病检测技术规范>的要求,对HIV抗体初筛检测呈阳性反应的标本采用免疫印迹试验进行确证.结果 2472例HIV抗体复核标本中,两种ELISA都呈阳性反应的为2467例,与WB的阳性符合率为97.97%;ELISA1呈阳性反应且ELISA2呈阴性反应的为5例,与WB的阳性符合率为0%;S/CO值落在了1～5.9之间,阳性符合率为43.48%;S/CO值在6～9.9之间,确证试验阳性符合率为95.56%;S/CO值≥10,确证试验阳性符合率为99.64%;所有的确证标本中,gp160、gp120、sp41、p24的出现都在95%以上,同时也出现了36例gp36的标本.结论 ELISA诊断试剂存在有一定的假阳性,随着S/CO值的增高,与确证试验的阳性符合率也将升高,但是高S/CO值的样品并不代表感染HIV,HIV抗体阳性的报告建议以确证试验的结果为准;WB确证方法在不确定标本中存在一定的缺陷.     

HIV—1／2抗体及HBsAg快速检测一步法的研究

多年来，秦皇岛生物技术开发研究所及秦皇岛卫生检疫局一直在探索和研究能够快速、准确检测人体血液艾滋病毒抗体、HBsAg的新方法。目前这项研究工作已经有了进展，经过与美国ABI公司合作，引进该公司的技术，研制和开发了快速一步法HIV-l／2抗体及HBsAg血清检测试剂盒。这两种试剂盒应用了先进的纸上免疫层析和抗原-抗体-抗原夹心技术，具有ELISA方法同等的敏感性和快速、准确、简单的特点。克服了ELISA方法操作繁杂、时间较长的缺点。     

144例HIV抗体筛查阳性与免疫印迹试验结果对比研究

目的对比分析(ELISA方法检测)H IV抗体试验阳性与免疫印迹试验(WB)结果,探求H IV抗体筛查阳性与确证实验结果的关系。方法对144份ELISA方法检测阳性样本的结果与WB法确证结果进行比较,分析ELISA检测S/CO值变化与WB结果的关系。结果 144例H IV抗体筛查阳性标本经免疫印迹确证试验,阳性的有86例,均为H IV-1抗体阳性,阴性34例,结果不确定的24例。ELISA与WB的阳性符合率为59.7%。确认为阳性标本的S/CO平均值为15.7;不确定的标本S/CO值平均为3.04;阴性的标本S/CO值平均为1.24。在阳性标本中,p55条带出现的频率最低为48.8%,其它均达到85%以上,其中gp160、gp120达到100%;不确定标本中,p24条带出现的几率最高,达75%,其它都在20%以下。结论筛查试验存在假阳性结果,H IV抗体结果的报告必须以确认结果为准。高S/CO值预示H IV抗体阳性的可能性较大,而S/CO值较低时H IV抗体阴性及不确定的可能性较大。WB确认方法在不确定标本检测中存在一定的缺陷。     

福建发现首例HIV—2感染者

目的：我国目前尚未发现ＨＩＶ－２病毒感染者,首例ＨＩＶ－２病毒感染者的检出对于ＨＩＶ－２病原学的研究、血清学确认实践、及艾滋病的预防控制具有重要意义。方法：被检血清标本用ＦＡＧＴ（ＧＢＣ,ＨＩＶ－１＋２）、ＥＩＡ（Ｖｉｒｏｎｏｓｔｉｃａ,ＨＩＶ－１＋２）和ＰＡ（Ｓｅｒｏｄｉａ,ＨＩＶ－１）３种不同原理的检测方法进行ＨＩＶ抗体初筛检测,可疑阳性血清经免疫印迹试验（ＷＢ）确认,通过分析蛋白反应条带确定ＨＩＶ抗体的性质。进行艾滋病流行病学调查,分析被检人员感染ＨＩＶ的地点、途径及可能扩散传播的范围。结果：ＦＡＧＴ和ＥＬＩＳＡＨＩＶ抗体初筛检测试验发现１个回国人员ＨＩＶ抗体阳性,用ＨＩＶ－１＋２和ＨＩＶ－２特异性的抗体ＷＢ试验证实为ＨＩＶ－２病毒感染。这是福建也是我国首例确认报告的ＨＩＶ－２抗体阳性者。     

孕产妇HIV抗体筛查阳性与免疫印迹试验对比

目的探讨孕产妇人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体筛查试验阳性与免疫印迹试验（WB）结果的关系。方法对33份孕产妇HIV抗体待复查样本,进行酶联免疫吸附试验（ELISA）及免疫印迹试验（WB）,对WB试验结果不确定者进行3个月、6个月随访检测,6个月随访样本补充HIV-1病毒载量检测,分析ELISA检测与WB试验检测结果。结果 33份样本ELISA复检均呈阳性,免疫印迹试验（WB）中20份确认为HIV-1抗体阳性,ELISA检测与WB试验阳性符合率为60.61%（20/33）;S/CO值〉8的20份样本,WB试验结果均为HIV-1抗体阳性,1〈S/CO值〈8的13份样本,WB试验5份为HIV抗体阴性,8份为HIV抗体不确定;6个月随访样本HIV-1病毒载量检测,结果均小于最低检测限（50 IU/ml）。结论孕产妇HIV抗体筛查（ELISA）假阳性较高,假阳性样本存在于WB试验抗体阴性和不确定结果之中;随着ELISA试验S/CO值增高,ELISA检测与WB试验的阳性符合率随之增高。     

HIV抗体不确定样品的随访结果

目的了解HIV抗体检测产生不确定结果的特点及随访情况。方法对绍兴市2007—2013年HIV抗体确证检测为不确定结果样品的来源、复检结果及蛋白印迹试验(WB)带型特点进行分析并跟踪随访。结果 955份复检阳性标本经WB试验报告结果为不确定29份,占3.03%。对29份标本的人作追踪随访,完成随访16人,复检ELISA和RT结果均为阳性的8人随访后均转为阳性;复检单项阳性的8人随访后均转为阴性。29份不确定结果中共检测到6种带型,gp160(+)、p24(+)和gp160(+)p24(+)3种带型最为常见,占89.65%。结论复检结果双阳性的样品阳转率较高,应加强随访并寻求替代确认策略,以减少非特异性反应导致假阳性结果。     

宫颈及阴道炎患者HIV抗原抗体检测及其临床意义

目的:了解宫颈炎、阴道炎患者HIV感染状况及其相互关系,为其防治提供可靠的依据。方法:通过对8798例患者检查阴道、宫颈情况,取阴道/宫颈分泌物及抽取静脉血,分别进行HIV抗原抗体等相关性传播病原体实验室检查。结果:生殖道性传播病原体总感染率为84.7%(7449/8798),17例患者感染HIV,占总感染率的0.2%(17/7449),44.0%(3874/8798)的人有两种或两种以上病原体,其中通过性传播途径感染HIV者17例,梅毒+HIV感染2例,淋病+HIV感染3例,念珠菌+HIV感染3例,细菌性阴道病+HIV感染9例。结论:宫颈及阴道炎患者有HIV感染状况和危险因素,应加强治疗和HIV筛查。     

唾液法与血液法检测HIV—1／2抗体的比较

唾液法与血液法检测ＨＩＶ—１／２抗体的比较李俊成曾镇光祖述宏张文波岳伟①唐小萍王文②中华人民共和国秦皇岛卫生检疫局（秦皇岛０６６００２）利用人类口腔中的唾液进行ＨＩＶ抗体的检测，是否与应用血清检测具有相同的敏感度、特异性，带着疑问，１９９４年４月，我...     

氯乙烯对大鼠肝细胞P21WAF1/CIP1和P53蛋白表达影响

目的 研究氯乙烯(VCM)对大鼠肝细胞P21WAF1/CIP1和P53蛋白表达的影响.方法 64只无特定病原体级SD大鼠(雌雄各半)随机分为低、中、高3个剂量组和1个对照组,采用腹腔注射染毒,低、中、高剂量组分别以5、25、125mg/kg剂量VCM气体腹腔注射染毒,对照组注射同中剂量组相同体积的清洁空气.每周3次,持续12周.染毒6、12周时每组分别随机处死8只大鼠(雌雄各半),光镜下观察染毒大鼠肝组织病理改变,免疫印迹法检测肝细胞中P21WAF1/CIP1和P53蛋白的表达.结果 VCM染毒6周时,各剂量组大鼠肝细胞P21WAF1/CIP1蛋白表达量均较对照组降低,高剂量组P53蛋白表达量较对照组增加,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.001).VCM染毒12周时,高剂量组大鼠肝细胞P21 WAF1/CIP1蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).各剂量组染毒12周和6周比较,P21WAF1/CIP1蛋白表达量均增高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.001).组织病理学检查发现VCM染毒12周时,肝细胞有气球样变,汇管区变大,纤维化等改变.结论 VCM可导致大鼠肝细胞P21WAF1/CIP1和P53蛋白表达改变.     

2005～2008年安庆市HIV抗体初筛结果分析

目的分析安庆市艾滋病实验室2005～2008年HIV抗体初筛结果,为安庆市艾滋病防治提供依据。方法按照《全国艾滋病检测技术规范》要求,对待检血清进行HIV抗体ELISA筛查、复检,Western Blot（WB）试验确认。结果2005～2008年共检测HIV抗体样本20 605份,其中初筛阳性105份,确认阳性43份。检测11个人群,9个人群检出阳性,其中以临床可疑构成比最高,其次是在押人员、自愿咨询检测、阳性配偶及子女和同性恋者。感染者多为20～40岁的青壮年,多数为外出农民工。结论艾滋病实验室对各种人群的筛查确定感染依赖于WB确认试验,建议进一步加大筛查力度尤其是加强对农村外出打工流动人口的检测和管理,以提高对感染者的发现率。     

血清半乳甘露聚糖试验在血液病合并侵袭性曲霉菌感染诊疗中的意义

目的 探讨酶联免疫法测定血清半乳甘露聚糖抗原(GM)在血液病合并侵袭性曲霉菌感染中的应用价值.方法 收集武汉同济医院血液科222例住院患者的355份血清GM试验结果及相关临床资料,并进行回顾性分析.结果 以I＞0.5为阳性界值GM试验的敏感性为(75.00±15.30)％,特异性为(95.6±1.53)％;222例患者中,确诊侵袭性真菌感染(IFI)4例,拟诊20例,排除诊断181例,结合GM试验结果使临床诊断组由4例提高至17例;以GM试验阳性结合胸部影像学渗出表现为起点的抢先性抗真菌治疗的有效率为81.25％;抢先治疗后早期即出现血清GM值的明显下降.结论 GM试验在IFI分层诊断中可帮助提高诊断级别;结合影像学资料,以较低的GM试验界值(1＞0.5)作为治疗起点可获得较高的抢先治疗有效率;观察血清GM值的动态变化对侵袭性曲霉菌病的疗效评价与监测复发有重要意义.     

HIV-1核心抗原p24基因的表达、纯化及抗原性分析

目的在原核系统中表达全长HIV-1 p24抗原,并对其抗原性进行鉴定。方法利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(BH-10)中扩增p24抗原基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达p24抗原。运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用W estern B lot(WB)及ELISA法对表达产物的抗原性进行检测。结果PCR产物和构建的重组质粒pET22b-p24经双酶切插入的外源基因片段均为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE电泳,可见1条相对分子量约26×103的外源表达蛋白带,与预期大小一致,未见杂蛋白带。WB结果显示重组蛋白与HIV-1阳性血清呈特异性反应,与健康人血清没有反应。ELISA检测p24抗原灵敏度为93.94%(62/66),特异性为93.33%(28/30)。结论构建了HIV-1 p24表达载体pET22b-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性,为研制HIV抗体确认试剂奠定了良好的基础。     

免疫层析法与酶联免疫吸附法检测血中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV的比较

〔目的〕分析比较乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、HIV抗体(抗-HIV)的免疫层析快速试剂在实际应用中的灵敏度、特异度和准确度,为今后的工作提供参考。〔方法〕对502份健康体检血清标本同时用快速免疫层析法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV,对其灵敏度和特异度进行比较。〔结果〕与ELISA相比,502份血清标本中HBsAg金标法有2份假阴性,5份假阳性,灵敏度为99.6%,特异度为99.0%,准确度为98.6%;抗-HCV金标法无假阴性,有9份假阳性,灵敏度为100%,特异度为98.2%,准确度为98.2%;抗-HIV硒标法有2份假阳性,灵敏度为100%,特异度为99.6%,准确度为99.6%。〔结论〕金标法检测HBsAg灵敏度和特异度稍低于ELISA,有漏检和误检现象,而抗-HCV、抗-HIV快速法与ELISA比较灵敏度相当,而特异度稍低,因此,都要结合ELISA结果才可出具最终检测报告,抗-HIV的检测任何一种方法出现阳性时都要进行确认试验。     

IFA、ELISA和WB用于莱姆病血清学诊断的比较研究

目的比较研究间接免疫荧光试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和蛋白免疫印迹试验（WB）3种检测方法对莱姆病血清学的诊断效果。方法收集临床疑似莱姆病患者血清标本及其流行病学和临床资料,分别采用IFA、ELISA和WB进行血清抗伯氏疏螺旋体抗体（IgM和IgG）检测,结合流行病学和临床资料进行综合分析。结果实验共检测莱姆病疑似患者血清398份,ELISA阳性86例,阳性率21.61%,其中IgM阳性27例,IgG阳性59例;IFA阳性82例,阳性率20.60%,其中IgM阳性26例,IgG阳性56例;WB阳性83例,阳性率20.85%,其中IgM阳性31例,IgG阳性52例;并且实验表明,在对于游走性红斑病例的诊断上,WB法阳性率明显高于ELISA和IFA（χ2=6.34,P〈0.05）。结论在莱姆病的实验室诊断中,IFA、ELISA和WB3种方法结合运用,可提高诊断的灵敏性和特异性;WB在排除ELISA和IFA的假阳性结果中有着重要作用。     

抗华支睾吸虫CAg噬菌体抗体表达与活性鉴定

目的对从抗华支睾吸虫噬菌体抗体库中筛选到的阳性克隆进行诱导表达和鉴定。方法对阳性克隆株1305、C10和E38用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹试验(Western blot)观察有无Fab抗体条带。然后，用卫氏并殖吸虫(Pw)、肝片吸虫(Fh)、姜片吸虫(Fb)、华支睾吸虫(G)、日本血吸虫(Sj)脱脂全虫粗抗原和华支睾吸虫代谢抗原(C5-Mhg)进行SDS-PAGE，并分别和B05、C10和E38噬菌体抗体进行Western blot，鉴定抗体活性。结果Western blot结果表明，3株阳性克隆的培养上清和细菌冻融上清在约50kD和27kD处均有特异抗体条带出现。B05噬菌体抗体与C5-MAg和C5-Ag在约25kD处出现特异性反应条带，而与其它4种吸虫抗原无反应条带的出现。C10除与C5-MAg和华支睾吸虫全虫抗原(C5-Ag)在约38kD处出现反应条带外，还与Sj-Ag在该处有弱阳性反应；而与其它3种吸虫抗原无反应条带出现。E38与C5-MAg和C5-Ag在约16kD处出现特异性反应条带，而与其它4种吸虫抗原无反应条带出现。结论3株阳性克隆均可表达抗华支睾吸虫循环抗原(CAg)噬菌体抗体，其中B05和E38具有特异结合C5-CAg活性。     

P16、P53在子宫内膜癌中的表达及意义

目的观察P16、P53蛋白的表达在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法运用免疫组化SP法检测P16、P53蛋白在60例子宫内膜癌、20例正常子宫内膜、20例内膜简单性增生过长、20例内膜复杂性增生过长、20例内膜非典型增生中的表达情况。结果P16、P53蛋白在正常内膜、简单性增生过长、复杂性增生过长的阳性表达率为70%(0%)、65%(30%)、60%(55%),与子宫内膜癌43.3%(83.3%)相比,差异有统计学意义。且P16、P53蛋白的表达在子宫内膜癌中与临床分期、组织学分级及肌层浸润有关,差异有统计学意义。结论联合检测P16、P53蛋白的表达对判断子宫内膜癌的恶性程度和预后有一定的临床参考价值。     

HIF-1α在人舌鳞癌组织中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在舌鳞癌组织、癌旁正常舌组织中表达状况及与舌癌进展之间的关系。方法采用半定量免疫印迹法(Western blot)检测40例舌鳞癌组织和癌旁正常舌组织中HIF-1α的表达。结果HIF-1α在舌癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织中的表达水平(P<0.05)。HIF-1α表达与舌癌的临床TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、组织学类型无关(P>0.05)。结论HIF-1α在舌癌的进展中具有重要作用,与疾病发展进程密切相关。     

胶体金免疫层析法检测弓形虫循环抗原的研究

目的：建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法（GICA）用于检测血清中弓形虫循环抗原（CAg）。方法：用胶体金颗粒标记弓形虫单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中的弓形虫循环抗原与测试条上的金标记单克隆抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果：用GICA与ELISA比较检测105份小鼠血清中循环抗原，两法符合率为95％（P〉0．05）。结论：GICA检测血清中的弓形虫循环抗原特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。