镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞毒性作用的实验研究

目的 观察镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞(CHL）的毒性作用。方法 以我国某镍冶炼厂电炉烟道尘为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测CHL细胞活性。结果 不同浓度下的镍冶炼烟尘(6．25、12．50、25．00、50．00、100．00μg／ml)作用一定时间后,CHL细胞存活率下降,呈现出时间．剂量．反应关系。接触受试物36h,细胞生长半数抑制浓度IG50为21．36μg／ml。同时镜下观察细胞形态也发生改变。结论 镍冶炼烟尘可以抑制CHL细胞生长,降低线粒体代谢活性。     

镍冶炼烟尘对大鼠肺细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响

目的探讨镍冶炼烟尘对大鼠肺组织细胞凋亡相关蛋白p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达水平的影响。方法健康Wistar雄性大鼠40只,随机分为5组:对照组及镍冶炼烟尘0.50、1.00、2.00、4.00 mg/kg组,第1天及第16天非暴露式气管内滴注受试尘,30 d处死。Hoechst33258法观察肺内细胞形态学改变;分光光度法测定肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的含量;免疫印迹(Western blot)法检测肺细胞p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,各染毒组大鼠肺组织细胞凋亡率均增高,差异有统计学意义(P0.05);4.00 mg/kg染毒组细胞出现胞核固缩碎裂等凋亡早期形态学特征;各染毒组大鼠肺组织中SOD、GSH-Px活力较对照组显著降低,MDA含量显著升高,差异有统计学意义(P0.05);染毒组大鼠肺组织Bax蛋白表达均高于对照组(P0.05),肺组织p-JNK、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平显著高于对照组(P0.05)。结论镍冶炼烟尘引起大鼠肺组织氧化损伤,同时促进p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达,最终产生凋亡。     

镍冶炼烟尘致NIH3T3细胞形态转化作用的实验研究

目的　研究镍冶炼工人接触烟尘的生物学效应。方法　以来自我国两家镍冶炼厂的镍冶炼烟尘为受试物 ,处理小鼠NIH3T3细胞 ,观察细胞吞噬活性、毒性和转化活性 ,预测镍冶炼烟尘的致癌危险性。结果　 (1)两种镍冶炼烟尘均可被NIH3T3细胞吞噬 ,两样品在 10 0 .0 0 0 μg/ml剂量的吞噬率分别为6 9 .0 %、39.0 % ,2 0 0 .0 0 0 μg/ml剂量的吞噬率分别为 78.0 %、4 7.0 % ,差异均有显著性 (P <0 .0 1)。剂量为12 .5 0 0～ 10 0 .0 0 0 μg/ml时 ,两样品的相对克隆形成率分别为 71.1%～ 3.9%和 84 .4 %～9.1%。两种镍冶炼烟尘以克隆形成率表示的细胞毒性与Ni2 O3 接近 ,高于TiO2 ,而低于阳性对照物N 甲基 N’ 硝基 N 亚硝基胍 (MNNG)。 (2 )MNNG、Ni2 O3 和两份镍冶炼烟尘均可诱发NIH3T3细胞发生形态转化 ,两种镍冶炼烟尘在 12 .5 0 0～ 5 0 .0 0 0 μg/ml范围内的转化率分别为 1.9%～ 3.6 %和 0 .9%～ 2 .5 %。 (3)MNNG和镍冶炼烟尘处理的NIH3T3细胞均可与刀豆素A(ConA)发生凝集反应 ,并能在软琼脂培养基中形成集落 ,验证了转化克隆的可靠性。结论　镍冶炼烟尘具有细胞转化活性 ,为镍冶炼烟尘的致癌危险性以及镍冶炼工肺癌的病因学研究提供了新的实验室证据。     

镍冶炼烟尘对豚鼠肺泡巨噬细胞的毒性及吞噬活性试验

本文用豚鼠肺泡巨噬细胞测试系统,比较了三种镍冶炼烟尘及三氧化二镍的细胞毒性和吞噬活性。用细胞半数致死浓度和吞噬率作为观察指标.结果表明,在受试样品中以镍精炼烟尘(取自火法处理硫化镍锍的镍精炼厂)的细胞毒性和吞噬活性为最强。     

镍冶炼烟尘致CHL细胞DNA损伤的彗星试验

目的利用单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)观察不同染毒浓度镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺成纤维(Chinese Hamster Lung Fibroblast,CHL)细胞DNA的损伤及其程度,以研究其致癌机制。方法采用镍冶炼烟尘对CHL细胞进行染毒,设阴性对照组和阳性对照组,采用单细胞凝胶电泳技术,镜下观察不同染毒时间和不同染毒浓度对DNA的作用,并分析相应指标。结果通过对受损细胞拖尾比率、延伸的尾动差、尾DNA百分含量及尾长4个指标反映细胞DNA受损程度和受损特征指标的分析显示,镍冶炼烟尘对CHL细胞可造成DNA的损伤,各浓度染毒组与阴性对照组比较,差异均有非常显著性(P<0.01)。高浓度染毒组的作用明显强于低浓度染毒组,高浓度染毒组4 h细胞拖尾率为70.6,拖尾细胞延伸的尾动差为4.18±1.92,与低浓度染毒组比较,差异有显著性(P<0.05)。各浓度染毒组细胞染毒4 h时损伤最严重。结论利用彗星试验可以检测出不同染毒浓度镍冶炼烟尘对CLH细胞DNA所造成的损伤,损伤有剂量-反应关系,损伤程度和特征随作用时间不同而变化。     

镍冶炼烟尘处理的NIH3T3细胞对刀豆素A的凝集反应

为了检测镍冶炼烟尘处理的NIH3T3细胞的某些生物学特征,采用刀豆素A凝集试验,分别用两份镍冶炼烟尘与小鼠HIH3T3细胞接触24小时,培养21天后观察与ConA的凝集反应。以N－甲基－N＇－硝基－N－亚硝基胍为阳性对照,二氧化钛为阴性对照。结果表明,用镍冶炼烟尘和MNNG处理的细胞与Con A发生了凝集,呈剂量－依赖关系。用TiO2处理的细胞凝集反应为阴性。镍冶炼烟尘处理的细胞与Con A发生凝集意味着该细胞的生物学特征发生了改变。这一变化提示两份受检样品可能存在致癌活性,应做进一步毒理学检测和评价。     

镍精炼烟尘对Beas-2B细胞Warburg效应影响的实验研究

将镍精炼烟尘配制成终浓度分别为0.00、25.00、50.00、100.00μg/ml的混悬液，处理人支气管上皮（Beas-2B）细胞24 h。通过CCK-8法检测镍精炼烟尘的细胞毒性；使用免疫印迹法（Western blot）检测Warburg效应相关蛋白HK2、PKM2和LDHA的蛋白表达水平。结果显示，不同浓度染毒组Beas-2B细胞的相对存活率分别为70.20%、54.01%、34.28%，随着镍精炼烟尘浓度增高而降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，各染毒组Warburg效应相关蛋HK2、PKM2和LDHA表达水平均增高，且随染毒浓度的增加而增加，差异有统计学意义（P<0.05）。提示镍精炼烟尘可以诱导Beas-2B细胞的Warburg效应增强，改变细胞的能量代谢方式，最终可能诱发癌症。     

丙烯腈对中国仓鼠肺细胞细胞活力和间隙连接通讯功能的影响

目的：探讨丙烯腈（ACN）对中国仓鼠肺细胞（CHL）细胞活力及细胞间隙连接通讯（GJIC）功能的影响。方法：镜下观察细胞形态学改变,采用MTT法测定细胞生长半数抑制浓度（IC50）,应用荧光染料示踪技术观测ACN对CHL细胞GJIC的影响。结果ACN染毒12和24h,细胞生长IC50分别为435．73和251．09μg/ml。低剂量组（12．5和25．0μg/ml）细胞形态与对照组相比无明显改变,较高剂量组（50．0－200．0μg/ml）细胞轻度受损（0－Ⅰ级）,高剂量组（800．0μg/ml）细胞明显受损（Ⅲ级）。ACN原形在无明显细胞毒辣性剂量（10．0－50．0μg/ml）时即可抑制GJIC,并呈持续抑制作用,存在剂量－效应和时间－0效应关系。ACN经代谢活化后,可加重对细胞GJIC的抑制作用和细胞受损程度,但在染毒12h后停止接触,该作用在一定程度上可逆转,牛磺酸作为一种重要的抗氧化剂,预处理细胞（牛磺酸剂为10和20mmol/L)可明显抑制ACN对细胞GJIC的下调作用。结论ACN在较高剂时对CHL人有毒性作用,但在无明显细胞损伤剂量时即明显抑制细胞GJIC功能,该抑作用停止接触ACN或有抗氧化剂存在可逆转,提示氧化应激在ACN所致细胞GJIC功能下调中具有重要作用。     

碳化硅冶炼烟尘对NIH/3T3细胞的影响

以小鼠肺成纤维细胞(NIH/3T3)为靶细胞,以某碳化硅冶炼车间沉降尘为受试物,采用中性红染料滞留(neutral red dye retention)实验和噻唑蓝(MTT)实验检测碳化硅冶炼烟尘对NIH/3T3细胞活性与增殖的影响。碳化硅冶炼烟尘未使细胞生长受到抑制,随染毒浓度的增加,作用时间的延长,细胞相对存活率逐渐升高,呈剂量-反应和时间-反应关系。中性红实验作用48 h,800μg/ml浓度组的细胞相对存活率达到最大值164.23%。MTT实验作用48 h,12.50μg/ml浓度组的细胞相对增殖率达到最大值155.48%;MTT实验1 600.00μg/ml浓度组的吸光度值与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。提示碳化硅冶炼烟尘对NIH/3T3细胞的毒性较弱,对NIH/3T3细胞的增殖有影响。 更多还原     

镍冶炼烟尘致NIH/3T3细胞DNA损伤的实验研究

目的 研究镍冶炼烟尘致DNA损伤作用.方法 采用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术,检测2份镍冶炼烟尘对小鼠NIH/3T3细胞的DNA损伤.结果 相同染毒时间内,随着染毒剂量（除样品2中50.0μg/ml剂量染毒24 h组）加大,细胞拖尾率增高,DNA断裂程度在4 h达到高峰,分别为35.5%、69.7%、85.2%、41.3%、75.7%、89.2%.各受试物在相同剂量下,染毒4 h时均较染毒2 h和染毒24 h细胞拖尾率高.NIH/3T3细胞受到镍冶炼烟尘的受试物作用后,在染毒2 h,样品1、样品2各剂量组的细胞彗星尾DNA含量、尾长（除12.5 μg/ml剂量组外）、尾动差（除样品1的12.5μg/ml剂量组外）均明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.在染毒4 h,两样品对细胞DNA的损伤达到高峰,各剂量组的3个指标与对照组的差异有统计学意义（P＜0.05）.染毒时间延长至24 h,上述3个指标改变程度均较染毒4 h减弱,样品1的彗尾长与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 镍冶炼烟尘可不同程度致NIH/3T3细胞DNA损伤.     

镉对中国仓鼠成纤维细胞活力和缝隙连接通讯功能的影响

目的　探讨致癌物镉对中国仓鼠肺成纤维细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒａｂｌａｓｔｓ,ＣＨＬＦ） 缝隙连接通讯（ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍ ｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ,ＧＪＩＣ） 功能的影响。方法　细胞毒性实验采用常规的噻唑蓝（ ＭＴＴ） 法,同时观察显微镜下细胞形态的变化。细胞ＧＪＩＣ 水平用划痕标记染料示踪（ＳＬＤＴ）技术测定。结果　ＣｄＣｌ２ 染毒２４ 小时和１２ 小时对ＣＨＬＦ 活力的半数抑制浓度ＩＣ５０ 分别为２０ ．８ μｍｏｌ／Ｌ和０ ．１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ。ＣｄＣｌ２ 在不产生明显细胞毒性的浓度下即可抑制ＣＨＬＦ 的ＧＪＩＣ 功能,该作用具有一定的剂量时间效应关系。细胞持续接触低浓度ＣｄＣｌ２ 一定时间后,受抑的ＧＪＩＣ 有恢复倾向,而在出现明显细胞毒性的情况下,ＧＪＩＣ 抑制是不可逆的。结论　ＧＪＩＣ 功能抑制可能在镉化合物致癌过程中起了一定的作用。     

无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。方法 采用细胞划痕染料标记示踪技术,以荧光染料在细胞间的扩散作为评价缝隙连接通讯的指标,观察亚砷酸和砷酸对原代培养的人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。结果 亚砷酸可显抑制人皮肤成纤维细胞间荧光黄染料的扩散,在0．005-5．0μmol／L浓度范围内有明显的剂量依赖关系。砷酸也可明显抑制荧光黄染料在人皮肤成纤维细胞间的扩散,但剂量依赖关系不明显。进一步的研究发现,亚砷酸可显增高人皮肤成纤维细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C的活性,其中对胞膜蛋白激酶C活性的作用更为明显。结论 无机砷可显抑制人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯,提示它们在癌症发生的促长阶段扮演重要角色。无机砷对细胞缝隙连接通讯的抑制可能与其引起细胞内蛋白激酶C的异常活化有关。     

甲基对硫磷对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯和孕酮分泌的影响

目的 探索甲基对硫磷(methyl parathion,MP)对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯(gapjunctional intercellularcommunication,GJIC)和孕酮分泌的影响.方法 体外培养5周龄SPF级BALB/c小鼠黄体细胞,分别设MP暴露组(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的MP处理3h)和GJIC促进剂——1 μmol/L异丙肾上腺素预处理组及蛋白激酶A(PKA)专一抑制剂——10 μmol/L H89预处理组与蛋白激酶C(PKC)专一抑制剂——10 μmol/L恩扎妥林预处理组(预处理5 min,0.8 mmol/L MP处理3h).采用ELISA法检测培养液中孕酮含量,划痕标记染料转移法测定贴壁细胞的GJIC.结果 高浓度(0.2～1.6 mmol/L)MP可明显抑制小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌(P＜0.05);异丙肾上腺素、H89和恩扎妥林均能缓解MP对体外小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌的抑制作用(P＜0.05).结论 MP可通过抑制小鼠黄体细胞的GJIC导致孕酮分泌受抑制,而PKA与PKC参与该过程.     

DEHP对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43表达和间隙连接通讯功能的影响

目的 通过对原代培养的大鼠睾丸支持细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达及间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)功能的影响.方法 体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,应用不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)作用于支持细胞24h,应用荧光定量PCR法检测Cx43基因mRNA表达,用Weastern blot方法检测Cx43蛋白表达,划痕标记荧光染料示踪方法检测GJIC功能.结果 与对照组相比,DEHP各组支持细胞Cx43基因mRNA和蛋白表达均下降(P＜0.05),呈浓度依赖关系,同时支持细胞GJIC功能降低.结论 DEHP在体外可通过抑制大鼠睾丸支持细胞Cx43基因表达而抑制GJIC功能,进而影响支持细胞功能.     

沙尘与非沙尘PM_(2.5)对人肺成纤维细胞存活率及细胞间通讯的影响

目的探讨沙尘与非沙尘PM2.5对人肺成纤维细胞存活率及细胞间通讯的影响。方法使用沙尘与非沙尘PM2.5的全颗粒、无机提取物和有机提取物,按它们在PM2.5中的质量比例,确定各自的染毒浓度。受试物处理细胞24小时后,采用MTT法测定细胞的存活率,并用划痕染料标记示踪法测定细胞缝隙连接通讯(GJIC)水平。结果在按上述确定的染毒浓度范围,沙尘和非沙尘全颗粒、沙尘无机提取物表现出明显的细胞毒性,有剂量-反应关系,且沙尘全颗粒的毒性最大。细胞划痕实验结果显示,沙尘和非沙尘PM2.5的全颗粒及其提取物均可抑制细胞间荧光扩散,抑制作用随剂量增高而增强,且有机提取物的抑制作用最强,其次是全颗粒,再次为无机提取物。结论颗粒物的来源和成分是影响其毒性的重要因素;沙尘与非沙尘PM2.5都能抑制细胞间通讯,GJIC可能为颗粒物的毒性机制之一。     

共轭亚油酸对正常动物细胞和人体肿瘤细胞间通讯功能的影响

为探讨c9,t11-共轭亚油酸 (CLA)的抑癌作用可能机制 ,在促癌物 (TPA)存在下 ,对正常细胞(CHL)以及人体肿瘤细胞 (SGC 790 1细胞和MCF 7细胞 )的细胞间隙连接通讯功能 (GJIC)的影响 ,采用划痕标记染料示踪技术 (SLDT) ;c9,t11 CLA剂量为 2 5 (mol L ,5 0 (mol L ,10 0 (mol L和 2 0 0 (mol L ,阴性对照为乙醇。结果显示 ,c9,t11 CLA可明显地提高TPA对CHL细胞的GJIC的抑制效应 ,当c9,t11 CLA浓度为 2 0 0 (mol L作用 48h时 ,细胞间隙通讯功能基本上与阴性对照组相近 ;当用c9,t11 CLA作用SGC 790 1细胞和MCF 7细胞2 4h和 48h时 ,可见 (2 4h 10 0 μmol L的MCF 7细胞 ) 2 4h 2 0 0 μmol L和 48h 10 0、2 0 0 μmol L剂量组的肿瘤细胞有一定的细胞间隙通讯功能。提示c9,t11 CLA可提高SGC 790 1细胞和MCF 7细胞的GJIC的功能 ,并且不同程度的拮抗TPA对CHL细胞GJIC的抑制效应     

锌和硒对二氧化硅致CHL细胞通讯连接的影响

目的 观察葡萄糖酸锌、亚硒酸钠对二氧化硅致成纤维细胞通讯连接（GJIC）的单独及联合作用，寻找两者的最佳剂量组合。方法 成纤维细胞与二氧化硅，同时加入不同浓度的葡萄糖酸锌、亚硒酸钠以及葡萄糖酸锌＋亚硒酸钠溶液，共同培养6h后借助划痕染料示踪技术观察成纤维细胞通讯连接功能。结果 与二氧化硅组比，葡萄糖酸锌、亚硒酸钠可以显著减轻二氧化硅抑制成纤维细胞通讯连接功能作用（P〈0．05）；1．5mg／L的葡萄糖酸锌与2．0μmol／L的亚硒酸钠联合作用效果最好。结论 葡萄糖酸锌、亚硒酸钠单独和联合作用在体外可有效减轻二氧化硅粉尘致成纤维细胞通讯连接功能的抑制作用。     

氧苯胂对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯及DNA损伤的影响

分别采用细胞划痕染料标记示踪技术和单细胞凝胶电泳技术 ,研究了氧苯胂对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响及DNA的损伤作用。研究结果显示 ,氧苯胂可显著抑制细胞缝隙连接通讯 ,其作用有明显的剂量 -反应关系 (P <0 0 1) ,在浓度为 10 0nmol L时抑制作用最强 ;氧苯胂对细胞DNA的损伤作用不明显 ,损伤细胞以尾长小于头长的轻微型DNA断裂为主。以上研究结果提示 ,氧苯胂的遗传毒性较弱 ,而其非遗传毒性相对较强 ,有机砷化物的致癌作用不容忽视