铝暴露对大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型影响

目的通过研究慢性铝暴露大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型（PKCγ）的蛋白和mRNA表达的变化，观察大鼠海马CA1区长时程增强（LTP）形成，探讨铝暴露对学习记忆机制的影响。方法选择断乳后Wistar大鼠，以含有不同浓度A1Cl3的水进行饲养。3个月后，测量大鼠海马LTP，用改良的Takai法测定PKC活性的变化，蛋白印迹（Westernblotting）法检测PKCγ的蛋白表达；RT-PCR检测PKCγ的mRNA表达。结果（1）各染铝组PKC活性与对照组比较均降低，差异有统计学意义（P〈0.01）；（2）各染铝组PKCγ蛋白表达与对照组比较有降低趋势（P〈0．05）；（3）各染铝组PKCγmRNA表达与对照组比较均降低（P〈0．05），0．2％与0．4％，0．6％组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢性铝暴露影响大鼠海马PKCγmRNA和PKCγ蛋白表达。使PKC活性降低。导致LTP的下降，从而影响学习记忆的功能。     

DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注后海马区神经元ERK信号通路和Caspase-3表达的影响

目的：观察8-阿片受体激动剂DADLE（[D—Ala2,D—Leu5]enkephali）对大鼠急性全脑缺血再灌注后海马区神经元ERK信号通路和Caspase一3表达的影响。方法：将50只sD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham）、模型组（I／R）、DADLE处理组（根据不同剂量可分为2mg／kg[A]、3mg／kg[B]、5mg／kg[C]o采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型。于缺血15min后经颈外静脉注射DADLE并于再灌注120min后处死。开颅取其新鲜海马组织,采用western blot检测海马组织Caspase-3的表达,以及采用免疫组织化学法检测非磷酸化ERK与磷酸化ERK（P—ERK）的表达状况。结果：Sham组ERK和P—ERK蛋白表达水平显著低于其他各组（P〈0．05）,DADLE处理组与I／R组相比,其ERK和P—ERK蛋白的表达量明显上调（P〈0．05）。海马组织Caspase-3蛋白表达I／R组较Sham组表达明显上调（P〈O．05）,而DADLE处理组与IR组比较,海马组织Caspase-3蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论：DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注后海马区神经元有保护作用,说明DADLE可通过上调ERK信号通路以及抑制Caspase-3的表达而起到保护脑组织的作用。     

雌鼠围产期染铅对仔鼠脑组织Brn-3a基因转录及蛋白表达的影响

[目的]探讨雌鼠围产期染铅对仔鼠中枢神经系统神经细胞内Brn-3a基因转录及蛋白的影响。[方法]雌性大鼠在围产期经饮水染铅，分为低（0．5g/L）、中（1．0g/L）、高（2．0g/L）3个染铅组，对照组饮用蒸馏水。取21日龄仔鼠脑组织进行观察，采用组织原位杂交半定量方法检测Brn-3a基因mRNA转录水平，采用免疫组织化学方法检测Brn-3a蛋白表达水平。[结果]原位杂交检测Brn-3a基因mRNA图像分析结果表明，高铅组与对照组相比，大脑皮质和海马部位平均灰度值升高（P〈0．05），表明mRNA的表达量减弱，海马部位阳性面积比明显下降（P〈0．01）。免疫组织化学图像分析表明，与对照组相比，各染铅组大脑皮质、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比[Aa（％）]、平均灰度的差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），并呈剂量依赖性关系。染铅组Brn-3a蛋白表达低于对照组。[结论]大鼠脑组织基因转录水平和蛋白表达水平有所下降，提示在本实验染毒剂量下，铅干扰了Brn-3a蛋白的正常表达模式。     

电磁辐射对大鼠海马MAPK信号通路的影响

目的观察电磁辐射对大鼠海马神经细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族基因及蛋白质表达水平的影响。方法以65mW／cm^2电磁波急性辐照大鼠20min，采用RT—PCR检测细胞外的调节蛋白激酶1(ERK1)、C-Jun氨基未端激酶1(JNK1)、P38 MAPK mRNA表达，采用蛋白质免疫印迹方法检测ERK1、JNK1、P38 MAPK蛋白质表达。结果电磁波辐照后大鼠海马ERK1与JNK1的mRNA表达及蛋白质表达均明显增加，ERK1的高表达持续至辐照后12h，JNK1持续至辐照后3，24h后两者均不同程度低于对照水平，辐照后P38 MAPK的mRNA及蛋白质表达变化不明显。结论电磁辐射可在基因转录和蛋白质表达水平对ERK和JNK2条信号转导通路产生影响．对P38 MAPK的影响不明显。ERK和JNK两条信号转导通咱可能参与了电磁辐射导致的中枢神经损伤。     

铝对大鼠海马[Ca2+]i和PKC生物活性影响

目的通过观察不同浓度慢性铝暴露对海马长时程增强（long-termpotentiation,LTP）的影响,检测海马细胞内Ca^2＋浓度和蛋白激酶C（PKC）生物活性,研究慢性铝暴露损伤学习记忆的机制。方法选择断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的蒸馏水进行饲养。3个月后,测定脑铝、血铝、海马细胞内Ca^2＋,测量记录大鼠海马LTP,用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果（1）各染铝组的[Ca^2＋]i与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,但各染铝组间差异无统计学意义。（2）各染铝组PKC活性与对照组比较均降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论慢性铝暴露引起大鼠海马细胞内[Ca^2＋]i下降,使PKC活性降低,导致下游分子的活性受到影响,破坏LTP的形成,损害学习记忆功能。     

慢性铝暴露对大鼠海马细胞外调节蛋白激酶2及cAMP反应元件结合蛋白mRNA和蛋白表达的影响

目的 通过观察细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)通路的变化,研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆功能的影响机制.方法 将80只初断乳清洁级雄性Wistar雄性大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和2、4、6 mg/ml三氯化铝染毒组,每组20只.采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒3个月.测定大鼠脑铝和血铝含量,采用Western Blot法和Real-time PCR(RT-PCR)法分别检测海马组织中ERK2和CREB mRNA及蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,各浓度铝染毒组大鼠血铝和脑铝含量均升高,海马组织中ERK2和CREB蛋白及mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着铝染毒浓度的升高,大鼠血铝和脑铝含量呈上升趋势,海马组织中ERK2和CREB蛋白及mRNA的表达水平均呈下降趋势.结论 慢性铝暴露可能通过抑制大鼠海马中ERK2/CREB通路而损伤大鼠的学习记忆能力.     

燃煤型氟中毒大鼠智力与脑ERK1/2表达关系

目的探讨燃煤型氟中毒大鼠智力变化及其发生机制。方法复制燃煤型氟中毒大鼠模型,用Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;蛋白印迹及实时荧光定量PCR检测信号转导系统细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达水平。结果高、低氟组大鼠逃避潜伏时间分别为(14.44±10.18)和(11.64±7.08)s,较对照组明显延长(P0.05);氟中毒大鼠第7 d穿台次数及逗留平台相限时间均较对照组减少(P0.05);染氟组大鼠脑组织中ERK1/2磷酸化蛋白较对照组升高1.5~2.3倍(P0.05),mRNA表达水平较对照组升高2.0~3.5倍(P0.05),呈剂量-效应关系。结论燃煤型氟中毒可引起大鼠学习、记忆能力降低,其机制可能与脑组织中ERK/MAPK信号转导通路的激活有关。     

单唾液酸神经节苷脂对铅暴露大鼠海马神经细胞生长抑素表达的干预作用

目的 研究单唾液酸神经节苷脂（GM1）对铅暴露大鼠海马神经细胞生长抑素（SS）的影响。方法 成年SD大鼠60只，随机分为三组：对照组、染铅组及GM1干预组，20只／组，40只染铅动物饮用0．1％的醋酸铅去离子水三个月，制成慢性染铅大鼠模型。GM1干预组腹腔注射GM1 50mg／kg，对照组和染铅组腹腔注射等量生理盐水，连续14d。采用免疫组化的方法测定大鼠海马细胞SS，观察铅暴露及GM1对其阳性表达的影响。结果 染铅组大鼠学习记忆能力较对照组明显减低，海马CA1区SS阳性神经元数量减少，差异有统计学意义（P〈0．05）；腹腔注射神经节苷脂后，Y-迷宫错误次数减少，其海马CA1区SS阳性神经元数量增多，差异有统计学意义（P〈0．05），CA1区SS阳性神经元数量亦增多但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 外源性神经节苷脂有可能增强海马细胞SS的阳性表达．从而一定程度的改善染铅大鼠的肇习记忆能力。     

微波辐照对大鼠学习记忆行为和海马LTP影响

目的研究微波辐照后学习记忆功能与长时程增强（LTP）改变的规律。方法采用功率密度为65mW／cm^2的微波全身一次辐照大鼠20min。在辐照后不同时相点观察大鼠学习记忆行为的改变（穿梭箱试验和Morris水迷宫试验）和海马离体脑片LTP的诱导变化。结果微波辐照可导致大鼠肛温升高4．1℃，比吸收率（SAR）为12．0W／kg。微波辐照后0,24h，大鼠主动回避反应（AAR）明显低于辐照前（P〈0．05）。微波辐照后0h和3h，大鼠寻找平台的潜伏期明显增加（P均〈0．05）；空间搜索试验中辐照组大鼠在目标区域的游泳时间占整个游泳时间的百分比和跨跃平台次数均显著低于对照组大鼠（P均〈0．01）。微波辐照后0，12，24h，3d，大鼠海马脑片LTP的诱导明显减弱（0h，P〈0．01；12，24h，3d。P〈0．05）。结论在本实验条件下，微波辐照可导致大鼠空间学习记忆能力受损，海马脑区LTP的诱导障碍是大鼠学习记忆功能损害的细胞电生理学基础。     

慢性氟中毒对大鼠骨组织Dlx5蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察慢性氟中毒对大鼠骨组织中转录因子Dlx5蛋白和mRNA表达水平的影响,探讨Dlx5在氟骨症发病机制中的可能作用。方法本研究用36只SD大鼠按性别随机分成3组,对照组（饮自来水,含氟〈0．5rag／L）、低氟组（饮含氟5．0mg／L的自来水）、高氟组（饮含氟50mg／L的自来水）,6个月后用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及骨氟含量,HE染色观察骨组织病理学改变,并采用原位杂交技术、免疫组织化学方法,对大鼠骨组织进行Dlx5蛋白及mRNA水平的定量分析。结果HE染色显示染氟大鼠骨组织骨小梁增宽、骨皮质增厚等骨硬化表现;染氟大鼠骨组织Dlx5蛋白及mRNA表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义（F1低－蛋白－28．381,F高－蛋白－343．515,F1低－mRNA－27．767,F高－mKNA－353．987,P均〈o．05）。结论过量的氟可上调Dlx5蛋白及mRNA水平的表达,促进成骨细胞的增殖与分化,从而出现骨质硬化。     

溴氰菊酯染毒大鼠的脑组织中GCS亚单位和Nrf2表达的时间进程

目的研究溴氰菊酯(DM)对大鼠大脑皮层和海马组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)轻亚单位(GCSl)和重亚单位(GCSh)mRNA表达,以及GCSh和转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)基因蛋白表达时间进程的影响。方法DM染毒组(DM12·50mg/kg bw)和溶剂对照组大鼠染毒1次,分别于大鼠染毒后不同时间点处死大鼠,分离皮层和海马。用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定mRNA表达的相对量。联合用免疫组织化学方法和图像分析系统检测海马和大脑皮层中GCS重亚单位蛋白(GCS-HS)和Nrf2蛋白的水平。结果(1)DM染毒后第5h和第48h大鼠大脑皮层中GCSh mRNA相对水平分别降低至对照组的83·9%、86·0%(P<0·05),第5h、24h和48h Nrf2mRNA分别增高至0h对照组的146·4%、145·2%和147·9%(P<0·05)。(2)DM染毒后第5h和24h海马中GCSh mRNA相对水平分别增高至0h对照组的118·4%、118·4%(P<0·05),第5h海马中GCSl mRNA比0h对照组、24h和48h组均高,增高至对照组的121·4%(P<0·05)。DM染毒后各时间点海马Nrf2mRNA水平未见明显的变化(P>0·05)。(3)DM染毒后海马不同分区(CA1、CA2、CA3和齿状回)和大脑皮层中的GCS催化亚单位(GCS-HS)和转录因子Nrf2蛋白水平均未见明显改变。结论本实验条件下DM染毒后,大鼠海马GCSh和GCSl mRNA基因表达出现上调,而脑皮层GCSh基因表达出现下调,Nrf2mRNA水平表达出现上调,但海马和皮层组织中的GCS-HS和Nrf2蛋白水平未见显著变化。     

慢性铅暴露小鼠海马细胞凋亡相关基因的表达

目的探讨发育期慢性铅暴露对小鼠海马B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcelllymphoma/leukemia-2,bcl-2)和bcl-2相关X基因(bcl-2associateX,bax)mRNA表达的影响。方法用RT-PCR法检测慢性铅暴露时小鼠海马bcl-2和baxmRNA表达水平。结果慢性铅暴露可使小鼠脑海马bcl-2mRNA表达水平明显下降,而baxmRNA表达水平明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性铅暴露可使小鼠脑海马bcl-2mRNA表达水平显著下降,而baxmRNA表达水平显著增加。     

电子垃圾污染对产妇及新生儿甲状腺激素水平及受体表达的影响

目的探讨电子垃圾拆解区产妇及新生儿甲状腺激素及受体表达水平的变化。方法于2005年12月至2006年7月在中国南方有十余年历史的电子垃圾拆解区(暴露组)及距该地区约50km、地理条件和生活习惯相近的市区妇幼保健院(对照组),分别随机选取当地产妇48名和45名。采用放射免疫分析法检测血清甲状腺激素,包括游离T3(FT3)、游离T4(FT4)、促甲状腺激素(TSH);采用实时荧光定量PCR测定胎盘组织和脐带组织中甲状腺激素受体(TR)α1、TRβ1和TSHR mRNA的表达水平;并确定母儿间甲状腺激素水平的相关性及胎盘组织与脐带组织中相应激素受体mRNA表达水平的相关性。结果(1)暴露组母体血清和脐血清中FT4均低于对照组(P<0.05),但TSH水平高于对照组(P<0.05)。(2)暴露组胎盘组织和脐带组织中TRα1、TRβ1mRNA水平低于对照组(P<0.05和0.01),但TSHR mRNA水平高于对照组(P<0.01)。(3)两组母血与脐血FT4、TSH均呈正相关(P<0.05和0.01)。(4)两组胎盘组织与脐带组织中TRα1、TRβ1和TSHR mRNA表达均呈正相关(P<0.01)。结论电子垃圾处理环境暴露可能对产妇及新生儿甲状腺激素水平及受体表达有影响。     

维生素Ｅ对1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿保护作用的研究

目的探讨维生素E (vitamin E,Vit E)对1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)中毒性脑水肿的保护作用。方法将雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、Vit E对照组、1,2-DCE单纯染毒组及Vit E低、中和高剂量干预组。连续给予药物灌胃4 d后,采取静式吸入方式染毒3. 5 h/d,持续3 d。结果与空白对照组相比,单纯染毒组小鼠脑组织呈现明显脑水肿病理改变,脑含水量、脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及细胞色素P450 2E1 (cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白和mRNA表达水平显著升高,脑组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase assay kit,CAT)活性、Occludin蛋白和mRNA及Claudin 5蛋白表达水平显著降低。与单纯染毒组相比,各干预组小鼠的脑含水量、脑组织MDA含量、CYP2E1蛋白和mRNA表达水平显著降低,GSH含量、Occludin蛋白及mRNA水平显著升高;中和高剂量干预组的小鼠脑组织中SOD和CAT活性及Claudin 5蛋白表达水平亦显著升高(P0. 05)。结论单纯1,2-DCE染毒可引起小鼠脑水肿,诱导脑组织中CYP2E1的表达,诱发脑组织氧化损伤,破坏紧密连接蛋白,并抑制Occludin和Claudin 5的表达;而Vit E干预可显著抑制CYP2E1的表达,缓解CYP2E1介导的氧化损伤,有效预防1,2-DCE引起的中毒性脑水肿。     

亚慢性镉暴露BALB/c小鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白在肾损伤中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）和细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinases,ERK）在亚慢性镉染毒小鼠肾脏损害发生后表达的变化及其意义。方法 21只雌性BALB/c小鼠随机分成3组,高、低剂量染镉组分别腹腔注射CdCl2溶液10.0、2.5 μmol/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水,每周3次连续染毒14周。对肾脏进行苏木精-伊红(HE)染色、碘酸雪夫(PAS)染色和胶原纤维染色（Masson染色）,观察肾组织病理变化;免疫印迹(Western blot)法检测肾脏中ERK、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白及其磷酸化蛋白的表达差异。结果 高剂量染镉组pERK、pp38和pJNK蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),低剂量染镉组pJNK蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。镉染毒组的bcl-2、bax蛋白表达水平降低,且bcl-2/bax比值低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。镉染毒组肾小球和肾小管均有损害。结论 CdCl2可能通过调节ERK、JNK和p38蛋白激酶信号相关蛋白表达水平的变化,引发肾脏损害。     

铅对小鼠海马c-jun表达及学习记忆功能影响

目的　观察铅对小鼠学习记忆功能及海马区c jun表达的影响。 方法　 5～ 6周龄小白鼠交配后 ,通过饮水饲以不同浓度醋酸铅 2 4,4 8,9 6mmol/L。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后 ,先通过哺乳接触铅 ,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。 6周后用跳台学习试验测试小鼠学习记忆能力 ;最后处死小鼠 ,用RT PCR法观察各组小鼠海马区c junmRNA的表达状况。 结果　 3个染铅组小鼠跳台学习成绩显著低于对照组 (P <0 0 1 ) ;3个染铅组小鼠c junmRNA水平均明显降低 ,并具有剂量效应关系。 结论　c jun基因表达水平的下降可能是铅致小鼠学习记忆功能损害的分子机制之一。     

亚慢性染毒苯并[a]芘对大鼠海马热休克蛋白70表达的影响

目的 研究亚慢性染毒苯并[a]芘(B[a]P)对大鼠海马热休克蛋白70( Hsp70)的影响。方法 选择48只健康雄性SD大鼠,饲养1周后将动物随机分为空白对照组、溶剂对照组及0.5、1.5、4.5、10.0 mg/kg B[a]P染毒组,隔日腹腔注射染毒90d,Morris水迷宫试验进行行为学测试。免疫印迹(Westem-blot)法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测大鼠海马Hsp70蛋白和Hsp70 mRNA的表达水平,免疫组织化学法观察大鼠海马各区Hsp70表达情况,图像分析系统测定Hsp70平均灰度值。结果 Morris水迷宫结果显示,4.5、10.0 mg/kg B[a]P组大鼠平均潜伏期和平均总路程明显高于空白对照组、溶剂对照组、0.5、1.5 mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义(P＜0.05);10.0 mg/kg B[a]P组平台象限滞留时间明显低于空白对照组、溶剂对照组和0.5mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义(P＜0.05)。B[a]P染毒组大鼠海马hsp70蛋白和hsp70 mRNA的表达水平均随染毒剂量增高而下降。其中,4.5、10.0 mg/kgB[a]P组Hsp70蛋白表达水平明显低于空白对照组、溶剂对照组和0.5mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义( P＜0.01,P＜O.05);0.5、4.5、10.0 mg/kg B[a]P组hsp70 mRNA表达水平明显低于空白对照组、溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),10.0 mg/kg B[a]P组hsp70 mRNA表达水平明显低于其他染毒组。免疫组化结果显示,海马CA1、CA2、CA3、DG区Hsp70表达平均灰度值均随着B[a]P染毒剂量的增高而呈下降趋势。Pearson相关性分析结果显示,大鼠海马Hsp70表达水平与平均潜伏期呈负相关（r=-0.428,P＜O.05）;大鼠海马hsp70 mRNA表达水平与平均潜伏期、平均总路程呈负相关(r值分别为-0.677、-0.594,P＜0.01),与平台象限滞留时间呈明显正相关(r=0.597,P＜O.01)。结论 亚慢性染毒B[a]P可抑制大鼠海马Hsp70的表达,与大鼠学习记忆和空间探索能力损害相关,该抑制作用无区域特异性。     

Depressed hippocampal MEK/ERK phosphorylation correlates with impaired cognitive and synaptic function in zinc-deficient rats

An experiment was performed to observe changes of mitogen-activated protein kinase ERK (MEK)/extracellular signal-regulated kinase (ERK) signaling pathways in the hippocampus of zinc-deficient (ZD) rats and the correlation with cognitive dysfunction. Forty-four male weanling Wistar rats were randomly assigned to ZD (n = 22) and control (pair-fed, n = 22) groups. After a 4-week treatment, Y-maze was used to test the spatial memory of the rats. The long-term potentiation (LTP) in rat hippocampal dentate gyrus was observed simultaneously. pMEK, pERK1/2, and pCREB protein levels were examined by Western blot assays. The results demonstrated that the latency period in Y-maze was significantly shorter for the ZD rats. LTP amplitude in the ZD group decreased significantly compared with the control group. pMEK, pERK1/2, and pCREB protein expression of hippocampus in the ZD group decreased significantly. The results implicated a possibility that zinc deficiency-induced cognitive and synaptic impairment may be relevant to the MEK/ERK signaling pathway.