河北省2012年-2013年流脑病例病原学监测及分子分型研究

目的对河北省2012年-2013年流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例病原学监测结果进行分析,了解脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)的菌群种类及分子分型特征。方法对2012年-2013年从流脑病例中分离的脑膜炎奈瑟菌菌株进行培养、生化鉴定、血清学鉴定、种属及分群的荧光定量PCR检测以及多位点序列分型(MLST)和por A基因分型研究;并对2012年-2013年流脑病例的脑脊液和血清标本进行种属、分群的荧光定量PCR检测及MLST分析。结果2012年-2013年,从流脑病例中共检测出B群5例,C群14例,W135群2例;MLST结果显示除1例没有所属的克隆群外,其余16例标本均属于ST-4821克隆群;6株Nm菌株的por A基因分属于不同的型别。结论河北省2012年-2013年流脑病例以C群为主,B群流脑呈现增长趋势,本省首次出现了W135群流脑病例,病例大都为高致病性ST-4821克隆群,提示应加强本省Nm的监测。     

分子生物学技术用于流脑疑似病例的流行病学研究

目的：利用分子生物学技术确认流脑死亡病例与其密切接触者实验室鉴定结果的相关性。方法：对疑似病例的血液标本进行脑膜炎奈瑟菌PCR分群和多位点序列分析实验,对密切接触者分离菌进行氧化酶实验、血清学分群鉴定、糖源利用实验和脉冲场凝胶电泳（PFGE）鉴定实验。结果：疑似病例标本PCR结果为脑膜炎奈瑟氏菌A群阳性,6株密接分离菌的氧化酶试验均为阳性,血清学分群鉴定结果均为A群,糖源利用试验为葡萄糖和麦芽糖阳性、乳糖和蔗糖阴性。PFGE结果表明：这6株菌来源于同一克隆,多位点序列分析结果为ST7。结论：引起该病例及其密切接触者的病原菌类型为ST7的A群脑膜炎奈瑟氏菌。     

贵州省一起学校流行性脑脊髓膜炎爆发疫情的病原学鉴定和多位点序列分型研究

目的报告一起学校流行性脑脊髓膜炎(流脑)爆发疫情的病原学特征。方法对疑似流脑病例进行流行病学调查,采集患者脑脊液和血标本及首例病例密切接触者咽拭子标本,进行病原学分离鉴定、实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测和多位点序列分型(Multi-locus Sequence Typing,MLST)分析。结果该起流脑爆发疫情由C群脑膜炎奈瑟菌引起,MLST分型为ST-4821高致病克隆群。结论该起疫情由C群脑膜炎奈瑟菌ST-4281引起,该克隆群为中国独有的高致病基因群,本结果有利于制定全省流脑防控策略。     

湖南省C群及W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征分型

目的了解湖南省C群和W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征。方法收集2006—2016年湖南省流行性脑脊髓膜炎患者的血液或脑脊液、患者密切接触者以及健康人群的咽拭子标本中分离到的脑膜炎奈瑟菌菌株,进行生化检测、血清学分群。选取其中的C群和W135群部分菌株进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型以及多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行分子分型,分析其流行病学特征。结果经生化和血清学确认后,选取22株C群脑膜炎奈瑟菌和9株W135群脑膜炎奈瑟菌进行药敏试验,结果显示对大部分检测抗菌药物全部敏感,但对复方磺胺甲口恶唑C群菌株全部耐药,而W135群菌株的耐药率为55.56%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=7.61,P=0.006)。经PFGE分型后,22株C群脑膜炎奈瑟菌共分为5种PFGE带型,其中5株HNC-01带型和13株HNC-02带型属同一亚型;2006年湖南省第1例C群患者分离菌株的PFGE带型为HNC-02,与2012、2013年患者以及患者密切接触者分离菌株的图谱完全一致,与带型为HNC-01的2008、2010、2013年的患者分离菌株仅有一个带型的差异,均属于优势带型。9株W135群脑膜炎奈瑟菌PFGE分型后共分为2个带型,其中首例患者与2013、2016年患者分离菌株的带型一致,均为HNW-01型。选取其中优势带型菌株经MLST后,结果 C群脑膜炎奈瑟菌为ST4821型,W135群脑膜炎奈瑟菌为ST11型,均属于脑膜炎奈瑟菌的高致病性克隆群。结论湖南省C群流脑和W135群流脑自首例病例出现后,各自都成为了该群病例的优势流行克隆群,C群流脑近年有减少态势,但出现了新的流行型别;W135群自2012年起成为我省新的流脑流行株,其优势菌株与国际上侵袭性的W群分型一致,可能引起新的大流行,应及时制定相应的防控政策。     

北京地区2006～2008年流脑病例的核酸检测与结果分析

目的 采用不同方法对2006～2008年北京地区流脑病例进行核酸检测并对结果进行比较分析.方法 收集北京地区流脑病例的抗凝血标本和脑脊液标本,利用普通多重PCR和多重实时荧光PCR进行流脑病例病原学检测.结果 (1) 2006～2008年,北京市疾病预防控制中心免疫预防所实验室共收集到79例流脑病例标本.脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌三者总检出率为31.65％ (25/79),其中脑膜炎奈瑟氏菌检出率为29.11％ (23/79),占总阳性率的92％ (23/25);肺炎链球菌检出率为2.53％ (2/79),占总阳性率的8％ (2/25),B型流感嗜血杆菌未检出.脑膜炎奈瑟氏菌血清群分布A群、C群和未定型所占比例分别为:65.22％、26.08％、8.70％. (2)流脑多重实时荧光PCR检测方法的灵敏性明显优于流脑多重普通PCR; (3)抗凝血标本脑膜炎奈瑟氏菌检出率明显低于脑脊液标本.结论 北京地区引起流脑病例的主要病原菌血清型为A和C群.仅检测流脑病例血液标本可能会造成漏检.     

山东省首例C群流行性脑脊髓膜炎死亡病例病原学分析

目的 对山东省首例C群流行性脑脊髓膜炎(流脑)死亡病例进行病原学分析.方法 对山东省首例C群流脑病例进行流行病学调查,标本采集,菌株分离、鉴定、血清学分群及药物敏感性检测,并进行脉冲场凝胶电泳(Pulse Field Gel Electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(Muhilocus Sequence Typing,MLST)分析.结果 山东省首次从流脑病人脑脊液中分离到C群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria Meningitidis,Nm),该菌株对环丙沙星、左氧沙星、复方新诺明耐药.PFGE分析为AH30型,MLST分析为ST-3200型.结论 从山东省首例C群Nm引起死亡病例的腩脊液中分离的菌株,其基因型为ST-3200型,是中国首次发现的C群ST-3200型菌株.应加强对C群Nm的监测,密切关注C群流腩的发病及流行趋势.     

2013年湖南省一起B群流脑聚集性疫情菌株分子分型分析

目的了解湖南湘西地区B群流脑聚集性疫情中病例及其密切接触人群中分离到的B群脑膜炎奈瑟菌的分子分型特征及其流行关系。方法对病例的血液标本及其密切接触者的咽拭子标本进行分离、培养及生化鉴定,确认为脑膜炎奈瑟菌后,对菌株进行血清学分群和药敏试验;采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)以及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法对菌株进行分子分型。结果共分离到3株B群脑膜炎奈瑟菌,均对复方磺胺甲恶唑(SXT)耐药,对青霉素(PEN)和氨苄青霉素(AMP)的药敏结果为中介度,对其他9种抗生素米诺环素(MIN)、头孢曲松(CRO)、头孢噻肟(CTX)、利福平(RIF)、阿奇霉素(AZM)、氯霉素(CHL)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LVX)和美洛培南(MEM)均敏感,PFGE结果显示3株菌株为同一带型,MLST结果显示3株菌株均为ST-4821 complex高致病克隆群。结论该起湖南湘西地区B群流脑聚集性疫情中病人与其密切接触者中分离到的B群脑膜炎奈瑟菌在分子分型实验中呈现高度一致性,提示为同一来源。流脑菌在湖南省的菌群已经发生变迁,带致病性克隆群的B群菌株可能成为优势菌株,引起流脑的暴发流行。     

中国C群脑膜炎奈瑟菌脉冲场凝胶电泳分析

目的对中国C群脑膜炎奈瑟菌分离株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析，了解安徽省C群流行性脑脊髓膜炎（流脑）暴发菌株及国内C群脑膜炎奈瑟菌菌株的分子流行病学特征。方法212株C群脑膜炎奈瑟菌菌株分离自流脑患者、密切接触者和健康人群鼻咽部，包括安徽省C群流脑菌株48株，其中38株与C群流脑暴发相关。脉冲场凝胶电泳选用NheI限制性内切酶，聚类分析选用BioNumerics软件。结果212株C群脑膜炎奈瑟菌菌株共分为43个PFGE带型，命名为AH1～AH43，AH1是中国C群脑膜炎奈瑟菌主要的带型，占69．3％（”=147），分布于11个省市。安徽省48株C群菌株共分为3个PFGE型别（AH1、AH2、AH3），45株（93．8％）为AH1型。安徽省38株与C群流脑暴发相关的菌株中，37株（97．4％）为AH1型。全国53株流脑患者分离菌株中，AH1型菌株占67．9％（36／53）；121株流脑病例密切接触者分离菌株中，AH1型占71．9％（87／121），38株健康人群鼻咽部分离菌株中，AH1型占63．2％（24／38）。结论AH1型C群脑膜炎奈瑟菌是中国目前C群流脑流行的主要克隆群，安徽省C群流脑暴发是由AH1型C群脑膜炎奈瑟菌引起的，已在全国呈扩散流行的趋势。     

2株B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学分析

[目的]探讨分离自大连市开发区2005年和2008年外来人口中2例暴发型脑膜炎死亡病例2株B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征及其关联性。[方法]2010年,对2株B群流脑菌株进行脉冲场电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分型分析。[结果]2株菌PFGE型相似性为100%,应为同一来源;MLST分析结果均为ST5662型。菌株对青霉素、头孢类、阿齐霉素、氯霉素、利福平等多种抗菌药物敏感。[结论]2株B群脑膜炎奈瑟菌分子分型结果一致,为同一科隆。     

三例C群流脑病例的流行病学调查与实验室检测分析

目的通过对3例流脑病例的调查分析及实验室检测，查明引起流脑流行的菌群，为龙岩市流脑预防与控制工作提供科学依据。方法采集病人脑脊液标本用卵黄双抗琼脂平板分离培养，分离菌株经API-NH和VITEK-32NH鉴定卡鉴定后进行血清分型鉴定。两例患者早期及恢复期血清分别进行A和C群流脑抗体检测。结果自两剜患者脑脊液标本中分离培养出C群脑膜炎奈瑟菌；另一例未检出脑脊液标本经PCR法检测脑膜炎奈瑟菌（Nm）特异基因CrgA和C群诊断基因SiaD（c）均为阳性。两例患者早期及恢复期血清流脑C群抗体均呈4倍以上增高。结论早期明确诊断和报告，将A＋C群流脑疫苗纳入计划免疫管理是今后龙岩市控制流脑疫情的关键。     

江苏省脑膜炎奈瑟菌对12种抗菌药的敏感性检测分析

目的:对江苏省2005~2007年分离的脑膜炎奈瑟菌进行临床常用抗菌药和预防性抗菌药敏感性检测,为流行性脑脊髓膜炎的防治提供依据。方法:采用E-Test法和K-B法,测定脑膜炎奈瑟菌菌株对抗生素的敏感性和耐药性。结果:2005~2007年江苏省共分离26株脑膜炎奈瑟菌,18株分离自病人,其中A群11株,C群7株;健康人群分离8株,其中A群2株,B群1株,C群5株。26株脑膜炎奈瑟菌对美罗培南、头孢曲松、头孢噻肟、氯霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、四环素均敏感。63.64%(7/11)流脑病人A群菌株、50.00%(1/2)健康人群A群菌株对环丙沙星耐药;42.87%(3/7)C群流脑病人菌株和40.00%(2/5)健康人群C群菌株对环丙沙星耐药;9.09%(1/11)流脑病人A群菌株对复方新诺明耐药。结论:2005~2007年江苏省分离的部分A群、C群流脑菌株对环丙沙星、复方新诺明耐药,所有菌株对美洛培南、头孢曲松、头孢噻肟、氯霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、四环素均敏感。     

Distribution of serogroups and sequence types in disease-associated and carrier strains of Neisseria meningitidis isolated in China between 2003 and 2008

Given the unpredictability of Neisseria meningitidis outbreaks and the increased prevalence of serogroup C strains following the introduction of serogroup A-based vaccines, we conducted an analysis of serogroups and sequence types (STs) in disease-associated and carrier N. meningitidis isolates that have emerged in China since 2003. We used multilocus sequence-typing techniques to investigate 371 N. meningitidis strains isolated from patients with meningitis and healthy carriers. Two lineages were identified in serogroup A and C isolates, genotyped as the ST5 complex and ST4821 complex, respectively. Both clonal complexes were found throughout China, although ST4821 was more concentrated in the eastern region of the country. The ST5 complex has been persistent in China since the late 1980s and has since spread across the entire country. Isolates belonging to the ST4821 complex have been a dominant lineage since 2003.     

2008／2009年度山东省流行性脑脊髓膜炎病原学监测资料分析

[目的]了解脑膜炎奈瑟菌菌群分布、变异及耐药情况，为流行性脑脊髓膜炎（流脑）防治工作提供科学依据。[方法]对2008／2009年度山东省流脑疑似病例及流脑监测点流行期检测资料进行分析。[结果]调查健康人群1097人。从咽拭子检出脑膜炎双球菌13人，带菌率为1．19％，分离菌株中，A群3株，B群1株，C群1株，W135群4，I群2株，X群2株。带菌率，15～19岁为5．77％，其他年龄为0．43％（P〈0．01）。检测10例流脑病例脑脊液（或血清），其密切接触者咽拭子30份，“两脑”项目哨点医院送检脑炎、脑膜炎疑似病例脑脊液（或血清）标本184份，RT—PCR检出l株A群菌（流脑病例）、3株C群菌（“两脑”病例）。用分离的9株菌株进行药敏试验，1株B群菌株对12种抗生素均敏感；其他8株对氨苄青霉素、阿齐霉素、美洛培能、头孢曲松、头孢噻肟、阿齐霉素、氯霉素、利福平、萘啶酸均敏感，对复方新诺明均耐药，对青霉素1株耐药．对环丙沙星6株耐药，对左氧氟沙星6株耐药。[结论]目前山东省流脑疫情以A群、C群为主，从健康人群中检出W135群菌株，部分菌株对常用抗菌药物表现耐药。     

广东首株W135群流行性脑脊髓膜炎奈瑟菌的分子特征分析

目的 分析广东首次从患者脑脊液分离到的W135群流行性脑脊髓膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,N. meningitidis) 的分子特征.方法 复苏培养并用奈瑟菌生化鉴定系统(API NH)生化鉴定从患者脑脊液分离到的1株W135群N.meningitidis,以本地近年分离的1株C群和3株A群N. meningitidis 为对照;通过DNA序列测定分析外膜蛋白编码基因(porA、porB)可变区型别;通过多位点序列分型(multilocus sequence typing,MIST),采用Splits Tree在线软件分析进化关系,研究其分子特征.结果 该W135群N.meningitidis的porA可变区(va)型别为P1.5,2,属主要致病型别之一;porB的可变区Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ分别为1、1、1、17型,无可变区Ⅵ、Ⅷ;MIST等位基因谱为:2、123…4 38、4、6,序列型(ST)为2960,属ST-11/ET-37 克隆系.4株对照菌株porA的VR型别均为P1.20,porB可变区Ⅳ为7型,无可变区Ⅶ;C群对照株属ST-4821克隆系,3株A群属ST-5克隆系.结论 该W135群N.meningitidis的分子特征与国外分离株相同,而与本地流行的A群及C群菌株不同.     

江西省2005年脑膜炎奈瑟菌带菌调查及C群脑膜炎奈瑟菌脉冲场凝胶电泳分析

目的了解江西省2005年健康人群脑膜炎奈瑟菌(Nm)带菌状况,为预测疫情和制定防治措施提供依据。方法采集健康人群和流行性脑脊髓膜炎(流脑)病人密切接触者的咽拭子标本进行Nm培养和鉴定,C群Nm菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果健康人群1 441份咽拭子标本中分离到A群Nm2株,B群25株,W135群2株。从37份流脑病人的密切接触者咽拭子标本中分离到C群Nm19株,经PFGE分析18株为相同的脉冲场电泳型(AH1)。结论江西省2005年健康人群带菌以B群为主,C群带菌率上升,PFGE分析为相同的菌株型别。     

Multilocus sequence typing of Neisseria meningitidis directly from cerebrospinal fluid

MLST typing of Neisseria meningitidis directly from clinical material was introduced in the National Reference Laboratory for Meningococcal Infections in Prague. Four cerebrospinal fluid samples were obtained from patients with suspected meningococcal invasive disease. In all samples, all classical laboratory methods gave negative results and the only positive method was PCR, which revealed Neisseria meningitidis group C (two specimens) and group B (two specimens), respectively. MLST performed directly from cerebrospinal fluid revealed that the strains causing the two group C infections were of sequence type (ST) 11, while the two group B infections were characterized as ST-32 and ST-33 respectively. Multi-locus sequence typing of meningococci directly from clinical material offers the opportunity to improve further the surveillance of meningococcal disease and has now been introduced into the routine portfolio of tests employed at the national reference laboratory of the Czech Republic.     

Microbiological and epidemiological investigation of the Neisseria meningitidis serogroup A epidemic in Niger in 2009: last wave before the introduction of the serogroup A meningococcal conjugate vaccine?

The 2009 meningitis season in Niger was characterized by an early onset, beginning in the very first weeks of the year and peaking from the 12th to the 15th week with 5655 clinical cases over the 4 weeks. From 1 January 2009 to 28 June 2009 (week 26), a total of 13,733 clinical cases of meningitis were reported to the national epidemiological surveillance system with a case-fatality rate of 4·2%. During the season 25 of the 42 health districts reached the epidemic threshold and 11 the alert threshold. Reactive mass vaccination campaigns involving a total of 5 166,741 doses of the polysaccharide meningococcal bivalent (A+C) vaccine progressively controlled the outbreak in most parts of the country. A total of 3755 cerebrospinal fluid samples representing 28·1% of the suspected meningitis cases were analysed. Serogroup A meningococci were the causative agent in 97·5% of the meningococcal cases. Multi-locus sequence typing of 26 meningococal serogroup A strains showed 25 sequence type (ST)7 and one ST2859, both sequence types belonging to the ST5 clonal complex (CC5) of subgroup III. This is the largest epidemic observed in Niger since those of 1995-1996 (59,948 notified cases) and 2000 (14,633 notified cases).     

广州市两例B群流脑病例分离株的MLST分型研究

目的对从广州市报告的两例B群流行性脑脊髓膜炎（流脑）病例中分离的4株脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis,Nm）进行多位点序列分型（multi—locus sequence typing,MLST）研究。方法分纯并提取菌株DNA、运用MI。ST分析对7个管家基因进行扩增并测序,确定菌株的序列型,对其相关性进行分析。结果两例病例分离株7个管家基因位点序列均不相同,第一例病例分离株的序列型为ST-7型,属高致病性ST-5complex／subgroupIII克隆系;第二例病例分离株的序列型为新发现的ST一9804型。结论广州两例B群流脑病例虽然发生时间相近,但分属不同的序列型,无同源性。MLST分型技术对研究不同流脑病例间的流行病学关系有重要意义。