2007-2013年贵州省志贺菌分离株毒力相关基因的 检测分析

摘要:目的　了解2007-2013年间贵州省腹泻病例志贺菌分离株毒力相关基因携带情况及流行模式,为贵州省细菌性痢疾的预防和控制提供实验依据。方法　采用PCR方法,对2007-2013年贵州省分离的178株志贺菌进行ipaH、ipaBCD、ial、sen和set1五种毒力相关基因检测,按血清型、年份和地区分析志贺菌中的毒力基因携带模式分布。结果　178株志贺菌ipaH、ipaBCD、ial、sen和set1毒力基因的阳性率分别为100%、56.2%、59.6%、59.6%和18.0%,共有12种毒力基因携带模式,命名为Ⅰ-Ⅻ,Ⅻ型是福氏志贺菌的主要毒力基因携带模式（59.6%）,Ⅷ型和Ⅰ型是宋内志贺菌的主要毒力基因携带模式（43.5%、42.0%）;2007-2013年主要毒力基因携带模式依次为Ⅷ、Ⅻ、Ⅷ、Ⅰ、Ⅷ、Ⅰ和Ⅷ型;开阳、紫云以Ⅷ型为主要携带模式（55.2%、45.5%）,平坝以Ⅻ型为主（80%）,桐梓以Ⅰ型为主（51.0%）。结论　ipaH可作为志贺菌检测的特异基因,贵州省近年志贺菌毒力基因携带模式以Ⅷ、Ⅰ型为主,血清型不同、地区不同其主要毒力基因模式分布也不相同。     

2011-2013年河南省志贺菌病原学监测分析

摘要:目的　了解河南省2011-2013年细菌性痢疾的病原学特征。方法　以河南省2011-2013年分离到641株志贺菌为研究对象,采用血清分型、药物敏感试验及PCR检测毒力基因方法,对其进行病原学检测,以了解志贺菌菌型分布、药物敏感性及毒力基因携带情况。结果　641株志贺菌共分为2群、11种血清型,福氏志贺菌（B群）占84.6%（542/641）,宋内志贺菌（D群）占15.4%（99/641）,其中以F2a血清型为主的福氏志贺菌检出率由2011年的44.3%（87/196）上升到2013年57.6%（114/198）,宋内志贺菌检出率由25.4%（50/196）下降到5.1%（10/198）。进行药敏试验的325株志贺菌株对对头孢噻肟、环丙沙星、氯霉素和诺氟沙星的耐药率有逐年上升趋势,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;B群与D群的耐药谱有差异。进行毒力因子检测的244株志贺菌中,福氏志贺菌对set1B的携带率高于宋内志贺菌,且近几年志贺菌对毒力基因的携带率呈逐年上升趋势。结论　河南省近年来志贺菌流行菌型正在发生改变,对目前常用的抗菌药物表现较高的耐药性,分离菌株中普遍携带有毒力因子。     

上海市闵行区2003—2009年志贺菌菌型分布及变迁

目的了解上海市闵行区志贺菌的菌型分布及优势菌型,为痢疾的防治工作提供科学依据。方法收集该地区2003—2009年送检样品中分离到的志贺菌进行流行病学分型。结果 7年中共检出1 324株志贺菌,分为14个血清型,福氏志贺菌933株,宋内志贺菌391株。其中福氏4c 255株,福氏2b 206株,福氏2a 197株,福氏1a 136株,福氏X变种77株,还包括福氏1b、福氏3a、福氏4a、福氏4b、福氏5a、福氏5b、福氏6a、福氏Y变种共62株。2003年,优势菌型为福氏2 b,到2009年福氏2 a成为优势菌型。结论该地区流行的志贺菌为福氏志贺菌和宋内志贺菌,其中优势菌型为福氏2b型、福氏2a型、福氏4c型和宋内志贺菌,优势菌型出现了变迁。     

2010-2014年上海地区志贺菌耐药及毒力基因携带情况分析

目的 了解2010-2014年上海市382株志贺菌对抗菌药物的敏感性及其毒力基因的携带情况.方法 采用纸片扩散法(kirby-bauer,K-B)检测139株福氏志贺菌和243株宋内志贺菌对13种抗菌药物的敏感性;同时对志贺菌的五种毒力基因进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增检测.结果 菌株对萘啶酸、链霉素、氨苄西林、四环素和复方新诺明的耐药率分别达到了97.4％、96.1％、84.8％、77.7％和77.2％,多重耐药情况严重.福氏志贺菌对氨苄西林、头孢噻肟、头孢吡肟、氯霉素、阿莫西林/克拉维酸、四环素、环丙沙星、诺氟沙星及左氧氟沙星的耐药率均高于宋内志贺菌,差异均具有统计学意义(均有P＜0.05).382株志贺菌全部携带ipaH基因,其中63.3％的福氏志贺菌同时携带ipaH、ial、sen、setA和set1 B这5种毒力基因,50.6％的宋内志贺菌同时携带ipaH、ial和sen这3种毒力基因.结论 上海地区志贺菌的耐药情况严重,且福氏和宋内志贺菌对部分抗菌药物的抗药性差别较大;福氏志贺菌毒力基因携带率高,毒力强,应注意防范.     

湖北省部分志贺氏菌基因检测结果分析

目的 检测分析志贺氏细菌基因型,追踪传染源,为科学控制志贺氏细菌类重点肠道传染病提供科学依据.方法 用脉冲场凝胶电泳方法检测志贺氏菌基因,用软件分析电泳图谱.结果 检测8株为宋内志贺氏菌,检测8株宋内志贺氏菌DNA基因有3个基因型,2地区宋内志贺氏DNA基因型相近;检测29株福氏志贺氏菌来源鄂西南、鄂西北、江汉平原部分志贺氏菌DNA基因型相近,基因型分布相对复杂.武汉市的福氏志贺氏菌DNA基因分属于2个基因型和F1a和F4c血清型;宜昌市的福氏志贺氏菌DNA基因分属于1个基因型;十堰市福氏志贺氏菌DNA基因分属于3个基因型和F1a、F2a和F4c血清型;襄阳市福氏志贺氏菌DNA基因分属于2个基因型和F1a和F4c血清型;黄冈市福氏志贺氏菌DNA基因分属于2个基因型和2个血清型.结论 志贺氏菌基因型分布复杂,基因型结果与血清型存在差异,应该把志贺氏菌DNA基因型的检测工作纳入重点监测工作范围.     

马鞍山市志贺菌福氏4c亚型毒力基因分布

目的了解马鞍山地区志贺菌福氏4c亚型感染株毒力分布特点,分析其流行模式。方法应用PCR技术,检测48株志贺菌福氏4c亚型菌株的ipaH,ial、set、sen等4种毒力基因。结果ipaHi、als、ets、en等4种毒力基因在48株志贺菌福氏4c亚型的分布分别为100?%,96%,88%;其毒力基因模式主要分成5型,其中Ⅰ型是本地区主要流行模式。结论马鞍山地区志贺菌福氏4c亚型普遍携带ipaHials、et、sen等4种毒力基因;毒力强、感染力强是该血清型成为本地主要流行型别的主要原因。     

北京市2010年细菌性痢疾病原学分析

目的掌握北京市2010年细菌性痢疾的血清学分布以及脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分子分型特征,为流行病学研究提供合理依据。方法从形态特征、生化反应、血清分型、PFGE分子分型方面对北京市6个区的肠道多病原监测点分离到的195株志贺菌进行了系统鉴定和病原学分析。结果 195株志贺菌包括福氏志贺菌33株(16.92%)、宋内志贺菌162株(83.08%);福氏志贺菌血清型以F2a为主。7、8、9三个月志贺菌的发病率最高。选择其中55株宋内志贺菌进行脉冲场凝胶电泳分析,结果显示55株菌可以分为27个带型,其中以J16X01.BJ0016带型(11株)和J16X01.BJ0011(7株)为主。结论北京市2010年6个监测区县分离到的志贺菌包括福氏和宋内2种血清群,以宋内志贺菌为优势血清群,福氏志贺菌以F2a血清型为主。8月份为志贺菌高发季节。J16X01.BJ0016为宋内志贺菌PFGE优势型别。     

2008—2010年北京市西城区志贺菌血清型变迁及耐药性分析

目的 2008—2010年北京市西城区志贺菌血清型变迁及耐药性分析。方法按《全国细菌性痢疾监测方案》的要求进行。结果 2008年西城区福氏志贺菌7株,占63.6%;宋内志贺菌4株,占36.4%。2009年西城区福氏志贺菌12株,占37.5%;宋内志贺菌19株,占59.4%;鲍氏志贺菌1株,占3.1%。2010年福氏志贺菌6株,占14.3%;宋内志贺菌36株,占85.7%。药敏试验结果:志贺菌对头孢吡肟、头孢西丁、头孢他啶、氧氟沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、氨曲南药物敏感。对氨苄西林、磺胺、奈啶酸耐药。结论 2008—2010年北京市西城区志贺菌血清型主要为福氏志贺菌和宋内志贺菌,但是福氏志贺菌已呈逐年减少趋势,而宋内志贺菌呈逐年增多趋势。志贺菌对头孢类药物和氟喹诺酮类药物敏感,临床宜选用此类药品进行治疗。     

福氏志贺菌4c亚型深圳分离株的生物学和分子特性分析

[目的]对深圳市首次分离的福氏志贺菌4c亚型菌株进行生物学和分子特性分析,了解该类新菌型生物学特征及分子特征。[方法]采用生化反应、血清学分型、刚果红侵袭试验、药敏分析等方法对患者、厨工肛拭及物体表面的17株福氏志贺菌分离株进行病原学分析,采用质粒图谱和毒力基因分析方法进行分子特性分析。[结果]所得到的福氏志贺菌4c亚型分离菌均分解葡萄糖产酸不产气,甘露醇阳性,血清学鉴定为福氏志贺菌IV型,7群菌株;刚果红侵袭试验均阳性;对氨卞西林、四环素、甲氧苄啶、阿莫西林耐药,而对阿米卡星、环丙沙星、庆大霉素、头孢噻肟、头孢噻吩和诺氟沙星敏感;所有菌株的质粒电泳图谱相同,但与F4a、F4b质粒电泳图谱差异较大;所有菌株均携带ipaH和set1基因,而仅有23.5%(4/17)的菌株携带ial和sen基因。[结论]该福氏志贺菌4c亚型深圳分离株的的生化、血清学鉴定结果与现有报道基本相符,该菌具备一定毒力。所有菌株均为同一来源,但4c亚型并非变异于F4a和F4b。ipaH和set1毒力基因携带情况与相关报道相符,ial和sen基因携带情况低于现有报道。     

宁波福氏c亚型志贺菌病原学特征、耐药性和毒力基因分布

目的了解宁波地区福氏c亚型志贺菌病原学特征、耐药性和毒力基因分布,为细菌性痢疾的有效防控提供依据。方法收集来自腹泻患者的志贺菌株,对其进行生化鉴定、血清分型、药敏试验和5种毒力基因检测。结果 149株菌株中福氏(B群)志贺菌占63.76%,其中福氏1c、2c和4c亚型占36.91%;宋内(D群)志贺菌占36.24%;未检出A群和C群志贺菌。福氏1c、2c和4c亚型菌株生化结果与ATCC标准菌株一致;血清凝集抗原结构式分别为Ⅰ∶7(8)、Ⅱ∶3,4∶7(8)和Ⅳ∶7(8),均为多耐药性菌株;5种毒力基因(ipa H、set1、sen、ial和vir A)的阳性率分别为100.00%、85.45%、85.45%、90.91%和87.27%。43株菌株(78.18%)携带全部毒力基因。结论福氏c亚型志贺菌已成为宁波地区主要流行株之一,除血清变异外,生化等生物学特性未变异,菌株为多重耐药菌,携带多种毒力基因,有较强的致病力,应加强志贺菌检测与菌型分析。     

志贺菌毒力基因的多重PCR鉴定

目的：建立志贺菌肠毒素1基因（ShET-1B）、志贺菌肠毒素2基因（ShET-2）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）和侵袭相关基因（捌）的多重PCR鉴定方法，实现志贺菌多基因同时检测。方法：选择志贺菌的4种毒力基因作为靶基因，应用Touchdown PCR方法，在一个反应管中同时进行扩增，根据产物分子量定性判断结果。结果：多重PCR同时检测与单基因PCR分别检测4种毒力基因两种方法具有相同的灵敏度与特异性。624株志贺菌具有6种毒力基因型，571株福氏志贺菌（包括11个血清型）中556株ShET-1B阳性。结论：多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点，适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究。ShET-1B基因可能广泛存在于福氏志贺菌之中。     

山东省2011-2014年志贺氏菌分子分型及耐药性分析

  目的  通过对山东省2011-2014年分离的志贺氏菌（Shigella）进行血清、毒力基因、分子分型和药敏等分析,了解山东省志贺氏菌的特性及流行趋势。  方法  用玻片凝集法进行血清分型,PCR方法扩增相关毒力基因,用脉冲场凝胶电泳技术进行分子分型,采用微量肉汤稀释法测定菌株抗生素敏感性。  结果  44株志贺氏菌主要为福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）（54.55%）和宋内志贺氏菌（Shigella sonnei）（43.18%）。ipaH、set1、sen、ial毒力基因携带率分别为100%、43.18%、56.82%、50.00%。经脉冲场凝胶电泳分型（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）,福氏志贺氏菌被分为18种带型,且总体相似度偏低;宋内志贺氏菌被分为14种带型,且89.47%的菌株相似度在90%以上。44株志贺氏菌对15种抗生素中的14种均存在不同程度的耐药。93.18%的菌株为多重耐药菌株。  结论  山东省志贺氏菌以福氏和宋内血清群为主,毒力基因携带率高,有聚类分布出现,耐药严重,应加强对志贺氏菌菌型、溯源和耐药性的监测。     

济源市福氏志贺菌毒力基因分型与分析

目的：对河南省济源市2002—2005年分离之福氏志贺菌株进行基因分型和分析。方法：应用多重PCR方法检测志贺菌肠毒素1基因（ShET-1B）、志贺菌肠毒素2基因（ShET-2）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）和侵袭相关基因（ial），根据产物分子量定性判断结果。结果：90株福氏志贺菌具有2种毒力基因型，ShET-1阳性率达到98．9％。结论：济源市福氏志贺菌毒力基因型具有高度的一致性。     

志贺菌毒力相关基因的PCR检测分析

目的：利用PCR方法对武汉地区近年来收集的17株志贺菌进行毒力相关基因检测并分析其分布情况。方法：采用8对引物set1A、set1B、shet2A、shet2B、ial、ipaH、stx1与virA分别对志贺菌中毒力相关基因进行检测,结合常规鉴定方法对PCR扩增结果进行分析。结果：SHET1仅在福氏志贺菌（福氏Ⅱ型、福氏Ⅳ型）分离株（包括其标准株）中存在;SH-ET2存在于各型志贺菌（包括其标准株）;ipaH基因存在于各种类型志贺菌（包括其标准株）;17株志贺菌中,引物shet2A和引物shet2B用于检测sen基因分别检出16株和13株;ial、virA在反复复苏的菌株中检出率有所下降,stx1基因只在痢疾志贺菌中检出。结论：志贺菌快速诊断方法（PCR）中应首选检测志贺菌相关毒力基因ipaH基因。     

2013-2017年河南省婴幼儿志贺菌流行特征与耐药分析

  目的  了解河南省2013-2017年婴幼儿志贺菌的病原学特征。  方法  以河南省5岁以下腹泻患儿5 149份粪便分离的606株志贺菌为研究对象,采用血清分型、药物敏感试验及聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测毒力基因方法,对其进行病原学检测。  结果  儿童志贺菌总检出率为11.77%(606/5 149),1~岁年龄组幼儿检出率最高,为24.08%;606株志贺菌共分为2群、11种血清型,其中福氏志贺菌占73.43%,宋内志贺菌占26.57℅。176株志贺菌对氨苄西林、萘啶酸的耐药严重(耐药率>90%),对氯霉素、环丙沙星,诺氟沙星、复方新诺明的耐药率>65%,对亚胺培南和头孢类抗生素敏感度较高,且福氏与宋内志贺菌耐药有差异。婴幼儿毒力基因组合模式以shET-1+、shET-2+、ipaH+、ial+为主,并检出5株无毒力株。  结论  河南省婴幼儿细菌性痢疾以福氏志贺菌为主,对常用的抗生素存在严重的耐药问题,不同血清型菌株携带优势基因模式不同。     

多重实时PCR检测沙门菌、志贺菌和致泻性大肠埃希菌

目的 建立多重实时荧光PCR检测沙门菌侵袭蛋白A基因（invA）、肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）不耐热肠毒素基因（elt）、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌侵袭力基因（ipaH）的方法。方法 优化多重实时荧光PCR的反应条件,检测系列10倍稀释的阳性菌DNA提取物。90份腹泻患者粪便样品经缓冲蛋白胨水（buffered peptone water,BP）增菌6h后进行多重实时荧光PCR检测,并对阳性标本进行菌株分离和鉴定。结果 多重实时PCR方法最低可以检测到10CFU／μl的福氏2aF301株、10。CFU／μl的鼠伤寒沙门菌和ETEC44815株。检测腹泻患者粪便样品,elt基因阳性率为14．4％（13／90）,ipaH基因阳性率为5．6％（5／90）;并从阳性样品中分离到3株elt基因阳性大肠埃希菌和4株ipaH基因阳性大肠埃希菌。整个检测过程可在10h内完成,其中包括BP增菌6h。结论 建立了同时检测invA、elt、ipaH毒力基因的多重实时荧光PCR方法,具有高度的特异性,可用于沙门菌、肠产毒性大肠埃希菌、志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌菌株的毒力基因鉴定及临床腹泻粪便标本的快速筛检。     

福氏志贺菌4c型病原学特性及毒力基因检测

目的:了解上海市闵行区福氏志贺菌4 c型生化特征、对抗生素的耐药性及毒力基因携带情况,为痢疾的防治工作提供依据。方法:对本地区2007年~2008年各肠道门诊监测点腹泻病人中分离到的福氏志贺菌4 c型菌株,用ATB进行生化检测,K-B法进行耐药性检测,PCR扩增进行setlA、set1B、sen、ial和ipaH5种毒力基因检测。结果:36株福氏志贺菌4 c型100%发酵葡萄糖、91.7%发酵甘露醇,27.8%菌株吲哚阳性。对萘啶酸耐药率高达100.0%,利福平、复方新诺明、四环素、氨卞西林的耐药率为97.2%、88.9%、83.3%、83.3%,80.6%菌株耐受一半及以上抗生素。setlA、set1B、sen、ial、ipaH基因携带率均为91.7%、91.7%、100.0%、100.0%、100.0%。结论:福氏4 c志贺菌多重耐药情况较为严重,敏感药物有庆大霉素和第三代头胞类药物。菌株毒力基因携带率高,具有很强的致病性。     

Virulence profiling of Shigella flexneri and emergence of serotype 2b as a highly virulent shigellosis causing strain in Pakistan

Bacillary diarrhea caused by Shigella flexneri is mediated by various virulence factors which make it the leading agent of diarrhea in developing countries. Previously, a high prevalence of S. flexneri, associated with diarrhea has been reported in Pakistan but no data is available on their virulence profile. The present study reports for the first time analysis of various virulence factors among S. flexneri serotypes isolated from clinical (diarrheal stool) and non-clinical (retail raw foods and drinking water) sources. A total of 199 S. flexneri (clinical: 155, raw foods: 22, water: 22) belonging to various serotypes were subjected to virulence genes detection and virulence profiling. The most frequent virulence gene was found to be ipaH (100%), followed by sat (98%), ial (71.3%), set1B (65.8%) and set1A (38.7%). A high level of virulence was detected in serotype 2b as compared to other serotypes as 32.3% of all serotype 2b have the entire set of five virulence genes including ipaH (100%), ial (100%), sat (37.7%), set1A (89.3%), and set1B (100%). Seven different virulence gene profiles (V1 - V7) were detected and the most frequently observed to be V1 (ipaH+, ial+, sat+, set1A+, set1B+) followed by V3 (ipaH+, ial+, sat+, set1B+). The predominant virulence gene pattern in serotype 2b isolated from clinical and non-clinical samples were V1 and V3. Furthermore, about 32% strains belonging to serotype 2b contain the complete set of five virulence genes isolated from patients with high disease severity. In conclusion, the current finding revealed for the first times that serotype 2b was the most virulent strains in both clinical and non-clinical samples in Pakistan. In addition, the virulence of serotype 2b was well correlated with high disease severity.     

腹泻病人中志贺菌的耐药性和Ⅱ类整合子

目的:研究志贺菌的耐药表型、携带的耐药基因及整合子的流行现状。方法:对2008年-2009年从闵行区腹泻病患者大便标本分离的63株志贺菌,用KB法测定其对9种抗生素的药物敏感情况;PCR筛查整合子种类;长片段扩增Ⅱ类整合子可变区并测序。结果:63株志贺菌均表现出明显的多重耐药和交叉耐药现象,福氏志贺菌对复方新诺明、氨苄青霉素、四环素和萘啶酸的耐药率达90%以上。宋内氏志贺菌对复方新诺明和四环素的耐药率达85%以上。92.1%(58/63)的志贺菌中检出II类整合子,未检出I类整合子。58株II类整合子保守区阳性的标本,可变区扩增亦全部阳性,大小约3 kb～4 kb之间。测序结果显示耐药菌株含有编码对磺胺类抗生素耐药的基因dfrA1、对链丝菌素耐药的基因sat1和对氨基糖甙类抗生素耐药的基因aadA1。结论:多重耐药和交叉耐药在志贺菌中广泛存在;耐药志贺菌携带II类整合子,II类整合子与耐药表型之间存在一定关联。