Carba plus纸片法检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的性能评估

目的评估Carba plus纸片法检测碳青霉烯酶类型的能力和临床价值。方法收集陆军军医大学大坪医院2017年1月-2017年12月临床分离的77株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)为实验组,同时选取84株碳青霉烯敏感肠杆菌科细菌(carbapenem-sensitive Enterobacteriaceae,CSE)作为对照组,所有菌株进行耐药基因检测和Carba plus纸片法检测,以耐药基因检测结果作为碳青霉烯酶类型的金标准,同时对Carba plus纸片法检测碳青霉烯酶类型的相关性能指标进行统计分析。结果 77株CRE中经耐药基因序列分析结果KPC阳性51株,MBL阳性22株,OXA-48阳性4株。Carba plus纸片法检测结果KPC阳性42株,MBL阳性26株,OXA-48阳性5株,其余4株未检测出产酶基因型。Carba plus纸片法预测KPC酶的灵敏度为82.3%,特异度为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为92.4%,准确度为94.4%;预测MBL酶阳性的灵敏度为100.0%,特异度为97.1%,阳性预测值为84.6%,阴性预测值为100.0%,准确度为97.5%;预测产OXA-48酶的灵敏度为100.0%,特异度为99.4%,阳性预测值为80.0%,阴性预测值为100.0%,准确度为99.4%。结论 Carba plus纸片法对CRE菌株产酶类型可进行快速、准确、便捷地鉴定,在基层微生物实验室有很大的发展前景,可作为表型确认试验和耐药监测的一种主要手段。     

金属β-内酰胺酶最佳酶抑制物的研究

目的探讨临床微生物实验室金属β-内酰胺酶最佳酶抑制物选择,建立一种避免金属酶漏检的方法。方法以Cucl2、Hgcl2、Fecl2、二乙烯三胺五乙酸、乙二胺四乙酸、2-巯基丙酸、巯基乙醇、巯基乙酸与头孢他啶(CAZ)药物纸片增效法测定质控菌株金属酶,从中评估出抑菌最强的酶抑制物与头孢他啶(CAZ)联合检测临床分离的100份耐亚胺培南和(或)头孢他啶铜绿假单胞菌,结果与聚合酶链反应(PCR)检测金属酶基因进行比较。结果增效法检测100份耐亚胺培南和(或)头孢他啶铜绿假单胞菌中有9份金属酶阳性,与PCR检测结果一致,阳性株中3株IMP-1扩增阳性,6株VIM扩增阳性,经基因测序确认为VIM-2型。结论用EDTA、2-巯基丙酸和头孢他啶(CAZ)药物纸片联合检测金属酶,可避免金属酶的漏检,其方法简便,结果可靠,可在基层微生物实验室开展使用。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的准确性. 方法头孢西丁、苯唑西林药敏纸片分别采用K-B法检测 156株金黄色葡萄球菌临床分离株,同时采用PCR扩增mecA基因方法为检测MRSA的标准方法,比较两种方法的准确性. 结果 95株mecA基因阳性,61株mecA基因阴性;头孢西丁、苯唑西林药敏纸片K-B法的敏感性分别为98.9%和96.7%,特异性分别为98.4%和93.4%;头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性高于苯唑西林纸片扩散法. 结论头孢西丁纸片扩散法是检测MRSA的可靠方法.     

携带杀白细胞素基因金黄色葡萄球菌临床感染菌株的回顾性研究

目的研究临床分离的金黄色葡萄球菌携带杀白细胞素基因在社区与医院菌株分布流行的情况,及其携带mecA基因型的相关性分析。方法收集2010年1月-2014年12月医院临床分离的188株非重复金黄色葡萄球菌,进行菌株鉴定和药敏分析,用头孢西丁药敏纸片法初筛耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),用PCR法检测金黄色葡萄球菌的杀白细胞素基因(PVL)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因,并测序部分阳性基因PCR产物。结果头孢西丁药敏纸片法初筛试验与mecA基因PCR法结果差异有统计学意义;188株金黄色葡萄球菌中,76株为MRSA,阳性率为40.4%,其中64株MRSA为医院获得株,12株MRSA为社区获得株;112株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中99株为医院获得株,13株为社区获得株;共有14株PVL基因阳性,阳性率7.4%,社区检测到2株PVL(+)CA-MSSA(社区获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌),医院共检测到12株、阳性率6.4%,其中7株为PVL(+)HA-MRSA(医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)、5株为PVL(+)HA-MSSA(医院获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌),对该14株PVL基因阳性菌株进行MIC(最低抑菌浓度)分析,喹奴普汀/达福普汀、呋喃妥因、利福平、万古霉素、利奈唑胺、替加环素的耐药率为0,耐药率较低的有四环素(21.4%)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(14.3%)、左氧沙星(7.1%)、庆大霉素(7.1%),菌株大部分分离自皮肤软组织、脓等标本。结论携带PVL毒力基因的MRSA在医院的检出率比在社区的明显高,提示含PVL高毒力与多重耐药基因的医院获得株-金黄色葡萄球菌PVL(+)MRSA已经从社区转移到医院感染,应引起院感与临床部门的高度重视。     

超广谱β-内酰胺酶检出方法的比较分析

目的 比较分析3种超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）的检测方法，探讨适用本地区的快速简便方法。方法 选用纸片扩散初筛法，双纸片协同法，标准纸片扩散确认法进行试验，结果 在双纸片协同法中，AMX／CA与底物出现协同现象的频率从高到低依次为AZT（86.1%）、CRO（83.3%）、CTX（77.8%）、CFP（69.4%）、CAZ（41.7%），中心间距为（20、25、30）mm时，出现协同现象的总频率分别为71.7%、67.8%、58.9%；确认试验中CAZ组检出率为81.1%，CTX组为91.1%；双纸片协同法与确认法的结果比较，符合率达97.3%，总检出率为10.2%。结论 双纸片协同法中，最佳底物为AZT，CRO，CTX，最差底物为CAZ，中心间距为20mm时检出率最高，确认试验中，CTX组检出率高于CAZ组，双纸片协同法可适用于中低级微生物实验室的推广使用。     

产吲哚金黄杆菌金属β-内酰胺酶及其基因型检测

目的了解产吲哚金黄杆菌(Chryseobacteriumindologenes)耐药特性和金属β-内酰胺酶(MBL)的产酶率及其基因型。方法琼脂稀释法检测25株产吲哚金黄杆菌的最低抑菌浓度(MIC),增效法、改良三维试验法进行MBL表型检测,聚合酶链反应(PCR)筛查MBL和整合酶基因,全编码基因检测以及序列分析以确定IND型MBL的基因型;接合试验监测耐药基因是否具有可转移性,等电聚焦电泳(IEF)测定β-内酰胺酶等电点(pI)。结果产吲哚金黄杆菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率为88.0%,但利福平、加替沙星、左氧氟沙星的耐药率均<12.0%;表型检测19株细菌产MBL,PCR初筛检测仅IND-like通用引物扩增出20株阳性,全编码基因分析,blaIND-1型9株,blaIND-2型10株,IND-like型MBL基因1株,其中5株blaIND碱基序列和演绎的氨基酸序列均发生改变;接合试验均为阴性,19株检测到1(17株)或2个(2株)pI值,携带blaIND-1的菌株(CI-5)经IEF和MBL表型检测均为阴性。结论产吲哚金黄杆菌具有很高的MBL检出率,本地区的产吲哚金黄杆菌以产IND-1、IND-2型MBL为主,blaIND可能存在蛋白质的不表达或低水平表达。     

70例铜绿假单胞菌产酶与耐药性的检测

[目的]探讨铜绿假单胞菌产AmpC酶、金属酶与其耐药的相关性.[方法]分离70株铜绿假单胞菌,采用纸片扩散法检测AmpC酶、纸片协同法检测金属酶,并选用7种广谱抗生素进行药敏实验.[结果]70株铜绿假单胞菌中,AmpC酶和金属酶阳性率分别为35.7%和7.14%. AmpC酶阳性菌株对头孢他啶(CAZ),头孢他啶/棒酸(CD02),头孢噻肟(CTX),头孢噻肟/棒酸(CD03),氧氟沙星(OFX),阿米卡星(AK)表现高度耐药,对亚胺培南(IPM),头孢吡肟(FEP),氨曲南(ATM)敏感;金属酶阳性菌株仅对阿米卡星(AK)敏感,对其余抗生素表现高度时药.[结论]铜绿假单胞菌产AmpC酶和金属酶阳性率较高,两种酶与铜绿假单胞菌多重耐药性相关.     

产金属酶合并外膜蛋白缺失的铜绿假单胞菌的检测

目的研究铜绿假单胞菌对亚胺培南(IMP)耐药机制,为临床合理选择抗生素提供确切的依据. 方法对20株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌,以EDTA、CuCl2、 FeCl2、2-MPA、IMP为酶抑制剂,头孢他啶(CAZ)、亚胺培南为底物,在M-H平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测,并用聚合酶链反应(PCR) 检测金属酶基因;对3株耐亚胺培南(IMP)的菌株和3株敏感株,提取其菌株外膜蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,比较两组菌株外膜蛋白的差异. 结果协同法检测20株铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶有1例阳性,结果与PCR法检测结果一致,PCR产物经测序证实为VIM-2型金属β-内酰胺酶;金属β-内酰胺酶阳性的菌株在2 种底物纸片中均与EDTA、2-MPA和IMP 纸片有协同作用,其中2-MPA效果最好,与CuCl2、 FeCl2纸片无协同作用;在外膜蛋白SDS-PAGE电泳图谱上发现敏感株存在OprD2、OprE带,但耐药株缺乏OprD2,OprE带缺乏或者染色较淡;定量分析发现耐药株OprD2、OprE含量明显低于敏感株. 结论铜绿假单胞菌对IMP耐药的主要原因是外膜蛋白OprD2、OprE缺失或含量减少以及VIM-2型金属β-内酰胺酶的产生所致,或由两者共同作用所致.     

金黄色葡萄球菌的耐药特征

目的 了解临床分离金黄色葡萄球菌的耐药性及克林霉素诱导型耐药的发生率,评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测MRSA的临床应用价值.方法 VITEK-2微生物分析系统及K-B法药敏试验对临床分离菌株进行鉴定和药物敏感性测定;胶乳凝集试验检测PBP2a;头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测MRSA;双纸片扩散法检测诱导型克林霉素耐药;WHONET 5.4及SPSS11.3软件对结果进行统计分析.结果 青霉素和氨苄西林耐药率最高,分别为98.9%和100.0%,未发现万古霉素耐药或中介菌株;93株金黄色葡萄球菌中,MRSA和MSSA分别为58株(62.4%)和35株(37.6%),MRSA对11种抗菌药物的耐药率高于MSSA;头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性分别为98.3%和97.1%,苯唑西林纸片扩散法的敏感性和特异性分别为75.9%和94.3%;对红霉素耐药而克林霉素敏感的9株金黄色葡萄球菌中,5株(55.6%)为诱导型克林霉素耐药.结论 临床分离金黄色葡萄球菌耐药性已十分严重;头孢西丁纸片扩散法是检测MRSA简便、可靠的方法;临床微生物室应常规检测金黄色葡萄球菌红霉素对克林霉素的诱导耐药性.     

两种检测超广谱β 内酰胺酶表型方法的比较

目的了解某医院临床产超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）细菌的耐药性与基因型,比较两种方法对ESBLs表型检测的效果。方法随机收集100株ESBLs阳性菌株（初筛试验阳性）为实验组,30株ESBLs阴性菌株（初筛试验阴性）为对照组。经Vitek2 Compact自动化系统鉴定细菌,纸片扩散法进行药敏试验;采用改良Hodge试验检测耐碳青霉烯类药物菌株;美国临床实验室标准化研究所（CLSI）推荐的ESBLs表型确证试验和利用3 氨基苯酚硼酸改良的ESBLs表型确证试验进行表型检测;同时用聚合酶链反应(PCR)检测全部菌株的ESBLs基因。结果ESBLs初筛试验阳性菌株均耐头孢噻肟,但对碳青霉烯类药物仍敏感;2株耐碳青霉烯类药物的菌株,改良Hodge试验阳性。ESBLs基因检出率为84.00%,基因型以SHV和CTX M型为主。以PCR检测ESBLs基因结果为金标准,ESBLs表型确证试验和改良ESBLs表型确证试验的灵敏度、特异性、阴性预期值、阳性预期值分别为72.61%、100.00%、100.00%、66.67%和98.81%、100.00%、100.00%、97.87%,两种方法比较,差异有统计学意义(χ2=7.53,P=0.006)。结论ESBLs初筛试验阳性菌株对碳青霉烯类药物具有较高的敏感性。利用3 氨基苯酚硼酸改良的ESBLs表型确证试验检测ESBLs表型,效果更好。