镉对大鼠卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响研究

目的研究镉对大鼠卵巢颗粒细胞孕激素合成的影响,并探讨其机制。方法未成年Wistar大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG)100IU,48h后,取出卵巢颗粒细胞体外培养,备用。①取备用细胞随机分成4组,染镉剂量分别为0、10、20、40μmol/L,孵化30min,测孕酮、cAMP含量。②取备用细胞,随机分为3组,分别为空白对照组、40μmol/LCdCl2、1mmol/L8-Br-cAMP(cAMP类似物) 40μmol/LCdCl2,培养2h,测量孕酮含量。结果各剂量组与对照组比较孕酮含量差异有统计学意义(P<0.01),且随着染镉剂量的增加孕酮含量明显下降;8-Br-cAMP 40μmol/LCdCl2组与单纯40μmol/LCdCl2比较,孕酮含量明显升高(P<0.01);高剂量(40μmol/L)、中剂量(20μmol/L)组镉抑制细胞内cAMP的含量(P<0.01)。结论在本实验的条件下,镉可抑制大鼠颗粒细胞孕酮的合成;8-Br-cAMP可增加孕酮含量,且可逆转镉所导致的孕酮降低;镉对cAMP的抑制作用可能是其抑制孕酮合成的机制之一。     

T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响

目的探讨T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响。方法对分离出的4~5周龄BABL/c小鼠睾丸间质细胞进行体外培养,分别暴露于含10 ng/ml hCG(对照)和10-9、10-8、10-7mol/L T-2毒素+10 ng/ml hCG的培养液中24h。采用RT-PCR方法检测相关功能基因(3β-HSD-1,P450scc和StAR)mRNA的表达水平。结果与对照组相比,10 ng/ml hCG+10-8mol/L T-2毒素和10 ng/ml hCG+10-7mol/L T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1 mRNA的表达水平及10 ng/ml hCG+各剂量T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞P450scc/HPRT、StAR/HPRT mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着T-2毒素染毒剂量的升高,10 ng/ml hCG诱导小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA的表达水平呈下降趋势。结论 T-2毒素可通过抑制小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA表达而对雄性小鼠产生生殖毒性。     

氟化钠对小鼠睾丸间质瘤细胞StAR和P450scc mRNA表达的影响

目的观察氟化钠对小鼠睾丸间质瘤细胞(mLTC-1)中类固醇急性调节蛋白(StAR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达水平的影响。方法利用小鼠mLTC-1细胞为模型,用实时定量PCR法测定细胞中StAR和P450scc mRNA表达水平。采用放射免疫法测定细胞培养基上清中孕酮分泌量。结果与对照组比较,12、16和20μg/ml氟化钠浓度组的StAR和P450scc mRNA的表达量以及孕酮分泌量明显降低(P<0.05)。结论氟化钠可以抑制mLTC-1细胞StAR和P450scc mRNA的表达,进而影响mLTC-1细胞孕酮的合成。     

氯乙烯影响雄性大鼠睾酮水平研究

目的探讨氯乙烯对雄性大鼠睾酮水平的影响和可能的机理。方法每组6只,4组雄性SD大鼠腹腔注射染毒28d,剂量分别为0、10、100和1000mg/kg.d。应用酶联免疫吸附法测定大鼠血清和睾丸组织中睾酮(testosterone,T)的水平,用荧光定量PCR测定睾丸组织中睾酮合成的限速酶P450胆固醇侧链裂解酶(P450cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenetic acute regulatory protein,StAR)的mRNA水平。结果染毒28d后,相比对照组,100和1000mg/kg.d剂量组血清和睾丸中的睾酮水平明显下降,并有明显的剂量-反应关系;两者StAR mRNA表达水平显著下降;1000mg/kg.d剂量组的P450scc mRNA表达水平亦明显下降。结论氯乙烯对雄性大鼠血清和睾丸中的睾酮水平有影响,睾丸中StAR和P450scc mRNA水平的下调可能是其机制之一。     

邻苯二甲酸二乙基己基酯暴露对青春期大鼠卵巢StAR、P450scc基因表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对大鼠卵巢组织类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达的影响。方法取青春期雌性SD大鼠32只,随机分为对照组(8只)和DEHP(低、中、高)3个实验组,每组各8只。按10、100和1000 mg/(kg·d)DEHP分别对各实验组大鼠灌胃,并用溶剂(玉米油)作为对照为对照组灌胃。连续灌胃10天,取大鼠卵巢组织提取总mRNA,逆转录PCR(RT-PCR)测定StAR和P450scc基因表达水平。结果大鼠体重保持上升;高剂量组大鼠卵巢重量较对照组降低(P0.05);中剂量、高剂量组大鼠卵巢组织StAR、P450scc mRNA表达降低(P0.05,P0.01)。结论 DEHP体内暴露可能降低StAR、P450scc基因的转录水平。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯暴露对青春期大鼠卵巢孕酮分泌及相关基因表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对青春期雌性大鼠血清孕酮分泌及卵巢组织相关类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)和胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达水平的影响。方法将32只健康6周龄清洁级SD雌性大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和10、100、1000mg/kg DEHP染毒组,每组8只。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒10 d。测定大鼠血清孕酮水平及卵巢组织StAR和P450scc mRNA的表达水平。结果与对照组比较,仅1 000 mg/kg DEHP染毒组大鼠血清孕酮水平明显升高,100、1 000 mg/kg DEHP染毒组大鼠卵巢组织StAR、P450scc mRNA的表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 DEHP暴露可通过降低StAR、P450scc mRNA的转录而增加大鼠孕酮合成水平。     

模拟微重力对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成相关酶表达的影响

目的研究长时间模拟微重力作用下,大鼠血液睾酮的变化及血液睾酮合成相关酶表达的变化,探讨微重力对睾丸间质细胞睾酮合成的影响及机制。方法雄性Wistar大鼠36只分成6组,每组6只:尾吊7 d组(S1),尾吊14d组(S2),尾吊21 d周组(S3),每组分别设对照组,即对照7 d组(C1),对照14 d组(C2),对照21 d组(C3)。采用酶联免疫竞争(ELISA)法测定大鼠血清睾酮的含量;RT-PCR法检测睾丸组织中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)的mRNA水平的变化。结果尾吊组大鼠睾丸湿重及血清睾酮的含量均极显著下降(P0.01);尾吊7 d组StAR、P450scc和3β-HSD表达量均显著下降(P0.05);尾吊14 d和21 d组StAR表达量差异无统计学意义(P0.05),而P450scc和3β-HSD表达量均显著下降(P0.01)。结论长时间微重力作用下,大鼠睾丸中的P450scc和3β-HSD两种睾酮合成关键酶的表达下降,造成睾丸间质细胞睾酮合成分泌的下降。     

妊娠期全氟辛烷磺酸盐暴露对胎鼠睾丸胚胎间质细胞雄激素合成的影响

目的 研究全氟辛烷磺酸盐(perfluorooctane sulfonate,PFOS)对睾丸胚胎间质细胞(fetal Leydig cell,FLC)合成雄激素的影响.方法 将20只健康SPF级SD妊娠大鼠随机分成4组,分别为对照(Tween-20)组和低(5mg/kg)、中(10mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量PFOS染毒组,每组5只.于妊娠第12～19天采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为2 ml/kg,每天1次,连续8d.染毒结束后,观察雄性胎鼠睾丸FLC数量,检测睾丸内睾酮浓度、FLC中胆固醇脂蛋白结合受体(scavenger receptor class B member 1,SR-B1)、类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side chain cleavage enzyme,P450scc)mRNA的相对表达量.结果 与对照组相比,中、高剂量PFOS染毒组雄性胎鼠睾丸FLC数量减少;高剂量PFOS染毒组雄性胎鼠睾丸内睾酮浓度降低(P＜0.05);高剂量PFOS染毒组雄性胎鼠睾丸组织中StAR mRNA、P450scc mRNA的相对表达量下降(P＜0.05),SR-B1 mRNA相对表达量显著下降(P＜0.01).结论 妊娠期染毒高剂量PFOS可降低雄性胎鼠睾丸FLC合成睾酮的能力.     

N-乙酰半胱氨酸对镉致大鼠肝线粒体损伤的影响

目的研究 N-乙酰半胱氨酸(NAC)对镉致大鼠肝线粒体损伤的影响。方法取6只清洁级雄性 Wistar 大鼠肝脏,梯度离心得线粒体液。将所得线粒体液分为6组,分别为对照组、镉染毒组(CdCl_2的浓度分别为10、100、1000、10000μmol/L)和 NAC 预处理组(线粒体液先用500 μmol/L 的 NAC 预处理30min 后,加1000μmol/L 的 CdCl_2)。于培养箱内37℃孵育1 h 后,测定各组锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力和还原型谷胱甘肽(GSH)、细胞色素 c(Cyt c)含量。结果与对照组相比,100、1000、10000μmol/L 镉染毒组 GSH 含量和 Mn-SOD 活力较低,差异均有统计学意义(P<0.05),且在10～10000μmol/L 范围内,随着 CdCl_2剂量的增加而呈降低趋势;1000、10000 μmol/L 镉染毒组 Cyt c 含量较高,差异均有统计学意义(P<0.05),且在0～10000μmol/L 范围内,随着 CdCl_2剂量的增加而呈升高趋势。与 NAC 预处理组相比,0、10、100、1000、10000 μmol/L 镉染毒组 GSH 含量和 Mn-SOD 活力以及0 μmol/L 镉染毒组 Cyt c 含量较低,1000、10000μmol/L 镉染毒组 Cyt c 含量较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论镉可剂量依赖性地诱导大鼠肝线粒体氧化损伤,NAC 能有效预防镉所致大鼠肝线粒体氧化损伤。     

双酚A对体外培养小鼠睾丸睾酮合成的影响及机制

目的探讨睾丸体外培养模型下双酚A(BPA)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。方法采用睾丸器官体外培养方法,将睾丸随机分为DMSO溶剂对照组和4个BPA剂量染毒组(终浓度为10-7、10-6、10-5和10-4mol/L)。分别培养24、48和72h,每24h通气一次。HE染色光镜下观察睾丸组织形态学变化,放射免疫法检测培养液睾酮浓度,免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。实时荧光定量PCR检测睾丸组织相关基因表达水平。结果 10-4mol/L剂量组支持细胞数目减少,部分间质细胞核固缩或呈絮状改变;随着时间的延长睾酮分泌逐渐减少,与DMSO对照组相比,10-5mol/L剂量组在48h时睾酮合成增加(P<0.05),其余各剂量组睾酮分泌降低,以10-4mol/L剂量组较明显(P<0.01);睾酮合成相关酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a羟化酶(P450c17)及波形蛋白(Vimentin)的基因及蛋白表达水平下降。结论 BPA能通过抑制3βHSD、P450scc、P450c17及Vimentin等相关酶的表达,干扰间质细胞睾酮的合成。