镍冶炼烟尘处理的NIH3T3细胞对刀豆素A的凝集反应

为了检测镍冶炼烟尘处理的NIH3T3细胞的某些生物学特征,采用刀豆素A凝集试验,分别用两份镍冶炼烟尘与小鼠HIH3T3细胞接触24小时,培养21天后观察与ConA的凝集反应。以N－甲基－N＇－硝基－N－亚硝基胍为阳性对照,二氧化钛为阴性对照。结果表明,用镍冶炼烟尘和MNNG处理的细胞与Con A发生了凝集,呈剂量－依赖关系。用TiO2处理的细胞凝集反应为阴性。镍冶炼烟尘处理的细胞与Con A发生凝集意味着该细胞的生物学特征发生了改变。这一变化提示两份受检样品可能存在致癌活性,应做进一步毒理学检测和评价。     

丝素蛋白膜与小鼠胚胎成纤维细胞的体外生物相容性研究

目的 探讨不同结构的丝素蛋白支架材料对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)生长繁殖性能的影响.方法 将NIH-3T3接种在丝素蛋白纳米纤维膜和浇铸膜上进行体外培养,并设空白对照组.通过MTT法、HE染色、扫描电镜来分析不同结构丝索蛋白膜的生物相容性.结果 增殖培养4天时实验组的OD值与对照组相比,有显著性差异(P<0....     

镍冶炼烟尘致NIH/3T3细胞DNA损伤的实验研究

目的 研究镍冶炼烟尘致DNA损伤作用.方法 采用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术,检测2份镍冶炼烟尘对小鼠NIH/3T3细胞的DNA损伤.结果 相同染毒时间内,随着染毒剂量（除样品2中50.0μg/ml剂量染毒24 h组）加大,细胞拖尾率增高,DNA断裂程度在4 h达到高峰,分别为35.5%、69.7%、85.2%、41.3%、75.7%、89.2%.各受试物在相同剂量下,染毒4 h时均较染毒2 h和染毒24 h细胞拖尾率高.NIH/3T3细胞受到镍冶炼烟尘的受试物作用后,在染毒2 h,样品1、样品2各剂量组的细胞彗星尾DNA含量、尾长（除12.5 μg/ml剂量组外）、尾动差（除样品1的12.5μg/ml剂量组外）均明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.在染毒4 h,两样品对细胞DNA的损伤达到高峰,各剂量组的3个指标与对照组的差异有统计学意义（P＜0.05）.染毒时间延长至24 h,上述3个指标改变程度均较染毒4 h减弱,样品1的彗尾长与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 镍冶炼烟尘可不同程度致NIH/3T3细胞DNA损伤.     

脑膜瘤组织中MGMT甲基化状态及其对脑膜瘤细胞生长与转移的影响

目的:探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在脑膜瘤组织中的甲基化状态及其对人脑膜瘤细胞系IOMM-Lee细胞生长和转移的作用。方法:收集本院34例脑膜瘤患者的标本,甲基化特异的PCR(MSP)法检测脑膜瘤组织和正常脑组织中MGMT甲基化水平,免疫组织化学染色检测脑膜瘤组织和正常脑组织中MGMT表达。将培养...     

急性砷暴露对C57BL/6J和129X1/SvJ小鼠肝脏全基因组DNA甲基化的影响

目的研究常用近交系品系C57BL/6J(B6)和129X1/SvJ(129)小鼠急性砷暴露后肝脏全基因组DNA甲基化的差异。方法将健康成年清洁级雄性野生型B6和129小鼠各18只按体重随机分别分为3组,分别为对照组(生理盐水,24 h),亚砷酸钠(5 mg/kg)染毒后6 h、24 h组,每组各6只。采用一次性灌胃方式进行染毒,采用ELISA法检测肝脏中全基因组DNA甲基化水平,采用Western blot法检测肝脏中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b以及砷甲基化相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)、甲硫氨酸合成酶(methionine synthetase,MTR)、砷甲基转移酶(CYT19)蛋白的表达水平。结果与对照组相比,亚砷酸钠处理后6 h的129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平降低,亚砷酸钠处理后24 h的B6小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。在基础水平下,129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05);亚砷酸钠处理后24 h时,129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平低于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,亚砷酸钠染毒后24 h的B6小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平均较高,而亚砷酸钠染毒后6 h的129小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a的蛋白表达水平均较低,差异有统计学意义(P0.05)。基础水平下的129小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平及亚砷酸钠染毒后24 h的129小鼠肝脏中DNMT3b的蛋白表达水平均高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,仅亚砷酸钠染毒后24 h的B6小鼠肝脏中MTHFR、MTR的蛋白表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);而亚砷酸钠染毒129小鼠肝脏中MTHFR、MTR、CYT19的蛋白表达水平均无明显变化。基础水平下的129小鼠肝脏中MTHFR、MTR的蛋白表达水平及亚砷酸钠染毒后6 h的129小鼠肝脏中MTHFR的蛋白表达水平均高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。结论急性亚砷酸钠染毒可升高B6小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平以及DNA甲基转移酶和砷甲基化相关酶蛋白的表达,而降低129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平以及DNA甲基转移酶和砷甲基化相关酶蛋白的表达。     

DNA聚合酶β基因表达对NIH3T3细胞增殖影响

目的 观察不同类型DNA聚合酶B(DNA Polymerase β,DNA pol β)在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的表达及细胞增殖特性的变化.方法 用脂质体转染的方法,将野生型(wild type,wt)和食管癌缺失突变型(delete mutional type,dmt)的pol β重组荧光载体pEGFP-C3-pol β转染NIH3T3细胞,建立稳定表达pol β的细胞系,通过荧光倒置显微镜观察其定位,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法绘制生长曲线,流式细胞仪测定其细胞周期.结果 转染2种类型pol β的NIH3T3细胞株中,均有外源基因mRNA水平和蛋白水平的表达;荧光倒置显微镜结果显示,野生型的以细胞胞核为主,缺失突变型的pol β表达以细胞胞浆为主,从第3 d开始,缺失突变型的细胞生长速度较野生型和对照组明显增快(P<0.05);转染缺失突变型NIH3T3细胞的S期细胞比例为68.29%,明显高于野生型的57.18%、对照组的58.12%和未转染NIH3T3细胞的57.35%(P<0.05).结论 外源野生型pol β基因表达后对NIH3T3细胞的增殖速度无明显影响,而缺失突变型则使其增殖速度加快.     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌的影响

目的观察Ras-Raf-ERK 1/2途径介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖和凋亡影响,探讨bFGF及其信号转导途径与卵巢癌发生发展关系。方法以bFGF和促细胞分裂剂激活性蛋白激酶1(MEK1)抑制剂PD98059处理CAOV3细胞,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白印迹(Western blot)检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的活性。结果bFGF处理后细胞增殖比明显增加,且与bFGF水平呈剂量依赖关系,bFGF浓度为75 ng/ml时细胞增殖比最高为140%;bFGF使无血清诱导的凋亡细胞比例下降[(33.20±5.32)%~(2.38±3.36)%];bFGF诱导ERK1/2活性增高。PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论bFGF通过Ras-Raf-ERK 1/2途径介导,促进卵巢癌CAOV3细胞增殖,抵抗无血清诱导凋亡。在卵巢癌发生发展过程中,bFGF信号传递发挥了重要作用。     

碳、氧化锌和碳载氧化锌复合纳米颗粒对小鼠胚胎成纤维细胞活性抑制及DNA损伤的研究

目的探讨不同化学组成纳米颗粒对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的毒性效应及机制。方法选择纳米碳、纳米氧化锌、碳载氧化锌复合纳米颗粒制备细胞染毒悬液,三种纳米颗粒分别设立5个剂量组(5、10、20、50和100μg/ml)对BALB/c小鼠胚胎成纤维细胞进行24h、48h、72h染毒培养;利用细胞形态学观察和噻唑蓝实验(MTT比色法)检测上述三种纳米颗粒对细胞活性的影响;通过单细胞凝胶电泳(彗星试验)检测低剂量纳米颗粒对细胞DNA的损伤作用。结果三种纳米颗粒能够明显影响MEF细胞的生长形态,对细胞活性的抑制作用具有明显的时间-效应和剂量-效应关系;纳米碳、纳米氧化锌及复合纳米颗粒的半数致死浓度分别为21.85、21.94和23.02μg/ml;随染毒剂量升高,纳米氧化锌颗粒对细胞活性的抑制作用显著增强;低剂量水平上,复合纳米颗粒造成的DNA损伤最为明显。结论化学组成不同的纳米颗粒能够对MEF细胞造成毒性损伤;当暴露剂量达到一定水平时,纳米颗粒的金属成分含量可能是其毒性作用的主导因素。     

氟和铝对小鼠胚胎成骨细胞骨保护蛋白和核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响

目的观察氟和铝对小鼠胚胎成骨细胞株(MC3T3-E1)骨保护蛋白(OPG)和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法 在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝;72 h后提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析MC3T3-E1细胞OPG和RANKL的mRNA表达,进行半定量分析。结果与对照组比较,氟铝联合染毒可显著提高MC3T3-E1细胞OPG mRNA的表达(P<0.05),两者具有协同作用(P<0.05),但氟铝联合染毒对MC3T3-E1细胞RANKL mRNA的表达水平无显著改变;因此,与对照组相比,氟铝联合染毒组RANKL/OPG比值显著降低(P<0.05)。结论氟铝联合可能通过增加成骨细胞OPG基因表达水平来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,使骨形成大于骨吸收。     

染料木黄酮对NIH/3T3细胞体外短期转化实验的影响

目的 通过观察染料木黄酮对NIH/3T₃细胞体外恶性转化的影响,研究染料木黄酮在癌症起始阶段的预防作用.方法 体外短期转化实验.结果 染料木黄酮在对细胞无明显毒性的浓度下,对MNNG所诱发NIH/3T₃细胞恶性转化有明显的抑制作用,其最低抑制浓度为37μmol/L.结论 染料木黄酮可能是化学致癌过程的抑制剂.     

镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞毒性作用的实验研究

目的 观察镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞(CHL）的毒性作用。方法 以我国某镍冶炼厂电炉烟道尘为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测CHL细胞活性。结果 不同浓度下的镍冶炼烟尘(6．25、12．50、25．00、50．00、100．00μg／ml)作用一定时间后,CHL细胞存活率下降,呈现出时间．剂量．反应关系。接触受试物36h,细胞生长半数抑制浓度IG50为21．36μg／ml。同时镜下观察细胞形态也发生改变。结论 镍冶炼烟尘可以抑制CHL细胞生长,降低线粒体代谢活性。     

互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞的急性毒性作用

目的研究互隔交链孢酚(AOH)对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3的急性毒性作用。方法将对数生长期的NIH/3T3细胞分为10、50μmol/L AOH处理组和溶剂对照组,观察染毒细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究细胞存活率,采用彗星实验观察细胞的DNA损伤程度,利用流式细胞术(FCM)检测对细胞周期的影响。结果细胞处理后,出现明显的细胞形态学变化。MTT结果表明,10、50μmol/L AOH处理组细胞抑制率(分别为19.88%,32.47%)显著高于溶剂对照组(P<0.05)。10、50μmol/L AOH组在彗星实验中细胞拖尾率为35.87%和71.83%,尾部DNA含量为(36.18±18.6)和(51.3±21.6),显著高于溶剂对照组的拖尾率(14.78%)和尾部DNA含量(21.29±15.60)(P<0.05);10μmol/L AOH处理组对NIH/3T3细胞周期影响不明显,而50μmol/L AOH处理组引起S期增高和明显的G2/M期阻滞(P<0.05)。结论AOH可诱导NIH/3T3细胞的DNA损伤、抑制细胞增殖,并诱导G2/M期细胞阻滞。     

甲醛、苯单独和联合致NIH/3T3细胞转化的研究

目的探讨苯、甲醛单独和联合致NIH/3T3细胞转化活性。方法采用细胞灶法观察甲醛、苯单独和联合致NIH/3T3细胞的转化作用。结果苯、甲醛及苯和甲醛联合染毒组均有细胞转化灶形成,其形成率均呈现剂量依赖关系。联合作用分析显示,苯25μg/ml 甲醛25μg/ml、苯25μg/ml 甲醛50μg/ml、苯50μg/ml 甲醛25μg/ml、苯50μg/ml 甲醛50μg/ml,两化合物联合作用转化率实测值分别为3.6%、5.8%、5.7%和7.6%。而预期转化率分别为3.5%、5.6%、5.6%、7.7%。说明在等剂量原则下,苯、甲醛单独染毒的转化细胞灶形成率之和与两化合物同时染毒的转化细胞灶形成率非常接近;析因分析表明两者间无交互作用(F=0.07,P>0.05)。结论苯、甲醛具有细胞转化活性,二者联合作用类型呈相加作用。     

国产柴油机废气颗粒提取物致NIH3T3细胞转化作用的实验研究

目的 评价3种国产柴油机(6120型、4115型、S-195型)废气颗粒提取物致细胞转化活性，预测它们的致癌性。方法 以国产3种柴油机废气颗粒提取物为受试物，采用细胞转化技术，观察其致NIH3T3细胞形态学转化作用。结果 国产3种类型柴油机废气颗粒提取物均可致NIH3T3细胞形态转化，且转化率存在剂量-反应关系，随着剂量的加大，细胞转化率增高，除6120型和4115型的0．25μg／ml剂量组外，其他受试物不同剂量组的细胞转化率与对照组比较，差异均有显著性(P＜0．05)。相同剂量下S-195型柴油机废气颗粒提取物的细胞转化活性较4115型和6120型高。结论 柴油机废气颗粒提取物具有不同程度的致细胞转化作用，柴油机废气颗粒物的职业性危害不容忽视。     

正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1基因对小鼠成纤维细胞表达细胞外基质的影响

目的　观察正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP- 1)基因对小鼠成纤维细胞生物学行为的影响。方法　应用正、反义人金属蛋白酶组织抑制因子 - 1(TIMP- 1)逆转录病毒表达载体转染 NIH3T3细胞 ,观察其对 NIH3T3细胞增殖的影响 ,Northern blot检测细胞 胶原 (α1)、MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1m RNA的表达 ,酶谱法分析细胞培养液中 MMP- 2、MMP- 9的蛋白表达 ;EL ISA测定细胞培养液中 FN、 、 、 型胶原的含量。结果　正义转染组显示出促细胞生长作用 (P<0 .0 1) ;反义转染组显示抑制细胞生长作用 (P<0 .0 1) ;TIMP- 1m RNA在各组均有表达 ,反义转染组表达明显减弱。正义转染组细胞培养液中 FN及 、 、 型胶原含量明显增高 (P<0 .0 1) ,MMP- 2 ,MMP- 9含量降低 ;而反义转染组 FN及 、 、 型胶原含量明显降低 (P<0 .0 1) ,MMP- 2 ,MMP- 9含量增高。结论　正义 TIMP- 1促进NIH3T3细胞的增殖 ,反义 TIMP- 1则抑制 NIH3T3细胞的增殖 ;反义 TIMP- 1通过抑制细胞 TIMP- 1的表达而促进小鼠成纤维细胞的 FN及 、 、 型胶原降解。     

Rap2b基因表达对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响

目的了解Rap2b基因对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。方法以人肺CDNA为模板克隆出Rap2b基因片段,构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,稳定转染NIH3T3细胞,利用集落形成试验和细胞伤口愈合试验,观察细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的改变。结果与转染空质粒的细胞对比,转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞集落形成数目明显增加(P0.01),损伤修复愈合增快。结论 Rap2b基因表达可显著增加NIH3T3细胞集落形成,并增快该细胞的损伤愈合速度。提示Rap2b基因表达可能具有促进NIH3T3细胞增殖和恶性转化功能。     

重金属宫内暴露对胎儿DNMT3B基因甲基化的影响

目的分析胎儿宫内暴露重金属与脐带血中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)基因甲基化的关系。方法本研究基于在山西开展的病例对照研究,共纳入173例无重大体表出生缺陷胎儿。采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)仪检测脐带组织中砷(As)、铅(Pb)、镉(Cd)、镍(Ni)四种重金属的含量,采用MassARRAY时间飞行质谱阵列基因分析平台检测脐带血中DNMT3B的甲基化水平。运用多重线性回归模型分析重金属暴露对DNMT3B甲基化的影响。结果脐带组织中砷、铅、镉、镍含量中位值及四分位间距分别为7.66(5.24-10.30)ng/g、23.91(16.74-44.29)ng/g、0.95(0.47-2.71)ng/g、21.42(15.61-32.2)ng/g。脐带血中DNMT3B基因甲基化水平为(7.38±2.66)%。脐带组织镉对DNMT3B甲基化水平有影响(β=0.74,P=0.03),镉与砷、铅、镍对DNMT3B甲基化水平的影响均无交互作用。结论脐带组织重金属暴露会影响胎儿DNMT3B的甲基化水平。     

Effect of resveratrol on the metastasis of 4T1 mouse breast cancer cells in vitro and in vivo

We investigated the effects of resveratrol on metastasis in in vitro and in vivo systems. 4T1 cells were cultured in the presence of various concentrations (0-30 µmol/L) of resveratrol. For experimental metastasis, BALB/c mice were injected intravenously with 4T1 cells in the tail vein, and were orally administered various concentrations (0, 100, or 200 mg/kg Body weight) of resveratrol for 21 days. After resveratrol treatment, cell adhesion, wound migration, invasion, and MMP-9 activity were significantly decreased in a dose-dependent manner in 4T1 cells (P < 0.05). The numbers of pulmonary nodules were significantly decreased in mice fed the resveratrol (P < 0.05). The plasma MMP-9 activity was decreased in response to treatment with resveratrol in mice (P < 0.05). We conclude that resveratrol inhibits cancer metastasis both in vitro and in vivo, and this inhibition is likely due to the decrease in MMP-9 activity caused by resveratrol.     

小剂量X线对小鼠细胞免疫功能影响

目的 动态观察小剂量X线照射后BALB/C小鼠的细胞免疫功能变化情况.方法 75只小鼠分成3组,经2和3 Gy X线照射后,应用流式细胞仪每周测定外周血T细胞亚群及NK细胞,观察5周.结果 2Gy照射后1周,小鼠外周血CD~+_3、CD~+_4、CD~+_8、CD+~_(16)CD~+_(56)细胞降至24.76±1.87,22.87±1.71,1.07±0.07,4.64±0.73(P<0.05),并呈进行性降低,至第3周开始恢复,第4周恢复正常;3Gy照射后1周,小鼠外周血CD~+_3、CD~+_4、CD~+_8、CD~+_(16)CD~+_(56)细胞分别降至4.11±0.21,2.33±0.91,0.17±0.07,2.33±0.18(P<0.01),并呈进行性降低,至第4周开始恢复,第5周恢复正常;在同一时间,3Gy照射较2Gy照射所导致的细胞亚群降低的程度更为明显(P<0.05).结论 BALB/C小鼠经小剂量X线照射后细胞免疫功能下降明显,4～5周后可恢复正常.