多药耐药肺炎克雷伯菌喹诺酮类耐药相关基因研究

目的 了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)喹诺酮类耐药机制.方法 对一组25株MDRKP进行了染色体介导和质粒介导的耐药相关基因进行检测和分析.结果 25株中,有19种存在gyrA基因突变(76.0%);9株存在aac(6′)-Ⅰ b-Cr(36.0%);2株存在qnrA1基因(8.0%)、2株存在qnrB基因(qnrB4-like)(8.0%)、3株存在qnrS1基因(12.0%);25株均存在mdfA基因,未检出qepA基因.结论 在MDRKP中,gyrA基因突变是喹诺酮类耐药的主要原因.     

携带bla_(KPC-2)型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类耐药机制研究

目的了解临床分离的携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药机制,为临床治疗提供参考依据。方法在2008年11月-2009年7月从住院患者中分离19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析两种喹诺酮类药物作用靶位编码基因(gyrA、parC)和5种质粒介导的喹诺酮类耐药相关基因。结果 19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌gyrA和parC基因PCR扩增均阳性,1株(5.3%)aac(6′)-Ⅰb-cr基因阳性,qnrA、qnrB、qnrS和qepA基因均阴性;序列分析结果表明,19株gyrA和parC基因均发生突变,分别导致gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)出现两个位点错义突变,导致第83位丝氨酸(Ser)被异亮氨酸(Ile)取代、第87位天冬氨酸(Asp)被甘氨酸(Gly)取代,parC基因QRDR出现1个位点错义突变,导致第80位丝氨酸被异亮氨酸取代。结论染色体介导的耐药机制仍是临床分离的携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物耐药主要机制。     

肺炎克雷伯菌对喹诺酮类及氨基糖苷类耐药基因检测及耐药机制分析

目的了解临床分离的耐环丙沙星及庆大霉素肺炎克雷伯菌喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA与氨基糖苷类耐药基因aac(6′)-Ⅰb的携带情况,并进行相关耐药机制分析。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌;采用K-B法检测细菌对16种常用抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链反应检测耐药基因qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac(6′)-Ⅰb。结果 25株耐环丙沙星和庆大霉素的肺炎克雷伯菌中,12株(48.0%)检出aac(6′)-Ⅰb基因,7株(28.0%)检出qnrS基因,4株(16.0%)检出qnrB基因,未检出qnrA和qepA基因,其中1株同时检出qnrS和qnrB基因,qnr基因总的阳性率为40.0%;有6株肺炎克雷伯菌同时存在喹诺酮类和氨基糖苷类耐药基因(50.0%)。结论对环丙沙星和庆大霉素耐药的肺炎克雷伯菌携带aac(6′)-Ⅰb和qnrS、qnrB耐药基因,qnr基因的携带率高达40.0%,肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药主要由aac(6′)-Ⅰb引起,单株菌可同时存在多种耐药基因,从而介导对多种抗菌药物的耐药性。     

新生儿感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株gyrA基因研究

目的了解湖南地区新生儿感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因的流行情况。方法采用PCR法对20株肺炎克雷伯菌进行gyrA基因检测,采用法国生物梅里埃公司生产的VITEK2-COMPACT全自动细菌鉴定检测16种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果 gyrA基因耐药决定区的突变,其中17株都有第83位的改变,3株发现有第87位的改变。结论本省儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要。     

肺炎克雷伯菌染色体及质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制研究

目的了解肺炎克雷伯菌染色体、质粒介导喹诺酮类耐药基因gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb-Cr和qepA基因的流行情况。方法采用PCR法对20株肺炎克雷伯菌进行gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb-Cr和qepA基因检测,稀释法检测20种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果20株肺炎克雷伯菌均存在突变,aac(6′)-Ⅰb和qnrS基因各检出1株,经比对分别为aac(6′)-Ⅰb-Cr和qnrS1。结论老年患者产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌对环丙沙星耐药主要为gyrA基因突变所致,但也有aac(6′)-Ⅰb-Cr和qnrS的因素。     

全基因测序法分析肺炎克雷伯菌JM45株对喹诺酮类药物耐药基因

目的分析泛耐药肺炎克雷伯菌JM45株携带的喹诺酮类药物耐药基因,研究其对喹诺酮类药物的耐药机制。方法采用Roche454高通量测序技术对肺炎克雷伯菌JM45株做全基因组测序(完成图),分析喹诺酮类耐药基因携带状况,再将gyrA与parC全长基因与其他6株肺炎克雷伯菌做分子进化分析。结果最终得到JM45株一条完整的基因组(染色体)序列及两条质粒序列;基因组(染色体)序列大小为5 273 812bp(GC含量65.8%),质粒1序列大小为317 156bp(GC含量53.0%),质粒2序列大小为12 209bp(GC含量55.3%);在基因组(染色体)序列中携带了gyrA基因(全基因组Feature ID:KPN_1614),parC基因(Feature ID:KPN_0743);与肺炎克雷伯菌喹诺酮类药物敏感株相比较,gyrA基因第83位密码子由TCC→ATC,翻译成氨基酸序列后丝氨酸(Ser)→异亮氨酸(Ile),parC基因第80位密码子由AGC→ATC,翻译成氨基酸序列后丝氨酸(Ser)→异亮氨酸(Ile)。结论肺炎克雷伯菌JM45株喹诺酮类药物耐药是gyrA基因和parC基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变所致;gyrA与parC全长基因的分子进化分析提示JM45株与肺炎克雷伯菌HS11286关系最为接近(序列相同),与肺炎克雷伯菌342关系最远。     

ICU儿童感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株parC基因研究

目的了解湖南地区新生儿感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因parC基因的流行情况。方法采用PCR法对26株肺炎克雷伯菌进行parC基因检测,采用法国生物梅里埃公司生产的VITEK2-COMPACT全自动细菌鉴定检测16种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果 parC基因在所有耐药株中均有第80、91位氨基酸的改变。结论本省ICU儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因parC基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要。     

儿童感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株gyrA及parC基因突变分析

目的 了解湖南地区儿童感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势,以及由染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA及parC的流行及变异情况,为治疗儿童肺炎克雷伯菌感染提供依据.方法 以VITEK-2Compact全自动微生物系统检测分离菌株的耐药性,采用PCR法对36株耐喹诺酮类肺炎克雷伯菌进行gyrA及parC基因检测,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析.结果 发现36株耐喹诺酮类肺炎克雷伯菌均发生了gyrA基因耐药决定区的突变,其中33株有第83位丝氨酸的改变,3株发现有第87位氨基酸的改变,而parC基因在所有耐药株中均有第80、91位氨基酸的改变.结论 儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA及parC基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要.     

肺炎克雷伯菌多药耐药株的耐药机制研究

目的 调查1株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)58种耐药相关基因与可移动遗传元件的存在情况. 方法 对分离自我国内地的1株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析58种β-内酰胺类、氨基糖苷类,喹诺刚类和其他广谱抗菌药物耐药相关基因与可移动遗传元件. 结果 该株MDRKP检出TEM-1、SHV-11(均测序比对证实)、tetA、mafA、trbC、tnp513、ISEcp1基因,且gyrA基因存在突变,其余50种基因未检出. 结论 该菌株耐Ⅰ～Ⅲ代头孢菌素抗菌药物,可能与同时产TEM-1型和SHV-11型β-内酰胺酶引起牵制耐药机制有关,该株MDRKP表型为多药耐药与gyrA基因突变及获得可移动遗传元件和多种耐药基因相关,在肺炎克雷伯菌中检出ISEcp1为国内首次报道.     

多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因新亚型的发现

目的调查多药耐药肺炎克雷伯菌中喹诺酮类耐药相关基因的存在与变异状况。方法收集绍兴市人民医院2007年10月-2009年6月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析1种染色体介导的喹诺酮类耐药相关基因(gyrA基因)和5种质粒介导的喹诺酮类耐药相关基因〔qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb、qepA基因〕。结果 gyrA基因83位密码子17株菌(85.0%)有突变,87位密码子7株菌(35.0%)有突变,各分为4种突变方式;SX007株存在同义突变的gyrA基因新亚型,SX001、002、003、006、017株同时存在有义突变和同义突变的gyrA基因新亚型;另检出aac(6′)-Ⅰb-Cr基因2株(10.0%),qnrB基因1株(5.0%),qnrS基因4株(20.0%);qnrA和qepA基因未检出。结论该组多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因突变率高,这是喹诺酮类耐药的主要原因,其他耐药基因阳性率比较低。     

肺炎克雷伯菌耐药表型的分布及其耐药性分析

目的 调查肺炎克雷伯菌(KPN)临床株产不同β-内酰胺酶株分布情况、表型特征及耐药现状,指导临床合理使用抗菌药物.方法 采用VITEK-2 Compact对肺炎克雷伯菌进行鉴定和药敏试验.结果 291株KPN表型主要分为3类:产ESBLs类、产获得性青霉素酶类、野生型;其中产ESBLs株占48.1％;产获得性青霉素酶类占35.1％;野生株占14.4％;此外产碳青霉烯酶菌株7株,占2.4％,产酶总阳性率为85.6％;产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药性明显高于非产ESBLs菌株.结论 应高度重视对KPN产酶株的监控,合理使用抗菌药物,控制耐药株的产生与扩散.     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药性及危险因素分析

目的研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapene-resistant klebsiella pneumoniae,CRKP)的耐药情况及临床感染的危险因素,为CRKP的防控提供依据。方法收集天津市第三中心医院2016年1月-2018年12月CRKP感染患者160例为CRKP组,按1∶2比例配对选取同期同病区320例对碳青霉烯类敏感的肺炎克雷伯菌(Carbapenem-susceptible kpneumoniae,CSKP)患者为CSKP组,进行耐药情况的比较,对CRKP感染的相关因素进行单因素分析,并进行多因素的Logistic回归分析。结果两组患者对呋喃妥因耐药率差异无统计学意义,CRKP组对其余抗菌药物耐药率均高于CSKP组(P<0.05)。单因素分析显示,感染前住院天数>14 d、ALB<35 g/L、导尿管置入、深静脉置管、气管插管、抗菌药物使用时间>14 d、抗菌药物种类>3种、碳青霉烯类、糖肽类的使用均与CRKP感染有关(P<0.05)。多因素的Logistic回归分析显示:ALB<35 g/L、置入导尿管、应用抗菌药物种类>3种为CRKP的独立危险因素(P<0.05)。结论针对其危险因素,改善患者营养状态,合理应用抗菌药物,减少有创操作,增强感染监测,严格实施消毒隔离,从而对CRKP进行有效的防控。     

201株肺炎克雷伯菌耐药性分析及其gyrA基因分析

目的 了解肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因gyrA的分布,给临床用药提供依据.方法 收集2003-2009年临床分离的肺炎克雷伯菌201株,采用琼脂稀释法进行药敏检测;利用引物特异性PCR结合测序识别gyrA基因耐药基因.结果 201株肺炎克雷伯菌对甲氧苄啶和氨苄西林有很高的耐药性,但是对亚胺培南和阿米卡星较为敏感;同时,检测到60株占29.9％存在gyrA基因突变.结论 随着抗菌药物的大量使用,肺炎克雷伯菌耐药性较严重,易导致肺炎克雷伯菌产生多药耐药性,给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战.     

1株携带6种β-内酰胺酶基因的肺炎克雷伯菌

目的了解对亚胺培南敏感的肺炎克雷伯菌（KPN）β-内酰胺酶产生状况。方法对1株KPN用PCR法进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、LEN、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测。结果检测显示TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种阳性。结论该株KPN同时携带6种β-内酰胺酶基因。     

肺炎克雷伯菌耐药监测分析

目的监测肺炎克雷伯菌的临床分布与耐药变化及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的发生率。方法对6年中分离的1986株肺炎克雷伯菌药敏试验结果进行回顾分析，药敏试验采用K～B纸片法。结果肺炎克雷伯菌1986株中产ESBLs菌株908株，总检出率为45．7％；产ESBLs菌株对多数常用抗菌药物耐药，而对亚胺培南和美罗培南敏感；主要来源于重症监护病房636株（32．0％）、呼吸内科480株（24．2％）；呼吸道感染最常见（1630株，占82．1％）。结论肺炎克雷伯菌是常见的致病菌，及时监测产ESBLs菌的发生率与耐药趋势对指导临床用药至关重要。     

肺炎克雷伯菌临床分离株的流行病学及耐药特性

目的 探讨医院肺炎克雷伯菌(KPN)临床分离株的流行病学及耐药性,为临床医师合理选用抗菌药物提供参考依据.方法 对266株肺炎克雷伯菌的标本来源和临床科室分布进行调查;细菌鉴定按照《全国临床检验操作规程》,采用常规方法鉴定;药敏试验采用K-B法进行,依据CLSI最新折点判读结果;数据处理应用WHO-NET软件分析.结果 医院肺炎克雷伯菌主要分离自呼吸道标本,占60.5％;以呼吸内科、ICU、脑外科、神经内科分离率较高,分别占20.7％、19.2％、15.8％、14.3％;肺炎克雷伯菌临床株对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南、美罗培南敏感率为100.0％,但对其他常用抗菌药物均产生了不同程度的耐药性.结论 医院应继续坚持细菌耐药性的监测工作,预防与控制多药耐药细菌医院感染的暴发流行.