长期接触低剂量氯化甲基汞致脑发育损伤大鼠动物实验模型的研究

目的:观察大鼠长期接触低剂量氯化甲基汞(MMC)不同发育阶段仔鼠脑汞含量。方法:雌性Wistar大鼠体重(120±20)g,随机分为3个实验组和对照组各30只。实验组母鼠从妊娠前90天至仔鼠出生后30天连续喂饲含有不同剂量(0.75、1.50和3.00 mg/kg)MMC的普通饲料,对照组给予普通饲料。采用干烧法用F732-V冷原子吸收测汞仪分别测定仔鼠大脑、小脑和海马组织汞含量。结果:在建立MMC所致脑发育损伤动物实验模型过程中,发现实验组母鼠的产子率低于正常鼠,高剂量组尤为明显,生后仔鼠外观无异常表现,不同脑区(大脑、小脑和海马)脑汞含量差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组生后不同时间仔鼠脑汞含量明显高于相应对照组(P<0.05),各实验组仔鼠脑汞含量随母鼠接触剂量的增高而有不同程度升高(P<0.05),同一实验组内仔鼠脑汞含量随生后时间的延长逐渐升高,在生后30天达峰值。结论:甲基汞可透过血脑屏障蓄积于仔鼠脑内,且仔鼠脑汞含量与母鼠接触剂量之间存在一定剂量反应关系。     

氯化甲基汞致小鼠精子畸变效应

氯化甲基汞致小鼠精子畸变效应袁涛，廖向东，张万友，康忠玉四川省劳动卫生职业病防治研究所６１００４１化学毒物对人类的生殖效应日益受到重视。精子畸形试验是通过检测化学物质所致哺乳动物精子形态的改变和畸形数量的增加，以评价其对哺乳动物生殖细胞的生殖毒性作用...     

氯化甲基汞对大鼠脑神经细胞c-fos表达的影响

目的通过体内与体外实验相结合的方法研究氯化甲基汞(MMC)对脑神经细胞c-fos表达的影响,探讨甲基汞所致脑发育损伤的机制.方法体外实验中,应用免疫细胞化学方法观察MMC对培养神经元c-fos表达的影响.体内实验中,Wistar妊娠大鼠于妊娠7～10d连续灌胃,每日给予MMC4mg/kg.取出生后第1、3、5、7、10和15d仔鼠大脑组织制备常规组织切片.采用免疫组织化学方法检测c-fos表达.结果体外培养的神经元中加入0.3μmol/LMMC持续作用后,神经元中c-Fos阳性细胞率在0.5h开始增多,并随时间的延长而增加.培养神经元接触MMC10min和2、6h组,细胞阳性率分别为(6.97±2.86)%、(66.86±5.32)%、(64.49±3.09)%.体内实验中,对照组和实验组中仔鼠大脑皮层中c-Fos蛋白阳性细胞率随发育时间延长逐渐减少,但实验组均高于相应对照组,实验组第1、3天组c-Fos阳性率分别为(47.01±3.79)%和(46.71±1.96)%,与对照组的(35.86±3.04)%和(33.35±1.06)%相比,差异有非常显著性.结论MMC可诱导脑神经细胞c-fos的过表达,这可能是MMC所致脑发育损伤的机制之一.     

宫内暴露甲基汞对幼鼠脑发育损伤机制研究

为研究孕期暴露甲基汞对婴幼儿脑发育损伤机制,我们建立了甲基汞孕期暴露实验动物模型,采用3.0mg/kg剂量对怀孕后母鼠染毒。仔鼠出生后不同天数对仔鼠大脑、海马和小脑脑汞含量进行测定和观察,研究不同发育阶段仔鼠的大脑、海马、小脑的脑汞含量,通过分析单位重量脑汞含量得出海马中分布显著高于大脑和小脑中的结论;采用TUNEL法检测脑神经细胞凋亡,观察脑神经细胞凋亡状况;采用流式细胞术对不同发育阶段仔鼠三个那脑区进行比较探讨细胞周期改变规律。     

氯化甲基汞对小鼠卵巢细胞周期的影响

为探讨氯化甲基汞对雌性动物生殖系统的影响，采用氯化甲基汞给雌性昆明种小鼠急性染毒，剂量为１／２００ ＬＤ５０，１／２０ ＬＤ５０和１／２ ＬＤ５０，染毒后采用ＦＡＣ－Ｓｃａｎ流式细胞仪技术分析了氯化甲基汞对卵巢细胞周期的影响。结果表明：１／２０ ＬＤ５０组和１／２ ＬＤ５０组中处于Ｇ０／Ｇ１期时相的细胞百分数高于对照组（Ｐ〈０．０５），而１／２－ ＬＤ５０组和１／２ ＬＤ５０组的Ｓ期时相的细胞的百     

甲基汞对培养大鼠脑神经细胞损伤的影响

目的 通过体外实验探讨氯化甲基汞(methylmerculy chloride，MMC)所致脑发育损伤及其与c—fos表达的关系。方法 采用形态学试验方法，观察MMC对体外培养大鼠脑神经细胞的损害作用，并应用免疫细胞化学方法观察MMC对神经元、神经胶质细胞c—fos表达的影响。结果 体外培养的神经细胞接触0．3μmol／L MMC后，出现胞浆浓缩、轴突回缩，染色质边聚、固缩等现象，呈凋亡的典型形态。神经细胞培养体系中加入0．3μmol／L MMC持续作用后，神经元和神经胶质细胞中c—fos阳性细胞率在0．5h开始增高，并随时间的延长而增加，2h以后维持较高水平。培养细胞接触MMC 10min、2h、6h后，实验组神经元c—fos阳性表达率分别为8．78％，68．26％，64．96％，神经胶质分别为7．74％，66．61％，72．52％。结论 MMC可诱导体外培养大鼠脑神经细胞c—fos高表达，并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c—fos介导有关。     

氯化甲基汞对APL模型裸鼠的作用研究

目的研究氯化甲基汞（MMC）对急性早幼粒细胞性白血病（APL）模型裸鼠的作用。方法去除免疫力BALB／C裸鼠经3Gy60Co照射10min,尾静脉接种5×10^7／ml对数生长期NB4细胞0．1ml,建立APL裸鼠模型。隔2日灌胃给予10mg／kg（0．1ml／10g）的MMC或三氧化二砷（ATO）（ATO作抗癌阳性对照）,探讨MMC对APL裸鼠白细胞计数及分类、脾／体比值及生存期等的影响。结果MMC能降低APL裸鼠的白细胞计数、白血病细胞比例及脾／体比值,延长APL裸鼠生存期,且与APL对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论4MMC对APL裸鼠各项指标有一定影响,可通过进一步的机制研究探讨将其用于治疗。     

氯化甲基汞及三氧化二砷对K562细胞凋亡的影响

目的研究氯化甲基汞（MMC）及三氧化二砷（ATO）对K562细胞凋亡的影响。方法K562细胞经1．25、2．5、5、10和20μmol／LMMC或ATO作用24h，采用FITC-“Annexin”V／PI双染法进行细胞凋亡率的检测。结果K562细胞接触不同剂量MMC或ATO 24h，随着剂量增加凋亡率不断增加，5．0μmol／L的细胞凋亡率分别为（31．54±6．35）％和（25．37±7．68）％，与空白对照组（10．36±3．23）％比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MMC及ATO均能促进K562细胞凋亡，且呈剂量依赖性。     

氯化甲基汞对大鼠脑神经细胞凋亡及P^53基因表达的影响

选用Ｗｉｓｔａｒ系雄性大鼠,经皮下注射给予１０ｍｇ／Ｋｇ体重氯化甲基汞（ＣＨ３ＨｇＣｌ）,连续７天,第１５天取其脑组织,利用细胞和分子生物学技术进行ＤＮＡ电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析。实验结果,染毒组大鼠脑组织ＤＮＡ电泳呈现特征性梯形电泳带;ＦＣＭ分析染毒组大鼠脑神经细胞的凋亡率、Ｐ５３基因表达率显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结果表明：ＣＨ３ＨｇＣｌ以诱导凋亡方式导致脑神经细胞损伤,Ｐ５３基因参与ＣＨ３ＨｇＣｌ诱导脑神经细胞凋亡的基因调控过程。     

硒对氯化汞致大鼠肾氧化损伤影响

目的 探讨氯化汞(HgCl2)诱导大鼠肾毒性作用并观察亚硒酸钠的拮抗效应.方法 Wistar大鼠24只随机分成3组,分别为阴性对照组(皮下注射质量分数为0.9%生理氯化钠溶液),染汞组(皮下注射HgCl22.5 mg/kg体质量),亚硒酸钠干预组(先腹腔注射亚硒酸钠20μmol/kg体质量,2 h后皮下注射HgCl2溶液2.5 mg/kg).注射后12 h将大鼠移入代谢笼,收集12 h尿样.注射后48 h处死,留取血样和肾组织.测定肾和尿汞水平及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄苷酶(NAG)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活力和尿蛋白、血清尿素氮(BUN)、肾谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、蛋白水平和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果 与染汞组相比,亚硒酸钠干预组肾汞、尿汞水平下降(P<0.01),尿NAG、ALP、LDH活力下降(P<0.05或P<0.01),尿蛋白、BUN水平下降(P<0.01).肾GSH-Px活力升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05).结论 HgCl2可诱导大鼠肾脏发生急性氧化性损伤,亚硒酸钠对该急性肾氧化损伤具有一定拮抗作用.     

氯化三丁基锡致巨噬细胞凋亡作用

目的 探讨氯化三丁基锡(tributyltin chloride,TBTCl)致巨噬细胞株RAW264.7细胞的凋亡作用。方法 当RAW264.7细胞处于代数生长期时,分别加入不同浓度(0.0,0.025,0.05,0.10,0.20,0.40mg/L)的TBTCl处理48h,分别用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,观察TBTCl对RAW264.7细胞增殖影响;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法观察凋亡细胞的形态,流式细胞仪检测TBTCl对RAW264.7细胞的凋亡率。结果 TBTCl能抑制RAW264.7细胞的增殖,其半数抑制浓度(IC₅₀)=0.179mg/L;TBTCl也能诱导细胞的凋亡,当TBTC1达到0.40mg/L时,细胞凋亡率达到19.5%。结论 TBTC1可诱导细胞凋亡。     

牛磺酸对镉致大鼠脑损伤组织中单胺类递质的影响

目的研究牛磺酸对镉致大鼠脑损伤组织中单胺类递质的影响。方法将40只大鼠按体重随机分为4组：正常对照组、模型组、高剂量组、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组每周2次腹腔注射氯化镉（CdCl2）2．0ms／kg,正常对照组每周2次腹腔注射生理盐水（相同体积）。同时,高剂量组、低剂量组每日分别灌胃牛磺酸1000和750mg／kg,正常对照组和模型组每日灌胃蒸馏水。实验持续4周后处死动物,测定脑组织中乙酰胆碱酯酶（AchE）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）活力及对脑组织病理形态学进行观察。结果牛磺酸高剂量组脑组织中AchE活力与模型组比较明显降低（P〈0．05）,ChAT活力明显增高（P〈0．05）;脑组织病理形态观察显示,模型对照组出现明显细胞核固缩,神经细胞数目减少,细胞排列层次减少;高剂量组海马神经细胞核固缩明显减少。结论牛磺酸可调节大鼠单胺类神经递质的释放水平,可显著改善镉致大鼠脑组织损伤。     

低剂量汞对镉诱导大鼠子宫增重作用的影响

目的　了解HgCl2 对CdCl2 雌激素样作用的影响。方法　以HgCl2 、CdCl2 等为受试物 ,设不同剂量的组合检测其对去卵巢SD大鼠子宫的诱导增重作用 ,并以E2 为阳性对照。结果　 1.0 0mg/kgHgCl2 和 2 .0 0mg/kgCdCl2 均可诱导去卵巢SD大鼠子宫明显增重 ,与阴性对照组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。 0 .0 4mg/kgHgCl2 与不同剂量的CdCl2 联合染毒 ,可致去卵巢SD雌性大鼠子宫明显增重 ,与阴性对照组相比 ,不仅高剂量组差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,低剂量也有统计学意义 (P<0 .0 5 )。结论　低剂量HgCl2 对CdCl2 具有雌激素样的联合作用。     

苯并[a]芘、铅染毒小鼠神经毒性及脑组织细胞凋亡的研究

目的研究苯并[a]芘(BaP)、铅及其联合作用引起的小鼠神经毒性及脑组织细胞凋亡.方法将80只昆明小鼠随机分为10组,即:①未处理对照组;②溶剂(植物油)对照组;③低浓度铅(5.4 mg/L,饮水)染毒组;④高浓度铅(54 mg/L,饮水)染毒组;⑤低剂量BaP(0.5 mg/kg体重,每周4次腹腔注射)染毒组;⑥高剂量BaP(5 mg/kg体重,每周4次腹腔注射)染毒组;⑦低浓度铅 低剂量BaP联合染毒组;⑧低浓度铅 高剂量BaP联合染毒组;⑨高浓度铅 低剂量BaP联合染毒组;⑩高浓度铅 高剂量BaP联合染毒组.实验中观察记录一般情况,处理8周后测脑脏器系数,TUNEL法检测小鼠脑组织细胞凋亡率并对凋亡率与脑脏器系数进行相关分析.结果①高浓度BaP单独染毒组(0.98%)及各联合染毒组(0.95%、0.93%、0.92%、0.90%)小鼠脑组织脏器系数低于对照组(1.08%、1.08%, P＜0.05～P＜0.000 1).②除低剂量铅单独染毒组外的其余各染毒组小鼠脑组织细胞凋亡率(11.91%、18.09%、44.62%、20.12%、60.84%、52.28%、90.17%)显著高于对照组(5.89%、5.87%, P＜0.000 1). ③细胞凋亡率与小鼠脑组织脏器系数间存在负相关关系(r=-0.827 1,P＜0.05).结论①BaP、铅对小鼠均有一定的中枢毒性,两者联合作用可使毒性增强;②细胞凋亡可能是BaP引起中枢神经系统毒性的机制之一.     

牛磺酸对汞致肾细胞凋亡的影响

目的探讨牛磺酸对汞致肾细胞凋亡的影响。方法昆明种小鼠24只随机分成3组，第1组为阴性对照组，第2组为单纯染汞组，第3组为牛磺酸干预组。单纯染汞组小鼠腹腔注射3．0mg／kg的氯化汞溶液，对照组注射0．9％的氯化钠溶液，注射容量为0．2ml／10g。牛磺酸干预组于注射3．0mg／kg的HgCl2前2h腹腔注射4mmol／kg牛磺酸溶液。24h后将小鼠颈椎错位处死，制备透射电镜标本，观察凋亡细胞形态；免疫组化法检测bcl-2和bax凋亡相关基因表达。制备单细胞悬液，流式细胞仪进行凋亡细胞百分数分析。结果透射电镜观察，对照组小鼠肾近曲小管细胞形态规则，单纯染汞组表现微绒毛排列紊乱，染色质聚集成块，核破碎释放出凋亡小体。凋亡小体被邻近细胞吞噬等典型细胞凋亡形态。牛磺酸组显示接近正常的肾小管上皮细胞的形态，仅见到少量的线粒体嵴溶解。流式细胞仪分析染汞组明显高于对照组，牛磺酸干预组均显著低于染汞组。免疫组化检测牛磺酸干预组bcl-2蛋白的表达显著高于染汞组；bax蛋白的表达显著低于染汞组。结论牛磺酸可以抵抗汞所致的肾细胞凋亡，使凋亡相关基因bcl-2的表达上调。bax的表达下调。     

Detection and identification of S-methylcysteine in urine of workers exposed to methyl chloride

Summary Methyl chloride is used as a methylating agent and as a blowing agent in industrial processes. Alkylating agents and other electrophilic compounds are often detoxified in the organism through conjugation with glutathione. Glutathione conjugates are generally excreted as mercapturic acids, cysteine conjugates, or other thioethers in urine.Urine samples obtained from persons occupationally exposed to methyl chloride were examined for the presence of elevated thioether levels using a previously published non-selective procedure. No significant increases were detectable.A new assay procedure was developed for the detection of methylthio compounds in urine. The method is based on alkaline hydrolysis of urine samples and subsequent gas chromatographic determination of methyl mercaptan in the headspace of acidified hydrolysates. By application of this method a greatly increased excretion of a methylthio compound in the urine of CH₃Cl-exposed workers was shown. The compound was identified as S-methylcysteine.A study of the urinary S-methylcysteine excretion in a group of workers during a seven-day shift revealed that two of six workers hardly excreted any S-methylcysteine after exposure to methyl chloride.     

氯化三丁基锡对斑马鱼胚胎发育的影响

目的观察氯化三丁基锡(Tributyltin chloride,TBTCl)对斑马鱼胚胎发育和幼鱼死亡的影响。方法成年健康斑马鱼雌雄按1∶1的比例交配产卵,分别用不同质量浓度的TBTCl对受精后4 h(Four-hour post-fertilization,4 hpf)斑马鱼进行染毒实验,统计斑马鱼胚胎受精后48 h的心率,72 h的孵出率,24、48、72、96、120 h的死亡率和畸形率。结果与对照组相比较,随着TBTCl染毒质量浓度的增加,斑马鱼胚胎的孵化率降低、心跳减缓、畸形率和死亡率增加。当TBTCl达到80μg/L时,斑马鱼的48 hpf的心率由对照组的(182.5±3.6)次/min下降到(130.3±3.2)次/min,72 hpf的孵出率由对照组的97.46%下降到23.08%,并且120 hpf的死亡率为65.00%、畸形率为69.17%。结论TBTCl能影响斑马鱼胚胎发育,导致斑马鱼胚胎和幼鱼的畸形与死亡。     

甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响

为探讨氯化甲基汞 (MMC)所致脑发育损伤及其与c fos表达的关系 ,采用光镜、电镜等形态学方法 ,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用 ,并应用免疫细胞化学方法 (SP法 )观察MMC对培养神经胶质细胞c fos表达的影响。结果表明 ,体外培养的胶质细胞接触MMC后 ,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象 ,呈凋亡的典型形态。MMC 0 0 2mmol L作用于神经胶质细胞 10min后 ,c Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化 :c Fos蛋白阳性细胞率 0 5h开始增高 ,2h达高峰 ,4～ 6h又逐渐减少。MMC 0 0 0 12 5、0 0 0 5、0 0 2、0 0 8和 0 32mmol L作用 10min后 ,0 32mmol L组的阳性率显著高于除0 0 8mmol L组外的其他各组 (P <0 0 1)。提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c fos表达 ,并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c fos介导有关。     

溴甲烷对大鼠体格发育和空间记忆发育的影响

目的　观察溴甲烷对大鼠体格发育和空间记忆发育的影响 ,探讨其中枢机制。方法　 3 0只幼年Wistar大鼠随机分为正常对照组和溴甲烷染毒组 ,每组 15只。染毒组经呼吸道吸入 ( 164 2± 2 5 6)mg/m3 1h ,7d后重复吸入一次溴甲烷染毒 ,4周后分别测定两组大鼠体重、血清生长激素水平 ;用水迷宫方法观察溴甲烷对大鼠空间记忆能力的影响。结果　染毒 4周后 ,对照组大鼠体重增长量为 ( 80 99± 2 6 11)g ,染毒组大鼠体重增长明显放缓为 ( 3 9 0 9±9 2 2 )g (P <0 0 1) ;血清生长激素水平对照组为 ( 2 45± 0 2 2 )ng/ml ,染毒组降低为 ( 1 43± 0 49)ng/ml (P <0 0 1) ;水迷宫测试显示其平均逃逸潜伏期在第 5天对照组为 ( 2 2 1± 12 0 )s ,而染毒组延长为 ( 4 4 6± 15 8)s (P <0 0 5 ) ;搜索实验显示染毒组大鼠穿过平台所在位置的次数 (PC)为 ( 3 9± 1 3 ) ,明显少于对照组 ( 6 1± 3 2 ) (P <0 0 5 )。结论　溴甲烷对大鼠的生长发育具有抑制作用 ,对学习记忆等脑的高级神经活动具有明显的损害作用。该作用可能是通过抑制神经和内分泌系统的活动实现的