麻疹野病毒H1基因型在中国流行的分析

为确定现阶段中国流行的麻疹野病毒本土基因型别 ,在 1995～ 2 0 0 2年用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞 )从河南、山东、安徽、上海等 19个省 (自治区、直辖市 ,下同 )的麻疹爆发和散发病人的咽喉拭子或尿液标本中分离到麻疹病毒 15 6株。用逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)从 15 6株麻疹病毒中扩增出核蛋白 (N)基因碳末端 4 5 0个核苷酸片段。通过对扩增产物的核苷酸序列测定和分析证明 ,15 4株为麻疹病毒H1基因型 ;2株属于A基因型 ,为沪191疫苗株。由此证实 ,H1基因型已在中国广泛流行 ,为中国麻疹病毒的优势基因型。H1是麻疹病毒型内变异最大的基因型。这 15 4株H1基因型麻疹病毒 ,除外Shanxi0 0 - 6和Hunan95 - 2 3株 ,可进一步划分为H1a和H1b两个亚组。H1a的 4 5 0个核苷酸和H1b的差异在 2 0 0 %～ 4 0 0 %。H1基因型的 4 5 0个核苷酸和A基因型代表株Edmonston的基因差异在 6 0 0 %～ 7 33% ;与H2基因型代表株China94 - 1的基因差异在 5 11%～7 5 6 % ;与其它 17个基因型代表株的最大差异在 11 5 6 %。在中国开展麻疹病毒监测和建立麻疹病毒毒株库及基因数据库 ,对加速麻疹控制及未来消除麻疹都十分必要。     

湖北省2016-2021年麻疹病毒流行株基因型特征

目的 分析湖北省麻疹病毒流行株基因型特征。方法 收集湖北省2016-2021年麻疹监测病例咽拭子标本，进行麻疹病毒核酸检测、分离培养、N基因C末端基因扩增，构建分离株与基因库(GenBank)中麻疹病毒基因型参考株的系统进化树，分析核苷酸同源性和基因型别。结果 从湖北省2016-2021年麻疹监测病例中共获得335株麻疹病毒流行株，其中H1基因型327株(2016-2018年)、B3基因型5株(2019年)、疫苗株A基因型3株(2016年和2021年)。H1基因型麻疹病毒分离株之间的核苷酸同源性为98.40%-98.90%,与H1基因型参考株的核苷酸同源性为97.30%-97.80%;B3基因型麻疹病毒分离株之间的核苷酸同源性为99.30%-100%,与B3基因型参考株的核苷酸同源性为97.10%-97.60%。结论 2016-2018年湖北省麻疹病毒优势流行株仍为中国本土H1基因型，2019年首次发现B3基因型，2021年仅检测到疫苗株A基因型。需继续加强麻疹病毒基因型监测，及时发现和阻断输入性麻疹传播。     

汕头市澄海区一起麻疹暴发的血清学和分子生物学研究

[目的]分析汕头市区一起麻疹暴发的原因。[方法]收集2005年9月麻疹暴发流行资料,采集病例急性期血清和咽拭子各8份,进行血清学检测、病毒分离和中和实验、通过RT-PCR扩增麻疹N基因碳末端589个核苷酸进行测序。[结果]麻疹暴发流行累计发病23例,8份血清的麻疹IgM抗体阳性7份(87.5%),8份咽拭子仅分离出1株麻疹病毒,该流行株不同于S-191疫苗株,鉴定为H1基因型;中和实验表明麻疹疫苗免疫后血清能够中和该野病毒,但其中和滴度比中和疫苗株低2～4倍。[结论]麻疹H1基因型野病毒是此次暴发的病源,人群抗体水平低下是暴发的根本原因。     

2013年-2014年北京市流行麻疹病毒基因型特征分析

目的了解北京市2013年-2014年流行的麻疹病毒基因型特征和变异趋势,为开展麻疹分子生物学监测提供科学依据。方法采用实时多重荧光RT-PCR方法进行麻疹病毒核酸鉴定,鉴定阳性标本采用RT-PCR方法扩增麻疹病毒N基因C末端450个核苷酸片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定。分析基因型流行特征,并同WHO麻疹病毒基因型代表株、我国H1基因型代表株、疫苗株构建基因进化树进行核苷酸、氨基酸的同源性分析。结果 1 347株麻疹病毒基因型分别为1 303株H1a基因型,37株为D8基因型,5株为A基因型,1株D9基因型,1株B3基因型。H1a基因型麻疹病毒在全市16个县区均有流行。1 303株H1a基因型核苷酸同源性为99.7%~100.0%,氨基酸同源性为97.3%~100.0%。结论 2013年-2014年北京流行的麻疹病毒主要为H1基因型,以H1a为优势亚型,发现3种新的基因型输入。     

引起江苏省2005～2006年麻疹流行的野病毒基因特征

目的 了解引起江苏省2005～2006年麻疹流行的麻疹野病毒基因特征,为制定消除麻疹策略提供依据.方法 2005～2006年收集了324例来自江苏省7个设区市的麻疹急性期病人咽拭子标本,用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞)从5个市分离到麻疹病毒99株.用逆转录-聚合酶链反应从99株麻疹病毒中扩增出核蛋白(N)基因31'端676个核苷酸片段,并对该片段进行序列测定和分析,构建基因亲缘关系树.结果 通过N基因3'端450个核苷酸片段的序列测定和分析证明,99株均为麻疹病毒H1基因型中的H1a基因亚型,H1a基因亚型中有2个小分支.99株麻疹病毒间450个核苷酸差异率为0%～4.7%;与A基因型代表株Edmonston株的核苷酸差异率为6.7%～9.8%;与H2基因型代表株China94-1的核苷酸差异率为6.7%～9.6%.结论 H1a基因亚型麻疹病毒在江苏省广泛流行,为绝对优势基因亚型,H1a亚型2个小分支中的很多不同或相同的病毒株引起的多个传播链造成省内各市的麻疹广泛传播.     

中国2005年流行麻疹野病毒H1a基因亚型血凝素基因和氨基酸特征分析

目的研究2005年引起中国麻疹流行的麻疹野病毒H1a基因亚型血凝素蛋白(HA)核苷酸和氨基酸特征及变异程度。方法从各省疾病预防控制中心麻疹实验室送检的2005年麻疹野病毒中选取4个H1a基因亚型代表株,并选取2004年河北省流行的1个H1a基因亚型代表株做对比分析。提取麻疹病毒核糖核酸(RNA),用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出核蛋白(N)羧基末端(450nt)和HA蛋白编码区基因片段(1 854nt),并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,与GenBank收录的1993~1994年中国优势基因型代表株、中国疫苗株沪191(S191)和长47(C47)HA蛋白和核蛋白羧基末端构建基因亲缘性关系树,分析HA蛋白基因的核苷酸/氨基酸的同源性。结果5株分离株全部为H1基因型的H1a亚型。5株H1a亚型毒株的HA与中国疫苗株S191相比有94~96个核苷酸差异,28~30个氨基酸差异;与C47有94~98个核苷酸差异,28~30个氨基酸差异。5株H1a亚型HA第719位核苷酸由G→A,导致第240位的丝氨酸(S)突变成天门酰胺(N),致使HA蛋白的1个N型糖基化位点丢失。结论该研究表明,麻疹野病毒H1a亚型株的HA蛋白的核苷酸/氨基酸,与1993~1994年流行株相比未发生明显变异。但与S191和C47相比有较大基因变异,丢失了个别中和抗原位点,但大部分中和抗原位点未发生变异。中国使用的疫苗对现流行的麻疹野病毒仍然具有保护作用,但初免成功后是否绝大部分人具有终身保护还有待进一步病毒学和流行病学论证。2005年麻疹流行与病毒本身的基因突变无明显关联,而是由易感人群的积累和人口流动导致广泛的传播所致。     

2006年长春市儿童野生型麻疹病毒基因序列分析

目的:研究吉林省长春市0~12周岁儿童野生型麻疹病毒的基因型别及核蛋白(N)基因序列特征,探讨控制麻疹发生的措施。方法:采用Vero/SLAM细胞分离培养麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从分离的麻疹病毒中扩增核蛋白(N)基因羧基端450个核苷酸片段(bp)并进行核苷酸测序分析,对基因库中麻疹病毒的22个代表株基因序列的同源性进行比较。结果:分离得到9株野生型麻疹病毒,N基因与H1基因型代表株相比同源性为98.3%。结论:吉林省长春市麻疹流行株属于H1基因型。     

浙江省1999—2011年麻疹流行株全基因组序列分析

目的 从全基因组层面探讨浙江省1999-2011年麻疹病毒的变异及其与疫苗株S191之间的差异.方法 选取浙江省不同年份分离的麻疹病毒流行株9株,采用RT-PCR方法扩增全基因组序列,并与疫苗株S191及国外主要流行基因型毒株进行全序列比较分析.结果 1999-2011年浙江麻疹流行株间的氨基酸同源性为98.77％ ～ 99.89％,麻疹病毒尚未受到明显的正向压力,各基因的变异仍属随机漂移.与疫苗株S191相比,两者间氨基酸的同源性仅为96.63％～ 98.16％,分别存在135～159个氨基酸的改变,其中共同的氨基酸变异位点113个,导致5个糖基化位点的变异.在核苷酸水平上,N基因的平均变异率最大(5.5％);而在氨基酸水平上,P蛋白的平均变异率最大(7.7％).此外,在全基因组序列上,浙江流行株与各国疫苗株的遗传距离均大于D4、B3基因型流行株与各国疫苗组的遗传距离(t=9.76,P＜0.05;t=-12.39,P＜0.05).结论 浙江麻疹流行株与疫苗株S 191在各基因上均产生了较大的差异,现行疫苗株与H基因型流行株之间的差异远大于疫苗株与国外优势流行株(D4、B(1)基因型)之间的差异,应密切关注这一变化趋势,及早研究后备麻疹免疫株.     

麻疹病毒分离及现行疫苗免疫效果分析

目的 分离麻疹流行病毒,与现用麻疹减毒活疫苗(Measles Vaccine,Live;MV)株病毒进行基因比较和交叉中和试验,以分析现行MV的免疫保护性.方法 由江苏省疾病预防控制中心提供2005年麻疹局部流行时急性期病人的咽拭子标本,用Veto/Slam细胞分离病毒,同时提取分离病毒和疫苗病毒核糖核酸,用逆转录-聚合酶链反应扩增血凝素蛋白(H)和核蛋白(N)基因,并进行核苷酸测序分析;另用MV免疫者的血清和麻疹病人的恢复期血清与分离野毒株和疫苗株进行交叉中和试验.结果 一次成功分离到4株麻疹野病毒,对其中1株(JS/26-05)作基因测序,N基因进化树分析为H1基因型;与疫苗株病毒基因比较,H基因核苷酸同源性为94.8%,氨基酸同源性为95.1%;N基因核苷酸同源性为94.4%,氨基酸同源性为96.2%,但碳末端150个氨基酸的同源性为90.0%.疫苗免疫者产生的中和抗体水平低于自然感染者,两者的抗体几何平均滴度分别为:针对野毒株1:9.56和1:22.40,针对疫苗株1:40.05和1:65.41,相差2.9～4.2倍;疫苗免疫产生的抗体中和野毒株的能力平均低于疫苗株4.2倍.结论 2005年江苏省局部地区麻疹流行时分离的病毒为H1基因型,麻疹分离株与现用疫苗株在基因水平上的差异明显,现用MV的免疫保护作用有所减弱,可能已影响到MV的免疫持久性.     

福建省2株麻疹病毒的分离与鉴定

[目的] 了解福建省目前流行的麻疹野病毒的型别与抗原性。[方法]细胞培养分离病毒；PT-PCR扩增病毒N基因碳末端450个核苷酸，并对其产物测定基因序列以定型；细胞中和试验进行抗原性分析。[结果]B95a细胞分离到了2株麻疹野病毒，Vero细胞未分离到，表明B95a细胞敏感性较高；分离到的病毒经PT-PCR及基因序列测定证实为麻疹野病毒H1基因型(中国流行的优势株)；分离的野病毒株与疫苗株同时进行血清中和试验显示：目前使用的疫苗产生的抗体对流行的野病毒仍具有中和作用，但中和滴度低于疫苗株。[结论]在保证生物安全的前提下，B95a细胞是目前分离麻疹病毒的首选细胞；新变异来的麻疹H1基因型也在我省流行，且目前使用的疫苗所产生的抗体，在体外中和野毒株的滴度低于疫苗株。     

宁波地区2004～2008年麻疹野病毒分离株基因特征分析

目的了解宁波地区流行的麻疹野病毒基因型别和特性。方法对2004～2008年宁波地区分离到的麻疹野病毒,采用逆转录-聚合酶链反应扩增麻疹病毒核蛋白基因碳末端456个核苷酸并进行序列测定,与基因库中麻疹病毒各基因型参考株比较并分析毒株变异情况。结果2004～2008年共分离到麻疹病毒22株,均属H1基因型,与H1型参考株China93-7的核苷酸同源性为97.1%～98.5%,与中国疫苗株沪191的核苷酸/氨基酸差异为8.0%～9.5%/9.8%～14.5%;其中16株与H1a参考株China93-2的核苷酸同源性为98.2%～99.6%,属于H1a亚型;6株与H1b参考株China94-7的核苷酸同源性为98.5%～98.9%,属于H1b亚型。结论宁波地区2004～2008年流行的麻疹病毒均为H1基因型,且以H1a亚型为主,亦存在H1b亚型。     

13株中国麻疹野病毒血溶素蛋白基因特征分析

目的分析1999～2003年中国（未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同）流行的H,基因型麻疹野病毒代表株血溶素蛋白（Fusion Protein,F）基因的分子特征。方法从1999～2003年中国分离的麻疹野病毒株中,选取13株H1基因型代表株,包括H1a基因亚型麻疹野病毒8株和H1b基因亚型麻疹野病毒5株。使用逆转录一聚合酶链反应扩增病毒的F基因全长,并进行核苷酸序列测定,同时与中国疫苗株及其它国家的A、D2、D6、D7、E基因型参考株进行序列比对及基因亲缘性关系分析。结果1999～2003年13株中国流行麻疹野病毒代表株中,核苷酸同源性为98．1％～99．0％,氨基酸同源性为98．1％～100．0％,与中国疫苗株沪191相比,其核苷酸同源性为95．7％～96．2％,氨基酸同源性为96．9％～97．2％;而与其它基因型相比,核苷酸同源性为94．4％～96．2％。F基因3个糖基化位点（第32、64、70位氨基酸）、对病毒融合功能起着重要作用的第112位精氨酸、第195位亮氨酸未发生改变。结论1999～2003年中国流行的H1基因型麻疹野病毒的F基因无明显差异,F蛋白上已知的重要功能位点未发生变异,推测中国流行的麻疹野病毒F蛋白的结构和功能未发生较大改变,但由于F蛋白是重要的功能蛋白,对F蛋白核苷酸和氨基酸的变异规律进行常规监测,对了解麻疹野病毒流行特点及其遗传变异规律具有重要意义。     

新疆维吾尔自治区2003～2004年麻疹野病毒分离株基因特征分析

目的了解新疆维吾尔自治区流行的麻疹野病毒的基因型或亚型特征,为消除麻疹提供科学依据。方法对2003~2004年用健康产婴脐血单个核细胞分离的麻疹野病毒进行分子流行病学分析。采用逆转录-聚合酶链反应对麻疹病毒核蛋白(N)基因羧基(COOH)末端676个核苷酸片段进行扩增,并测定扩增产物的核苷酸序列。通过分析COOH末端450个核苷酸序列构建基因亲缘关系树,并分析毒株变异情况。结果2003年和2004年各分离麻疹病毒3株(XJ03-26、XJ03-27、XJ03-74;XJ04-146、XJ04-150、XJ04-152),除XJ03-26株与沪191株核苷酸差异<1%,属疫苗相关株A基因型外,其余5株均为H1基因型。其中XJ03-27、XJ03-74、XJ04-150、XJ04-152与H1a参考株China9322的核苷酸差异为0.5%~1.6%,同属于H1a亚型;XJ04-146与H1b参考株China9475的核苷酸同源性为98.7%,属于H1b亚型。4株H1a毒株分属两组(即XJ03-27与XJ04-150,XJ03-74与XJ04-152),每组内毒株N基因COOH末端450个核苷酸序列几近相同或无差异。结论新疆维吾尔自治区2003~2004年流行的麻疹病毒以H1a亚型为主,亦存在H1b亚型。新疆维吾尔自治区流行的麻疹野病毒间存在较大基因变异,不同年份存在相同麻疹病毒的持续循环传播,需加强麻疹疫苗的预防接种及病毒学监测。     

2012-2015年湖北省麻疹病毒基因测定分析

目的：通过对2012—2015年湖北省麻疹病毒流行株的基因型别和特征进行分析,了解湖北省麻疹病毒流行株基因特点,为制定消除麻疹策略提供依据。方法选取2012—2015年湖北省麻疹病例咽拭子标本126份,提取病毒核酸,对其中86份核酸阳性标本通过RT－PCR扩增麻疹病毒N基因并进行序列测定,对病毒基因型别进行分析。结果通过基因测序定型发现2012—2015年湖北省麻疹病毒基因型主要为 H1a亚型,仅发现一例 D8亚型,2例麻疹病毒疫苗株 A 基因。结论2012—2015年湖北省麻疹病毒主要为H1a基因亚型,首次发现一例麻疹D8基因亚型,存在少数疫苗相关病例。建议进一步加强麻疹病毒基因型别监测,实时了解全省麻疹病毒基因型别变化特征,为中国消除麻疹行动计划提供科学依据。     

1995～1997年中国部分地区麻疹病毒流行株基因型分析

本文报道以反转录二步多聚酶链反应方法 (RT -PCR)直接测定麻疹病人唾液、尿液标本中的麻疹病毒 (MV)血凝基因 (H)、核衣壳基因 (N)。以RT -PCR产物纯化后进行MV 4 50ntH、2 82ntN基因核苷酸片段测序分析 ,测序结果一致表明 ,1995～ 1997年期间中国部分地区MV流行株存在两种基因型。其中一种基因型只发现 1株 ,与EDw54株相同 ,另一种基因型占流行株的绝大多数 (称新基因型 ) ,与其它国家以前报道的MV流行株基因型的N基因最大差异为 15.4 %与EDw54、疫苗株相差8.8% ;H基因最大差异是 10 .8%。     

New measles genotype, Uganda

We report the first genetic characterization of wildtype measles viruses from Uganda. Thirty-six virus isolates from outbreaks in 6 districts were analyzed from 2000 to 2002. Analyses of sequences of the nucleoprotein (N) and hemagglutinin (H) genes showed that the Ugandan isolates were all closely related, and phylogenetic analysis indicated that these viruses were members of a unique group within clade D. Sequences of the Ugandan viruses were not closely related to any of the World Health Organization reference sequences representing the 22 currently recognized genotypes. The minimum nucleotide divergence between the Ugandan viruses and the most closely related reference strain, genotype D2, was 3.1% for the N gene and 2.6% for the H gene. Therefore, Ugandan viruses should be considered a new, proposed genotype (d10). This new sequence information will expand the utility of molecular epidemiologic techniques for describing measles transmission patterns in eastern Africa.     

2005年吉林省野型麻疹病毒的基因特征分析

目的了解吉林省麻疹病毒流行株的基因型别,探讨控制麻疹发生的措施。方法在2005年1—12月采集吉林省麻疹暴发和散发病人的咽喉拭子和尿液标本共72份,用CDW150细胞分离到麻疹病毒9株。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）从麻疹病毒中扩增出核蛋白（N）基因羧基端450个核苷酸片段,进行核苷酸序列分析和基因分型。结果9株麻疹病毒均属H。基因型,其中Hla7株,Hlb2株,H1a和H1b在450个核苷酸片段中的差异为2．0％～3．5％。结论H1基因型是吉林省麻疹病毒的优势流行株,是导致2005年吉林省麻疹局部暴发和散发的主要病原体。