河南省两株狂犬病毒核蛋白和糖蛋白基因的序列分析

目的分析河南省2株狂犬病毒核蛋白及糖蛋白的基因序列,了解狂犬病毒街毒株与人用及兽用狂犬病疫苗株间的差异。方法以免疫荧光法检测2004年采自河南省的100只犬脑标本,取阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒。以RT-PCR法扩增病毒核蛋白及糖蛋白全基因,克隆测序后进行遗传学分析。结果分离到2株狂犬病毒,分别命名为Henan Hb1与Henan Sq1,序列分析表明2株病毒均为基因1型狂犬病毒,2株病毒的N基因与G基因核苷酸的同源性分别为99.3%和98.9%,氨基酸的同源性分别为98.7%和98.4%。2株病毒与CTN疫苗株同源性较高,N基因与G基因的核苷酸同源性分别为89.1%和85.6%～85.7%,氨基酸同源性分别为97.6%～98.0%和92.3%。与已知的基因1型狂犬病毒相比,2株病毒与印度尼西亚从犬中分离到的2株病毒同源性最高,N基因与G基因核苷酸同源性分别为92.1%～93.2%和91.9%～92.1%,氨基酸同源性分别为97.5%～98.6%和96.0%～96.2%。Henan Sq1株病毒在糖蛋白关键的毒力位点333位由W替换了R。系统发育分析表明Henan Hb1与Henan Sq1与印度尼西亚株、疫苗株CTN、中国分离株,以及泰国与马来西亚分离株进化关系最近,而与疫苗株3aG、PV、ERA及攻击毒CVS株等进化关系较远。结论2株狂犬病毒是基因1型狂犬病毒,但无论是N基因还是G基因的核苷酸序列,以及推导出来的氨基酸序列与已知的1型狂犬病毒株及疫苗株均有一定的差异。     

湖南省湘潭市2004-2010年狂犬病流行病学研究

目的分析湘潭市狂犬病流行病学特征并探讨狂犬病毒N基因的遗传进化关系,为狂犬病的防控提供科学依据。方法收集2004-2010年湘潭市狂犬病病例资料进行描述性流行病学分析,用巢式RT-PCR法从家犬脑组织标本内获得N基因并进行测序,并构建系统发生树进行遗传特征分析。结果 2004-2010年共报告91例人间狂犬病例,97.80%被犬所伤,平均潜伏期为44.18 d。共采集412份犬脑组织标本,经巢式RT-PCR确证6份标本核酸阳性,感染率为1.46%。测定3株狂犬病毒株的N基因序列,均为基因Ⅰ型,毒株间的核苷酸同源性为97.2%~98.1%,构建系统发生树属于同一组群,其中与湖南省内邵阳、湘西州、外省如贵州、江苏、河南、浙江省等分离的毒株表现出较近的亲缘关系,且与疫苗株CTN株有较近的亲缘关系。结论湘潭市仍然是狂犬病高发区,引起的病毒不是新型病毒,应做好综合防控措施遏制狂犬病疫情的发生。     

狂犬病病毒浙江街毒株糖蛋白基因序列分析

目的 测定狂犬病病毒浙江株(鼬獾源和犬源)糖蛋白(GP)基因组全序列,从分子水平比较狂犬病病毒浙江株与其他地区代表性街毒株和疫苗株GP之间的差异.方法 乳鼠接种分离狂犬病病毒,RT-PCR反应测定狂犬病病毒浙江株GP基因核苷酸序列,并进行序列和编码蛋白的比较分析.结果测序获得浙江5株鼬獾源狂犬病病毒和9株犬源狂犬病病毒GP基因序列,全长1575个核苷酸,编码524个氨基酸.浙江病毒株与其他地区街毒株、疫苗株核苷酸和氨基酸序列相似性在82.3%～99.9%和85.1%～99.8%之间,种系分析显示浙汀株均为基因1型,GP编码蛋白无重组,主要抗原位点未出现较大的变异.结论 对GP基因一级结构综合分析表明,在某些区域存在优势抗原表位的可能性较大,可能出现潜在的蛋白质抗原决定簇,浙江株GP基因变异较小,与国内其他地区流行的代表性街毒株相似,但高于其他疫苗株,在基因结构及种系进化关系上存在一定的距离.     

广西玉林市2005—2012年狂犬病病原学监测及病毒N基因特征分析

目的分析2005—2012年广西玉林市狂犬病病原学监测结果及病毒N基因遗传变异特征,为狂犬病防控提供科学依据。方法 2005—2012年在广西玉林市采集犬脑组织及临床诊断人狂犬病病例的唾液进行病原学检测,检测阳性标本进行N基因核苷酸序列测定、同源性比较和种系发生分析。结果共采集、检测外观健康犬脑组织728份、临床诊断人狂犬病病例唾液33份,RT-PCR检测阳性率分别为0.96%(7/728)和51.52%(17/33)。获得5条犬源、6条人源狂犬病病毒株N基因全序列。该11条序列之间的核苷酸同源性为94.7%~100.0%,与广西以往分离株GX01的核苷酸序列的同源性为94.5%~98.4%,与疫苗株CTN株的同源性为94.6%~99.7%。进化树分析显示,犬源株和人源株病毒N基因亲缘进化关系很近,处于同一分支,都属于基因Ⅰ型狂犬病病毒。结论从病原学和病毒分子水平证实玉林市外观健康犬携带狂犬病毒及17例临床诊断病例为确诊病例,其病原为狂犬病病毒基因I型,阳性带毒犬的流动是造成本病传播和扩散的主要因素,也是造成该地区疫情高发的重要原因之一。     

贵州省安龙县21例人狂犬病的流行病学调查

目的 分析2004年2月8日至5月1日在贵州省安龙县发生的21例狂犬病患者,探讨局部地区爆发性流行的因素。方法 对21例狂犬病患者进行个案调查,用间接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原。结果 在近3个月的时间内,安龙县共发生21例狂犬病,发病率为5.12/10万。在21例狂犬病患者中有20例被犬所伤,1例为猫所伤;全部病例平均潜伏期为36.52天,但潜伏期<15天的病例有6例;21例病例中17例未进行正确的伤口处理,9例接种疫苗,其中仅3例为及时接种。所有21例没有注射抗狂犬病毒血清或人抗狂犬病毒免疫球蛋白。在疫点周围采集的73只犬脑组织中,9只犬脑组织狂犬病病毒抗原为阳性,阳性率13.33％。结论 犬饲养量大,犬的病毒携带率高,伤后处理不及时不规范,疫苗接种率低可能是安龙县狂犬病发病爆发性流行的主要原因。     

1株驴源狂犬病毒的分离鉴定及N, G基因序列分析

目的 对武汉市汉南区新分离的1株驴源狂犬病毒(RABV)街毒株的N、G基因进行遗传学分析,比较其与近年来湖北省及周边地区分离的代表性街毒株以及人用和兽用狂犬病疫苗病毒株之间的差异.方法 以直接免疫荧光法检测驴脑组织中的RABV,并将驴脑海马组织研磨后接种乳鼠,观察其发病情况,采用双抗体夹心ELISA法检测驴脑组织及发病乳鼠脑组织悬液中的RABV,然后提取发病乳鼠脑组织RNA,利用RT-PCR扩增RABV的N、G基因,测序后进行遗传学分析.结果 在驴脑组织及发病乳鼠脑组织中检出RABV,该病毒株与近年来湖北省及周边地区分离的代表性街毒株以及国内外人用和兽用狂犬病疫苗病毒株相比,N、G基因核苷酸序列的同源性分别为85.7％～99.1％和82.2％～99.7％,推导的氨基酸序列同源性分别为95.6％-99.8％和87.8％～99.4％,与国内分离街毒株核苷酸和氨基酸的同源性高于疫苗株,且与国内疫苗株CTN-181的同源性要高于国外疫苗株.结论 该病毒株鉴定为驴源RABV,与湖北省及周边地区分离的代表性街毒株及中国人用狂犬病疫苗株CTN-181处于同一个亚群,有较近的系统进化关系.     

湖南省2008-2009年狂犬病病原学监测及病毒基因特征分析

目的 分析2008-2009年湖南省狂犬病病原学监测结果及新分离病毒的N基因分子特征.方法 采用直接免疫荧光法(DFA)、巢式PCR检测狂犬病监测标本,阳性标本应用ABI3730测序仪对N基因进行全序列测序;运用生物信息学方法分析N基因特征及序列同源性,构建系统进化树,分析新分离病毒株遗传特征并与以往分离株比较.结果 1451份监测犬脑组织标本中DFA初筛阳性31份,阳性率为2.14％;31份DFA阳性标本经巢式PCR复核,17份阳性,阳性率为1.17％;巢式PCR检测疑似狂犬病病例唾液、脑脊液、血清及尿液标本56份,3份阳性,阳性率为5.36％;新分离的阳性株与巴斯德株进行N基因序列比较,核苷酸和氨基酸同源性均在87.2％～ 87.9％之间;成功构建系统进化树,新分离的20株病毒全部属于基因Ⅰ型.新分离病毒株与湖南省内、邻省和国际株比较存在不同的亲缘关系.结论 湖南省狂犬病病例及犬携带病毒的情况较为稳定,流行株仍为基因Ⅰ型,未发生变异.     

浙江省野生动物鼬獾狂犬病毒全基因组序列测定分析

目的 测定浙江省分离的2株野生动物鼬獾狂犬病毒株全基因组序列,从分子水平进行遗传变异特征分析,了解狂犬病毒在浙江省的流行和变异情况.方法 RT-PCR测定鼬獾狂犬病毒株全基因组核苷酸序列,并进行基因序列和编码蛋白相似性比较及种系发生分析.结果 测序获得2株鼬獾狂犬病毒全基因组核苷酸序列信息:基因组全长11 923 nts,leader长58 nts,由5个编码区组成:NP(1353 nts)、PP(894 nts)、MP(609 nts)、GP(1575 nts)、LP(6386 nts),N-P-M-G间隔序列长2、5、5 nts;G-L基因间伪基因ψ长423 nts;trailer长70 nts.核酸BLAST及多序列比对显示,浙江省鼬獾狂犬病毒株全基因组序列的组成和结构符合弹状病毒科狂犬病毒属特征;鼬獾病毒株负链RNA基因组5个基因编码氨基酸的长度没有变异,编码区基因没有发生重组,编码蛋白仅表现较少的序列变化,多数只发生碱基的替代;中国病毒株之间特别是同种动物狂犬病毒之间各个基因区域核苷酸与氨基酸序列相似性最高,鼬獾狂犬病毒基因组序列相似性在氨基酸水平明显高于核苷酸水平,蛋白质编码基因的核苷酸变异大多属于同义突变.结论 鼬獾狂犬病毒与研究中选择的代表性疫苗株或者街毒株的变异位点和变异类型相似,多序列相似性比较和N基因种系发生分析显示,鼬獾狂犬病毒均属于基因1型,具有中国地域性特点,2株野生动物鼬獾狂犬病毒极有可能是存在于自然界中固有的街毒株.     

浙江省不同宿主来源狂犬病病毒N基因分子特征分析

目的 测定浙江省不同宿主（人、鼬獾、犬）来源的狂犬病病毒街毒株N基因序列, 分析病毒遗传变异特征及其与流行的关系。方法 采用直接免疫荧光试验和反转录聚合酶链式反应检测狂犬病病毒阳性标本N基因核苷酸序列, 利用生物信息学软件分析基因序列和编码蛋白。结果 共获得浙江省2 个人源、5 个鼬獾源和11 个犬源狂犬病病毒街毒株N基因核苷酸序列, 18 个核苷酸和氨基酸序列同源性在89.7%～100.0%和98.4%～100.0%, N蛋白一级结构上绝大部分为稳定区域, 编码基因的核苷酸变异多为无义突变, 系统发育分析显示18 个街毒株均属于传统的基因1 型。结论 浙江省不同宿主来源狂犬病病毒的流行具有地域性特征, 同类宿主动物病毒株或来自同一县域/相邻县域的毒株在地理位置上最为近缘, 但人源株病毒更具有复杂性。浙江省狂犬病病毒街毒株的流行具有通过犬向鼬獾和人传播, 并在犬、鼬獾中跨区域循环传播的特点。     

云南省保山市人间狂犬病调查及病毒分子生物学特征分析

目的 了解云南省保山市发生2例狂犬病患者的流行病学特点,根据病原分子生物学特征分析可能的传染来源.方法 采用狂犬病个案调查表进行流行病学调查,采集狂犬病死者脑组织标本,用直接免疫荧光试验(DFA)检测狂犬病病毒抗原,用RT-PCR法检测狂犬病病毒核酸,测定狂犬病病毒P、M和N基因全序列并根据其同源性比较及系统进化树进行分子流行病学分析.结果2006年7月保山市隆阳区发生1例人间狂犬病,2007年4月腾冲县发生1例狂犬病.2例患者犬伤暴露程度均为Ⅲ度.2例死亡病例均采集到脑组织(编号为CYN0601H和CYN0701H),经DFA和RT-PCR两种实验室方法检测确诊为狂犬病病毒阳性.CYN0601H和CYN0701H与国内外狂犬病病毒的P、M和N基因核苷酸和推导氨基酸序列同源性分析显示,CYN0601H和CYN0701H与泰国分离株的同源性最高.系统进化分析显示,2株病毒标本亲缘关系很近,同属于狂犬病病毒基因1型,且与泰国病毒株有较近的亲缘关系.结论从病原学和病毒分子水平证实云南省保山市2例患者均为狂犬病,保山市狂犬病病毒流行株可能为境外传人,应加强云南省边境地区狂犬病防制工作.     

Genetic analysis of dog rabies viruses circulating in Bangkok.

The genetic diversity of the rabies virus glycoprotein (G) gene isolated from individual rabid dogs (inter-hosts) and within a single infected dog (intra-host) has been analyzed in an effort to better understand selective pressures and population shifts among rabies viruses circulating in Bangkok. Comparison of individual master sequences among inter-hosts revealed that the dog virus isolates circulating in Bangkok were phylogenetically closely related. The ectodomain of the glycoprotein was highly conserved among the virus isolates. Furthermore, the genetic diversity of the G gene within an intra-host was assessed by comparing the cloned sequences in the virus population. The comparisons revealed that rabies virus circulating in an intra-host consisted of closely related heterogenous populations with minor substitutions at nucleotide (0.19%) and amino acid levels.     

浙江省慈溪市犬类狂犬病病毒携带状况调查及变异研究

目的研究犬类狂犬病病毒的携带状况及变异,为正确有效控制狂犬病疫情提供依据。方法根据狂犬病疫情分布,用分层采样法,采集相关地区犬脑51只,用免疫荧光法、夹心酶联吸附法、小鼠颅内接种试验法及RT-PCR进行检测。分离狂犬病病毒并进行N基因测序。结果在流浪犬只中发现狂犬病毒株(命名CXs)。流浪犬带毒率7.69%,CXs与疫苗株和固定毒株的NJ进化树比较,发现与WZO(H)株100%同源,与狂犬病毒固定毒株相比更接近CTN株(该地区使用的疫苗株)。结论当前使用的狂犬疫苗用于预防狂犬病是可靠的。经狂犬病流行特征和暴露后免疫预防处理分析,加强犬只的管理、免疫,暴露后采用规范清创,正确使用狂犬疫苗,合理使用狂犬免疫球蛋白(或血清)仍是当前防治狂犬病需遵循的原则。     

墨江县1例狂犬病病例的流行病学调查

[目的]分析墨江县首例人间狂犬病病例的流行病学特征,为制定墨江县狂犬病防控策略和措施提供科学依据。[方法]对病例进行现场流行病学调查,分析疫情,对当地犬只密度进行调查,灭犬时取犬脑组织检测狂犬病病毒抗原。[结果]墨江县2010年5月报告人间狂犬病1例,已死亡,潜伏期31 d,病程4 d。近年来全县犬只密度不断增高,全县平均每1.24户人家有1只犬,每5.69个人养有1只犬;土栋组平均每户1.6只犬,每3.2个人养有1只犬。50份犬脑组织经直接免疫荧光试验检测,其中3份狂犬病病毒抗原阳性,阳性率达6%。[结论墨江县狂犬病防治形势严峻,加强犬只管理、规范进行暴露后处置、及时接种狂犬疫苗和免疫球蛋白、健康教育是防治狂犬病的有效措施。建议将狂犬病暴露者免疫纳入医疗保险进行报销,避免出现因免疫费用太贵而不能及时进行暴露后免疫的现象     

江苏省盐城市1999-2008年狂犬病流行病学研究

目的 分析盐城市狂犬病的流行病学特征.方法 收集狂犬病疫情资料,开展犬密度、犬免疫率、犬伤人率及狂犬病处置门诊工作调查;检测犬脑中狂犬病毒并进行相关分子生物学研究.结果 1999-2008年盐城市共报告135例人狂犬病,形成自1958年以来的第二次流行高峰,其中2003年报告40例狂犬病.135例患者中114例为农民.监测点调查发现盐城市犬密度为每100人中约豢养犬3～6只,每年平均100只犬伤人6.37人次,2008年犬的免疫率只有20%,暴露人群狂犬病疫苗接种率为77%.狂犬病处置门诊中抗狂犬病血清(球蛋白)的使用率仅为5%～10%.在采集108份犬脑标本中,4份狂犬病毒阳性,扩增、测序并分析病毒的N和G基因显示,这些病毒为基因Ⅰ型狂犬病毒,与目前使用的狂犬疫苗株CTN同源性最高.结论 盐城市人间狂犬病的持续流行与当地犬的饲养量大、免疫率低以及农村地区群众受动物伤害后的处理不及时规范及处理率低密切相关.     

2007～2008年高州市人狂犬病暴露与犬携带狂犬病病毒情况调查

[目的]了解高州市外观健康犬只狂犬病病毒携带情况和人群狂犬病暴露与处置情况,为提出狂犬病防制对策提供依据。[方法]收集2007年高州市犬只饲养与动物伤人资料,对2008年高州市某乡小学205名学生家长进行狂犬病知识与犬伤情况问卷调查,2008年7～9月在市场采集健康犬脑和及唾液腺检测狂犬病病毒。[结果]高州市2007年动物伤人12029例,其中被犬所伤者占80.46%。调查205人,85.37%听说过狂犬病,其中66.34%知道狂犬病是被动物伤所致;61.46%的家里养犬。检测200只犬的标本,均为狂犬病病毒阴性。[结论]高州市家养犬只数量多,犬伤暴露状况严峻,居民狂犬病相关知识知晓率不高,尚未发现携带狂犬病病毒的犬只。     

上海市狂犬病流行病学分析及预防控制策略

目的 分析1950～2000年上海市狂犬病流行病学特征和评价预防控制策略。方法 开展病例流行病学调查,死亡病例病毒分离和间接荧光法测狂犬病毒IgG。结果 上海市狂犬病发病率1950年的1.98/10万为最高,1958～1988年无本地内源性感染病例,1989年至今共发生19例狂犬病病例。1985～2000年9月报告的20例狂犬病病例平均潜伏期66.37d,平均病程4.55d。其中705未经任何医疗预防处理。194例阳性犬咬伤者经及时全程医疗预防处理后,均未发病。结论 严格的犬类管理,及时伤口处理,注射狂犬病疫苗和抗狂犬病血清可以预防狂犬病和降低发病率。     

湖南省2006年狂犬病病原学监测

目的 了解湖南省狂犬病病毒的分布及来源,从病原学角度分析该省狂犬病疫情高发的原因.方法 采集湖南省人间狂犬病高、中、低疫区市售家犬脑组织及疑似病例、病犬标本,用直接免疫荧光法(DFA)和RT-PCR检测狂犬病病毒,RT-PCR阳性标本进行狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列分析. 结果 外观正常犬脑组织狂犬病病毒阳性率为2.78%,23株狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列同源性范围为88.8%～100.0%,表明主要足同义突变,病毒株在省内的分布无明显的地域性.系统发生树揭示狂犬病病毒在湖南省省内及与周边省份(贵州、湖北、广西)和其他省份(江苏、河南)间存在扩散循环传播.疑似病例的唾液、尿液、血液标本均未检出狂犬病病毒,皮肤标本检出1例阳性. 结论 湖南省内普遍存在狂犬病病毒感染犬只,省内与外省的病毒分离株有高度的亲缘关系,此为疫情高发的主要原因.