热原及从注射液中除热原的方法

近年来,人们已经从不同菌种分离出不同热原的纯品,对细菌性热原的产生、种类、组成、结构、性质、药理、各种热原的纯品提制方法及热原试验等,进行了多方面大量的研究工作,对热原的概念有了新的认识。本文着重介绍热原的组成、性质及从制剂中除热原的方法。     

POMC衍生肽与高温应激和热适应

本文对阿黑皮素原的有关问题及其衍生肽在热应激和热适应中的作用进行了简要回顾。     

洁消精去热原效果观察

热原反应是输液中出现危害最大的一种反应。多年来国内许多医疗保健机构对其发生原因及杜绝方法进行不懈努力 ,但热原反应时有发生。热源反应的原因是输注器具所带来的热原引起。因此 ,关键是将输注器具彻底浸泡、洗涤 ,避免输注器具被热原污染。1　原理热原主要由细菌产生 ,病毒极少。不同的细菌产生热原的种类性质及致热强度不同。革兰氏阴性杆菌产生的热原致热作用最强 ;革兰氏阳性杆菌次之 ;革兰氏阳性球菌产生最弱。活的细菌并不把内毒素排出菌体体外 ,当细菌死亡细胞膜破裂时释放出来。热原有耐热性 ,如加热 10 0℃不发生分解 ,12 0℃…     

多酶清洗剂去热原效果的研究

目的通过试验了解多酶清洗剂去热原的效果. 方法取使用后的玻璃注射器40付,随机分成两组;试验组用1:200的多酶清洗剂浸泡30 min,对照组用1%三效热原灭活剂浸泡1 h;两组水温相同,均为30℃;常规清洗后分别采样,进行热原检测. 结果试验组热原检测阴性结果占88%,对照组热原检测阴性结果占90%,P＞0.05,多酶清洗剂去热原效果与三效热原灭活剂相比差异无显著性. 结论多酶清洗剂可以去热原,可能与多酶能分解蛋白质、脂肪和糖有关,热原大多是革兰阴性菌的代谢产物,它是一种脂多糖,能被多酶所分解,但在使用过程中应注意浓度、水温和个人防护.     

两种去热原方法对可复用穿刺针灭菌前保存期限的研究

将8000个经细菌内毒素工作标准品（内毒素浓度为10EU／mL）污染的可复用穿刺针，各取一半分为化学法组和干烤法组去热原。分别于去热原后即时、2h、1d、2d、3d……，至70d进行鲎试验检测，每次各抽取一个针头，比较两组各时间段鲎试验阳性率。干烤法组穿刺针去热原70d内鲎试验检测均为阴性；而化学法组穿刺针去热原后即时检测阳性率为8．00％，2h后检测阳性率为24．00％，且随着时间的延长，阳性率逐渐升高。     

三效热原灭活剂的再利用及其应用效果分析

自2002年起,我们根据三效热原灭活剂的性能特点,将已使用过的,以前废弃的“二道”三效热原灭活剂溶液(去热原后的溶液)进行再利用,改革了传统的洗涤剂清洗方法,经质量检测,完全符合标准。1三效热原灭活剂的性能特点及再利用的方法三效热原灭活剂是一种新型高效浓缩型粉制剂,易溶于水,因具有消毒、去污、去热原三大作用,故名为“三效”,此溶剂使用安全、方便,无腐蚀性。本品水溶液中有效氯在500ppm时1 min能杀灭大肠埃希菌,750ppm时10 min可破坏HBsAg的抗原性,800ppm时1 h即可去除热原,达到卫生部《医院消毒供应室验收标准》中注射器洗涤质…     

建立可吸收医用膜细菌内毒素检查的新方法

[目的]检验粘克^TM可吸收医用膜是否符合生物材料的热原要求,建立粘克^TM可吸收医用膜的细菌内毒素检查方法。[方法]按《中华人民共和国药典》2005年版附录及GB/16175-1996规定,同时采用热原检查法和细菌内毒素检查法对粘克^TM可吸收医用膜72h的浸提液样品进行检测。[结果]该浸提液对细菌内毒检测不产生干扰,细菌内毒素试验结果为阴性。同时受试家兔体温升高均低于0.6℃,并且3只家兔体温升高总和低于1.4℃。[结论]粘克^TM可吸收医用膜不含引起机体发热的内毒素或致热原,符合医用生物材料的使用标准。用细菌内毒素检查法替代家兔热原法对该可吸收膜进行热原检查是可行的。     

改良终点法和原终点法在临床生化检验中的作用

目的对临床生化检验中改良终点法和原终点法的作用进行对比分析。方法临床对两种检验方法进行使用,对比分析改良终点法和原终点法之间的相关性以及线性浓度。结果在检测结果差异对比中,两种方法差异不明显,不具有统计学意义（P〉0.05）;改良终点在正常浓度下的批内CV和总CV测定要高于原终点法,在异常情况下低于原终点法,两者之间差异显著,具有统计学意义（P〈0.05）;改良终点法在高浓度测量下其线性浓度测定范围要大于原终点法,两者之间差异显著,具有统计学意义（P〈0.05）。结论在生化高浓度检验中,改良终点法应用优势明显高于原终点法,因此可以对改良终点法进行推广使用。     

无细胞百日咳原液细菌内毒素检查方法的探讨

无细胞百日咳原液主要用于吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风联合疫苗的配制，供儿童预防百日咳、白喉、破伤风之用。目前《中国生物制品规程》规定该原液用于配苗前必须进行兔法热原检查，本文就细菌内毒素检查法取代兔法热原检查法的可行性进行了实验研究，以建立一种检测无细胞百日咳原液热原的更简便、快速、灵敏、经济的方法。     

供应室玻璃注射器细菌内毒素检测分析

对2001年1月～2002年12月玻璃注射器内毒素检测结果进行分析,报道如下. 1材料与方法 1.1材料试验用注射器、试管(经有效氯＞0.1%消佳净浸泡初步去热原,250℃30 min特殊干烤箱干热去热原处理),去热原水、鲎试剂、对照用内毒素工作品.供应室高压灭菌后的玻璃注射器随机抽样3件.     

浸提温度对细菌内毒素影响的初步研究

目的:为热原实验和细菌内毒素实验确定合适的浸提温度。方法:采用《中国药典》2010年版(二部)附录检测细菌内毒素的动态浊度法,在不同浸提温度下测定细菌内毒素溶液中细菌内毒素的含量。结果:溶液中的细菌内毒素含量在121°C1h和80°C 1h的浸提条件下会大大减少,在37°C 1h的浸提条件下不会发生明显改变。结论:热原实验和细菌内毒素实验最适合的浸提温度是37°C。     

超声技术在器械清洗中的应用与效果

目的运用超声清洗技术清洗医疗器械,提高器械清洗质量。方法放大镜下检查器械洁净度与根据标准鲎试剂热原监测法,验证超声清洗去除热原的效果。结果超声清洗器械,对凹凸部和关节处全方位清洗无盲区,洁净度高,经超声清洗的注射器监测结果阴性。结论提高了器械清洗质量。     

蚕丝-PLGA编织支架生物安全性评价方法研究和应用

目的:通过动物实验评价蚕丝-PLGA细丝混合编织支架材料的生物安全性,为该材料临床应用提供理论依据。方法:通过捻拧编织蚕丝纤维-PLGA细丝混合支架,蚕丝:PLGA的质量比为2∶3。并制备该支架材料的浸提液。采用蚕丝纤维-PLGA细丝混合编织支架浸提液进行如下生物安全性的动物实验研究:急性全身毒性试验、皮内刺激试验、溶血试验、热原试验,并根据实验数据进行分析、评价。结果:蚕丝-PLGA混合编织支架材料为螺旋上升的绳索状,直径3.2 mm。支架材料无急性全身毒性作用,无皮内刺激反应。支架材料溶血率为1.17%,小于5%,不具溶血作用,符合生物材料溶血试验的要求。热原试验表明,3只实验兔体温升高数分别为0.4℃、0.2℃、0.3℃,均低于0.6℃,总值小于1.4℃,不具热原反应。结论:蚕丝-PLGA混合编织支架材料具有良好的生物相容性。符合相关生物安全性的评价标准。     

止血用ZSM-5沸石的生物相容性评价

目的：对ZSM-5沸石进行生物相容性评价，为开发其作为急救止血材料提供实验室依据。方法：参照我国医疗器械生物学评价标准和所推荐的生物学试验，对ZSM-5沸石进行体外细胞毒性、溶血、急性全身毒性、热原、皮内反应、致敏、微核试验研究。为了解沸石颗粒残留伤口内对机体的影响，行肌肉内植入试验研究。结果：ZSM-5沸石无明显细胞毒性；无溶血反应；急性全身毒性、热原、皮内反应、致敏试验结果均符合我国医疗器械生物学评价标准：沸石植入肌肉后12周局部组织有明显的炎症反应。结论：ZSM-5沸石细胞生物相容性好，但长期存留于创面内可引起炎症反应。     

枯痔注射液细菌内毒素检查方法研究

目的研究枯痔注射液的细菌内毒素检查法。方法依照《中国药典》2010年版(二部)附录方法和指导原则。结果枯痔注射液在最大有效稀释浓度下对鲎试剂反应无干扰作用。结论用细菌内毒素检查法对枯痔注射液进行热源检查是可行的。     

参麦注射液细菌内毒素检查方法的探讨

目的：考察参麦注射液细菌内毒素检查方法的可行性,加强对参麦注射液的质量监控。方法：采用细菌内毒素检查法,考察参麦注射液对鲎试剂的干扰试验,并检测供试品细菌内毒素的限度。结果：对样品进行1∶4稀释,用0.125 EU/mL鲎试剂无干扰,与家兔热源检查法结果一致。结论：与家兔法检查本品热原相比,细菌内毒素法可行性高,此方法避免了家兔热源检查法操作的复杂性,且灵敏度高、方便快捷。     

动态浊度法测定人凝血酶原复合物制品中细菌内毒素含量

[目的]建立动态浊度法定量测定人凝血酶原复合物制品中细菌内毒素含量的方法。[方法]通过对样品中定量添加标准内毒素的干扰试验,检测其回收率应在50%～200%范围。[结果]人凝血酶原复合物制品对鲎试验无干扰作用,动态浊度法定量检测结果与家兔实验结果基本一致。[结论]应用本方法定量测定人凝血酶原复合物制品中细菌内毒素含量是可行的。     

Monocyte-activation test to reliably measure the pyrogenic content of a vaccine: An in vitro pyrogen test to overcome in vivo limitations

Pyrogen content is one of the critical quality attributes impacting the safety of a product, and there is an increasing need for assays that can reliably measure this attribute in vaccines. The Limulus amebocyte lysate (LAL) assay and the rabbit pyrogen test (RPT) are the canonical animal-based pyrogen tests currently used to release vaccines; however, there are several drawbacks associated with these tests when applied to Bexsero, intrinsically pyrogenic product, containing a meningococcal Outer Membrane Vesicle component. While the RPT, as applied to Bexsero at its given dilution, ensures safe vaccine, it is highly variable and prone to false positive results. On the other hand, the LAL assay although quantitative, can detect only endotoxin pyrogens and is not sufficient for monitoring the safety of Bexsero, which contains both LPS and non-endotoxin pyrogens. Being aware of these limitations of the RPT and LAL when applied to Bexsero, the Monocyte Activation Test (MAT) which is sensitive to both endotoxin and non-endotoxin based pyrogens has been developed as an alternative pyrogen test. Here, the development and the validation of a MAT assay adapted from the European pharmacopoeia for Bexsero, is described. The MAT assay is then used for monitoring the safety and consistency of Bexsero vaccines at release, providing great advantages in terms of reduced variability with respect to RPT, reduction of animal use, in line with the 3Rs principle concerning the protection of animals and faster time to market. In addition the correlation of the MAT to the RPT has been demonstrated supporting the replacement of the in vivo method and the potential application of the assay to other intrinsically pyrogenic vaccines.     

Evaluation of the monocyte activation test for the safety testing of meningococcal B vaccine Bexsero: A collaborative study

The aim of this collaborative study was to evaluate the robustness of the monocyte activation test (MAT) for quantifying the pyrogenic content in the outer membrane vesicle (OMV)-containing vaccine Bexsero: the first meningococcal B vaccine to be licenced. We analysed datasets from 9 laboratories covering 15 test systems for 3 batches of Bexsero with higher, equivalent and lower activity relative to a reference lot in the MAT. Activity was measured in terms of relative pyrogen units (RPU) based on European Pharmacopoeia (Ph. Eur.) MAT Chapter 2.6.30 Method C: Reference Lot Comparison Test. We report that all 15 test systems were consistent in that they showed sample A to be the most active in the MAT; that 13 of 15 test systems had an accuracy of more than 80% and an overall geometric mean RPU of 1.03 with lower and upper 95% confidence limits of 0.97 and 1.09 respectively for a sample with an expected value of 1.00 RPU. We also report larger variability in the results for test systems involving cells from individual blood donations for sample A suggesting that there could be donor to donor differences in sensitivity to the vaccine constituents responsible for the higher activity of this batch. Overall, the consistency and accuracy of the MAT was remarkable given the range of test systems used by participants, all of which are permitted by the Ph. Eur. General MAT Chapter. This is important given the limitations of the rabbit pyrogen test for the control of pyrogenicity in general and particularly with products with intrinsic pyrogenicity such as Bexsero.