应用基因芯片筛选子痫前期信号转导差异表达基因

目的:建立子痫前期外周血基因表达谱,筛选子痫前期信号转导差异表达基因,探索其与子痫前期发病的关系。方法:应用基因芯片技术检测4例重度子痫前期和4例正常妊娠妇女外周血,获得子痫前期差异表达基因,了解子痫前期外周血信号转导相关基因的异常表达。结果:在子痫前期所检测的21 000个基因中,出现2次重复一致差异表达的基因195个,其中信号转导相关的差异表达基因32个,表达上调基因20个,下调基因12个。结论:成功建立子痫前期外周血基因表达谱,信号转导相关基因的差异表达可能是子痫前期发病的原因之一。     

运用基因芯片技术筛选亚慢性汞中毒大鼠肾脏差异表达基因

目的 运用基因芯片技术分析亚慢性汞中毒大鼠肾脏基因表达语的变化.方法 健康雄性SD大鼠20只随机分成染毒组和对照组,每组10只.染毒组皮下注射0.2 mg/kg氛化汞溶液2个月,建立亚慢性汞中毒肾脏损伤大鼠模型,用基因芯片方法筛选大鼠肾脏差异表达基因,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异表达基因厂结果筛选出亚慢性汞中毒肾脏差异表达基因385个,其中上调139个,下调246个.上调基因主要步及毒物异物应答、炎症应答、神经递质代谢、溶质体转运等功能;下调基因主要涉及基础物质代谢、细胞信号传导、免疫调节、细胞增殖、转录调节等功能基因.RT-PCR方法验证结果与芯片结果一致.结论　汞中毒肾脏损伤是多墓因参与的结果;筛选出的明显差异表达基因可能在肾脏损伤机制中发挥重要作用,可能是氛化汞肾脏毒性作用的敏感基因或靶基因.     

应用基因芯片技术筛选转染NOR1基因后HepG2细胞差异表达基因

目的研究转染NOR1基因后肝癌细胞系HepG2基因表达谱的改变。方法应用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1( )/NOR1真核表达载体和pcDNA3.1( )空白载体分别转染入肝癌细胞系HepG2,再分别提取转染pcD-NA3.1( )/NOR1和空载体pcDNA3.1( )的HepG2细胞总RNA,应用基因芯片技术进行芯片分析。结果芯片分析结果显示差异表达基因中上调的基因有59个,下调的基因有103个,这些差异基因的功能涉及多个方面。结论应用基因芯片技术成功筛选了NOR1基因转染细胞后差异表达基因,为阐明NOR1基因与肝癌发生发展的关系提供了实验依据。     

基因芯片筛选应力性骨折差异表达基因

目的 了解应力性骨折(SF)患者与正常人群相比较的外周血差异表达基因.方法 选取入伍新兵(均为男性),采用1:1配比的病例对照研究,正常对照组与SF组各3例.收集被测试者空腹肘静脉血提取RNA,纯化后进行人表达谱芯片试验.SAM软件分析芯片结果.选取表达差异最显著并有提示意义的差异基因,应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术进行验证.结果 SF组上调基因21条,下调基因1条.表达差异最显著的基因为TNFRSF10C,其验证结果显示,SF组TNFRSF10C的相对表达量与正常对照组相比较,3组上调,1组下调.结论 SF患者与正常人群外周血之间存在基因表达差异,SF的发生发展是一个涉及多种功能基因表达的复杂的生物学过程,为SF的生物力学研究提供了背景资料,并未其早期诊断和筛查提供了重要线索.     

应用基因芯片技术探讨小鼠胚胎心脏发育过程中的差异表达基因

目的 脊椎动物心脏发育基因表达谱远未明确，为此利用基因芯片技术研究小鼠心脏发育过程中的基因表达变化。方法 分别提取第10d～11d龄和18d龄的小鼠胚胎心脏mRNA，通过逆转录反应分别标记成两种荧光cDNA探针，然后与载有一组靶基因的基因表达谱芯片杂交，研究心脏在不同发育时期的基因表达差异。结果 在8404个靶基因中，143个基因差异表达，其中上调基因52个，下调基因91个；分别是细胞分裂、凋亡、信号传递、基因和蛋白质表达调控、组织细胞结构、物质和能量代谢相关的基因以及某些功能尚不清楚的基因。其中一些基因可能是心脏发育的控制基因。结论 基因芯片技术能有效筛查心脏发育过程中的差异表达基因。     

微波辐射后大鼠海马差异表达基因筛选

目的研究微波辐射后大鼠海马差异表达基因,以探讨微波辐射致脑损伤的分子机制。方法采用大鼠寡聚核苷酸芯片筛选30mW/cm^2微波辐射后大鼠海马差异表达基因,按照国际通用分类标准对结果进行功能分类;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）验证部分基因于辐射前后表达差异,并分析相关基因在微波辐射损伤中作用。结果30mW/cm2微波辐射后6h,大鼠海马中筛选到13个差异表达基因,其中4个表达上调,9个表达下调;辐射后7d差异表达基因为20个,其中4个表达上调,16个表达下调。RT-PCR验证结果与芯片一致。差异表达基因功能涉及应激、转运、代谢、发育分化、细胞凋亡、信号转导、转录、细胞粘附等,并与线粒体损伤、N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）信号通路开放、神经递质释放障碍、膜损伤等密切相关。结论微波辐射可使大鼠海马多个基因差异表达,为进一步研究微波辐射致脑损伤的机制提供新思路。     

基因芯片检测与苯中毒相关的信号传导通路中基因的差异表达

目的检测苯中毒信号转导相关基因的表达，探讨苯引起的血液系统损害的发病机理。方法应用含4265条信号转导基因的cDNA芯片检测7例苯中毒患者和7例无苯接触的正常人的外周血白细胞基因表达谱，观察其在基因表达谱上的差异。进行了基因表达谱聚类分析。结果在4265条基因中，存在明显差异表达的基因176条。至少在六张芯片结果中有显著性表达上调的基因35个，主要包括有PTPRC、STAT4、IFITM1等。至少在5张芯片结果中有显著性表达下调的基因45个，主要包括有ARHB、PPP3CB、CDC37等。结论微矩阵基因芯片在检测苯中毒信号转导相关基因的改变时．具有快速、高通量、高灵敏度等特点．细胞信号转导的障碍在苯中毒发病中起一定的作用。     

小鼠皮肤无绿藻感染差异表达基因的筛选

目的 利用基因表达谱芯片筛选小鼠感染无绿藻皮肤组织的差异表达基因,探讨基因在皮肤无绿藻病中的作用,从而对皮肤无绿藻病有更新的认识.方法 12只6～8周龄雄性小鼠,随机分为两组,实验组(皮肤无绿藻感染组)和对照组(生理盐水组)各6只;分别提取免疫抑制小鼠感染无绿藻的皮肤组织和对照组皮肤组织,抽提总RNA,反转录成cDNA同时进行单色标记,和小鼠全基因表达谱芯片杂交,经过芯片扫描和数据处理,分析出差异表达的基因,并对部分差异基因采用实时荧光定量PCR的方法进行验证.结果 感染无绿藻的小鼠皮肤组织中表达差异＞2倍的基因共有9902个,其中表达上调的基因4974个,表达下调的基因4928个;生物信息学分析发现,差异基因功能主要涉及炎症反应、免疫应答、信号转导、细胞黏附等多个生物学过程;另外还发现了一些有意义的信号通路如趋化因子信号通路、Jak-STAT信号传导途径、Toll样受体信号传导途径等;差异基因的实时荧光定量PCR结果与基因芯片的结果趋势一致.结论 皮肤无绿藻病的发生涉及众多基因表达的改变,芯片技术可以有效地筛选出皮肤无绿藻感染小鼠的差异表达基因,对进一步探索皮肤无绿藻病的发病机制,有效干预或治疗皮肤无绿藻病具有重要意义.     

白藜芦醇对记忆减退大鼠被动回避能力及海马组织中CREB表达的影响

目的观察白藜芦醇(Res)对记忆减退大鼠被动回避能力及对c AMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法按体质量将雌性Wistar大鼠随机分为6组,分别为:记忆减退模型组(model)、Res 20、40、80 mg/kg干预组、雌二醇替代组(ERT)和假手术组,每组10只。利用去卵巢合并D-半乳糖腹腔注射的方法建立记忆减退模型。用跳台实验检测大鼠的被动回避能力反应大鼠的记忆力,用real-time PCR检测Creb基因的表达,用Western blot检测CREB总蛋白及磷酸化蛋白。结果跳台实验中Res各个干预组潜伏期明显长于模型组(P0.05),Res 80 mg/kg组错误次数显著减少(P0.05)。与假手术组相比,模型组Creb基因的表达显著减少(P0.05)且p-CREB/CREB显著降低(P0.05)。与模型组相比,Res各干预组和ERT组Creb基因的表达显著升高(Res 20、40、80 mg/kg vs model:P0.05;ERT vs model:P0.01),3个干预组及ERT组p-CREB/CREB均明显增加(Res 20 mg/kg,ERT vs model:P0.05;Res 40,80 mg/kg vs model:P0.01)。结论 Res上调Creb基因的表达并且促进CREB蛋白磷酸化,可能是改善记忆减退大鼠被动回避能力的机制之一。     

基因芯片技术检测大鼠心肌顿抑相关基因的差异表达

目的研究大鼠心肌顿抑差异表达的基因，并进一步探讨心肌顿抑发生的机制。方法采用大鼠心肌顿押模型，取顿抑心肌组织及假手术组心肌组织标本，用27K Rat Genome Array进行全基因表达谱研究，筛选出差异表达的基因并进行功能分析。结果基因芯片检测发现了292个在顿抑心肌组织中2倍差异表达基因，其中上调199，下调93。表达上调的基因包括HSP70、Atf3、Gadd45b、Egr2、Verge等，上调最大幅度为23．1倍，主要涉及抗凋亡、血管和神经生长、转录和存活、修复等心脏保护性细胞因子和一些功能不明的基因，而下调基因多数功能不清。结论心肌顿抑通过上调一些基因的表达对缺血心肌起到保护作用，促进这些保护性基因的表达可能是将来缺血性心脏病的治疗目标。     

孕期及哺乳期锌干预对仔鼠脑组织bcl-2mRNA表达的影响

目的　观察锌与脑组织中 bcl- 2 m RNA表达关系 ,明确锌调节中枢神经系统发育及功能以及锌与神经细胞凋亡间的分子机制。方法　将成年刚怀孕 ICR雌性小鼠随机分为 5组并饲以不同锌水平的饲料 ,使其分别成为严重缺锌组 (1 mg/kg)、轻度缺锌组 (5mg/kg)、适锌组(30 mg/kg)、高锌组 (1 0 0 mg/kg)及高锌对喂组 (1 0 0 mg/kg)。实验动物在孕期和哺乳期均喂饲实验饲料 ,而断奶期 (2 0日龄 ,P2 0 )至成年 (70日龄 ,P70 )各组改喂普遍饲料。在 P2 0和 P70期收集各实验组动物脑组织 ,采用 Northern blot技术检测 bcl- 2 m RNA表达情况。结果　在 P2 0及 P70仔鼠脑组织中均有 bcl- 2 m RNA表达 ;P2 0期缺锌组 (严重缺锌组及轻度缺锌组 )实验仔鼠脑组织bcl- 2 m RNA的表达量明显少于非缺锌组 (适锌组、高锌对喂组及高锌组 ) ,并表现出与膳食锌水平呈正依赖关系 ;成年 (P70 )时 ,各实验组仔鼠脑组织 bcl- 2 m RNA表达水平未见明显差异。结论　锌对脑组织中神经细胞凋亡具有调节作用 ,发育期锌缺乏可促进脑细胞凋亡发生 ,并抑制 bcl- 2m RNA表达 ;补充锌可能通过提高 bcl- 2 m RNA转录水平抑制神经细胞凋亡。     

孕鼠维生素A缺乏对子代心脏GATA-4基因表达的影响

目的探讨孕鼠维生素A(VA)缺乏对子代心脏GATA-4基因表达的影响。方法清洁级断乳健康雌性SD大鼠48只,随机分为正常对照(VAN组)组,VA缺乏组(VAD组)和边缘性VA缺乏(MVAD组)组各16只,分别喂养普通饲料、VA缺乏饲料和边缘性VA缺乏饲料。10 w后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5d、孕18.5d胚胎心脏和新生鼠心脏。透射电镜下观察新生鼠心脏超微结构变化。用RT-PCR和Western blot方法检测孕13.5d、18.5d和新生鼠心脏GATA-4基因mRNA和蛋白表达。结果与VAN组比较,VAD组和MVAD组的新生鼠心脏电镜下出现心肌纤维模糊,排列紊乱断裂,明暗带不清,线粒体排列不规则等。VAD组在3个时期的GATA-4基因mRNA和蛋白表达均低于VAN组(P<0.01);MVAD组在孕13.5d和18.5d的GATA-4基因mRNA和蛋白水平与VAN组之间存在差异(P<0.05),其新生鼠心脏GATA-4基因蛋白水平亦明显低于VAN组(P<0.01)。结论孕鼠VA缺乏影响子代心脏GATA-4基因水平,可能导致子代心脏超微结构的变化,进而造成心脏发育异常。[营养学报,2012,34(4):322-326]     

大鼠的实验性铁与锌营养缺乏

目的观察铁锌同时缺乏和单独缺乏对大鼠铁锌营养状况的影响。方法按照2×2析因设计,将4w龄雄性wistar大鼠随机分为4组:缺铁缺锌组(F0Z0):喂以低铁低锌饲料(铁7.10mg/kg,锌5.14mg/kg),自由进食;单纯缺铁组(F0Z1):喂以低铁饲料(铁7.10mg/kg,锌40mg/kg);单纯缺锌组(F1Z0):喂以低锌饲料(锌5.14mg/kg,铁40mg/kg);铁锌正常组(F1Z1):喂以铁锌正常饲料(铁40mg/kg,锌40mg/kg);后3组均与F0Z0组对喂。喂养42d后,处死大鼠,分别测定Hb、Hct、血清铁、血清锌、肝脏铁、肝脏锌、胫骨锌等指标。结果实验结束时F0Z0组大鼠的Hb平均水平降至82.36g/L,血清锌0.78μg/ml,成功建立缺铁缺锌大鼠模型。4组大鼠的各项指标水平大多以F0Z0组最低,F0Z1组或F1Z0组次之,F1Z1组最高;铁缺乏可导致大鼠血清铁、肝脏铁含量明显下降,也可降低肝脏锌水平;锌缺乏能显著降低机体肝脏锌、胫骨锌水平;在体重、Hb、Hct、血清锌这四项指标上存在铁锌交互作用。结论大鼠铁锌同时缺乏时铁锌营养状况最差,缺锌可能会增加对铁的吸收利用,缺铁会减少体内锌储存量。     

锌缺乏对大鼠骨骼肌α－肌动蛋白基因表达的影响

本文观察了缺锌对大鼠股四头肌深层肌总蛋白质、ＤＮＡ、总ＲＮＡ、肌动蛋白（ＤＮａｓｅⅠ抑制法）和α－肌动蛋白ｍＲＮＡ（地高辛标记探针，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交）含量的影响。结果显示：缺锌时肌肉中总蛋白质、ＤＮＡ和肌动蛋白的相对含量变化不明显，总ＲＮＡ和α－肌动蛋白ｍＲＮＡ的含量明显减少。这提示，锌缺乏导致α－肌动蛋白的基因表达下降，可能在转录和翻译过程中影响骨骼肌肌动蛋白的合成速率。     

缺锌对大鼠小肠粘膜维生素D受体及钙结合蛋白基因表达的影响

目的:研究锌缺乏对生长期大鼠小肠粘膜维生素D受体(VDR)和钙结合蛋白(CaBP)基因表达水平的影响。方法:刚断奶的雄性大鼠随机分为缺锌(ZD)、配饲(PF)、对照(ZA)三组,每组10只。喂养15d后处死,取小肠粘膜,用试剂盒抽提组织RNA,用实时荧光定量PCR检测小肠粘膜VDRmRNA及CaBPmRNA的表达。结果:ZD组大鼠小肠粘膜VDR基因表达较PF组下调88.89%,PF组较ZA组VDR基因表达下调50.00%,ZD组较ZA组VDR基因表达下调94.5%。ZD组CaBP基因表达较PF组下调80.16%,PF组较ZA组CaBP基因表达下调39.76%,ZD组较ZA组CaBP基因表达下调88.50%。结论:锌缺乏通过改变VDR的活性而影响VDRmRNA,从而影响靶基因CaBP转录,进而影响钙吸收,导致骨生成障碍。     

缺锌大鼠海马生长抑素和精氨酸加压素的变化

方法：采用液体缺锌饲料灌胃的方式使大鼠缺锌二周。采用Ｙ－迷宫实验和原子吸收及放射免疫分析技术，分别测定大鼠的学习记忆行为，血清锌含量和海马生长抑素（ＳＳ）、精氨酸加压素（ＡＶＰ）水平的变化。结果：与正常对照组相比，缺锌大鼠在Ｙ－迷宫中达到学会标准所用的时间明显增多（Ｐ＜０．０５）；血清锌含量明显降低（Ｐ＜０．０５）；海马ＳＳ和ＡＶＰ水平明显降低（Ｐ＜０．０１）。结论：在缺锌状态下，海马内的ＳＳ和ＡＶＰ水平是降低的，这种变化可能是缺锌影响脑的智力发育的重要因素之一。     

锌缺乏对生长期雄性大鼠海马泛素C末端水解酶L1表达的影响

[目的]观察缺锌对生长期大鼠海马泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)表达的影响。[方法]将SD大鼠随机分为正常组、缺锌配喂组和缺锌组,正常组喂饲常锌饲料(32.5mg/kg),缺锌配喂组喂饲高锌饲料(73.5mg/kg),缺锌组喂饲缺锌饲料(1.2mg/kg)。饲养4周后处死动物,取海马组织,RT-PCR法检测UCH-L1mRNA的表达水平,Westernblot法检测UCH-L1蛋白的表达水平。[结果]与正常组和缺锌配喂组比较,缺锌大鼠海马中UCH-L1mRNA和蛋白的表达水平均显著下调。[结论]缺锌大鼠海马UCH-L1的表达异常,可能是缺锌导致认知损伤的重要机制之一。     

维生素A缺乏对小鼠胚胎Hox基因表达的影响

目的：观察维生素Ａ（ＶＡ）缺乏对小鼠胚胎ＨｏｘＣ４（３．５）和ＨｏｘＤ１０（４．５）基因表达量的影响。方法：初断乳的昆明小鼠,雌鼠４０ 只均分为正常对照组（Ａ）和维生素Ａ缺乏组（Ｂ）,分别饲含ＶＡ４０００ ＩＵ／ｋｇ 饲料和ＶＡ ０ ＩＵ／ｋｇ 饲料。雄鼠饲以普通饲料。在饲养的第１７ 周按雌∶雄＝ ２∶１ 合笼交配。在怀孕的第１２ 天和第１４ 天,分别对孕鼠颈椎脱臼处死,立刻剖腹取出胎鼠,迅速置于液氮中速冻后置于－ ７０℃冰箱保存。用地高辛标记的探针,采用原位杂交方法探测小鼠胎儿ＨｏｘＣ４（３．５）和ＨｏｘＤ１０（４．５）基因ｍ ＲＮＡ含量。结果：ＶＡ缺乏时,ｍ ＲＮＡ的含量明显减少。结论：ＶＡ缺乏导致Ｈｏｘ 基因表达量下降,从而影响小鼠胚胎的正常发育。     

锌缺乏对孕鼠发育及体内促生长有关激素水平的影响

目的　探讨锌缺乏对妊娠大鼠发育及体内促生长有关激素含量的影响。方法　将Wistar妊娠大鼠随机分为缺锌组 (ZD)、对喂组 (PF)、补锌组 (ZS)及正常对照组 (Cont) ,分别给予缺锌 (0 .7mg/ kg)和正常锌 (1 0 0 mg/ kg)饲料喂养 ,观察孕鼠及胎鼠发育情况 ,并采用放射免疫法检测血清中甲状腺素 (T3 、T4 )、促甲状腺素 (TSH)和生长激素 (GH)含量。结果　缺锌组孕鼠在妊娠期间体重没有增加 ;胎鼠出生体重显著低于其他三组 ;血清中激素含量显著低于补锌组和正常对照组。结论　锌缺乏可降低孕鼠血液中促生长有关激素含量 ,导致孕鼠及胎儿生长发育迟缓。     

锌对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响

目的:观察不同锌摄入水平对心理应激大鼠不同脑区金属硫蛋白亚型表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为8组:正常对照组、对喂组、缺锌组和补锌组及其相应的应激组,分别给予正常、缺锌和补锌饲料,以缺锌动物当日的饲料摄入量作为对喂动物次日的给料量。动物喂饲1w后开始束缚应激,持续4w。分别以蛋白印迹法和RT-PCR测定海马、皮质、间脑和嗅球金属硫蛋白含量以及MT-1mRNA和MT-3mRNA的表达;并以ELISA法检测血浆IL-6和IL-1的含量。结果:缺锌动物的血锌含量明显降低,缺锌应激动物不同脑区金属硫蛋白及其亚型mRNA的表达均较缺锌动物明显升高,但其增加幅度低于其它应激组;而补锌应激动物的表达增加幅度最大。缺锌组和各应激组动物的血浆皮质醇、IL-1、IL-6水平出现显著升高。另外,金属硫蛋白在不同脑区的表达水平不同:海马>嗅球>皮质>间脑。结论:不同锌营养状况可影响心理应激动物不同脑区金属硫蛋白的表达,海马脑区表达水平较高可能与海马在应激反应中的重要作用相关联。糖皮质激素及IL-6、IL-1等细胞因子可能对金属硫蛋白的表达发挥了诱导作用。