马鞭草诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡作用观察

[目的]探讨马鞭草C部位对人绒癌JAR细胞抑制作用机理. [方法]通过相差显微镜观察活细胞贴壁程度、细胞形态改变;荧光显微镜观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构变化;琼脂糖凝胶电泳观察用药后细胞DNA断裂情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况. [结果]马鞭草C部位可引起细胞数目减少并萎缩;荧光显微镜下观察到典型凋亡细胞的形态学特征;电镜下见到明显的凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳出现"阶梯状条带";流式细胞仪检测发现用药后出现明显的凋亡峰. [结论]马鞭草C部位对人绒癌JAR细胞抑制作用机理是诱导其凋亡.     

2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤和凋亡

目的建立2,5己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将2,5己二酮(30、40、50mmol/L)加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,Hochest33258观察细胞核变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂、流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较各组间的差异。结果随2,5己二酮浓度增加,细胞存活率下降(P<0.01);荧光显微镜观察有特征性的凋亡细胞核;琼脂糖凝胶电泳有明显的DNAladder;流式细胞仪检测凋亡率随2,5己二酮浓度的增大而增加(P<0.05)。结论一定浓度的2,5己二酮有导致PC12细胞损伤和凋亡的作用。     

枸杞多糖抑制人白血病细胞生长的研究

用体外培养法研究枸杞多糖 (LBP X)对人白血病HL 6 0细胞生长的抑制作用并探讨其作用机制。结果表明 :LBP X(2 0、10 0、5 0 0和 10 0 0mg L)与HL 6 0细胞共培养 48h后 ,LBP X抑制HL 6 0细胞增殖呈剂量依赖性关系 ,且可降低HL 6 0细胞的膜流动性 ,HL 6 0细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显的“DNAladder” ,TUNEL方法检测呈阳性。这提示诱导HL 6 0细胞凋亡是LBP X抗肿瘤的重要机制     

鬼臼毒素衍生物GP-14对HL-60细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的观察自旋标记鬼臼毒素衍生物4β-N-[4＂-(2＂,2＂,6＂,6＂-四甲基-1＂,2＂,5＂,6＂-四氢吡啶-1＂-氮氧自由基)-酰胺基]-4＇-去甲基表鬼臼毒素(GP-14)对人白血病细胞系HL-60的作用及对端粒酶活性的影响.方法采用MTT法、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测GP-14对HL-60细胞的作用;TRAP-ELISA法测定端粒酶活性.结果GP-14可明显抑制HL-60细胞增殖.在一定剂量和时间范围内,GP-14主要诱导HL-60细胞凋亡,5.0μmol/L处理48小时凋亡率为43.8%;并可使端粒酶活性下降.结论GP-14能特异地诱导HL-60细胞凋亡,抑制细胞端粒酶活性,对端粒酶活性的抑制作用比同等浓度的VP-16强.为进一步开发其临床价值提供了依据.     

苯体外诱导小鼠骨髓细胞凋亡的研究

目的 观察苯对离体小鼠骨髓细胞的凋亡诱导作用。方法 荧光染色法检测细胞形态;DNA凝胶电泳法观察DNA裂解片段;流式细胞仪测细胞DNA含量法检测细胞凋亡率。结果 荧光染色法检测显示苯诱导小鼠骨髓细胞出现典型的凋亡特征形状;DNA凝胶电泳检测出苯诱导终浓度为15、25mmol/L,诱导时间为3h,电泳图谱呈现典型的DNA梯型条带;流式细胞仪检测DNA含量结果表明苯诱导小鼠骨髓细胞凋亡呈剂量－效应和时间－效应关系。结论 在体外培养条件下,苯是一种小鼠骨髓细胞凋亡诱导剂。     

苦参碱诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的 研究苦参碱对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡机制.结果 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的抑制作用,荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡.结果 不同浓度苦参碱对Hep-2细胞有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性;FCM检测结果 显示:S期细胞比例及凋亡率增高,G2/M期细胞比例下降,且呈剂量依赖性;形态学发现Hep-2细胞染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体形成;DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带.结论 苦参碱可能是通过将人喉癌细胞周期阻滞在S期,诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖,发挥其抗癌功能.     

蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱变化的研究

目的研究蟾酥作用后HL-60细胞基因表达谱的变化，为蟾酥诱导HL-60细胞凋亡的可能机制提供依据。方法采用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡；应用DNA芯片技术检测蟾酥作用前后HL-60细胞基因表达谱的变化。结果1％(v／v)的蟾酥可明显诱导HL-60细胞凋亡。细胞凋亡发生前，在检测的1152个基因中共有9个基因表达改变，其中8个基因上调，1个基因下调。结论在蟾酥诱导HL-60细胞发生凋亡过程中有多个基因参与，BCL-2下调以及IL-8上调与凋亡的发生关系密切。     

9-羧酸蒽对人髓性白血病细胞株HL-60凋亡的研究

目的　研究氯通道抑制剂 9-羧酸蒽 ( 9-AC)对人髓性白血病细胞株HL - 6 0的影响 ,并对相关机制进行探讨。方法　体外培养人白血病细胞株HL - 6 0 ,采用透射电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等观察9-A对HL - 6 0细胞的作用。结果　在 5× 10 -4 mol/L 9-AC作用 48h后 ,细胞发生明显的改变。电镜下细胞形成典型的凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性梯形条带。流式细胞仪分析表明 ,实验组HL - 6 0细胞出现明显的亚二倍体峰 -凋亡峰。结论　 9-AC具有明显的诱导白血病细胞HL - 6 0凋亡的作用。     

金黄色葡萄球菌对人脐静脉内皮细胞黏附及内化与诱导细胞凋亡的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌(SAU)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的黏附、内化及诱导细胞凋亡的发生、发展的机制和致病意义。方法常规方法制备SAU悬液,分别感染HUVEC细胞30 min、1、24、h。采用光学显微镜和荧光显微镜观察SAU对HUVEC的黏附、内化情况,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析SAU对HUVEC细胞诱导凋亡的影响。结果SAU与HUVEC共育30 min发现有细菌黏附细胞表面,1 h后有少量细菌侵入胞内,并伴有凋亡现象的发生,随着时间的延长,内化的细菌数没有增加,凋亡现象通过流式细胞仪、DAPI荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析明显的被观测到。结论SAU通过黏附、内化侵入内皮细胞并诱导内皮细胞发生凋亡。     

洛伐他汀对HL-60细胞bcl-2基因表达的影响

目的 观察HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀(lovastatin，LOV)对HL-60细胞bcl-2基因表达的影响，进一步探讨其抑制细胞增殖诱导细胞凋亡的可能分子机制。方法 采用生长曲线测定、流式细胞仪分析、DNA片段化百分率检测以及RT-PCR、Western blot等技术方法，观察LOV对HL-60细胞体外增殖和凋亡的影响，以及bcl-2基因表达的改变。结果 LOV能显著抑制HL-60细胞增殖，使细胞周期阻滞于G0／G1期，细胞凋亡率增加，DNA片段化百分率升高；LOV能下调HL-60细胞bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结论 LOV对HL-60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用，下调节bcl-2基因表达可能是其分子机制之一。     

松口蘑菌丝体蛋白对HeLa细胞凋亡的影响

目的 :　研究松口蘑发酵菌丝体水提液中菌丝体蛋白质 (TMP- B)的体外抗癌作用。方法 :　体外培养 He La细胞 ,培养时添加不同浓度的 TMP- B,绘制细胞生长曲线。利用扫描电镜、流式细胞术及 DNA凝胶电泳等进行体外抗人子宫颈癌 He La细胞增殖和诱导细胞凋亡机制的研究。结果 :　 TMP- B在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。扫描电镜观察到 TMP- B处理细胞产生明显的凋亡小体 ;TMP- B对细胞周期的影响是通过抑制细胞从 S到 G2 /M期的转化来抑制He La细胞增殖 ,诱导细胞发生凋亡的 ;流式细胞仪分析图上出现凋亡峰 ;DNA电泳出现以 2 0 0 bp左右为单位的 DNA碎片。结论 :　采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质 ,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

枸杞多糖对人前列腺癌PC-3细胞的影响及其抑瘤效应

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对人前列腺癌PC-3细胞的影响及其机制,观察LBP对人前列腺癌PC-3细胞致瘤作用的干预效果。方法通过细胞生长抑制率、彗星实验、流式细胞术、原位末端标记法(TUNEL)和Bcl-2、Bax蛋白表达来检测LBP对人前列腺癌PC-3细胞的影响;致瘤性实验检测LBP对人前列腺癌PC-3细胞致瘤力的影响。结果LBP能抑制人前列腺癌PC-3细胞的生长;可致PC-3细胞DNA链断裂;能诱导PC-3细胞凋亡;使Bcl-2/Bax蛋白比值显著下降;LBP干预组肿瘤体积增长缓慢,肿瘤体积和重量均明显小于和轻于人前列腺癌裸鼠移植模型组。结论LBP对抗人前列腺癌PC-3细胞和肿瘤生长抑制作用的机制,可能与其损伤人前列腺癌PC-3细胞DNA链、诱导细胞凋亡和调控凋亡相关基因表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯体外诱导HL-60细胞凋亡

目的 为研发天然抗白血病新药，研究茶多酚主要活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外诱导细胞凋亡的作用。方法 采用体视显微镜、DNA凝胶电泳及透射电镜技术，观察EGCG对体外诱导人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)凋亡的影响及其诱导凋亡的最佳作用时间和最佳作用浓度。结果 发现EGCG实验组中，HL—60细胞生长被显著抑制，DNA凝胶电泳中可见DNA条带，其细胞超微结构明显改变。当250ug／m1 EGCG作用细胞6h时，其诱导细胞凋亡的作用最明显。结论 EGCG可体外诱导HL-60细胞凋亡．可能是抗白血病的侯选药。     

β-胡萝卜素对白血病HL-60细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的：　探讨β－胡萝卜素抑制白血病细胞增殖的机制。方法：　体外培养白血病细胞株ＨＬ－６０,培养时添加１０μｍ ｏｌ／Ｌ、５０μｍ ｏｌ／Ｌ、１００μｍ ｏｌ／Ｌβ－胡萝卜素作用２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ 后,用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术分析细胞周期分布,同时利用流式细胞术结合ＤＮＡ 凝胶电泳检测白血病细胞凋亡。结果：　细胞生长曲线显示１０～１００μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素均对白血病细胞株ＨＬ－６０ 有显著性抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示５０μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素处理ＨＬ－６０ 细胞２４ｈ 后,出现Ｓ期阻滞,并诱导５．５９％ 的细胞凋亡。ＤＮＡ 凝胶电泳结果同样显示β－胡萝卜素能够诱导白血病ＨＬ－６０ 细胞凋亡。结论：　β－胡萝卜素对于髓系白血病细胞株ＨＬ－６０ 细胞的增殖具有显著性抑制作用,其机制可能是干扰的白血病细胞ＤＮＡ代谢;β－胡萝卜素诱导白血病细胞凋亡也是其抑制白血病的重要途径之一。     

三叶青提取物对白血病HL60细胞增殖抑制作用研究

目的探讨三叶青提取物对白血病HL60细胞的增殖、凋亡的影响。方法将不同浓度的受试物作用于体外培养的HL60细胞,用四氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪观察细胞凋亡。结果受试物处理24 h后6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/m l组,受试物处理48、72 h后所有浓度组HL60细胞的增殖率和凋亡率均呈不同程度的下降或上升,差异均有统计学意义。结论三叶青提取物能有效抑制体外HL60细胞的增殖,诱导HL60细胞凋亡。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

硒和维生素E对白血病细胞凋亡及c-Myc基因表达的影响

目的 :　研究 Se和 VE对白血病细胞凋亡及 c- Myc基因表达的影响。方法 :　体外培养白血病细胞株 HL- 6 0、K5 6 2 ,培养时分别添加 Se(8μmol/L)和 VE(1 0 0 μmol/L)。利用 DNA凝胶电泳技术及 Northern杂交技术检测细胞凋亡和癌基因表达。结果 :　Se和 VE均能诱导白血病细胞 HL- 6 0和 K5 6 2细胞凋亡。VE(1 0 0 μmol/L)能够抑制 HL- 6 0细胞中 c- Myc基因的表达 ,结果有显著性 ;VE却不能抑制 K5 6 2细胞内 c- Myc基因的表达。相反 ,Se(8μmol/L)不能够抑制 HL-6 0细胞中 c- Myc基因的表达 ,却能抑制 K5 6 2细胞内 c- Myc基因的表达 ,结果有显著性。结论 :　抑制 c- Myc基因的表达 ,诱导白血病细胞凋亡是 Se、VE抑制白血病细胞增殖的重要途径之一。对于髓系和非髓系白血病细胞 ,Se与 VE对 c- Myc基因的表达的影响迥然不同 ,提示二者的作用机制是不同的。     

枸杞多糖对人前列腺癌细胞生长影响

目的 观察枸杞多糖对体外培养的雄激素非依赖型人前列腺癌PC-3细胞存活率、细胞周期及其凋亡的影响。方法 用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测枸杞多糖对PC-3细胞作用的时间效应和剂量效应，并计算细胞生长抑制率；流式细胞仪观察枸杞多糖处理PC-3细胞后细胞周期以及细胞凋亡的改变。结果 枸杞多糖对PC-3细胞的增殖有明显的抑制作用，抑制率可达87．84％，且呈剂量-效应和时间-效应关系；流式细胞仪分析显示。枸杞多糖可影响该细胞周期并引起细胞凋亡，凋亡率高达40％。结论 枸杞多糖对人前列腺癌PC-3细胞的生长有明显抑制作用，其机制可能是通过诱导人前列腺癌细胞凋亡和影响其生长周期而实现。     

牛乳铁蛋白素对Jurkat细胞和HFL-I细胞生物学特性的影响

目的形态学观察牛乳铁蛋白素(LfcinB)对Jurkat细胞与人胚肺成纤维(HFL-I)细胞作用的程度,验证LfcinB诱导Jurkat细胞凋亡信号转导通路。方法用荧光显微镜观察Hoechst33258染色LfcinB处理过的Jurkat细胞和正常成纤维细胞,与阴、阳性对照组比较;用DNA断裂琼脂糖凝胶电泳分析LfcinB对Jurkat和HFL-I细胞作用差异;用流式细胞术分析Jurkat细胞早期凋亡和线粒体电势电位状况;Westernblotting研究Jurkat细胞接触LfcinB4、6和8h细胞内caspase-3、caspase-8、caspase-9和胞浆中细胞色素C含量的变化。结果在LfcinB作用Jurkat细胞DNA断裂琼脂糖凝胶电泳图中显示为阶梯状凋亡DNALadder,而LfcinB作用的HFL-I细胞无此现象;在荧光显微镜可以看到LfcinB作用过的Jurkat细胞经Hoechst33258染色细胞核呈致密浓染和HFL-I细胞的细胞核呈均匀染色;流式术分析结果为LfcinB作用Jurkat细胞2、4h的凋亡率分别为11.5%和17.8%,线粒体膜电位下降;caspase-3、caspase-9和细胞色素C的免疫印记分析显示,LfcinB能使Jurkat细胞胞浆中的细胞色素C含量增加,被激活caspase-3、caspase-9在胞浆中逐渐增多,对caspase-8没有影响。结论LfcinB诱导Jurkat细胞凋亡,对正常成纤维细胞没有作用;Jurkat细胞接触LfcinB2h以后细胞内caspase-3、caspase-9和胞浆中细胞色素C的含量累积增加,验证了LfcinB通过依赖caspase家族的细胞内信号通路诱导Jurkat细胞凋亡。