5株O139群霍乱弧菌生物学性状研究

目的研究从病人和水产品中分离到的5株O139群霍乱弧菌的生物学性状。方法参照《霍乱防治手册》对5株菌的生长特征、生化特征、血清学反应及药物敏感性进行鉴定；应用多重PCR方法对所试菌株进行毒力相关基因检测，用Vero细胞测定方法检测ctxA阳性菌株霍乱肠毒素的表达。结果5株O139群霍乱弧菌生物学性状和血清学反应与阳性对照菌体O139群霍乱弧菌MO45基本相同；2株来自重型病人和1株来自水产品的菌株ctxA、zot、ace、tcpA、tcpI、hlyA、rtxA、rtxC、ompU、tarR 11种毒力相关基因全部阳性。经Vero细胞测定，其霍乱肠毒素效价达到1：160；在2株来自轻型病人的菌株中仅hlyA、rtxA、rtxC、toxR 4种毒力相关基因为阳性。结论O139群霍乱弧菌致病(泻)的决定基因簇并非仅为ctxA、zot、ace、cep等毒力相关基因。     

福州市2005年霍乱弧菌分离株的分子流行病学调查

目的：研究福州市2005年霍乱菌株DNA分子特征，分析其同源性及流行病学意义.方法：采用聚合酶链反应（PCR）及随机引物多态性扩增（RAPD）等分子生物学技术对菌株进行检测，研究本地菌株的分子特征，RAPD结果用SAS9．0软件进行多态性比较。结果：对40株霍乱弧菌4种毒力基因检测结果表明，39株霍乱弧菌均检出ctxA、tcpA、ace、zot4种毒力基因，1株外环境菌株4种毒力基因均为阴性。40株霍乱弧茵RAPD结果经聚类分析可分为4个聚类群，其中37株属于同一聚类型别，另3株分别属于不同聚类型。结论：福州市2005年流行菌株以稻叶型占绝对优势，流行优势菌株分子遗传特征具有高度的同源性。本次研究采用的PCR及RAPD等分子生物学方法在霍乱流行病学调查中具有较高的实用价值。     

广东省外环境O1/O139群霍乱弧菌毒力基因分型

目的 分析广东省外环境来源O1/O139群霍乱弧菌毒力基因的携带及基因分型特征,为霍乱防控提供依据.方法 选取2008 -2009年广东省O1/O139群霍乱弧菌水体分离株69株,水产品分离株16株和同期病例分离株5株,应用多重聚合酶链反应对ctxA、ace、zot、tcpA、tcpl、hlyA、ompU、toxR等8种毒力基因进行检测和分型分析.结果 90株O1/O139群霍乱弧菌均携带hlyA和toxR基因;5株病例菌株中有3株携带8种毒力基因,另外2株小川型菌株为非产毒株,基因型为hlyA+ toxR+ ompU+ zot+ tcpA+ tcpl+型和hlyA+ toxR+ tcpA+型;水体菌株中,稻叶型菌株以hlyA+ toxR+ ompU+ ace+ zot+ tcpl+型(34.15％)为主,小川型(66.67％)和O139群(70％)以hlyA+ toxR+型为主;水产品菌株中,稻叶型菌株以hlyA+ toxR+ ompU+ tcpl+型(75.00％)为主,小川型菌株各种基因型别均有分布,无明显优势基因型别.结论 广东省外环境来源O1/O139群霍乱弧菌以非产毒株广泛存在,毒力基因型别多样.     

衡阳市水产品及养殖容器霍乱弧菌监测与分析

目的 通过分析霍乱弧菌外环境水体、水产品监测的相关信息,为制定有效的霍乱疫情监测防控措施提供依据. 方法依据<霍乱弧菌手册>[1](第五版)提供的方法,对外环境样本进行分离、鉴定,阳性株用KB法作药敏试验,PCR方法进行ctxA、tcpA毒力基因测定. 结果在监测的105份外环境样本中,检出32株小川型霍乱弧菌,阳性率30.48%;阳性菌株均来自水产品及其养殖容器,水体样本中未检出.32株菌株对15种药物的敏感实验结果基本一致:对诺氟沙星等8种药物敏感,对复方新诺明等3种药物耐药,对强力霉素等4种药物中敏.、32株分离菌株中经毒力检测有9株毒力基因阳性(5株毒力基因ctxA阳性,3株毒力基因tcpA阳性,1株毒力基因tcpA、ctxA均为阳性). 结论本次监测中水产品霍乱弧菌的污染情况严重,且来源于甲鱼的菌株ctxA毒力基因检出较高,提供了证实衡阳市因食用甲鱼引起霍乱疫情暴发的有力依据.应加强水产品市场管理,有针对性制定防控措施.     

两株霍乱弧菌的同源性分析

[目的]十堰市首次从水产品和肉制品中同时检出2株01群霍乱弧菌小川型,因样品同一时间采自同一市场,对其同源性进行研究,并追溯污染源,查明污染途径. [方法]通过PCR扩增,对这两株菌的ctxA、zot、ace、tcpA毒力基因进行检测,然后进行PFGE分析,判断是否具有同源性. [结果]这两株菌毒力基因检测均为阴性,PFGE型相似性为100%,应为同一来源,基围虾是被解冻水污染的,猪肉是在样品运送过程中被基围虾污染的. [结论]应进一步加强水产品中霍乱弧菌的监测,预防霍乱疫情的暴发与流行;采样人员应注意在样品采集过程中每份样品必须独立包装,运输过程中避免混放而引起交叉污染.     

非O1/非O139群霍乱弧菌感染病例分离株分子流行病学分析

目的 分析安徽省马鞍山市连续2个月内监测到的6例具有霍乱疑似症状、感染非O1/非O139群霍乱弧菌的病例,判断疫情的聚集性.方法 对病例分离株进行生化和血清型别鉴定以及溶血试验,药敏试验检测抗生素耐药谱,应用荧光PCR和常规PCR进行霍乱弧菌特异基因、毒力及其相关基因的检测,包括ompW、ctx 、tcpA、toxR、hlyA 、zot、ace、rstR和gⅢCTX,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其分子型别.结果 生化鉴定和血清学试验鉴别腹泻病例6株菌株为非O1/非O139霍乱弧菌,均产生β溶血;14种药物中有12种属于全部敏感;荧光PCR检测霍乱弧菌特异性基因ompW均为阳性,ctx、tcpA 、zot、ace、rstR和gⅢCTX基因均为阴性,toxR 、hlyA基因有5株菌扩增阳性,1株菌(1001434446)为阴性;PFGE显示6株菌带型均不相同,但有2株非常相似,分离株与霍乱弧菌产毒株相似性很低.结论 6例感染非产毒的非O1/非O139群霍乱弧菌病例发病虽相对集中,但属于散发病例,在局部地区频繁出现,提示其公共卫生意义不可忽视.     

2009-2012年江西省外环境霍乱弧菌致病力及药敏检测

目的掌握江西省外环境中霍乱弧菌菌型分布、毒力基因、耐药现状,为霍乱防治提供科学依据。方法采用血清学分型法对外环境中分离的霍乱弧菌进行分型,同时以主要毒力基因ctx为引物对检索的霍乱弧菌进行PCR扩增,并应用K-B纸片法对部分菌株进行10种抗生素的药物敏感试验。结果 2009-2012年期间,共从外环境中分离到霍乱菌株156株。毒力实验结果显示37株O139群中15株扩增出与阳性对照一致的毒力基因(ctx)条带,而119株O1群除2株小川型外,其余均未扩增出毒力基因(ctx)条带,与阴性对照一致。药敏结果显示:O139群和O1群对丁胺卡那霉素、诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟90%以上敏感。结论江西省2009-2012年间外环境中分离到的霍乱弧菌中,O139群与O1群并存,O1群为优势菌;水产品中O139群菌株绝大多数为产毒株,而O1群菌株绝大多数为非产毒株。应重点加强水产品的霍乱监测。药敏结果供霍乱治疗和必要时的预防药物选择提供依据。     

珠江河口水体霍乱弧菌污染状况调查研究

目的:了解珠江河口水体01/0139群霍乱弧菌的污染情况,提出改善水体霍乱弧菌监测的建议,为采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行提供依据.方法:根据历年霍乱监测资料和疫点分布状况,在珠江水系广州段选择设立24个采样点,每月采集水体标本进行01/0139群霍乱弧菌分离培养,对分离得到的阳性菌株进行血清分型、噬菌体一生物分型、PCR检测毒力基因、K-B法药敏试验.结果:2006年3月～2007年2月共采取862份水体样本,其中有67份检出01或0139群霍乱弧菌,检出率为7.77%,血清型以01群为主,尤以稻叶型占优;01群菌株均为非流行株,2株0139群菌株检出ctx毒力基因;菌株耐药分析发现不同血清型菌株耐药谱有所差异.结论:01/0139群霍乱弧菌在珠江河口水体环境中广泛存在,常年均可从水体中分离获得.必须加强环境水体及海水产品霍乱弧菌监测,及时了解其污染状况,以便采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行.     

嘉兴市霍乱弧菌分离株检测分析

目的比较分析嘉兴市霍乱弧菌菌株的血清型、毒力基因和分子分型特征。方法采用血清学和分子生物学方法对近年来分离到13株霍乱弧菌菌株进行血清型分布、毒力基因(ctxA、ace、zot、tcpA、cri和rtxA)携带和ERIC-PCR分型研究。结果 13株霍乱弧菌菌株,2株为O139群霍乱弧菌,11株为O1群霍乱弧菌,其中小川型9株,稻叶型2株。2株O139群霍乱弧菌菌株携带3种毒力基因;11株O1群霍乱弧菌菌株,除1株携带4种毒力基因外,其余10株携带全部6种毒力基因。ERIC-PCR分型分析显示,不同的霍乱弧菌菌株之间ERIC-PCR型别表现出一定的遗传多样性。结论嘉兴市霍乱弧菌菌株大多携带多种毒力基因,而且来源多样,防控工作任重而道远。     

珠江河口水体霍乱弧菌监测及菌株毒力基因分布特征

目的 了解珠江河口水体中O1群和O139群霍乱弧菌的分布状况,分析菌株的分子特征和毒力基因特征.方法 对2009年1月至2010年12月从珠江河口水体中分离的59株O1群和10株O139群霍乱弧菌,采用聚合酶链反应(PCR)方法体外检测ctxA、tcpA、ace、zot、tcpl,hlyA、toxR和ompU等毒力相关基因,并进行毒力相关基因分型分析,对限制性内切酶Not Ⅰ消化后的基因组DNA进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,采用BioNumerics软件分析图谱,得到菌株带型相似性的聚类分析树状图.结果 2009-2010年共采集1 152份水体标本,分离得到O1/O139群霍乱弧菌69株,其中O1群埃尔托霍乱弧菌59株(小川型18株,稻叶型41株),O139群霍乱弧菌10株.PCR检测69株菌ctxA全部阴性,hlyA和toxR全部阳性,基因分型可分成9个型.稻叶型菌株中,34.15％(14/41)为hlyA+ toxR+ ompU+ ace+ zot+ tcpⅠ+型;小川型菌株中,66.67％(12/18)为hlyA+toxR+型;O139群菌株中,70％(7/10)为hlyA+ toxR+型.PFGE分型发现,O139群菌株PFGE相似度为69.9％～ 95.5％;O1群菌株相似度为72.8％～ 100.0％,可分成3个聚类.结论 在霍乱流行间歇期,该地区外环境水体中O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株广泛存在,基因型别多样.     

2001至2005年广州地区霍乱弧菌主要致病相关基因特征分析

目的 应用多重聚合酶链反应（PCR）检测方法和测序研究近5年广州地区分离的霍乱弧菌的4种致病相关基因的携带情况及霍乱肠毒素基因ctxA的变异情况。方法针对霍乱肠毒素A亚单位基因（ctxA）、小带联结毒素基因（zot）、辅助霍乱肠毒素基因（ace）、毒素共调菌毛亚单位A基因（tcpA）设计引物,将多重PCR方法应用于广州地区分离的276株霍乱弧菌的致病相关基因的检测。对ctxA基因的PCR扩增产物进行核苷酸序列测定,探讨ctxA扩增产物的同源性。结果 近5年广州地区分离的276株霍乱弧菌中,人源株中93．9％为致病相关基因A型（ctxA^＋tcpA^＋ace^＋zot^＋型）菌,其余6．1％为致病相关基因C型（ctxA^-tcpA^-ace^-zot^-型）菌,临床分离的致病相关基因A型菌分离自轻、中、重型病例和带菌者,其中有68．5％分离自轻型病例,21．9％分离自带菌者,临床分离的致病相关基因C型菌中有63．6％分离自轻型病例,36．4％分离自带菌者,C型菌引起带菌者的比例高于A型菌;78株环境分离株中9．0％为致病相关基因A型菌,35．9％为致病相关基因B型（ctxA^-tcpA^-ace^＋zot^＋型）菌,55．1％为致病相关基因C型菌。霍乱肠毒素基因ctxA变异较小。结论 多重PCR方法揭示了广州地区霍乱弧菌致病相关基因模式的多态性,为深入研究人源和环境来源霍乱菌株致病相关基因的演化提供了有效手段,并对本地区霍乱的预防、控制和预警具有重要的指导意义。     

浙江沿海地区海及水产品霍乱弧菌污染状况调查分析

目的了解浙江省沿海地区的海及水产品霍乱弧菌污染状况和菌型特征,为制定海及水产品卫生管理措施和霍乱防治对策提供科学依据。方法选择3个沿海县市,分别在农贸市场、养殖场（或捕捞点）、餐馆等场所采集990份海及水产品标本,标本经碱性蛋白胨水增菌,4号培养基选择性培养,生化鉴定和血清、噬菌体分型,毒力基因检测。结果海及水产品带菌率为1．41％,其中甲鱼带菌率最高为8．9％。有稻叶型、小川型、O139群等3个血清型,各型菌株数分别为2株、2株、10株。12株菌株中9株有毒力基因,其中5株有3个毒力基因,1株只有CTX、ACE毒力基因,3株只有ZOT毒力基因。结论浙江省沿海地区海及水产品受到霍乱弧菌污染,霍乱弧菌3种菌型全有,大多具有毒力基因,能引起霍乱暴发的危险。     

Molecular identification of pathogenicity genes and ERIC types in Vibrio cholerae O1 epidemic strains from Mozambique

The phenotypic and genotypic profiles of the V. cholerae strains causing the Mozambican 1997-8 epidemic were characterized to provide a reference for comparison with other epidemic strains. A total of 75 strains of V. cholerae O1 isolated in different provinces, were analysed. Strains were characterized by PCR for detecting toxin genes (ctxA, zot and ace), virulence associated genes (tcpA. nanH, hlyA and torR) and ERIC sequences. All V. cholerae strains were serotype O1, Ogawa, biotype El Tor. MIC testing showed a high proportion of strains multi-resistant to drugs (100% to cotrimoxazole and 52% to tetracycline) and susceptibility to ciprofloxacin. The isolates contained two intact copies of the CTX genetic element and all other genes tested. PCR of restricted DNA revealed two ERIC types: the first in provincial isolates, also predominant in other African epidemic strains, and the second in Maputo isolates (the national capital).     

Detection of virulence associated genes, haemolysin and protease amongst Vibrio cholerae isolated in Malaysia

Eighty-four strains of Vibrio cholerae O1, O139 and non-O1/non-O139 from clinical and environmental sources were investigated for the presence of the toxin co-regulated pilus gene, tcpA, the virulence cassette genes ctxA, zot, ace and cep and also for their ability to elaborate haemolysin and protease. The ctxA and zot genes were detected using DNA-DNA hybridization while the ace, cep and tcpA genes were detected using PCR. Production of haemolysin and protease was detected using mammalian erythrocytes and an agar diffusion assay respectively. Analysis of their virulence profiles showed six different groups designated Type I to Type VI and the major distinguishing factor among these profiles was in the in vitro production of haemolysin and/or protease. Clinical O1, O139 and environmental O1 strains were similar with regard to presence of the virulence cassette genes. All environmental O1 strains with the exception of one were found to possess ctxA, zot and ace giving rise to the probability that these strains may actually be of clinical origin. One strain which had only cep but none of the toxin genes may be a true environmental isolate. The virulence cassette and colonization factor genes were absent in all non-O1/non-O139 environmental strains but production of both the haemolysin and protease was present, indicating that these may be putative virulence factors. These findings suggest that with regard to its pathogenic potential, only strains of the O1 and O139 serogroup that possess the tcpA gene which encodes the phage receptor, have the potential to acquire the CTX genetic element and become choleragenic.     

2009年杭州市01群霍乱弧菌的分子特征及耐药性

目的 研究2009年杭州市O1群霍乱弧菌分离株的分子特征及菌株耐药情况。方法 选取2009年分离自杭州市7个区县的30株O1群霍乱弧菌分离株,用PCR检测其肠毒素A基因（ctxA）和毒素共调菌毛A基因（tcpA）,以脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis,PFGE）进行分子分型并作相似度分析,用改良K-B纸片法检测菌株的耐药谱。结果 30株O1群霍乱弧菌分离株中,ctxA -并tcpA+基因型菌株有24株,占80.00％;ctxA -并tcpA -基因型菌株有4株,占13.33％;ctxA+并tcpA+基因型菌株有2株,占6.67％。27株菌（3株因降解未分型）分为11种PFGE型别(P1～P11);23株ctxA -并tcpA+基因型菌株（1株因降解未分型）分为P1～P7等7种型别,相似度≥91.4％,其中P1型占56.52％ (13/23)。7株从同一起暴发事件中分离的ctxA -并tcpA+菌株的PFGE型别分别为P1（6株）和P2（1株）,相似度为97.6％。24株ctxA -并tcpA+菌株对氨苄西林、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为20.83％( 5/24)、4.17％ (1/24)和4.17％ (1/24)。结论2009年杭州市O1群霍乱弧菌流行株的基因型是ctxA -并tcpA+型;ctxA -并tcpA+型O1群霍乱弧菌菌株的耐药情况尚不严重。     

Preferential association of the heat-stable enterotoxin gene (stn) with environmental strains of Vibrio cholerae belonging to the O14 serogroup

Toxigenic Vibrio cholerae O1 and O139 serogroups have the capacity of causing epidemic and pandemic cholera but are infrequently found in the environment. The other serogroups are abundant in aquatic environments but do not possess the virulence genes necessary for causing the disease. Of the 559 environmental strains of V. cholerae, collected during different periods from environmental samples in Calcutta, 9 (1.6%) harboured the heat-stable enterotoxin gene (stn). Six of the 9 strains belonged to the O14 serogroup. Thus, V. cholerae strains carrying the stn gene revealed preferential association with the O14 serogroup. Three of the six strains harboured the tcpA gene of the E1 Tor type, which is an unusual feature among environmental V. cholerae strains. A strain that possessed the E1 Tor type tcpA also had the CTX prophage. Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) revealed that the stn gene positive O14 strains of V. cholerae were not clonal.