低氧对RAW264．7细胞中糖皮质激素受体表达的调节

目的 观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞在低氧培养箱(1% O2)内不同时间段糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA和蛋白表达的变化,探讨低氧对RAW264.7细胞中GR表达的调节.方法 采用体外培养的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,将细胞接种于60 mm dish内,细胞长至50%时,将培养液置换为含5%无激素胎牛血清的无糖DMEM培养液,放入低氧培养箱内,同时输入含1% O2、5% CO2、94% N2 的混合气体,分别于低氧处理4、8、12 h后将细胞取出,抽提RNA或者蛋白,应用real-timePCR 和Western印迹分析测定GRmRNA和蛋白的表达水平,以未低氧处理RAW264.7细胞为对照.结果 低氧处理4 h可使RAW264.7细胞中GR mRNA的表达明显上调为对照的1.8倍(P<0.05),处理至12 h GRmRNA的表达仍高于对照,约为对照的2.7倍(P<0.05);低氧处理RAW264.7细胞8 h GR蛋白的表达也明显升高,约为对照的1.7倍(P<0.05),至低氧处理12 h,GR蛋白的表达仍高于对照.结论 低氧可以上调体外RAW 264.7细胞GR mRNA和蛋白的表达.     

香烟烟雾提取物对RAW264.7细胞增殖、自噬的影响及机制

目的研究香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对RAW264. 7细胞增殖、自噬的影响及其机制。方法以RAW264. 7细胞作为实验对象,实验分为对照组、阳性对照组(剥夺血清)和CSE组(2%、3%、4%、5%CSE)。利用增强型CCK-8试剂盒测定CSE对RAW264. 7细胞增殖的毒性作用,Western blot实验、mRFP-GFP-LC3细胞荧光斑点计数进行CSE影响RAW264. 7细胞自噬及其机制的研究。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,处理时间为24 h,CSE组吸光度值(0. 671±0. 03、0. 746±0. 10、0. 584±0. 07、0. 588±0. 05)显著下降,显示CSE有效抑制了RAW264. 7细胞的增殖,且差异有统计学意义(P<0. 05)。Western blot实验结果显示,与对照组相比,CSE组LC3B蛋白表达量增加且最高表达量在6 h(6. 612±0. 35)、12 h(4. 383±1. 99)和24 h(5. 781±0. 78)均不同,P62蛋白表达量下降且最低表达量在6 h(1. 815±0. 08)、12 h(0. 274±0. 06)和24 h(0. 414±0. 06)也不同,Pm TOR(1. 744±0. 15)、P-AKT(0. 376±0. 03)蛋白表达量下降,差异具有统计学意义(P<0. 05),而Beclin1蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义。mRFP-GFP-LC3细胞荧光斑点计数结果显示,CSE组绿色荧光斑点(GFP)显著减少,红色荧光斑点(mRFP)稳定不变,mRFP-GFP结合后显示为黄色和红色斑点。结论CSE对RAW264. 7细胞的增殖具有毒性作用,且通过AKT/m TOR信号通路诱导RAW264. 7细胞产生自噬。     

电磁辐射对大鼠血清糖皮质激素水平及其受体在海马表达的影响

目的探讨糖皮质激素（glucocorticoid,GC）在电磁辐射致学习记忆功能损伤中的作用和机制。方法以65mW／cm2电磁波辐射大鼠20min,于辐射后10、30min及3、12 h应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,放射免疫法测定血清中皮质酮（corticosterone,CORT）的含量。取海马组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法检测糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的表达。结果与相应对照组比较,大鼠的学习记忆能力在电磁辐射后10、30 min及3 h下降,12 h无明显变化。血清CORT含量在辐射后10、30 min明显升高,而后逐渐降低,12 h后再次明显升高。海马组织GR mRNA、总GR蛋白表达在辐射后10、30 min无明显变化,3、12 h后表达均明显下调,与对照组相比,mRNA表达分别降低了69％、76％,蛋白降低了58％、67％,差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较,胞浆GR在辐射后3、12 h明显下降,同时胞核蛋白明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）,说明在GC作用的后期,辐射后3、12 h GR核转位明显。结论糖皮质激素的升高及其受体表达的下调可能参与了电磁辐射致学习记忆损伤的过程,且损伤早期GC以快速的非基因组作用机制为主,后期则以经典的基因组机制为主。     

小檗碱对胰岛素抵抗HepG2细胞11β-羟基类固醇脱氢酶1mRNA表达的影响

目的研究小檗碱对胰岛素抵抗模型肝细胞11β-羟基类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）mRNA表达的影响。方法应用高浓度胰岛素孵育HepG2细胞24h,建立胰岛素抵抗肝细胞模型。将模型细胞分别置于含不同浓度胰岛素和小檗碱的培养液中培养24h,以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法测定培养液中的葡萄糖浓度,计算细胞对葡萄糖的吸收率。应用RT-PCR检测小檗碱作用前后模型细胞11β-HSD1mRNA的表达。结果以含10-7mol／L胰岛素的培养液孵育HepG2细胞24h后,细胞对葡萄糖的吸收明显降低,表明建模成功。模型细胞经高浓度（10μmol／L）小檗碱处理后,葡萄糖吸收率明显增加[（42．53±1．99）％VS（28．16±1．99）％,t=12．9457,P〈0．01],并且高浓度小檗碱与胰岛素对模型细胞有协同促进葡萄糖吸收的作用。模型细胞11β—HSD 1mRNA表达显著高于非胰岛素抵抗细胞（相对表达量：4．60±0．96 vs 0．67±0．42,t=4．9476,P〈0．05）。经高浓度小檗碱干预24h后,模型细胞11β-HSD1mRNA表达降低,与非胰岛素抵抗HepG2细胞相比差异无统计学意义（相对表达量：1．12±0．35VS0．67±0．42,t=1．1394,P〉0．05）。低浓度（1μmol／L）小檗碱则作用不明显。结论浓度依赖性地下调11β—HSD1mRNA表达是小檗碱改善胰岛素抵抗的作用机制之一。     

牛磺酸对大鼠视网膜光化学损伤c-fos表达影响

目的观察饲料中添加牛磺酸对光化学损伤后大鼠光感受器细胞凋亡的影响，并进一步从氧化应激基因c-fos表达变化角度探讨其防护机制。方法70只SD大鼠随机分为对照组、牛磺酸组。分别喂饲标准饲料或添加4％牛磺酸饲料喂饲15d后接受（3000±200）lx持续0，1，3，6，9，12，24h光照，凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）检测光感受器细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI）；RT．PCR法及免疫印迹法检测视网膜内c-fos mRNA以及蛋白表达水平。结果感光细胞凋亡指数随光照时间延长逐渐增加，牛磺酸组AI显著低于对照组（P〈0．05）。其中光照12h牛磺酸组与对照组AI分别为（12．3±4．7）％和（32．4±6．2）％；视网膜c-fos mRNA光照1h后一过性表达增高，牛磺酸组较对照组低（P〈0．05）；光照后视网膜c-fos蛋白表达逐渐升高。于3h达峰值。牛磺酸组显著低于对照组（P〈0．05）。结论在视网膜光化学损伤条件下，牛磺酸可能通过抑制视网膜c-fos的转录及表达。阻断光感受器细胞凋亡转导从而保护视网膜。     

SOD对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

[目的]探讨超氧化物歧化酶（SOD）对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响。[方法]对雄性Wistar大鼠行支气管肺泡原位灌洗术，获取肺泡巨噬细胞。将贴壁后的肺泡巨噬细胞分为对照组、模型组和干预组，均用无血清DMEM培养基孵育。模型组加入SiO2粉尘悬液，干预组用SOD预处理1h后再加入SiO2粉尘悬液。各组肺泡巨噬细胞分别孵育1、2、4、8、16h，用免疫细胞化学和RT-PCR方法观察其MMP-2、MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。[结果]模型组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA表达在1、2、4、8h均较对照组明显增强（P〈0．01），分别是对照组的1．229、1．358、1．401、1．354倍和1.402、1．637、1．705、1．463倍。MMP-2蛋白及其mRNA表达无明显变化。干预组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA表达在1、2、4、8h较模型组显著减弱（P〈0．05），但仍高于对照组（P〈0．05）。[结论]应用SOD可降低染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA的表达。     

以甲醇和汽油为燃料的汽车尾气对RAW 264.7细胞的细胞毒性及对其增殖和凋亡的影响

目的研究以甲醇和汽油为燃料的汽车尾气（以下简称甲醇车尾气和汽油车尾气）对小鼠RAW264．7细胞的细胞毒性及对其增殖和凋亡的影响。方法用甲醇车尾气和汽油车尾气对RAW264．7细胞染毒,用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法确定受试物的染毒剂量。RAW264．7细胞分甲醇车尾气组（分别用0．0078、0．0156、0．03125、0．0625、0．125L／ml的甲醇车尾气染毒）和汽油车尾气组（染毒剂量与甲醇车尾气组相同）,并分别设空白对照组。分别对各个组进行乳酸脱氢酶（LDH）活力测定、细胞形态学观察、检测细胞周期并计算细胞增殖指数及计算凋亡率。结果在MTT试验中,汽油车尾气组在0．125、0．5、1、2、4L/ml剂量组的光密度（OD）值低于对照组（P〈0．01）,甲醇车尾气组在0．5、1、2、4L／ml剂量组的OD值低于对照组（P〈0．01）。汽油车尾气组在0．1250．0625、0．03125L／ml剂量组的LDH活力高于对照组（P〈0．05）;汽油车尾气组0．03125、0．0625L／ml剂量组和甲醇车尾气组0．0625L／ml剂量组的细胞增殖指数低于对照组（P〈0．05）;甲醇车尾气组和汽油车尾气组在0．0156、0．03125、0．0625L／ml剂量组凋亡率均高于对照组（P〈0．05）。结论同等剂量下甲醇车尾气的细胞毒性明显大于汽油车尾气;汽油车尾气和甲醇车尾气对RAW264．7细胞株凋亡的影响相近;汽油车尾气对细胞增殖的抑制作用略大于甲醇车尾气。     

丙型肝炎病毒F蛋白体外免疫调节作用

目的探讨HCVF蛋白对DC及T细胞的免疫调节作用。方法构建HCVF蛋白的表达菌株,并表达、纯化F蛋白;收集42例慢性丙型肝炎患者及30例健康对照,检测血清抗F蛋白抗体的阳性率;分离PBMC,并体外诱导分化DC细胞,用纯化的F蛋白刺激DC细胞,流式细胞术检测DC细胞表面CD69、CD80、CD95、CD95L的表达情况;用纯化的F蛋白刺激PBMC,ELISA方法检测细胞上清中IFNγ、IL-12、IL-4、IL-10的含量。结果成功克隆表达F蛋白,纯度较高（浓度0．8mg／mL,纯度大于90％）;42例慢性丙型肝炎患者m清中特异性抗F蛋白抗体阳性率为42．88％（18／42）;F蛋白可诱导DC细胞表面CD69、CD80、CD95L、CD95明显上调．且丙型肝炎患者这些分子的表达水平明最高于健康对照组（t=2．824、3．707、4．788、3．550,P均〈0．05）。F蛋白诱导丙型肝炎患者PBMC产生的Th1型细胞因子IFNγ、IL-12含量明显低于健康对照组（t=4．583、3．708,P均〈O．05）,而Th2型细胞因子IL-4、IL-10含量明显高于健康对照组（t=3．483、2．872,P均〈0．05）。结论丙型肝炎F蛋白可诱导机体产生特异性抗体,上凋DC细胞表面活化及凋亡分子．并可促进Th1／Th2失衡。     

Smad7对AGEs介导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨Smad7对终末期糖基化终产物（AGEs）介导大鼠近端肾小管上皮细胞转分化的影响。方法采用Tet-on质粒系统构建强力霉素（Dox）调控Smad7表达的NRK52E株。转染的NRK52E细胞根据刺激条件不同分为（1）Dox-组：单纯AGEs刺激；（2）Dox＋组：AGEs＋Dox刺激。采用细胞免疫化学方法检测p-Smad2／3核表达水平，Western blot方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙粘着糖蛋白（E-cadherin）蛋白表达。结果Dox调控Smad7表达的NRK52E细胞株构建成功。Dox可进一步上调AGEs介导的Smad7 mRNA和蛋白表达（t=3．05。P〈0．01）。Smad7高表达可抑制AGEs介导NRK52E细胞30min和24h P-Smad2／3核表达水平（t=4．5，t=3．2，P〈0，01）。明显下调α-SMA和上调E-Cadherin蛋白表达（t=3．47，t=3．25。P〈0．01）。结论Smad7通过抑制Smad信号通路活化，阻抑AGEs介导的肾小管上皮细胞向肌成纤维母细胞转分化。     

低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌中的表达

目的探讨低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变及正常宫颈组织中的表达及意义。方法采用免疫组化sP法检测低氧诱导因子-1α和p53蛋白在54例宫颈癌、28例宫颈上皮内瘤样变和20例正常宫颈组织中的表达情况。结果①低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌中强阳性表达、宫颈上皮内瘤样变中少量表达、正常宫颈组织中无表达，三者之间有显著性差异（X^2=25．974，P〈0．01）；②低氧诱导因子-1α在宫颈上皮内瘤样变Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中阳性表达呈上升趋势，但无显著性差异（X^2=1．179，P〉0．05），p53蛋白在宫颈上皮内瘤样变Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中表达无显著性差异（r=1．426，P〉0．05）；③低氧诱导因子-1α表达与宫颈癌临床分期显著相关（X^2=7．488，P〈0．05），与分化程度显著相关（X^2=8．589，P〈0．05），与淋巴结转移显著相关（X^2=12．295，P〈0．05），并且与肿瘤恶性程度成正相关（r=0．370，P〈0．05），p53蛋白表达与宫颈癌临床分期显著相关（X^2=6．888，P〈0．05）；④低氧诱导因子-1α与p53蛋白在宫颈癌组织中阳性表达呈正相关（r=0．339，P〈0．01）。结论低氧诱导因子-1α和p53蛋白过度表达，在宫颈癌的发生、发展过程中具有重要作用，是宫颈癌发生的早期事件，其表达水平随着宫颈癌恶性程度的增加而增加，且低氧诱导因子-1α与宫颈癌的发展和转移有关；突变型p53蛋白表达增加的同时低氧诱导因子-1α表达增加。二者具有正相关性，联合检测可作为判定肿瘤恶性程度、预测转移和评估预后的指标。     

A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期大量诱生SOCS-1蛋白的机制研究

摘要:目的　本研究利用A族链球菌（GAS）感染小鼠巨噬细胞,来分析SOCS-1的表达情况,以此探索GAS进行免疫逃逸的可能机制。方法　同时培养RAW264.7巨噬细胞和C57小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）,以感染复数（MOI）100∶1加入对数生长期GAS及经热灭活处理的GAS（70℃加热处理60 min）刺激RAW264.7及BMDMs巨噬细胞1 h,弃去细菌后,继续培养2,4,6,8,10 h,分别收集细胞,通过RT-PCR及Western blot 方法检测JAK/STAT通路的活化及SOCS-1的表达情况。结果　GAS感染RAW264.7及BMDMs细胞4 h后p-STAT1的水平明显高于热灭活组（P＜0.05）,6 h达到高峰,8 h后开始降低;同时,两组细胞SOCS-1基因的表达,GAS组4 h开始明显升高,6 h达到高峰,8 h开始降低;而热灭活GAS组SOCS-1基因在感染后6 h后开始升高,且升高的幅度明显小于GAS组（P＜0.05）。SOCS-1蛋白在GAS感染后6 h可以检测到,而热灭活GAS刺激细胞10h检测不到SOCS-1的表达。结论　GAS感染小鼠初期通过快速活化JAK/STAT通路引起SOCS-1的表达,以此来逃避机体的免疫攻击。     

盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞PGE_2、COX-2表达的影响

目的研究盐酸小檗碱对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响,探讨盐酸小檗碱的抗炎作用机理。方法MTT法测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响;酶联免疫法(ELA)检测盐酸小檗碱对PGE2生成的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2 mRNA的表达;蛋白印迹法(Western Blotting)检测COX-2的蛋白表达。结果盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞有生长增殖抑制作用;盐酸小檗碱抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞PGE2的生成;但是对COX-2 mRNA及COX-2蛋白表达均无明显影响。结论盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞有生长增殖抑制作用,盐酸小檗碱不是通过抑制COX-2生成的途径来影响PGE2的生成的。     

17β雌二醇对脂多糖致炎性拮抗作用

目的研究17β雌二醇(17β-estradiol,E2)对核转录因子(NF-кB)转录活性及Toll样受体(TLR4)表达的影响。方法采用脂多糖和17β雌二醇同时作用于单核巨噬细胞RAW264.7,采用逆转录-聚合酶链反应方法检测细胞表面TLR4基因的表达;用荧光素酶报告基因转染试验观察NF-кB转录活性变化。结果对照组、LPS单独刺激组和17β雌二醇预作用组细胞TLR4 mRNA的相对表达分别为(1.23±0.21)(、1.52±0.28)和(1.11±0.27),NF-κB转录活性的相对值分别为(126±32)(、306±58)和(247±37),LPS刺激可使细胞TLR4 mRNA表达和NF-кB转录活性增强,而17β雌二醇预作用可明显降低TLR4 mRNA的表达和NF-кB转录活性,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 17β雌二醇能通过调节TLR4及转录因子NF-кB的活性呈现一定的抗炎作用。     

高温及内毒素复合因素对IL-1 βmRNA表达影响

目的 探讨高温和内毒素(LPS)复合因素对RAW 264.7细胞IL-1β mRNA表达的影响.方法 采用体外培养的巨噬细胞系RAW 264.7细胞,分为37,40℃对照组,37,40℃LPS组.用RT-PCR方法检测RAW 264.7细胞IL-1 βmRNA表达.结果 RAW264.7细胞在37和40℃加或不加LPS条件下随着时间的变化IL-1 βmRNA表达各不相同,在37℃条件下,LPS组随着时间的不断延长,IL-1 βmRNA表达不断增强;40 ℃条件下对照组IL-1βmRNA表达亦表现出不断增强,而LPS组IL-1 βmRNA表达表现为先增强后减弱.结论 高温和内毒素复合因素能够下调RAW 264.7细胞IL-1 βmRNA表达,考虑其原因与高温和内毒素复合因素诱导产生的热休克蛋白及该条件下RAW 264.7细胞的大量凋亡有关.     

不同辐照方式对IL-4刺激的RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响

目的 研究不同辐照方式对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响,为肿瘤的预后影响因素研究提供依据。方法 实验分为两个部分,第一部分用0、2、5、10 Gy X射线照射细胞24 h后给予IL-4刺激12 h,第二部分用IL-4刺激3 h后用0、2、5、10 Gy X射线照射9h,Western blot方法检测RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白的表达情况。结果 照射+IL-4组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;IL-4+照射组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;与照射+IL-4组比较,IL-4+照射组RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF的增加更显著（P<0.05）。结论 电离辐射能导致RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达增高,不同辐照方式对RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响不同,本研究为肿瘤的治疗提供作用靶点。     

黄芩素干预宫颈癌细胞凋亡机制的研究

摘要:目的　观察通过使用不同浓度黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后,TIMP2及凋亡相关因子Bax、Bcl2 mRNA及蛋白水平表达的变化。方法　体外培养HeLa细胞株,分为空白对照组、100 μmol/L干预组、200 μmol/L干预组,培养24 h。相差显微镜下观察细胞形态及数量的变化。流式细胞技术法检测细胞周期的变化。RT-PCR法检测TIMP2、Bax、Bcl2 mRNA水平的表达变化。Western Blot法检测TIMP2、Bax、Bcl2蛋白水平的表达变化。结果　黄芩素干预24 h后,与空白对照组相比较,各组细胞G1期均受阻滞,组织程度与黄芩素干预浓度成正向变化,Bcl2的mRNA及蛋白表达与黄芩素干预浓度浓度相关,呈逐渐降低的趋势（P＜0.05）,TIMP2、Bax的mRNA及蛋白水平表达趋势为随黄芩素浓度增加而逐渐增强（P＜0.05）。结论　黄芩素通过阻滞细胞周期中G1期,上调Bax,下调TIMP2和Bcl2的表达,促使HeLa细胞凋亡。     

介孔纳米SiO2致小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞毒性与氧化损伤

[目的]探讨介孔纳米SiO2对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞的毒性和氧化损伤作用。[方法]设4个浓度组（2.5、10、50、100I.tg／mL）和生理盐水对照组,染毒24h后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法观察细胞毒性,并根据染毒后细胞的总蛋白（TP）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的变化情况分析介孔纳米SiO2的细胞毒性和氧化损伤作用。[结果]10、50和100μg／mL浓度组细胞存活率随着染毒浓度的升高而降低,差异有统计学意义;50、100μg／mL浓度组细胞及其上清液中TP、LDH、NO和MDA含量随染毒浓度增加而升高,而GSH和SOD含量降低;而且与细胞发生融解破碎、间隙加大等形态学改变情况相符。[结论]介孔纳米SiO2对体外培养巨噬细胞株RAW264.7具有细胞毒性和氧化损伤作用,且随剂量的加大而增强。     

低氧对rAAV-2介导的 hVEGF165基因在大鼠心肌细胞中表达的影响

目的探讨低氧对人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因在心肌细胞中表达的影响。方法以重组2型腺相关病毒(rAAV-2)为载体,构建rAAV2/hVEGF165,转染大鼠原代心肌细胞。对心肌细胞进行低氧培养,并于培养的0、24、48、72h,分别应用RT-PCR技术检测VEGF165 mRNA表达、ELISA法检测hVEGF165蛋白的水平,并与对照组(予以常氧培养)进行比较。结果rAAV2/hVEGF165体外转染后,低氧培养的心肌细胞在24、48、72hhVEGF165 mRNA转录水平均明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05);在低氧培养的24、48、72h其培养上清中hVEGF165蛋白含量亦明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.05)。结论低氧可促进重组2型腺相关病毒介导的人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因在心肌细胞中表达。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对急性SiO2染尘肺组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的观察N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对急性SiO2染尘肺组织基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法清洁级Wistar大鼠随机分为3组,对照组经气管注入生理盐水,损伤组和干预组注入SiO2粉尘悬液,其中干预组在注入SiO2粉尘悬液前1 h用NAC预处理。3组大鼠分别在染尘后第1,3,7,14,28天取出肺组织,应用免疫组织化学和RT-PCR方法观察其MMP-2和MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。结果损伤组肺组织MMP-2和MMP-9表达均较对照组增高。MMP-2蛋白表达在各时间点分别是对照组的1.440,1.811,2.379,1.672和1.412倍,差异均有统计学意义(P<0.01);mRNA表达分别是对照组的2.061,2.261,2.931,2.000和1.615倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP-9蛋白在各时间点分别是对照组的1.450,1.661,2.186,1.563和1.526倍,差异均有统计学意义(P<0.01);mRNA表达在第1,3,7,14天高于对照组,分别是对照组的1.676,2.027,2.584和2.178倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。干预组肺组织MMP-2蛋白及mRNA表达在各时间点均低于损伤组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。MMP-9蛋白表达在各时间点低于损伤组,高于对照组;mRNA表达在第1,3,7,14天低于损伤组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论应用NAC可以部分抑制急性矽尘染毒肺组织表达MMP-2和MMP-9。