二甲双胍对镉诱导小鼠急性肝毒性的影响

目的：探讨二甲双胍是否可以缓解镉所诱导的小鼠肝毒性。方法：将雄性野生型(WT)小鼠和肝脏特异性敲除编码PP2A Aα的PPP2R1A基因(HO)小鼠随机各分为4组,包括对照组(0.9%生理盐水)、镉染毒组(1.5 mg/kg CdCl₂)、二甲双胍处理组(100 mg/kg二甲双胍)、镉和二甲双胍联用组(1.5 mg/kg CdCl₂,100 mg/kg二甲双胍)。各组小鼠连续7 d分别腹腔注射上述受试物,采用半自动血生化分析仪检测小鼠外周血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)浓度;HE及油红O染色观察肝脏组织病理学改变;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织中镉相关转运蛋白zip14、dmt1、mrp1、oct2、bsep和zip8的mRNA表达水平。L02人肝细胞分别用CdCl₂染毒和/或二甲双胍处理后,CCK-8试剂盒法检测细胞活力,荧光显微镜下检测Fluo-4 AM的荧光强度评估细胞内钙离子水平。结果：镉染毒时,WT小鼠血浆ALT和AST浓度分别升高了86.40%和3.19%,出现肝细胞...     

PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的人肝L02细胞DNA损伤

目的:探讨人正常肝细胞内蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基(PP2A-B56γ,由PPP2R5C基因编码)高表达对镉诱导相关基因转录水平和DNA损伤效应的影响,并探讨其作用机制。方法:构建PP2A-B56γ高表达L02-2R5Cc和空白载体对照L02-pBabe细胞模型;两种细胞分别给予CdCl_2(Cd)、TNFα单独处理及联合处理后,实时荧光定量-PCR(QRT-PCR)检测不同处理组PPP2R5C和金属硫蛋白1B(MTIB)mRNA转录水平;彗星试验(SCGE)检测细胞DNA断裂损伤情况;并按照3×2的析因设计分析不同处理之间是否存在联合作用及作用类型。结果:与L02-pBabe细胞相比较,L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C、外源性PPP2R5C-FLAG mRNA显著高表达(P0.05),细胞株构建成功。3种因素单独处理时,与阴性对照组相比,Cd降低PPP2R5C、升高MT1B mRNA表达,PPP2R5C基因高表达诱导的效应与Cd处理相反,TNFα降低PPP2R5C和MT1B mRNA表达(均P0.05);析因分析表明,在PPP2R5C和PPP2R5C-FLAG mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd、与TNFα之间均存在协同性交互效应(P0.05);在MT1B mRNA检测中,PPP2R5C高表达与cd和TNFα之间均表现为拮抗作用,PPP2R5C高表达与TNFα为协同抑制作用(均P0.05)。SCGE检测表明,与阴性对照相比.Cd诱导彗星尾长、尾矩、尾部DNA含量和拖尾细胞阳性率显著增高(P0.05),TNFα、PPP2R5C高表达单独作用均不引起DNA损伤(P0.05),但两两联合作用的析因分析结果表明,TNFα预处理与Cd处理对DNA损伤具有协同作用,PPP2R5C高表达与Cd处理存在拮抗作用,交互作用均具有统计学意义(P0.05)。结论:Cd抑制肝细胞PPP2A-B56γ编码基因的转录并显著诱导DNA损伤,PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的DNA损伤,而炎症因子可增强镉对细胞DNA的损伤。     

微囊藻毒素LR对人FL和HL7702细胞PP2A各亚基转录水平的影响

背景与目的： 研究微囊藻毒素LR(microcystin LR,MCLR)对正常人羊膜细胞FL和肝实质细胞HL7702蛋白磷酸酶2A(PP2A)各亚基mRNA表达的影响。材料与方法： FL和HL7702经100 nmol/L MCLR作用24 h后,采用实时定量PCR方法检测PP2A各亚基mRNA表达的变化。实验并设溶剂对照组。 结果： FL细胞PP2A各亚基mRNA表达部分上升,部分下降;而HL7702细胞PP2A各亚基mRNA表达均上升。 结论： MCLR对肝来源细胞的特异性作用可能与其肝脏毒性有关。     

蛋白磷酸酶2A调节亚基在肿瘤发生发展过程中的作用

蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）是真核生物体内一种重要的Ser/Thr蛋白磷酸酶,在细胞的生理过程中起着重要的作用。PP2A全酶由3个亚基组成,第3个亚基为调节亚基,分属于4个家族。调节亚基对PP2A的分布、底物专一性及功能有决定性影响。本文就含有不同调节亚基的PP2A在肿瘤发生发展过程中的作用作一综述,进而为肿瘤防治提供新的思路。     

小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达片段I-2^PP2A在多种肿瘤细胞中表达的研究

目的:检测小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达片段I-2PP2A在多种肿瘤细胞中的表达情况,以了解I-2PP2A基因的表达分布特点及功能特征,为进一步相关研究奠定基础.方法:利用Northern杂交与半定量RT-PCR相结合的方法检测I-2PP2A在H446、H446/CDDP、A549、A549/CDDP、SK-HEP-1、Namalwa、SGC7901等7种肿瘤细胞中的表达.结果:I-2PP2A在H446细胞、H446/CDDP细胞及Namalwa细胞中均有表达,经进一步图像分析及统计学处理表明I-2PP2A在H446/CDDP细胞中的表达量明显高于在H446细胞中的表达量(P<0.01),在H446/CDDP与Namalwa间的表达量无明显差异(P>0.05).结论:相对于H446细胞来说,I-2PP2A在其耐药细胞株H446/CDDP中有差异高表达.I-2PP2A可能参与了H446/CDDP多药耐药性的形成,其参与途径可能与细胞凋亡有关.     

沉默I2PP2A基因对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨siRNA沉默I2PP2A基因表达对人胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法 脂质体转染法将靶向I2PP2A的短发夹状RNA（short hairpin RNA, shRNA）转染BGC-823细胞;Real-time RT-PCR和Western blot观察转染后胃癌BGC-823细胞I2PP2A mRNA和蛋白表达的变化;WST-1法和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化;最后采用蛋白质印迹分析法检测三组胃癌细胞中cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结果 转染I2PP2A siRNA后胃癌BGC-823细胞的I2PP2A mRNA及蛋白表达明显受抑制;I2PP2AmRNA和蛋白表达下调抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结论 I2PP2A表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1和MMP-9表达下调密切相关,I2PP2A可能成为胃癌治疗的新靶点之一。     

冈田酸对喉鳞癌细胞系PP2A活性及迁移的影响

目的：探讨冈田酸（OA）对喉鳞癌细胞系（Hep-2）活性和迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）比色实验确定OA作用于Hep-2的最大浓度;酶活性实验检测不同浓度（0、50、100 nmol/L） OA对Hep-2蛋白磷酸酶2A （PP2A）活性的影响;划痕实验检测Hep-2在不同浓度（0、50、100 nmol/L） OA作用下迁移能力的变化。结果：50、100、200 nmol/L OA作用24 h后Hep-2的相对活力分别为96.7%±1.8%、82.9%±12.6%和57.2%±7.7%,与对照组（100%）比较均明显下降（P均<0.05）。50和100 nmol/L OA作用24 h后PP2A的相对活性分别为30.90%±12.01%和8.98%±4.96%,与对照组（100%）相比明显下降（P<0.05）。划痕试验中,经OA作用24及48 h后Hep-2细胞的迁移能力与对照组相比均明显减弱（P<0.05）,并且100 nmol/L OA处理组迁移能力的减弱程度较50 nmol/L OA处理组更明显（P<0.05）。结论：100 nmol/L冈田酸明显抑制Hep-2细胞PP2A活性并降低了细胞的迁移能力。     

Overexpression of PP2A-B56 γrepressed the effect of cadmium on DNA damage in human normal L02 liver cells

目的:探讨人正常肝细胞内蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基(PP2A-B56γ,由PPP2R5C基因编码)高表达对镉诱导相关基因转录水平和DNA损伤效应的影响,并探讨其作用机制.方法:构建PP2A-B56 γ高表达L02-2R5Cc和空白载体对照L02-pBabe细胞模型;两种细胞分别给予CdCl2(Cd)、TNFα单独处理及联合处理后,实时荧光定量-PCR(QRT-PCR)检测不同处理组PPP2R5C和金属硫蛋白1B (MT1B) mRNA转录水平;彗星试验(SCGE)检测细胞DNA断裂损伤情况;并按照3×2的析因设计分析不同处理之间是否存在联合作用及作用类型.结果:与L02-pBabe细胞相比较,L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C、外源性PPP2R5C-FLAG mRNA显著高表达(P＜0.05),细胞株构建成功.3种因素单独处理时,与阴性对照组相比,Cd降低PPP2R5C、升高MT1B mRNA表达,PPP2R5C基因高表达诱导的效应与Cd处理相反,TNFα降低PPP2R5C和MT1B mRNA表达(均P＜0.05);析因分析表明,在PPP2R5C和PPP2R5C-FLAG mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd、与TNFα之间均存在协同性交互效应(P＜0.05);在MT1B mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd和TNFα之间均表现为拮抗作用,PPP2R5C高表达与TNFα为协同抑制作用(均P＜0.05).SCGE检测表明,与阴性对照相比,Cd诱导彗星尾长、尾矩、尾部DNA含量和拖尾细胞阳性率显著增高(P＜0.05),TNFα、PPP2R5C高表达单独作用均不引起DNA损伤(P＞0.05),但两两联合作用的析因分析结果表明,TNFα预处理与Cd处理对DNA损伤具有协同作用,PPP2R5C高表达与Cd处理存在拮抗作用,交互作用均具有统计学意义(P＜0.05).结论:Cd抑制肝细胞PPP2A-B56γ编码基因的转录并显著诱导DNA损伤,PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的DNA损伤,而炎症因子可增强镉对细胞DNA的损伤.     

蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子在肿瘤中的作用

蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在绝大多数肿瘤中高表达.CIP2A能够与转录因子Myc和蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A,PP2A)直接相互作用,抑制PP2A对Myc第62位丝氨酸的磷酸化作用,进而阻止Myc蛋白降解,该功能是CIP2A促癌作用的重要体现.CIP2A在肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移、上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、细胞周期及抗药性等方面发挥着重要的作用;同时,CIP2A也是一些肿瘤诊断和预后的潜在生物标志物.本文就近年来CIP2A在肿瘤中的表达、调控以及其在肿瘤细胞中的作用和其作为潜在抗肿瘤药物靶标的研究作一综述.     

α4在化学致癌物诱导细胞转化中的作用

目的：探讨α4在化学致癌物诱导细胞转化中的可能作用。方法：采用免疫印迹检测化学致癌物诱导既往转化细胞模型和肝肿瘤细胞株中α4的表达水平，再利用病毒感染法在肝永生化细胞株L02R上构建α4高表达（L02R-α4）和低表达（L02R-SHα4）的细胞株，检测其细胞生长速度和转化能力。进一步选择已建立的细胞株、化学致癌物AFB1诱导转化的细胞（L02RT-AFB1）及肝肿瘤细胞株HepG2和SMMC等，在有或无mTOR通路抑制剂雷帕霉素处理下，通过免疫印迹检测mTOR下游两个分子p70S6K1和4E-BP1的表达及磷酸化水平。结果：在化学致癌物诱导转化的细胞模型和肝肿瘤细胞株中发现α4的表达比对照细胞上调1.9~5.9倍。蛋白印迹结果证实L02R-α4和L02R-SHα4细胞株构建成功，α4表达上调能够促进L02R细胞增殖并发生转化（P＜0.05）。在α4高表达的转化细胞L02R-α4中，p70S6K1和4E-BP1呈高磷酸化状态。当有雷帕霉素作用时，所有细胞中p70S6K1和4E-BP1的磷酸化水平明显下降，在L02R-SHα4细胞中下降尤为显著。结论：α4具有癌基因功能，α4的异常上调激活mTOR通路，促进细胞增殖并诱导细胞恶性转化。     

辣椒素诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的研究

目的研究辣椒素对人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）法观察辣椒素对细胞生长的抑制作用,荧光显微镜下观察细胞的形态学变化,通过DNA凝胶电泳进行DNA片段化分析,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法分析DNA酶抑制剂（ICAD）蛋白的表达。结果辣椒素可诱导A375-S2细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性。250μmol／L辣椒素处理24h,A375-S2细胞出现明娩的亚二倍体峰;处理36h,Hoechst 33258荧光染色有明显的凋亡小体出现,DNA电泳出现阶梯状图谱。在辣椒素作用下,caspase激活的ICAD蛋白表达量随时间延长而减少。结论辣椒素对A375-S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现,降低ICAD蛋白的表达为其诱发A375-S2细胞凋亡的机制之一。     

基底细胞样乳腺癌组织CIP2A蛋白表达临床意义分析

目的:检测蛋白质磷酸酶2A(PP2A)的癌性抑制因子(CIP2A)在基底细胞样乳腺癌(BLBC)中的表达,分析CIP2A与BLBC临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化方法检测43例BLBC、57例non-BLBC和20例癌旁正常乳腺组织中CIP2A蛋白的表达。结果:免疫组化检测结果显示,BLBC及non-BLBC中CIP2A的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异有统计学意义,P<0.05;CIP2A蛋白的表达和患者年龄及肿瘤大小无关,与BLBC淋巴结转移及临床分期相关,P<0.05。结论:BLBC组织高表达CIP2A,CIP2A可能与BLBC的发生、发展密切相关。     

蛋白磷酸酶2A与肿瘤关系的研究进展

蛋白磷酶2A(Proteinphosphatase2A,PP2A)是真核生物体内重要的Ser/Thr蛋白磷酸酶,参与了体内众多信号通路和生理过程的调节。其活性的改变可能与肿瘤的发生相关,被认为是一个潜在的肿瘤抑制因子。     

蛋白磷酸酶2A与乳腺癌

蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase2A,PP2A）是真核生物体内广泛存在的Ser/Thr蛋白磷酸酶,调节细胞内多种生理过程。近年来的大量实验证据表明,PP2A的失调与多种肿瘤发生具有相关性,由此PP2A被认为是一个潜在的肿瘤抑制因子。本文从两方面介绍了PP2A在乳腺癌的发生、转移和乳腺癌辅助治疗中扮演的重要角色,包括：PP2A的自身突变以及PP2A与Akt信号通路、细胞粘附因子、雌激素受体、mTOR等乳腺癌相关因子的相互作用。     

三种马兜铃酸类化合物对HK-2细胞的毒性比较

背景与目的研究Aristolochic acid I(AAI)、Aristolochic acid II(AAII)和Aristolochic acid Ia(AAIa)3种马兜铃酸类化合物在体外对肾小管上皮细胞株(HK-2)的毒性作用的差异。材料与方法倒置显微镜下观察药物作用后细胞形态学改变;设计药物作用组、阴性对照组和空白调零组,采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-di methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT]法检测药物作用下细胞活力抑制率;免疫组化SABC法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。结果形态学观察表明,在30μg/ml剂量浓度下作用24h,AAI、AAIa药物作用组的细胞收缩变圆、脱壁;免疫组化结果表明,20μg/ml的剂量浓度下作用72h,3种化合物分别作用下的细胞均出现α-SMA的表达;MTT结果显示3种药物和细胞生长抑制率之间存在着浓度和时间依赖性关系,根据半数抑制浓度IC50值,抑制作用AAI>AAIa>AAII;3种药物都能影响细胞周期甚至诱导细胞发生不同程度的凋亡。结论3种药物对HK-2的毒性作用存在差异,其引起毒性效应的作用机制也可能有所不同。     

膀胱移行细胞癌来源的exosome诱导体外细胞毒性T细胞杀伤效应

目的 观察膀胱移行细胞癌T24细胞来源的exosome体外诱导细胞毒性特异性T淋巴细胞(CTL)对肿瘤细胞的杀伤效应.方法 采用超滤和蔗糖密度梯度离心法分离T24细胞释放的exosome,电镜、Western blot观察exosome的特征.将exosome和肿瘤细胞负载到人外周血分离培养的树突状细胞(Dc)上,并与T细胞体外共同培养,分为exosome致敏DC组、未致敏DC组和对照组,Alamar blue检测CTL对T24细胞的细胞毒活性.结果 T24细胞分泌的exosome为直径约30～90nm的类圆碟形小囊泡.Western blot证实,exosome表达热休克蛋白70(HSP70)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和人细胞角蛋白20(CK20)分子.与未致敏DC组和对照组比较,exosome致敏DC组活化的T细胞对T24细胞有更强的细胞毒活性(P＜0.01).结论 T24细胞来源的exosome负载了HSP70、ICAM-1等免疫相关蛋白;exosome经DC负载后活化CTL产生抗肿瘤活性.     

苦参碱诱导K562细胞磷脂酶A2活性与表达的改变

目的：研究磷脂酶A2在苦参碱促K562细胞分化的信号转导中的作用。方法：利用磷脂酶A2的水解作用，以掺入大肠杆菌膜的[^3H]标记的油酸为酶解底物，检测K562细胞内磷脂酶A2的活性。以半定量的RT-PCR方法检测K562细胞内磷脂酶A2的mRNA水平。结果：0．1mg/ml浓度的苦参碱作用K562细胞后，磷脂酶A2的活性与表达量的增高。结论：磷脂酶A2作为细胞内的重要信号分子，通过活性与表达量的改变参与苦参碱促K562细胞分化的信号转导。，     

原花青素对淀粉样蛋白Aβ 25-35诱导的 SH-SY5Y细胞 毒性的影响

目的：探讨原花青素对淀粉样蛋白片段Aβ_25-35染毒的SH-SY5Y细胞存活、氧化应激及其分泌淀粉样蛋白Aβ_1-42和可溶性淀粉样蛋白sAPPα水平的影响。方法：分别以不同浓度（0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL）原花青素和不同浓度（0.1、1.0、10.0、20.0 μmol/L）的Aβ_25-35作用SH-SY5Y细胞24 h后用MTT法检测细胞活力,进一步以1.0 μmol/L Aβ_25-35染毒细胞,建立细胞损伤模型,不同浓度（0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL）原花青素干预24 h,用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞分泌Aβ_1-42水平及sAPPα水平,TBA法测定细胞内丙二醛（MDA）含量,WST-8法测定细胞内总超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果：与对照组相比,不同浓度原花青素作用24 h后,细胞存活率差异均无统计学意义（P均>0.05）,而不同浓度Aβ_25-35均使SH-SY5Y细胞活力降低（P < 0.01）,其中1.0 μmol/L Aβ_25-35 对细胞活力的抑制作用最强（P < 0.01）。以1.0 μmol/L Aβ_25-35染毒细胞,Aβ_1-42分泌水平升高（P < 0.01）,sAPPα水平降低（P < 0.01）,细胞内MDA含量升高（P < 0.01）,总SOD活力降低（P < 0.01）。与1.0 μmol/L Aβ_25-35染毒组比较,0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL原花青素干预可提高各组细胞活力（P < 0.05）,降低Aβ_1-42分泌水平（P < 0.01）;0.5、1.0、5.0 μg/mL原花青素干预可提高细胞分泌sAPPα水平（P < 0.05）,降低细胞内MDA含量（P < 0.05）,增强总SOD活力（P < 0.05）。结论：原花青素可减轻Aβ_25-35诱导的SH-SY5Y细胞Aβ负荷,并减轻细胞氧化损伤。     

榄香烯乳对肺腺癌A549细胞hnRNP A2/B1的mRNA及蛋白表达的影响

目的：观察榄香烯乳对人肺腺癌细胞株A549细胞hnRNP A2／B1 mRNA及蛋白表达的影响。方法：选用A549细胞株，应用MTT法检测细胞增殖，显微镜下观察细胞形态变化，逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测hnRNPA2／B1mRNA表达，蛋白印迹法检测hnRNP A2／B1蛋白表达。结果：榄香烯乳对A549细胞体外增殖有显著抑制作用，且呈时间和剂量依赖性，其IC50值为15μg／ml，hnRNPA2／B1mRNA及蛋白表达水平均有下降。结论：榄香烯乳可抑制肺腺癌A549细胞增殖，致其hnRNPA2／B1的mRNA和蛋白表达水平均有下降。     

细胞色素P450 1A2的转基因细胞及其应用

1引言 细胞色素P450(CYP是一种含血红素酶,广泛分布于从细菌到动物中,能代谢各种外源性和内源性化合物.动物肝微粒体中的CYP能代谢外源性物质,如药物、农药、环境污染物、前突变物和/或前致癌物.细胞色素P450 1A2(CYP1A2)能代谢芳香胺、杂环胺、黄曲霉素B1等许多类化合物.转CYP1A2的各种细胞系的建立为研究CYP1A2的功能提供了新的工具.到目前为止,已经建立的细胞系有细菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞.最近,CYP1A2和其他微粒体电子转运系统如NADPH-细胞色素P450还原酶共同表达成功,提高了异源性CYP1A2的代谢能力.另外,为了重建杂环胺的完全代谢活化系统,建立了同时表达CYP1A2和二相酶(phase Ⅱ enzyme)N-乙酰转移酶的细胞系.各种永生的细胞系已经在毒理学试验领域内取得发展.下面按不同的细胞系说明它们的应用.