负载人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞在体外特异性杀伤的影响

目的 探讨人结肠癌Lovo细胞总RNA抗原致敏的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在体外特异性杀伤的影响.方法 利用Ficoll密度梯度离心法提取脐血单核细胞,分别诱导CIK和DC细胞,并用流式细胞仪检测其免疫表型.采用Trizol提取结肠癌Lovo细胞总RNA作为肿瘤细胞抗原,转染脐血来源的DC.实验分为3组:转染Lovo DC共培养CIK组、未转染DC共培养CIK组和单纯CIK组.靶细胞为Lovo细胞,在效靶比为50∶1和20∶1的条件下以噻唑蓝法分别检测CIK的体外杀伤活性.结果 在效靶比为20∶1时,负载Lovo RNA抗原的DC能诱导出CIK对Lovo细胞最强的细胞毒杀伤力为(76.49±4.21)%,DC+CIK组次之为(53.84±2.15)%,CIK组细胞毒性最低为(32.20±3.07)%,且两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肿瘤细胞总RNA提取方法简单,易于临床实施,其作为抗原致敏DC能强化CIK的特异性杀伤,将有很好的临床应用前景.     

负载抗原的DC与CIK共培养对耐药乳腺癌细胞的杀伤作用

目的:观察负载抗原的树突状细胞(dendritic cell,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对高表达P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的多药耐药(multidrug resistance,MDR)人乳腺癌MCF-7/ADR细胞的杀伤作用。方法:提取健康人外周血单个核细胞,常规诱导出CIK及DC;制备MCF-7/ADR细胞冻融抗原后冲击DC,并与CIK共培养作为实验组(冻融物DC-CIK组),未负载抗原的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK组),同时设单独培养的CIK组或DC组作为空白对照组。流式细胞术分析细胞的表型及P-gp表达,ELISA法测定细胞上清中IL-12、IFN-γ水平,MTT法检测对MCF-7/ADR及MCF-7细胞株的杀伤活性。结果:冻融物DC-CIK组、DC-CIK组细胞增殖活性均大于CIK组(P<0.05)。冻融物DC-CIK组对MCF-7/ADR、MCF-7细胞的杀伤活性在效靶比10∶1、20∶1、40∶1时分别为(44.29±1.39)%、(58.24±3.52)%、(68.9±2.83)%和(33.51±2.18)、(40.43±2.3)%、(44.62±1.19)%,均高于DC-CIK组及CIK组(P<0.05);冻融物DC-CIK组对MCF-7/ADR耐药细胞株的杀伤活性高于非耐药细胞株MCF7(P<0.05);而对于非耐药株MCF-7细胞的杀伤活性,冻融物DC-CIK组和DC-CIK组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DC与CIK共培养细胞增殖活性和细胞毒活性均强于CIK,经冻融抗原冲击的DC与CIK共培养可以显著提高对MCF-7/ADR耐药细胞株的杀伤活性。     

抗PD-1单克隆抗体联合CIK细胞对肺癌细胞株杀伤作用的研究

目的:研究程序性死亡受体1（program cell death-1,PD-1）单克隆抗体联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells,CIK cells）对肺癌细胞株的杀伤作用及相关机制,探究该治疗方法在肺癌治疗中的可行性。方法:患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）在体外采用多种细胞因子诱导为CIK,并用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CIK细胞的表型。培养A520 及H1975肺癌细胞,利用FCM检测其表面HLA-ABC,HLA-A2,HLA-DR及PD-L1的表达情况。将CIK细胞和抗PD-1单抗Nivolumab单独或者联合作用于A520 及H1975肺癌细胞。用ELISPOT法测定不同组γ干扰素（interferon gamma,IFN-γ）的释放,用CCK8法检测CIK细胞对肺癌细胞株的杀伤率。结果:CIK细胞对于肺癌细胞株的杀伤随着效靶比（effect target ratio,E∶T）的增加而加强;对于PD-L1高表达的肺癌细胞,Nivolumab与CIK细胞联合使用对肺癌细胞株的杀伤优于单一的CIK细胞及Nivolumab。结论:对于PD-L1高表达的A520肺癌细胞,PD-1单抗Nivolumab能够提升CIK细胞的杀伤作用,而对于PD-L1表达水平低的H1975细胞,Nivolumab不能提升CIK细胞的杀伤作用。     

CIK细胞对乳腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡的作用

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-inducedkillcells,CIK)对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法应用MTT法检测CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变。结果MTT比色法表明随着CIK细胞与乳腺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(P<0.01)。CIK细胞作用于乳腺癌细胞24h后,形态学观察乳腺癌细胞发生凋亡或坏死。结论CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外乳腺癌细胞的免疫活性细胞。     

链式CIK细胞对白血病K562细胞的体外杀伤活性

目的： 研究细胞因子诱导的体外细胞经过链式激活后获得的链式CIK细胞对白血病K562细胞的杀伤效应。 方法: 采用血细胞单采机从外周血分离单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）,经过细胞因子诱导、扩增、培养得到链式CIK细胞,以CIK细胞作对照,检测链式CIK细胞的增殖能力, LDH释放法测定其对K562细胞的杀伤活性。 结果: 链式CIK细胞组在培养第5、第14天的细胞数低于CIK细胞组（P<0.01）;链式CIK细胞对K562细胞的杀伤活性在效靶比40 ∶1和20 ∶1时分别为（56.1±2.24）%、（34.4±3.56）%,均低于CIK细胞（均P<0.01）。 结论: 链式CIK细胞是一种培养周期短、对白血病K562杀伤活性较弱的免疫细胞。     

IL-15上调NKG2D表达对CIK细胞杀伤活性的增强效应

目的观察IL-15对细胞因子诱导的杀伤细胞( Cytokine-induced killer cells,CIK)NKG2D受体表达及其对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响。方法体外分离外周血单个核细胞,分为两组。对照组：干扰素-γ、白细胞介素-2、CD3单抗诱导培养CIK细胞。IL-15组：加用IL-15培养。流式细胞仪检测细胞免疫表型及CD3+细胞、CD56+细胞表面NKG2D的表达,LDH法测定第14天细胞在效靶比20∶1、30∶1时对EC9706细胞的杀伤活性;效靶比30∶1时,观察NKG2D单抗封闭细胞表面NKG2D分子后对两组细胞杀伤活性的影响。结果随着培养时间的延长,CIK群体细胞及CD56+细胞表面NKG2D表达逐渐增强,IL-15组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);效靶比20∶1、30∶1时,IL-15组细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较对照组明显增强,差异均有统计学意义(P＜0.05);效靶比30∶1时NKG2D单抗封闭CIK细胞表面NKG2D分子后,对照组细胞、IL-15组细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较阻断前明显下降,差异均有统计学意义 (P＜0.05)。结论IL-15上调CIK细胞表面NKG2D分子表达,增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,CIK细胞通过NKG2D发挥作用。     

CIK联合DDP对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应

目的探讨多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合DDP对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应。方法用健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外用多种细胞因子诱导成CIK细胞,于培养14天收获CIK细胞作为效应细胞,流式细胞术分析其表型特征。将CIK细胞培养液上清作用于SKOV-3细胞,于培养24及48 h用流式细胞仪检测SKOV-3细胞的凋亡情况。杀伤实验共分为A1~4CIK作用组;B1~7DDP作用组;C1~2CIK联合DDP作用组;采用MTT法检测CIK和DDP对SKOV-3的生长抑制效应。结果 CIK细胞体外培养14 d时CD3+CD56+双阳性细胞数量达38.7%;SKOV-3与CIK细胞培养液上清共培养24 h及48 h后凋亡率分别为(12.30±1.47)%和(27.13±2.03)%;CIK及DDP对SKOV-3细胞的抑制率随着效靶比和药物浓度的提高及作用时间的延长而提高。而两者联合对SKOV-3的杀伤作用明显高于单一因素。结论 CIK细胞可通过诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡发挥较强的杀伤作用。联合CIK治疗可明显增强DDP对卵巢癌SKOV-3细胞的杀伤作用。     

肝癌特异性靶标致敏DC诱导CIK细胞对肝癌HuH-7细胞及移植瘤的抑制

目的：观察负载肝癌特异性DC靶标的树突状细胞（dendritic cell,DC）与细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer cell,CIK）细胞共培养后对肝癌细胞HuH-7的杀伤作用以及对裸鼠肝癌移植瘤的治疗效果。 方法： 外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞。分别利用肝癌特异性DC靶标和肝癌HuH-7细胞冻融抗原刺激DC,ELISA法测定其对DC IL-12分泌的影响。DC HuH-7、DC target分别与CIK细胞共培养后,ELISA法检测其对CIK细胞IFN-γ分泌的影响,CCK-8法检测效靶比为10〖DK〗∶1、20〖DK〗∶1、40〖DK〗∶1、100〖DK〗∶1时DCHuH-7-CIK和DC target-CIK细胞对HuH-7细胞的杀伤作用。构建HuH-7细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组、CIK组、DC HuH-7-CIK组和DC target-CIK组,尾静脉注射细胞悬液,观察效应细胞的抑瘤效果。 结果： DC HuH-7与DC target的IL-12 p70分泌水平较DC显著升高\[（179.33±14.04）、（173.33±6.66） vs （59.33±1184）pg/ml,均 P <0.01\];与CIK细胞共培养后,DC HuH-7-CIK与DC target-CIK细胞分泌IFN-γ的能力也显著高于DC-CIK细胞（均 P <0.01）,且DC HuH-7-CIK与DC target-CIK细胞之间无显著差异（ P >0.05）。在相同效靶比时,DC HuH-7-CIK细胞以及DC target-CIK细胞对HuH-7细胞的杀伤活性明显高于单纯CIK细胞（ P <0.05）,且DC HuH-7-CIK与DC target-CIK组之间无显著差异（ P >0.05）。DC target-CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用与DCHuH-7-CIK细胞相仿,且均显著高于单纯CIK细胞\[(78.48±1458)%、(85.78±15.69)% vs (54.69±28.07)%,均 P <0.05\],无明显不良反应。 结论： 肝癌特异性DC靶标能够显著提高CIK细胞对HuH-7细胞及其裸鼠移植瘤的杀伤活性,可替代肝癌组织抗原负载DC。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对大肠癌细胞株LOVO体外杀伤作用的研究

目的研究树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对大肠癌细胞株LOVO的杀伤及诱导凋亡作用。方法 从健康供者外周血中提取出单个核细胞, 用不同的细胞因子诱导出DC及CIK细胞, 待DC成熟后将DC与CIK混合培养。细胞计数法测定细胞的增殖、MTT法测定细胞杀伤活性、透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡、Western Blot法检测效应细胞表面FasL表达。结果 DC细胞对CIK细胞具有很强的促增殖作用, 且DC-CIK细胞共培养组在各效靶比的杀伤活性均明显高于单独CIK细胞培养组(P＜0.01)。DC可以促进CIK诱导肿瘤细胞发生凋亡, 且DC-CIK、CIK细胞均大量表达FasL。结论 DC细胞可以显著提高CIK细胞的增殖活性和细胞毒活性, 其共培养的作用机制之一可能是通过Fas/FasL途径而实现。     

嵌合抗原受体修饰CIK细胞抗肿瘤研究进展

在过去的20多年中,CIK细胞已逐步从实验室研究走向临床应用研究并展现了一定的抗瘤效果.然而,CIK细胞存在缺乏抗原特异性、靶向性不足、体内存活时间短等问题限制了其在临床上的应用.随着嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞(CAR-T)技术的兴起,CIK细胞的CAR修饰潜力也倍受关注.本文就CAR-CIK细胞的构建思路、效应细胞来源和简化治疗优势、基础研究和临床转化现状以及目前CAR-CIK面临的瓶颈问题等的研究进展作一综述.     

健康人和肝癌患者CIK体外增殖能力及对原代肝癌细胞抗肿瘤作用的比较研究

目的探讨源自健康人和肿瘤患者的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外增殖能力及对原代肝癌细胞的抗肿瘤作用的差异,进一步了解CIK的抗肿瘤作用.方法分离健康人和肝癌患者外周血单个核细胞经细胞因子激活诱导培养为CIK,流式细胞分析检测CIK免疫表型;用机械研磨法将新鲜肝癌组织标本分离成单细胞悬液;四甲基偶氮唑盐法榆测两种CI...     

下调口腔鳞状细胞癌Tac8113细胞的Galectin-9表达对CIK杀伤作用的影响

目的:下调口腔鳞状细胞癌细胞系Tac8113中的半乳糖凝集素（Galectin-9,Gal-9)基因表达并与细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cells,CIK cells）共培养后,观察CIK细胞体外杀伤效果。方法:分离外周血单个核细胞,加入细胞因子,体外培养CIK细胞14 d,流式细胞术对CIK细胞进行表型检测。将已构建的Galectin-9 siRNA 重组质粒 pGPU6/Gal-9,脂质体法转染Tac8113细胞。Western blotting法检测Tac8113细胞中Galectin-9蛋白的表达。CIK细胞与各组Tac8113细胞共培养,CCK8法检测杀伤情况,ELISA法检测上清干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)的分泌情况。结果:体外培养CIK细胞,流式细胞术检测细胞表面CD3+CD56+细胞比例为（29.7±12.8）%,Tim-3阳性率为（78.3±5.5）%。 pGPU6/Gal-9转染Tac8113细胞,Western blotting结果显示Tac811细胞Galectin-9蛋白表达水平明显降低。CCK8结果显示CIK细胞对低表达Galectin-9的Tac8113细胞的体外杀伤能力增强,分泌INF-γ增加。结论:下调口腔鳞状细胞癌Tac8113细胞中Galectin-9的表达,能够增强CIK细胞对其的体外杀伤作用。     

WAVE生物反应器应用于CIK细胞培养

目的:探讨利用波浪(WAVE)生物反应器培养扩增肿瘤患者CIK细胞的效能及其对肿瘤细胞的杀伤活性.方法:分离8例肿瘤患者外周血单个核细胞,分别采用CIK细胞传统扩增技术(CIK组)和WAVE反应器培养方案(WAVE组),应用锥虫蓝染色并进行细胞计数,利用流式细胞术比较两组CIK细胞的扩增效率、活化情况及其亚群的组成变化,并以K562细胞为靶细胞检测扩增后CIK细胞的杀伤活性.结果:WAVE组细胞增殖数较CIK组明显提高(P＜0.05或P＜0.01);在第14天,WAVE组CD3+ CD8+、CD3+ CD56+细胞亚群比例明显高于CIK组[(78.56±2.99)％vs(74.54±3.02)％,(48.33±7.01)％ vs(40.69±6.43)％,均P＜0.05],而Treg细胞比例显著降低(P＜0.05);当效靶比为10∶1、20∶1时WAVE组扩增的CIK细胞对K562的杀伤率明显高于CIK组(P＜0.05或P＜0.01),CIK细胞中CD3+ CD8+ CD107a+的比例明显升高[(29.43±4.97)％ vs(25.19±4.91)％,P＜0.05].结论:WAVE生物反应器扩增培养体系获得的CIK细胞数量多、纯度高,其中CD3+ CD8+和CD3+ CD56+ NKT细胞比例较高,其对K562肿瘤细胞的杀伤效果明显高于传统培养技术获得的CIK细胞.     

急性淋巴细胞白血病患者外周血中KIR2DL4的表达及其对NK细胞杀伤功能的影响

目的:探究杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4（killer cell Ig-like receptor 2DL4,KIR2DL4）在急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）患者外周血中的表达,及其对自然杀伤细胞（nature killer,NK）杀伤功能的影响。方法:从ALL患者及健康志愿者的外周血中分离出单个核细胞,采用实时荧光定量PCR检测单个核细胞中KIR2DL4的表达差异;从单个核细胞中分选NK细胞,通过流式细胞仪检测CD3-CD56+标记的NK细胞比例,并分析NK细胞表面KIR2DL4与Molt-4细胞表面人白细胞抗原G（human leukocyte antigen G,HLA-G）的表达水平。分别以NK细胞、KIR2DL4阻断抗体作用的NK细胞、IgG1抗体作用的NK细胞作效应细胞,Molt-4细胞为靶细胞,在不同效靶比（5∶1、10∶1、20∶1）下,利用ELISA检测细胞上清液中干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放法检测不同处理的NK细胞对Molt-4细胞的杀伤作用;并在20∶1的效靶比下,通过激光共聚焦显微镜观察各处理下Molt-4细胞形态学改变,流式细胞术检测不同处理的NK细胞脱颗粒情况。结果:ALL患者外周血中KIR2DL4 mRNA相对表达量显著高于健康志愿者（P＜0.05）;分选后CD3-CD56+标记的NK细胞纯度达到90%以上;与NK细胞和Molt-4细胞共培养相比,阻断KIR2DL4能够提高细胞上清液中NK细胞分泌因子IFN-γ与TNF-α水平（P＜0.05）,提高NK细胞对Molt-4细胞的杀伤率（P＜0.05）,使Molt-4细胞形变与核固缩更明显,并提高NK细胞中CD107α表达水平（P＜0.05）。结论:KIR2DL4在ALL患者外周血中高表达,而阻断KIR2DL4能够促进NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α及脱颗粒,提高其对Molt-4细胞的杀伤功能。     

肺癌患者淋巴结内培养CIK细胞的抑瘤实验和临床前期研究

背景与目的：细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)兼具T淋巴细胞强大的杀瘤活性与自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)杀瘤的非MHC限制性。CIK细胞可直接杀伤肿瘤细胞,调节并增强免疫功能,同时不损害机体免疫环境,其在治疗恶性肿瘤中的作用已得到广泛认可。本研究旨在观察肺癌手术患者淋巴结培养获得的CIK细胞的杀瘤活性及其临床应用的安全性。方法：获取上海市胸科医院6例经手术治疗的非小细胞肺癌患者的淋巴结及外周血,体外培养分别获得CIK细胞。通过倒置显微镜观察两组CIK细胞的形态,检测淋巴结组及外周血组CIK细胞表型,应用CCK8显色法检测两组CIK细胞对A549细胞株的抗增殖作用,观察回输后血液中癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)的变化及其临床应用中的不良反应。结果：淋巴结组和外周血组CIK细胞CD3⁺CD56⁺T细胞的比例均＞30%。不同效靶比淋巴结组CIK细胞对A549细胞的抑制率均高于外周血组(P<0.05)。回输淋巴结内CIK细胞后肺癌患者有不同程度CEA下降。不良反应轻微,主要表现为皮疹和发热。结论：肺癌手术患者的淋巴结可用于培养CIK细胞,其活性优于外周血来源的CIK细胞,临床前期实验证实安全性高。     

Study of Multi-directional Derivation of Cord Blood Mononuclear Cells and Observation of Killing Activity to MGC-803 Gastric Cancer Cell Strain In Vitro

Objective： To study multi-directional derivation of cord blood mononuclear cells to CD3AK, LAK and CIK cells as well as changes of killing activity to gastric cancer cell strain in vitro. Methods： CD3mAb and IL-2 were used to induce CD3AK cells, and IL-2 was used to induce LAK cells; IFN-γ was used in the beginning, then IL-1, CD3mAb and IL-2 were used to induce CIK cells after 24 h for observing amplification and analyzing their relationship. The phenotypes of the cultured CIK cells were analyzed by flow cytometry. Subsequently, by using MGC-803 gastric cancer cell strain as target cells, the killing activity of CD3AK, LAK and CIK cells was evaluated by using MTT method. Results： The amplification activity of CD3AK and CIK cells was all far higher than LAK cells （P〈0.05）. The amplification activity had no obvious difference between CIK cells and CD3AK cells at prophase, but that was far higher in CIK cells than CD3AK cells at about 20^th day （P〈0.05）. The flow cytometry revealed that the amount of CD3^＋ CD56^＋ cells, major effector cells after CIK cells being cultured was significantly increased （P〈0.05）, moreover, the amount of CD8^＋ cells was significantly increased as well （P〈0.05）. The killing activities of CD3AK and CIK cells to the MGC-803 gastric cancer cell strain were all significantly higher than LAK cells, while the killing activity of CIK cells was stronger than CD3AK cells （P〈0.05）. Conclusion： CIK cells have stronger amplification activity and killing activity, and can be taken as more effective killing cells applied to the tumor adoptive immunotherapy.     

不同冻存时间对CIK细胞免疫表型及杀伤活性的影响

目的:探讨不同冻存时间对外周血来源的CIK细胞免疫表型及其杀伤活性的影响。方法:采集6名健康患者外周血,分离外周血单个核细胞培养,第0h加入IFN-γ,24h后加入IL-2、抗CD3单抗,每隔3天补充含CD3单抗、IL-2的新鲜培养液,培养15天进行冻存。复苏冻存1、2、3、4、5月的CIK细胞为实验组,以常规培养至15天的CIK细胞为对照组。利用流式细胞仪检测各组CIK细胞中CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞的百分比,CCK8法检测各组CIK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:冻存1、2、3月的CIK细胞与对照相比CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例无明显差异（P＞0.05）,冻存4、5月的CIK细胞中CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例较对照组明显下降［（70.62±6.35）%、（14.36±4.28）%、（67.87±5.63）%、（12.61±6.21）% vs （84.23±5.20）%、（22.75±3.46）%］,P＜0.05。对靶细胞的杀伤能力在1、2、3月时与对照相比未见明显减弱（P＞0.05）,冻存4月、5月后的CIK细胞在各效靶比对K562细胞的杀伤活性与对照相比明显减弱（P＜0.05）。结论:冻存时间的长短对CIK细胞的免疫表型及杀伤活性均有一定的影响,且随着冻存时间的延长,CIK细胞的杀伤活性减弱。建议冻存CIK细胞的最佳时间为1、2和3月。     

荷CEA-rV的DC诱导的CIK对CEA阳性原代肿瘤细胞的特异杀伤作用

目的：探讨携带CEA重组基因痘苗病毒（CEA-rV）抗原的树突状细胞（DC）诱导的杀伤细胞（CIK）对CEA阳性原代肿瘤细胞的特异性杀伤作用。方法：用脐血制备脐血单个核细胞（UBMC）、DC、CIK、DC＋CIK、CEArV＋DC＋CIK和CEA-rV＋DC＋UNBC细胞。取新鲜切除的食管癌组织和肺癌组织，制备原代培养的CEA阳性肿瘤细胞作为靶细胞。用MTT法测5组效应细胞对两种靶细胞的杀伤活性。结果：1）用CEA兔抗人单克隆抗体鉴定证实两种原代培养靶细胞系CEA阳性细胞。2）流式细胞仪测定DC的分子表型，证实为DC。3）流式细胞仪测定CIK的CD3^＋CD56^＋双阳性细胞达75．4％。4）DC＋CIK和CIK相比，对两种CEA阳性肿瘤细胞的杀伤率差异无统计学意义，P〉0．05。5）CE-rV4-DC＋CIK对两种CEA阳性肿瘤细胞的杀伤率（78．80％）明显高于DC＋CIK（52．94％），P％0．05。结论：CEA—rV＋DC能明显提高CIK细胞对原代培养的CEA阳性肿瘤细胞的杀伤活性，而单纯DC不能提高CIK的杀伤活性，说明CEA—rV在提高CIK对CEA阳性肿瘤细胞的特异杀伤作用中起重要作用。     

蛇床子素对人前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响及其机制研究

目的:探讨天然化合物蛇床子素对人前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响及分子机制。方法:采用CCK8法检测蛇床子素对LNCaP细胞增殖的影响；用EdU细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖情况；流式细胞仪检测蛇床子素对其周期阻滞情况；β-半乳糖苷酶染色法检测蛇床子素对LNCaP细胞衰老的影响；Western blot检测衰老相关蛋白SKP2、p27的表达情况。结果:CCK8结果显示蛇床子素对LNCaP细胞的增殖有明显的抑制作用，且呈现一定剂量依赖性（P＜0.05）；EdU结果发现药物处理组细胞在荧光电镜下观察增殖细胞数较空白对照组逐渐减少，当蛇床子素浓度为150 μmol/L时，增殖细胞数较空白对照组下降30%（P＜0.01）；流式细胞仪检测结果显示当蛇床子素浓度为100、150 μmol/L时，阻滞于G2/M期的细胞数明显增多，并且呈现一定的浓度依赖（P＜0.05）；药物处理组细胞于倒置显微镜观察可见，蛇床子素浓度为150 μmol/L时，β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数较对照组明显增加（P＜0.01）；免疫印迹法结果显示随着蛇床子素浓度的增加，衰老相关蛋白SKP2的表达减少、p27的表达增加（P＜0.05）。结论:蛇床子素可以抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖并进一步诱导其衰老。