腹水来源卵巢癌细胞系的建立及其生物学特性

背景与目的:体外建立卵巢癌细胞系有利于深入了解卵巢癌干细胞的生物学特性及抗癌药物的筛选.本研究中我们以人卵巢癌患者腹水为材料建立卵巢癌细胞系,并进一步探讨其基本生物学特性.方法:体外分离卵巢癌患者腹水中的肿瘤细胞,纯化并传代培养,观察细胞形态学变化,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,进行染色体核型分析.收集体外培养上清,进行放射免疫法检测相关激素状况和肿瘤标志物表达.动物实验观察细胞成瘤性以及瘤体的病理形态.结果:该卵巢癌细胞系已在体外培养与传代传110余代,历时近2年,透射电镜下可观察到卵巢癌细胞有显著的异形核,体外生长的倍增时间为40.8 h,染色体核型分析为超二倍体,染色体数目分布为63～120条.第80代细胞培养上清中雌二醇为45.0 pg/mL、睾酮0.03 ng/mL、孕酮未测出,CA125为4.49 U/mL,CA19-9为4.09 U/mL.第51代细胞接种于裸鼠后有皮下成瘤性,为低分化腺癌.结论:腹水来源的卵巢癌细胞在体外培养已是永生化细胞系,并具有明显的恶性细胞的生物学特征.     

人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OV1228/Taxol的建立

目的:建立人卵巢癌细胞株紫杉醇耐药细胞株OV1228/Taxol.方法:以人卵巢癌细胞株OV1228作为亲本细胞,采用浓度梯度递增法建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OV1228/Taxol.通过细胞形态学观察、生长曲线和群体倍增时间测定、药物敏感试验、细胞周期测定和罗丹明-123外排试验以及多药耐药基因(MDR1)和蛋白激酶C-α(PKC-α)基因及蛋白水平的测定,评价OV1228/Taxol的生物学特性.结果:成功建立起人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OV1228/Taxol,耐药指数为39.44,对顺铂(DDP)和5-氟尿嘧啶(5-FU)有交叉耐药性.与OV1228细胞相比,OV1228/Taxol耐药细胞异形明显,耐药细胞倍增时间显著延长,P=0.033 5;耐药细胞内罗丹明-123量显著减少,P=0.005 4;MDR1和PKC-α在基因和蛋白水平表达均明显增加.结论:OV1228/Taxol细胞对紫杉醇具有典型耐药特性,为进一步研究耐药逆转途径提供了实验基础.     

人子宫内膜癌细胞系HECCL-1的建立及其生物学特性的初步观察

目的 :建立人子宫内膜癌细胞系 ,并研究其生物学特性。方法 :将传代稳定后的人子宫内膜癌裸小鼠移植瘤标本用贴壁培养法建立细胞系 ,用光学显微镜、电子显微镜观察细胞系的形态 ,研究细胞系的生长及生物学特性。结果 :成功建立 1株人子宫内膜癌细胞系 ,已传代 6 0代 ,命名为HECCL 1。其生物学特征为 :形态学具有腺上皮癌细胞的特点 ,细胞生长旺盛 ,DNA为非整倍体 ,连续传代后仍保留人类肿瘤染色体的特点 ,异种动物移植阳性 ,雌、孕激素受体表达均阴性。结论 :HECCL 1细胞系的建立 ,为开展人类子宫内膜癌的基础及临床研究提供了理想的实验工具。     

人直肠癌体外培养细胞系HRC-9698的建立及其生物学特性

目的利用人直肠癌的裸鼠皮下移植瘤组织在体外建立一人直肠癌细胞系HRC-9698,并对其一般生物学特性进行检测;方法取人直肠癌裸鼠移植瘤组织将其剪碎后贴入培养瓶底壁上加入含20%胎牛血清的1640培养液建成人直肠癌细胞系HRC-9698,并传代.用光镜和电镜观察细胞形态、超微结构;用细胞计数和MTT方法观察细胞分裂指数、细胞生长曲线、倍增时间;用G显代方法进行遗传学分析;用放射免疫法和免疫组化方法检测CEA分泌和表达;用流式细胞术检测DNA含量和细胞周期分布.结果HRC-9698贴壁生长形态为多边形及不规整形,核大并可见1-2个核仁;超微结构显示:细胞核大而极不规则,内有明显核仁.胞质内有大量粘液样小泡结构,在不同的细胞中,小泡的大小和数量不等,有些小泡呈极性分布.一般在小泡结构大而多的细胞中,其它细胞器较少,胞质中有较丰富的多聚核糖体(Polyribosomes),在部分细胞中可见发达的高尔基复合体(Golgi complex).此外,在胞质中还可见少量的上皮细胞特有的张力纤维.细胞表面微绒毛较少,在细胞与细胞之间可见不典型的细胞间连接结构.细胞核分裂指数22‰～24‰,倍增时间为45～48小时.染色体均为异倍体.DNA指数为1.73,细胞周期中增殖期细胞占47.18%.细胞表达并分泌CEA.结论HRC-9698具备人肠癌细胞的生物学特征,可作为大肠癌体外研究的对象.     

肺癌细胞系XWLC-05的建立及其生物学特性研究

背景与目的:云南省宣威地区是我国肺癌高发地区之一,女性肺癌死亡率居全国首位,本研究旨在建立云南宣威女性肺腺癌细胞系,为肺癌高发区的防治研究提供理想的体外实验模型.方法:以手术切除的肺癌组织标本进行原代培养,通过光镜观察、电镜观察、绘制生长曲线、计算倍增时间、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体及其显带分析、肿瘤标志物检测、异体移植实验及免疫组化检测等对其生物学特性进行分析鉴定,建立细胞系.结果:体外培养细胞生长稳定,细胞形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征,染色体数目分布在55～69之间,众数为60～63;小鼠接种成瘤率为100%,瘤细胞形态与原患者的病理切片相似,命名为XWLC-05(Xuanwei Lung Cancer-05).结论:该细胞系符合建系标准,是一株新建的人肺腺癌细胞系.     

人结肠高分化腺癌细胞系THC—8908的建立及其生物学特性

本文报道将手术切除人结肠腺癌肿瘤标本,接种于裸鼠皮下,获可传代移植瘤,再体外培养,建立可连续培养的结肠高分化腺癌细胞系THC-8908,已传至160代。经光学和电镜检查该细胞系具有上皮性恶性细胞特征,放免检测证实具有分泌CEA能力,并观察了其体外生长曲线、分裂指数、软琼脂上集落形成率,染色体分析众数63,基本为亚三倍体,裸鼠皮下移植形成恶性种瘤,与手术标本病理形态相一致,是进行癌变机理研究和实验性基因治疗的良好模型。     

人肝癌细胞系HCC-9903的建立及生物学特性初步观察

我们以手术切除标本作原代培养 ,新建一株人肝癌细胞系 ,目前已维持培养 18个月 ,传代 12 0代 ,生长稳定 ,命名为ＨＣＣ 990 3(ＨｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒＣａｒｃｉｎｏｍａ 990 3)。现报告如下。一、材料与方法癌组织来源于山东大学齐鲁医院 1例肝细胞肝癌患者 ,男 ,5 0岁。于 1999年 3月 4日行肝癌切除术。原代培养采用组织块培养法。培养液为ＲＰＭＩ16 40。胰酶消化 ,1∶3传代。扫描及透射电镜观察其超微结构 ,绘制生长曲线 ,计算细胞倍增时间。行双层软琼脂培养及刀豆球蛋白凝集实验 ,以流式细胞仪检测细胞周期时相和ＤＮＡ合成 ,…     

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Scid小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物（AE3、p53）的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月，已传至80代以上，群体倍增时间为39．6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点，胞浆富含张力原纤维束，细胞间可见桥粒。Sdd小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型，染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物（AE3、p53）呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系，可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。     

人脊索瘤细胞系CM-3l9的建立及其生物学特性的观察

目的 建立人脊索瘤细胞系，为脊索瘤研究提供实验型。方法 取经病理证实的新鲜脊索瘤手术标本，进行体外原代组织块培养。对存活细胞进行形态学观察、组织化学染色、细胞周期检查、染色体分析、电镜观察、异种移植和体外侵袭实验等。结果 建成细胞系CM-319，经近两年的体外培养，已连续传代百余次，其形态学表现、组织化学染色、电镜观察和异种移值等均符合脊索瘤细胞特征。细胞倍增时间为33h。细胞周期测定显示：G1期为55．6％，G2期为21．9％，S期为22．5％，G2／G1为1．90。染色体具有亚三倍体核型。异种移植成瘤率100％，具有侵袭性。结论 CM-319是一株人脊索瘤细胞系，可用于对脊索瘤的研究。     

人类卵巢癌顺铂耐药细胞株OV1228／cDDP的建立及其生物学特性

 目的　建立人类卵巢癌细胞顺铂耐药细胞株OV1228／cDDP,并对其生物学特性进行检测。方法　采用顺铂浓度梯度递增法,建立人类卵巢癌顺铂耐药细胞株。通过细胞形态学观察、生长曲线和群体倍增时间测定、药物敏感试验、mdr-1和PKC-α基因及蛋白表达水平的测定,来评价OV1228／cDDP的生物学特性。结果　成功建立了OV1228／cDDP耐药细胞株,耐药指数（RI）为5.97,对多柔比星和5-氟尿嘧啶具有一定的交叉耐药性。与OV1228相比,OV1228／cDDP细胞异型性增加、细胞倍增时间延长;mdr-1和PKC-α在基因和蛋白表达水平均明显增高。结论　OV1228／cDDP细胞对顺铂耐药性稳定,并呈现一定的多药耐药特性,为进一步研究耐药逆转途径提供了实验基础。     

人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性

目的: 采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EHH1,并对其生物学特性进行分析。方法：将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果：成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EHH1。EHH1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EHH1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6 μg/L) 。染色体G带显示,EHH1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论: 通过原代培养建立的肝癌细胞系EHH1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。     

人肝癌顺铂耐药细胞系的建立及其生物学特征

背景与目的：药物耐受性是当前肿瘤研究的热点,国内外普遍应用体外建立的耐药细胞系作为研究模型。为探讨肝癌对顺铂耐药的机理。本研究首次建立了人肝癌顺铂耐药细胞系并研究其生物学特性。方法：采用逐步递增顺铂浓度,间歇作用体外诱导法建立人肝癌顺铂耐药细胞系QGY/cDDP;MTT法测定药物敏感性,光镜,电镜,活细胞计数法,流式细胞仪及染色体分析等方法观察其生物学特征的改变。结果：历时3个月建成人肝癌顺铂耐药细胞系QGY/cDDP,其对顺铂的耐药指数为10.81,并且与5-氟尿嘧啶,表阿霉素等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性;QGY/cDDP的细胞形态及染色体数目发生改变;体外群体倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期分析发现其S期与G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞增多。结论：QGY/cDDP细胞具有耐药表型,且耐药性能稳定。     

人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214的建立及其生物学特性

目的 建立人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214,为子宫颈癌研究提供实验模型。方法 无菌切除人子宫颈癌的手术标本,用组织块贴壁法体外培养,连续传代稳定生长后,绘制细胞生长曲线。采用光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染色体核形分析。用免疫组化法测定细胞系肿瘤标记物的(ER、PR、Keratine、PCNA)表达情况。结果 组织块贴壁法体外培养获得人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214(简称H),细胞维持培养16个月,传代131代,生长稳定,群体倍增时间为35．48h,细胞呈上皮镶嵌状贴壁生长,趋向复层生长,无接触抑制。超微结构显示,具有典型的桥粒结构和较多的张力原纤维。染色体数目35—156条,主流范围58—80条(64．8％),结构为人类染色体。细胞的肿瘤标记物(ER、PR、Keratine、PCNA)检测呈高表达,DNA指数为1．931。裸鼠移植瘤组织病理形态学与患者原始肿瘤一致,无血清培养成功。结论 通过组织块贴壁法体外培养建立的人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC—0214,与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代16个月以上,细胞形态不变,生长周期恒定,可望作为一个稳定的细胞系。     

人卵巢癌永生化细胞系BUPH:OVSC-2的建立及其生物学特性研究

背景与目的：利用永生化技术建立预期表型的细胞系,已成为建设系的重要手段之一,而人卵巢癌永生化细胞系的建立国内外少有报道。本文介绍人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系的建立,以及对其生物学特性的研究。方法：以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养。将永生化基因SV40T抗原基因转染第10代细胞,经筛选、抗性克隆扩大培养,得到永生化细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生化曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究其生物学特性,并与其来源细胞的生物学特性进行比较。结果：建立一株人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,命名为BUPH：OVSC－2,现已传至90年代。其生物学特性为：形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;具有恶性细胞的特征,恶性度高。通过比较,与其来源细胞的生物学特性无明显差别。结论：BUPH：OVSC－2为一株恶性度高的人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,保留了其来源细胞的生物学特性,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型。     

辐射诱导辐射耐受鳞癌细胞株的建立及其生物学特性

目的通过辐射人喉鳞癌细胞株Hep-2获得辐射耐受细胞株Hep-2R，建立一个放射敏感性研究的对比模型。方法用γ线反复照射Hep-2细胞，建立辐射耐受细胞Hep-2R。成克隆实验法测定两株细胞不同剂量照射后的细胞存活分数，拟合细胞存活曲线比较两种细胞株的放射生物学参数。光镜、电镜、活细胞计数、染色体分析及流式细胞仪周期分布比较其生物学差异。结果经7个月辐射诱导得到了一个放射敏感性不同于亲本细胞株的Hep-2R细胞株，并已稳定传30代以上且辐射耐受性能稳定。其SF2=0．680、D0=3．24Gy、D0=1．90Gy、N=1．80，而Hep-2细胞SF2=0．415、Db=2．06Gy、D0=1．01Gy、N=1．64。Hep-2R细胞形态及染色体数目发生了改变，群体倍增时间较亲本细胞延长。细胞周期分析显示G1期细胞增多，S、G2期细胞减少。结论通过辐射诱导可以从Hep-2细胞株得到辐射耐受细胞株Hep-2R，这种相同背景、不同放射敏感细胞株为进一步研究放射敏感性的分子机制提供了一个良好对比模型。     

Establishment and characterization of a new cell line from primary human breast carcinoma

Summary A new cell line (BRC-230) was established from surgical material of primary ductal infiltrating breast carcinoma. The epithelial nature of this cell line was confirmed by ultrastructural analysis and demonstrated the retention of structural properties characteristic of the original tumor. The BRC-230 cell line induced tumor in athymic Cr1:nu/nu(CD-1)BR nude mice, it possessed an abnormal karyotype with a modal chromosome number between 60–61 with eight recurrent marker chromosomes, and it presented a doubling time of 30.5 hr. Scatchard analysis demonstrated that both primary tumor and BRC-230 cells were estrogen and progesterone receptor negative.Immunoenzymatic and radioimmunoassays showed a production of marker antigens (CEA, TPA, CA125, CA15-3, CA19-9) which was similar in the patient's serum and BRC-230 cells. Thein vitro drug sensitivity assay of the cell line and of the parental tumor tissue showed overlapping results to all tested antiblastic drugs. BRC-230 cells were resistant to 4-Idroperoxy-cyclophosphamide, Idarubicinol, Mitoxantrone, Etoposide, 4Epidoxorubicin, and Doxorubicin, showing a multiple drug resistance phenotype. Amplification or rearrangement of Her-2neu, Ha-ras, and C-myc genes was observed neither in the original tumor nor in BRC-230 cells; the mdr-1 gene was also present in a single copy.We conclude from these studies that the BRC-230 cell line maintains the same characteristics as the original tumor and may provide us with a good model to studyin vitro the biology of drug resistance of breast cancer.     

阿霉素诱导人肝癌细胞多药耐药株的建立及其生物学特性评价

背景与目的:多药耐药(multidrugresistance,MDR)是肿瘤治疗的主要障碍,为探讨体外逆转肿瘤MDR的新方法,本研究建立人肝癌细胞多药耐药模型HepG2/Adm,并研究其生物学特性。方法:以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,用阿霉素(adriamycin,ADM)浓度梯度递增诱导法,建立HepG2/Adm。观察细胞的生长规律;用MTT法检测多药耐药性;流式细胞术检测细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因(mdr1)的表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)、肺耐药蛋白(lung-relatedprotein,LRP)及谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)的表达;逆转录PCR半定量检测4种MDR基因mRNA表达量。结果:与HepG2细胞比较,HepG2/Adm细胞倍增时间延长30.01h,S期细胞减少(5.6±0.03)%,G1、G2期细胞增多犤(4.2±0.09)%,(1.5±0.08)%犦。该细胞对多种抗肿瘤药物耐药,HepG2/Adm对阿霉素的耐药指数是亲本细胞的26倍,细胞表面多药耐药蛋白P-gp、MRP及GST的表达显著增加,LRP表达有一定的增加;上述四种耐药蛋白基因的表达均明显增加。结论:HepG2/Adm细胞具有多药耐药特性,其耐药性与P-gp、MRP及GST的过表达有关。     

子宫内膜异位症相关性卵巢透明细胞癌和卵巢子宫内膜样癌的临床病理特征研究

目的 研究子宫内膜异位症(EM)相关性卵巢透明细胞癌(CCC)和卵巢子宫内膜样癌(EC)的临床病理特征.方法 选取CCC和EC患者共167例,根据是否为EM恶变将患者分为EM组(n=84)和非EM组(n=83).比较两组患者的年龄、生育史、EM病史、临床表现、凝血功能、血清CA125水平、超声检查结果、术中情况及术后病理特点.结果 EM组患者的发病年龄、初潮年龄均明显小于非EM组(P﹤0.01),未绝经患者所占比例明显低于非EM组(P﹤0.01);EM组患者的孕次、产次明显低于非EM组(P﹤0.001),不孕症患者所占比例明显高于非EM组(P﹤0.001);EM组中既往有EM病史的患者所占比例高于非EM组(P﹤0.05);临床表现方面,EM组患者的痛经、月经紊乱发生率均明显高于非EM组(P﹤0.01);EM组患者的PT、APTT明显短于非EM组(P﹤0.001);术后,EM组患者的血清CA125水平低于非EM组(P﹤0.05);两组患者超声检查结果比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);EM组患者的肿瘤直径明显大于非EM组(P﹤0.001);两组患者的FIGO分期比较,差异有统计学意义(P﹤0.05),其中EM组患者中Ⅰ~Ⅱ期患者所占比例高于非EM组.结论 EM相关性CCC和EC与单纯CCC和EC存在明显不同的临床病理特征,具有确诊年龄及初潮年龄小、绝经比例更高、孕产次更低、既往有EM病史患者所占比例更高、痛经和月经紊乱表现更多、PT和APTT更短、血清CA125水平较低和临床病理分期较早等特点.