硫化砷对白血病细胞的生长抑制及作用机制

 目的 研究硫化砷（As4S4）通过体外培养对白血病细胞HL-60细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法 以不同浓度（7.5 ~ 60 mmol／L）的As4S4作用于体外培养HL-60细胞12 ~ 48 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪观察细胞凋亡率,免疫组化法检测bcl-2、p53蛋白表达,应用RT-PCR法检测HL-60细胞中p53 mRNA表达。结果 不同浓度的As4S4作用12 ~ 48 h后,可显著抑制HL-60细胞的生长,呈时间浓度依赖性,并诱导细胞发生凋亡,凋亡率为30.18 % ~ 70.98 %,不同作用时间、不同浓度间凋亡率差异有统计学意义（P＜0.01）,RT-PCR结果显示As4S4作用24 h后,下调p53 mRNA的表达。免疫组化结果显示,bcl-2、p53蛋白表达逐渐降低,并呈浓度依赖性。结论 As4S4能够显著抑制HL-60细胞的生长。诱导其凋亡,并下调bcl-2、p53的表达,可能是其重要机制。     

镍维甲酰胺对HL-60细胞凋亡及端粒酶影响

[目的]观察维甲类化合物N－（4－羧基苯）镍维甲酰胺对人白血病系HL－60的作用及对端粒酶活性的影响。[方法]应用剂量反应曲线，台盼蓝排斥法，光镜，电镜，流式电流细胞仪等观察N－（4－羧基苯）镍维甲酰胺对HL－60细胞的作用，应用TRAP－ELISA法测定端粒酶活性下降。[结论]N－（4－羧基苯）镍维甲酰胺作用于HL－60细胞可使HL－60细胞发生凋亡。抑制细胞端粒酶活性。对端粒酶活笥的作用比同等浓度的全反式维甲酸强，这对进一步研究并开发其临床应用有一定价值。     

四物合剂对马利兰诱导HL-60细胞凋亡的 影响

 目的观察不同剂量四物合剂对马利兰诱导HL-60细胞凋亡作用的影响。方法MTT法检测细胞增殖活性 ,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞p53/bcl-2表达,ELISA法检测细胞色素C释放, 分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8和谷胱甘肽（GSH）。结果四物合剂可激活细胞Caspase-3和 Caspase-8,上调细胞p53/bcl-2表达比率、升高细胞色素C释放、降低GSH（P＜0.05,P＜0.01）,且 60mg/L剂量可抑制HL-60细胞生长（P＜0.05）。结论四物合剂可抑制HL-60细胞生长,对马利兰诱导HL-60 细胞凋亡具有增效作用,其增效作用机制可能与激活肿瘤细胞凋亡PKC通路有关。     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

土贝母苷甲对人HL-60髓性白血病细胞周期与凋亡的影响

目的:研究土贝母苷甲(下称苷甲)对人髓性白血病细胞HL-60的细胞周期及凋亡的影响。方法:采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测苷甲对HL-60细胞生长的影响;形态学方法(荧光显微镜和透射电镜)、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在苷甲作用下HL-60细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因bcl-2、cyclinB1表达的变化。结果:苷甲显著抑制HL-60细胞的生长,其抑制效果与浓度及时间呈依赖关系。15μmol·L-1苷甲作用24小时可将HL-60细胞阻滞于G2/M期,进而诱导其凋亡,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯状区带。bcl-2表达无明显变化,cyclinB1表达降低。结论:苷甲对细胞周期起阻滞作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与cyclinB1表达降低有关。     

土贝母皂苷对HL-60细胞周期作用的研究

目的：应用土贝母皂苷(下称皂苷)作用于人早幼粒白血病细胞(HL-60)．研究皂苷抗肿瘤作用的分子机制。方法：采用流式细胞术等方法分析细胞周期及凋亡：蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因bcl-2、cdc2和cyclinB1表达的变化。结果：15μmol/L皂苷作用24h可将HL-60细胞阻滞于G2/M期．进而诱导凋亡,流式细胞仪捡测肿瘤细胞出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。凋亡抑制基因bcl-2表达无明显变化．周期蛋白cyclinB1表达降低．而cdc2表达无明显改变。结论：皂苷导致HL-60细胞G2-M期阻滞，进而诱导凋亡；周期阻滞的分子机制与降低cyclinB1蛋白水平有关。而凋亡的诱导与bcl-2表达无关。     

HoxB1质粒转染对视黄酸诱导的 HL-60细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞内HoxB1表达、视黄酸(RA)代谢与细胞凋亡的相互关系.方法:采用脂质体介导的质粒转染和反转录-PCR等实验技术方法做有关分析检测.结果:2.5×10-7mol/L全反式RA(ATRA)处理HL-60细胞3天,HPLC分析显示,HoxB1的高表达可明显抑制HL-60细胞ATAR代谢;使ATRA增殖抑制作用减弱;野生型HL-60细胞有较强bcl-2表达,ATRA处理抑制未转染细胞bcl-2表达,但单纯HoxB1转染、HoxB1转染+IFNα均能增强bcl-2表达.结论:HoxB1转染HL-60细胞ATRA代谢明显受抑,ATRA增殖抑制作用及凋亡诱导作用减弱.     

蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制研究

目的 研究蛇床子素对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 CCK8实验检测蛇床子素对HL-60细胞的增殖抑制作用,Hoechst染色观察药物8h作用后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HL-60细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western bolt检测HL-60细胞的活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达变化.结果 蛇床子素可明显抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡,抑制率最高达（90.7±4.5）％,F=138.46,P=0.000;总凋亡率为33.6％,F=27.75,P=0.006.诱导后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2比值升高（F=210.12,P=0.000）,活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达水平随药物作用时间延长而升高.结论 蛇床子素可抑制HL-60细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡机制与同时激活线粒体途径和死亡受体途径相关.     

有效bcl-2 siRNA对HL-60细胞生长的抑制作用

 目的　应用RNA干扰（RNAi）技术观察有效bcl-2 siRNA对白血病细胞HL-60凋亡的影响。方法　将有效bcl-2 siRNA转染入HL-60细胞;用MTT法、流式细胞术（FCM）及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞增生及凋亡情况。结果　有效bcl-2 siRNA有抑制HL-60细胞生长及促进细胞凋亡的作用。结论　有效bcl-2 siRNA能特异性促进HL-60细胞凋亡,抑制其生长。     

bcl—2反义核酸提高白血病HL60细胞对米托蒽醌的敏感性

目的 探讨下调HL60细胞bcl-2基因表达对米托蒽醌（MIT）细胞毒作用的影响。方法 将针对bcl-2基因编码区141-147密码子的反义寡核苷酸（ASODN）作用于HL60细胞,测定其mRNA表达,细胞生长。细胞凋亡。结果 12.5umol/LASODN作用于HL60细胞48h可以下调bcl-2mRNA表达40%。0.5umol/LMIT作用于经ASODN预处理48h的HL60细胞5h,50.9%的细胞发生凋亡,明显高于MIT单独作用诱导的细胞凋亡（25.6%);当ASODN与0.7nmol/LMIT共同作用时,细胞存活率（48h)由MIT单独作用时的73.7%降至25.6%。结论 bcl-2ASODN可下调bcl-2基因表达,促进细胞凋亡而增加MIT抗肿瘤作用。     

冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的调节

目的：探讨冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的影响．方法：应用噻喳蓝(MTT)还原法检测细胞生长抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2基因的表达水平；应用端粒重复扩增(TRAP)法检测端粒酶活性。结果：5nmol／L～25nmol／L的冬凌草甲素可诱导细胞凋亡．抑制细胞增生。在细胞生长受抑制过程中．端粒酶活性及bcl-2表达水平显著下降。结论：冬凌草甲素可诱导急性白血病HL-60细胞凋亡、抑制细胞增生；其作用机制与端粒酶活性下降及bcl-2的表迭水平下调有关．其中bcl-2的表达水平可能起重要的调节作用。     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：探讨bcl-2反义寡核苷酸诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡。方法：将人工合成的bcl-2反义寡聚脱氧苷酸片段与ＨＬ－６０,细胞共培养,在作用的第０天、３天、５天通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。结果：bcl-2反这寡核苷酸可下调ＨＬ－６０细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,同时可诱导细胞凋亡,而bcl-2反义寡核苷酸及对照无此作用。     

二氟甲基鸟氨酸及反义bcl-2协同诱导HL60细胞凋亡

目的　观察二氟甲基鸟氨酸 (DFMO)及反义bcl 2调控bcl 2基因表达对HL6 0细胞凋亡的诱导作用。方法　构建反义bcl 2逆转录病毒重组体 ,建立产病毒细胞系 ,转染HL6 0细胞 ,用形态观察、生长曲线、FCM分析、集落形成、DNA电泳图谱、分子杂交及免疫组化等方法研究细胞生长特性及细胞凋亡诱导。结果　成功地构建了反义bcl 2逆转录病毒重组体及产病毒细胞系。以此转染HL6 0细胞 ,引起了bcl 2mRNA及蛋白表达下降 ,但生长速率、细胞周期分布及鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因表达水平与亲本细胞比较差别不大 ;无明显的细胞凋亡 ,仅集落形成能力有所减弱。用小剂量DFMO处理反义bcl 2转染的细胞 ,不仅生长受到明显抑制 ,而且可诱导细胞凋亡。结论　DFMO与反义bcl 2对HL6 0细胞增殖抑制及凋亡诱导有协同作用。抑制bcl 2表达能提高肿瘤细胞对DFMO作用的敏感性。     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡的研究

明确化疗药物诱导急性白血病细胞凋亡的规律及在急性白血病化疗中的意义。方法应用光镜、电镜,结合ＤＮＡ电泳及流式细胞仪分析技术,观察阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）诱导的急性髓系白血病细胞系ＨＬ－６０凋亡模式。结果Ａｒａ－ｃ诱导的细胞凋亡在０～３６小时过程中持续存在,逐渐增强,其诱导效率呈剂量性增强。而且,经其他６种化疗药物诱导后,ＨＬ－６０以及经ＤＡ方案化疗的１例急性髓系白血病患者外周血白细胞,均表现典型的ＤＮＡ梯形图谱。进一步分析表明,化疗诱导凋亡与其下调ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达有关。结论化疗药物诱导的细胞凋亡是化疗的关键机制     

全反式维甲酸对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨 HL- 6 0细胞经全反式维甲酸 (ATRA)作用后对化疗药物阿糖胞苷 (Ara- C)诱导凋亡敏感性的变化。方法 :应用光镜检查凋亡细胞形态 ,DNA电泳检查梯状条带及流式细胞仪检测细胞周期分布、凋亡细胞率和 bcl- 2蛋白表达的阳性细胞率和相对荧光强度 (MFI)。结果 :ATRA0 .3mg/ L 作用 HL- 6 0细胞 72 h后 ,S期细胞显著减少至 32 .9% (P<0 .0 5 ) ,G0 / G1 期细胞明显增加达 5 8.5 % (P<0 .0 5 ) ,bcl- 2阳性细胞率和 MFI分别下降至 18%和 0 .6 3(P<0 .0 5 ) ;Ara- C1.5 m g/ L 作用 HL- 6 0细胞 4h,凋亡细胞率为 5 5 .1% ,DNA电泳见明显的梯状条带。当 HL- 6 0细胞经 ATRA0 .3m g/ L 作用 72 h后再加 Ara- C1.5 m g/ L 继续培养 4h,细胞凋亡率明显减少至 34 .4% (P<0 .0 5 ) ,DNA电泳见梯状条带亮度减弱。结论 :ATRA降低 HL- 6 0细胞对 Ara- C诱导凋亡敏感性 ,其机制可能与 ATRA阻滞 G0 / G1 期细胞进入 S期有关     

Ara-C INDUCED APOPTOSIS IN HUMAN MYELOID LEUKEMIA CELL LINE HL-60: INDUCING APOPTOSIS IS THE PRIMARY MECHANISM OF CHEMOTHERAPY

ＡｒａＣＩＮＤＵＣＥＤＡＰＯＰＴＯＳＩＳＩＮＨＵＭＡＮＭＹＥＬＯＩＤＬＥＵＫＥＭＩＡＣＥＬＬＬＩＮＥＨＬ６０：ＩＮＤＵＣＩＮＧＡＰＯＰＴＯＳＩＳＩＳＴＨＥＰＲＩＭＡＲＹＭＥＣＨＡＮＩＳＭＯＦＣＨＥＭＯＴＨＥＲＡＰＹＺｈｏｕＪｉａｎｆｅｎｇ周剑锋...     

Bcl-2反义寡核苷酸增强阿糖胞苷诱导原代白血病细胞凋亡的研究

背景与目的:有研究证实,针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区的2个有效反义作用靶点的反义寡核苷酸能增强HL-60和K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素、足叶乙甙的敏感性。本研究观察这两个新靶点的反义寡核苷酸对Ara-C诱导原代培养的急性白血病(AL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞凋亡的影响。方法:用细胞记数法观察细胞的生存情况;免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色法观察并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:靶向bcl-2mRNA翻译起始区与靶向蛋白编码区的两个反义寡核苷酸分别与Ara-C联合作用AL、CLL细胞48h,细胞的活性受到明显的抑制,分别同无关寡核苷酸(NS-ODN)联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。这两个不同靶点的反义寡核苷酸分别与Ara-C联用均能明显下调AL、CLL细胞Bcl-2蛋白的表达,并且联合作用AL、CLL细胞48h的凋亡细胞百分率分别与NS-ODN联合Ara-C组、单用Ara-C组进行比较,差异有显著性(P<0.05)。与靶向bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸比较,靶向蛋白编码区的反义寡核苷酸提高AL细胞对Ara-C的敏感性作用要强些(P<0.05)。结论:针对bcl-2mRNA翻译起始区和蛋白编码区两个靶点的反义寡核苷酸能增强Ara-C诱导AL、CLL细胞的凋亡。     

拓扑异构酶I抑制剂诱导白血病HL60/VCR耐药细胞凋亡的研究

目的　研究拓扑异构酶I抑制剂 (topotecan ;TPT)对白血病耐药细胞HL6 0 /VCR诱导凋亡的作用。方法　瑞氏 吉姆萨染色和吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)染色进行形态观察 ,采用TUNNEL、流式细胞仪检测细胞周期和AnnexinV观察TPT对HL6 0 /VCR细胞的抑制效应和促凋亡作用。WesternBlot检测bcl 2、活化的caspase 3和P糖蛋白 (Pgp)的表达变化。 结果　经TPT处理后的HL6 0 /VCR细胞 ,在光镜和AO/EB染色中均可见到典型的凋亡细胞形态学改变 ,并具有时间和剂量依赖性 ;AnnexinV染色后能检测到早期凋亡细胞 (2 6 .8% ) ,细胞周期显示 :G1期细胞比例增高 ,S期减低 ,并有 2 1.8%凋亡峰 ;TUNNEL能检测到 (6 2 .2± 3.5 ) %的阳性细胞 ;伴有活化的caspase 3的表达和bcl 2的下调 ,而Pgp的表达在细胞凋亡前后无变化。结论　TPT能诱导白血病耐药细胞凋亡 ,该过程伴有caspase 3的活化和bcl 2的表达下调。     

STUDY ON ANTITUMOR DRUG-INDUCED APOPTOSIS IN HUMAN CANCER CELLS BY TERMINAL DEOXYNU-CLEOTIDYL TRANSFERASE ASSAY

ＳＴＵＤＹＯＮＡＮＴＩＴＵＭＯＲＤＲＵＧＩＮＤＵＣＥＤＡＰＯＰＴＯＳＩＳＩＮＨＵＭＡＮＣＡＮＣＥＲＣＥＬＬＳＢＹＴＥＲＭＩＮＡＬＤＥＯＸＹＮＵＣＬＥＯＴＩＤＹＬＴＲＡＮＳＦＥＲＡＳＥＡＳＳＡＹＴｏｎｇＴｏｎｇ童彤ＳｕｎＨａｎｘｉａｏ孙含笑Ｌｉｕ...