微小RNA-223-3p靶向调控TGFBR3影响肺癌细胞上皮间质转化及Wnt/β-catenin通路

目的:探讨微小RNA-223-3p（miR-223-3p）对转化生长因子Ⅲ型受体（TGFBR3）的靶向调控及对肺癌上皮间质转化（EMT）及Wnt/β-catenin通路相关指标的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测肺癌细胞（95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460）以及人肺上皮细胞BEAS-2B的miR-223-3p和TGFBR3水平,经双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p和TGFBR3的靶向关系。将A549细胞分成3组:对照组、miR-223-3p NC组（转染miR-223-3p NC）、miR-223-3p mimic组（转染miR-223-3p mimic）,MTT法、划痕实验及Transwell小室实验分别检测3组细胞的增殖及迁移能力。接着收集3组转染后的细胞,分别制备裸鼠移植瘤,处死裸鼠并剥离肿瘤组织,测量肿瘤体积及重量,免疫组化法对比各组镜下TGFBR3蛋白的表达情况,Western blotting实验检测EMT相关指标上皮钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及Wnt/β-catenin通路相关因子（Wnt1和β-catenin）的表达。结果:与BEAS-2B细胞对比,肺癌细胞miR-223-3p及TGFBR3的表达水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-223-3p能靶向调控TGFBR3的表达。miR-223-3p mimic组A549细胞的增殖活力、划痕愈合率及穿膜细胞数均较miR-223-3p NC组明显降低（P＜0.05）;此外,miR-223-3p mimic组裸鼠瘤体体积及重量均明显低于miR-223-3p NC组。免疫组化结果显示,miR-223-3p mimic组TGFBR3阳性表达率上升,与miR-223-3p NC组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting结果提示,与miR-223-3p NC组相比,miR-223-3p mimic组肿瘤组织中TGFBR3、E-Cadherin表达水平升高,而N-Cadherin、Vimentin、Wnt1和β-catenin表达水平均下降（P＜0.05）。对照组与miR-223-3p NC组的增殖活力、划痕愈合能力以及EMT和Wnt/β-catenin通路相关因子水平的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-223-3p在肺癌中异常低表达,miR-223-3p通过靶向调控TGFBR3来抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移侵袭、EMT过程并阻断Wnt/β-catenin通路,在肺癌进展中发挥抑癌作用。     

miR-223-3p通过调控ECT2诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨miR-223-3p对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选取24例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织,实时定量PCR检测miR-223-3p的相对表达水平,免疫组化检测分析上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平,并对两者进行相关性分析。将人非小细胞肺癌A549细胞分为正常对照组、转染对照组、miR-223-3p过表达组,其中正常对照组细胞未作任何处理,转染对照组细胞转染空质粒载体,miR-223-3p过表达组转染miR-223-3p mimics。MTT实验和平板集落形成实验检测各组细胞的增殖率,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blot实验检测ECT2蛋白的表达水平;采用siRNA转染法沉默A549细胞中的ECT2后,检测细胞增殖及凋亡的变化。结果：miR-223-3p在癌组织中表达显著低于癌旁组织,而癌组织中ECT2蛋白表达高于癌旁组织,二者存在负相关关系（r=-0.666,P < 0.05）;与正常对照组和转染对照组细胞相比,miR-223-3p过表达组细胞的增殖率降低（P < 0.05）,ECT2蛋白表达显著降低,而细胞凋亡率显著升高（P < 0.05）;沉默ECT2对细胞增殖和凋亡的影响与过表达miR-223-3p基本一致。结论：miR-223-3p可能通过负向调控ECT2的表达,进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

lncRNA BLACAT1靶向结合miR-29a-3p调控甲状腺癌细胞TPC-1的生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA BLACAT1(lncRNA BLACAT1)调控microRNA-29a-3p（miR-29a-3p）对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能机制。方法:收集2018年06月至2019年03月在我院行甲状腺癌切除术的31例患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p在甲状腺癌组织、癌旁组织、5种甲状腺癌细胞系（SW579、 PDTC-1、 HMGA1、 TPC-1、 KAT-5）及正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平;调控TPC-1甲状腺癌细胞系中lncRNA BLACAT1、miR-29a-3p的表达,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用生物信息分析和双荧光素酶报告基因法预测和验证lncRNA BLACAT1与miR-29a-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织和正常甲状腺细胞相比,甲状腺癌组织和细胞系中lncRNA BLACAT1的表达水平显著上调,miR-29a-3p的表达水平显著下调（P＜0.05）;过表达lncRNA BLACAT1促进TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭;在甲状腺癌组织中lncRNA BLACAT1的表达水平与miR-29a-3p的表达水平呈负相关（r2 =0.492,P＜0.001）;双荧光素酶分析证实lncRNA BLACAT1能特异性结合miR-29a-3p,并能降低其表达;过表达miR-29a-3p抑制TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,且miR-29a-3p可以抑制由lncRNA BLACAT1过表达引起的TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的增强。结论:lncRNA BLACAT1通过靶向调控miR-29a-3p表达影响甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,从而促进甲状腺癌的发展。     

miR-199a-3p通过调控CBX7对肺癌细胞A549侵袭与转移的影响

目的: 探讨miR-199a-3p负调控色素框同源蛋白7（pigment box homologous protein 7, CBX7）促进肺癌细胞A549的侵袭与迁移能力。方法： :qRT-PCR法检测肺癌患者的肺癌组织、癌旁组织、发生转移的患者的肺癌组织及肺癌细胞系中miR-199a-3p、CBX7的表达量,分析miR-199a-3p与临床特征的关系。荧光素酶报告分析实验检测miR-199a-3p可与CBX7 mRNA的结合区域,qRT-PCR法检测过表达miR-199a-3p对肺癌细胞A549中的CBX7 mRNA表达的影响;Western blot法检测过表达miR-199a-3p对肺癌细胞A549中的CBX7蛋白表达的影响。Western blot检测在肺癌组织和癌旁组织中CBX7蛋白的表达。MTT实验、流式细胞法、Transwell实验检测miR-199a-3p与CBX7对肺癌细胞A549增殖、侵袭、迁移能力及周期S期聚集的调控。结果 : 肺癌组织中miR-199a-3p的相对表达量显著高于癌旁组织,发生转移患者的肺癌组织中miR-199a-3p的相对表达量显著升高;各肺癌细胞株中miR-199a-3p的表达量均显著高于正常肺细胞;miR-199a-3p的表达量与患者肿瘤 TNM分期、肺癌转移有关。CBX7是miR-199a-3p可能作用的靶基因;miR-199a-3p可特异性与CBX7 mRNA的3’UTR区域内的位点互补结合, 进而抑制CBX7的表达;miR-199a-3p mimics转染组CBX7的mRNA及蛋白表达水平均显著降低。肺癌组织中CBX7 mRNA、蛋白的相对表达量显著低于癌旁组织;各肺癌细胞株中CBX7 mRNA的表达水平均显著低于正常肺细胞。miR-199a-3p抑制CBX7,促进肺癌细胞A549增殖、侵袭、迁移能力及周期S期的聚集;miR-199a-3p可下调CBX7促进肺癌细胞增殖。结论: miR-199a-3p能通过负调控CBX7抑制肺癌的发展,其可能成为肺癌诊断及治疗的新靶向。     

lncRNA LINC00909靶向miR-548-3p对结直肠癌细胞放射敏感性的研究

目的 探讨lncRNA LINC00909是否通过靶向miR-548-3p而影响结直肠癌细胞放射敏感性。方法 采用qRT-PCR检测结直肠癌组织、癌旁组织中LINC00909、miR-584-3p的表达量;体外培养结直肠癌细胞SW480、SW620,分别将si-NC、si-LINC00909、miR-NC、miR-584-3p mimics、si-LINC00909与anti-miR-NC、si-LINC00909与anti-miR-584-3p转染至SW480、SW620细胞,用4 Gy照射细胞;克隆形成实验检测细胞存活分数及放射增敏比;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证LINC00909、miR-584-3p的靶向关系。裸鼠皮下移植瘤实验检测干扰LINC00909表达或抑制miR-584-3p表达对照射后移植瘤重量的影响。结果 结直肠癌组织中LINC00909的表达水平显著升高(P<0.05),miR-584-3p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰LINC00909表达或miR-584-3p过表达后细胞存活分数明显降低(P<0.05),放射增敏比分别为2.017、1.762,并可抑制增殖、迁移及侵袭(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC00909可靶向结合miR-584-3p;干扰LINC00909表达后移植瘤重量显著降低(P<0.05)。共转染anti-miR-584-3p后移植瘤重量显著升高(P<0.05)。结论 干扰LINC00909表达可通过上调miR-548-3p的表达而减弱结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力从而增强细胞放射敏感性。     

lncRNA SNHG14通过靶向miR-433-3p调控甲状腺癌SW579细胞的恶 性生物学行为

目的：探讨 lncRNA SNHG14 对甲状腺癌 SW579细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法：收集2017年10月至2018年12月青海省人民医院收治的20例甲状腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,用qPCR检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中SNHG14与miR-433-3p 的表达;根据转染物的不同,将 SW579 细胞分为 si-NC 组（转染si-NC）、si-SNHG14组（转染si-SNHG14）、miR-NC组（转染 miR-NC）、miR-433-3p mimic 组（转染 miR-433-3p mimic）、si-SNHG14+anti-miR-NC 组（共转染si-SNHG14与anti-miR-NC）和si-SNHG14+anti-miR-433-3p组（共转染si-SNHG14与anti-miR-433-3p）。MTT法、FCM、Transwell 实验分别检测转染后SW579细胞的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力的改变;利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG14是否可结合miR-433-3p,qPCR法检测SNHG14与miR-433-3p之间的相互调控关系。结果：SNHG14在甲状腺癌组织中的表达高于癌旁组织（P<0.05）,而miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织（P<0.05）。抑制SNHG14的表达或过表达miR-433-3p 可使SW579细胞增殖能力降低（P<0.05）、迁移与侵袭细胞数减少（均 P<0.05）、细胞凋亡率升高（P<0.05）、G1期细胞比例升高（P<0.05）且S期细胞比例降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明SNHG14可结合miR-433-3p,抑制SNHG14的表达可提高SW579细胞中miR-433-3p水平（均P<0.05）。同时抑制miR-433-3p 和SNHG14的表达可部分逆转后者对SW579细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用（均P<0.05）。结论：甲状腺癌组织中lncRNA SNHG14呈高表达、miR-433-3p呈低表达,lncRNA SNHG14可通过靶向结合miR-433-3p促进甲状腺癌SW579细胞的增殖、迁移、侵袭而抑制细胞凋亡。     

LncRNA SNHG20通过miR-520f-3p调控胆管癌细胞增殖和侵袭

目的探讨lncRNA SNHG20和miR-520f-3p对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法收集2012年3月至2014年3月在哈尔滨医科大学附属第二医院手术切除的20例胆管癌患者肿瘤组织及相应癌旁组织,利用脂质体转染技术分别将si-SNHG20、miR-520f-3p mimics和miR-520f-3p inhibitor及其对照质粒转染至胆管癌CCLP-1细胞,构建过表达和沉默细胞模型。利用qRT-PCR分别检测胆管癌组织和相应癌旁正常组织,以及胆管癌细胞系CCLP-1、QBC939、RBE、TFK-1和正常胆管上皮细胞系HIBEC中SNHG20与miR-520f-3p的表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG20与miR-520f-3p的靶向关系。结果分别与癌旁组织和正常胆管上皮细胞系HIBEC比较,SNHG20在胆管癌组织和胆管癌细胞系CCLP-1、QBC939、RBE、TFK-1中的表达升高(P<0.05),而miR-520f-3p表达降低(P<0.05)。与si-NC组比较,敲低SNHG20后CCLP-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。SNHG20可以靶向作用并调控miR-520f-3p的表达,敲低miR-520f-3p能逆转下调SNHG20对CCLP-1细胞增殖和侵袭的抑制作用(t=10.533,P=0.002;t=8.683,P=0.037)。结论LncRNA SNHG20能靶向作用于miR-520f-3p,进而调控胆管癌细胞增殖和侵袭。     

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p（miR-379-5p）通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con（miR-con组）、miR-379-5p mimics（miR-379-5p组）分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA（miR-379-5p+pcDNA组）、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL（miR-379-5p+pcDNA-CTSL组）分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织（P＜0.05）;与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）,而促进Cleaved caspase-3蛋白表达（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

微小RNA-526b-3p通过JAK/STAT3信号通路对黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨微小RNA-526b-3p(miR-526b-3p)对黑素瘤细胞侵袭与迁移的影响及潜在机制。方法 实时定量PCR(qPCR)检测黑色素瘤组织和A2058细胞中miR-526b-3p和信号转导子与激活子3(STAT3)的表达水平，双荧光素酶报告基因实验验证miR-526b-3p和STAT3的靶向关系。成功构建miR-526b-3p模拟物(mimics)和过表达STAT3的质粒pcDNA3.1-STAT3后进行转染，将A2058细胞分为miR-NC组(对照)、miR-526b-3p mimics组(过表达miR-526b-3p)、miR-526b-3p mimics+pcDNA3.1-STAT3组(过表达miR-526b-3p和STAT3)。采用CCK-8法检测细胞增殖，划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭；运用qPCR和Western blot方法检测miR-526b-3p和JAK/STAT3信号通路相关基因STAT3和p-JAK1的表达水平。结果 黑色素瘤组织和细胞中miR-526b-3p表达下调，而STAT3表达上调(P<0.05)。相较于miR...     

外泌体携带的miR-142-3p通过靶向COX-2抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭

目的:探讨骨肉瘤组织中miR-142-3p是否可以通过靶向COX-2来抑制肿瘤细胞增殖和侵袭能力,并且验证携带miR-142-3p的外泌体是否可以抑制骨肉瘤细胞生长。方法:检测骨肉瘤癌组织及癌旁组织中miR-142-3p和COX-2 mRNA的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-3p与COX-2 3' UTR的靶向关系。构建过表达miR-142-3p及COX-2细胞系,检测细胞的增殖及侵袭能力。用携带miR-142-3p的外泌体处理肿瘤细胞,检测细胞的增殖及侵袭能力。对携带miR-142-3p的外泌体进行体内抑瘤实验。结果:较癌旁组织而言,miR-142-3p在癌组织中显著低表达（P＜0.05）,而COX-2在癌组织中显著高表达（P＜0.05）,且COX-2是miR-142-3p的靶标。过表达miR-142-3p的细胞增殖及侵袭能力降低（P＜0.001）。体外增殖实验及小鼠体内移植瘤模型表明,携带miR-142-3p的外泌体可以在小鼠体内外抑制骨肉瘤细胞的增殖（P＜0.001）。结论:携带miR-142-3p的外泌体可通过抑制COX-2的表达来抑制骨肉瘤细胞的生长,因此,携带miR-142-3p的外泌体可能发展成为一种治疗骨肉瘤的潜在策略。