CD44v6通过Akt信号通路调节胶质瘤细胞生长

目的:探讨CD44v6对胶质瘤细胞生长的影响及其相关机制。方法:细胞免疫荧光染色观察A172细胞中CD44v6表达情况及其表达部位。实时荧光定量PCR和Western blot检测A172细胞中CD44v6以及siRNA下调CD44v6表达的情况，MTT检测CD44v6对细胞活力的影响，Annexin Ⅴ-FITC/PI染色检测CD44v6对细胞凋亡的影响，Western blot检测细胞中p-Akt水平。结果:A172细胞表达CD44v6，表达部位在细胞膜。siRNA下调CD44v6表达后，细胞生长显著减缓，细胞凋亡增加。CD44v6配体-骨桥蛋白促进A172细胞Akt的磷酸化，下调CD44v6表达后，骨桥蛋白的这种效应被显著抑制。进一步，骨桥蛋白促进A172细胞生长，下调CD44v6表达后，骨桥蛋白促进A172细胞生长的效应消失。结论:CD44v6增加A172细胞活力，抵抗细胞凋亡，其促进细胞内Akt的磷酸化是其中的一个机制。     

丙戊酸钠对人宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响

[目的]研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠对人宫颈癌Hela和Siha细胞株增殖和细胞周期的影响。[方法]用不同浓度丙戊酸钠分别作用Hela和Siha细胞，MTT法测生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期，RT—PCR和Western blot检测p21^WAF1/CIP1 mRNA和蛋白改变。[结果]丙戊酸钠对宫颈癌Hela和Siha细胞生长抑制呈剂量依赖性；丙戊酸钠使Hela和Siha细胞阻滞于G0／G1期；丙戊酸钠上调p21^WAF1/CIP1 mRNA和蛋白表达。[结论]丙戊酸钠能上调p21^WAF1/CIP1表达，促使细胞阻滞于G0／G1期,从而抑制宫颈癌Hela和Siha细胞生长。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

丙戊酸钠对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及机制

目的 研究丙戊酸钠对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及其机制.方法 细胞计数法检测不同浓度丙戊酸钠处理Raji细胞后细胞的增殖活性,制作生长抑制曲线.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.Westernblot检测细胞周期蛋白cyclin D1和p21、凋亡抑制基因survivin的变化.结果 丙戊酸钠能明显抑制Raji细胞的增殖,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.01).流式细胞仪检测发现以3 mmol/L的丙戊酸钠处理Raji细胞后细胞阻滞于G0/G1期,其凋亡率呈时间依赖性上升(P＜0.01).Western blot检测发现3 mmol/L丙戊酸钠处理后Raji细胞cyclin D1表达明显下调而p21表达明显上调(均P＜0.05).survivin表达显著下降(P＜0.01).结论 丙戊酸钠对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与细胞周期和诱导凋亡有关.     

探讨bcl-2下调后对胶质瘤细胞系的增殖、凋亡和侵袭能力的影响

目的 研究下调bcl-2基因表达后对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法 利用小分子RNA干扰（Small interfering RNA,siRNA）技术人工合成bcl-2靶向siRNA,转染神经胶质瘤细胞系SHG44和TJ905细胞,特异性沉默神经胶质瘤细胞SHG44和TJ905细胞bcl-2基因表达。通过蛋白质印迹（Western blot）分析、噻唑蓝（MTT）实验、Transwell实验和流式细胞仪（FCM）检测,观察bcl-2 siRNA对转染细胞bcl-2基因抑制效果、增殖能力的变化、侵袭能力的改变和细胞凋亡的影响。结果 bcl-2 siRNA可特异性下调神经胶质瘤细胞系SHG44和TJ905细胞bcl-2基因表达。bcl-2下调的神经胶质瘤细胞增殖能力在不同时间点都受到抑制,侵袭能力也明显下降,但实验中未见细胞明显凋亡。结论 下调bcl-2基因表达可有效抑制神经胶质瘤细胞生长,降低细胞增殖和侵袭能力。     

丙戊酸钠诱导Siha细胞周期阻滞的实验观察

目的:研究丙戊酸钠对人宫颈癌Siha细胞增殖和细胞周期的影响.方法:MTT检测生长抑制,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法检测p21WAF1/CIP1、p-CDK2和cyclin E蛋白.结果:丙戊酸钠以剂量依赖性方式抑制Siha细胞生长IC20和IC50分别为2.0 mmol/L和8.0 mmol/L;丙戊酸钠上调G0/G1期比例由(74.92±0.60)%升高至(84.475±1.11)%,P=0.001,下调S期(13.19±0.70)%降为(7.72±1.40)%,P=0.004和G2/M(11.89±1.30)%降为(7.81±0.31)%期比例,P=0.006.丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1蛋白,下调cyclin E和p-CDK2蛋白.结论:丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1表达和抑制cyclin E表达,使细胞阻滞于G0/G1期,抑制Siha细胞生长.     

Rab31对神经胶质瘤细胞增殖迁移侵袭的影响及机制研究

目的:研究Rab31对人神经胶质瘤细胞增殖迁移侵袭的影响及相关分子机制。方法:Western blot检测正常人胶质细胞NHA和3株人神经胶质瘤细胞SHG-44、TJ905和LN229中Rab31表达;将3种Rab31沉默siRNA及其对照分别转染至神经胶质瘤SHG-44细胞中,分别记为si-Rab31-1组、si-Rab31-2组、si-Rab31-3组和si-NC组,Western blot验证转染效率,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移侵袭,Western blot检测PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K p101、p-AKT和AKT表达水平。结果:与正常人胶质细胞NHA相比,神经胶质瘤细胞SHG-44、TJ905和LN229中Rab31蛋白表达显著增加（P＜0.01）;与si-NC组比较,si-Rab31-1、si-Rab31-2和si-Rab31-3组神经胶质瘤细胞SHG-44中Rab31蛋白表达显著降低（P＜0.01）,其中si-Rab31-2组SHG-44细胞中Rab31表达最低;抑制Rab31表达可显著抑制SHG-44细胞增殖、迁移和侵袭,并抑制SHG-44细胞中PI3K/AKT信号通路转导（P＜0.01）。结论:抑制Rab31可通过抑制PI3K/AKT信号通路转导抑制胶质瘤SHG-44细胞增殖、迁移和侵袭。     

RNA干扰抑制人结肠癌SW480细胞EGFR的表达及其对体外生长情况影响的研究

目的研究利用RNA干扰技术抑制人结肠癌SW480细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,并观察受抑制后SW480细胞体外生长情况的改变。方法利用脂质体将siRNA转染进入SW480细胞(野生型K-ras基因表达阳性),在细胞内形成双链siRNA,识别并降解EGFR mRNA。通过荧光定量RT-PCR检测EGFR mRNA的表达水平,Western blot检测EGFR蛋白的表达,MTT法检测SW480细胞的增殖抑制情况,流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞其EGFRmRNA及蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05);转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞增殖率较对照组降低(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA能有效抑制SW480细胞EGFR基因的表达,具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。     

沉默表皮生长因子受体的表达对肺腺癌A549细胞自噬的影响

目的：研究降低表皮生长因子受体（EGFR）的表达对肺腺癌A549细胞自噬活性的影响。方法：A549细胞中加入EGF处理,分为4组,即未处理组和10、25、50 ng/mL EGF处理组,用Western blot方法检测EGFR的蛋白表达;采用转染siRNA降低肺腺癌细胞A549细胞EGFR的表达,将A549细胞分为4组,即未处理组、EGFR siRNA-1组、EGFR siRNA-2组和EGFR siRNA-3组,分别采用Real-time RT-PCR和Western blot方法检测EGFR mRNA和蛋白表达水平来评价3个siRNA的沉默效果;将A549细胞分为转染EGFR siRNA组、转染空载体组、转染试剂组（只加入等量转染试剂）及未处理组,且4组均加入等量的50 ng/mL EGF,用Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达,观察沉默EGFR表达对自噬活性变化;A549细胞分为转染EGFR siRNA组和转染空载体组,用透射电子显微镜观察自噬小体。结果：转染siRNA后A549细胞EGF蛋白的表达降低,LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化水平升高（P < 0.05）,细胞内出现较多自噬小体,自噬活性明显增加。结论：降低EGFR的表达可以提高肺腺癌A549细胞自噬活性。     

KIF20A对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡及细胞周期分布的影响

目的:研究KIF20A对胶质瘤U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:利用 RNA干扰技术下调胶质瘤细胞系 U87中 KIF20A 的表达。RT-qPCR 和 Western blot 分别检测 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平上的表达。CCK-8 实验检测 U87细胞增殖能力的变化，Transwell 实验检测U87细胞迁移及侵袭能力的变化，流式细胞术检测 U87细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:RT-qPCR和Western blot 结果显示 siRNA-KIF20A显著下调 KIF20A 的表达，CCK-8和Transwell 实验显示下调 KIF20A 的表达显著抑制了U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力，流式细胞术结果显示下调 KIF20A 的表达显著促进了U87细胞的凋亡，诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:下调KIF20A的表达抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭，促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并诱导细胞周期G0/G1期阻滞。     

siRNA沉默FAM83A基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究FAM83A基因对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法:运用qRT-PCR法检测非小细胞肺癌细胞H1299中FAM83A的表达；将blank组（未作任何处理）、si-control组（转染si-control）、si-FAM83A组（转染si-FAM83A）用脂质体法转染至H1299细胞；Western blot检测细胞中FAM83A、p16、p21、MMP-2、MMP-9的蛋白表达；MTT法检测细胞的增殖；Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭；裸鼠成瘤实验检测肿瘤的生长。结果:沉默FAM83A后，H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力均得到显著下调，并且p16、p21的蛋白表达明显上调，MMP-2、MMP-9的蛋白表达明显下调。最重要的是，沉默FAM83A后的异种移植裸鼠体内的肿瘤生长能力得到明显抑制。结论:沉默FAM83A可抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并抑制裸鼠体内肿瘤的生长。     

miR-153靶向ZEB2抑制胶质母细胞瘤侵袭与转移

目的:探究miR-153对人胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）侵袭转移的影响及相关作用机制。方法:利用qRT-PCR检测miR-153在GBM中的表达;将miR-153转染至胶质瘤U251细胞后,应用qRT-PCR 验证转染效率;应用Western blot、Transwell及划痕实验检测U251细胞的上皮间质转化、细胞侵袭及转移能力的变化;应用qRT-PCR及Western blot检测ZEB2的mRNA和蛋白表达;利用质粒转染技术过表达miR-153后,同时过表达ZEB2,再应用Transwell及划痕实验检测U251细胞的侵袭及转移能力的变化。结果:与对照相比,miR-153在GBM中低表达;过表达miR-153显著抑制胶质瘤U251细胞的上皮间质转化、细胞侵袭及转移,并能够抑制U251细胞中ZEB2的蛋白表达;ZEB2过表达有效阻断了miR-153抑制U251细胞侵袭及转移的作用。结论:miR-153能够靶向下调ZEB2,进而抑制胶质瘤U251细胞上皮间质转化及细胞侵袭转移。     

AHR活化介导的ROS诱导NSCLC细胞吉非替尼耐药的作用机制

目的:探讨芳香烃受体（AHR）介导的活性氧簇（ROS）诱导非小细胞肺癌（NSCLC）吉非替尼耐药的作用机制。方法:以正常支气管肺泡上皮细胞BEAS-2B为对照，Western blot检测非小细胞肺癌A549、PC-9、H1299和H1975细胞AHR的蛋白表达。AHR激动剂FICZ、吉非替尼、N-乙酰半胱氨酸（NAC）分别处理A549和PC-9细胞，MTT、激光共聚焦显微镜、流式细胞术及Western blot分别检测吉非替尼敏感性、细胞内ROS及表皮生长因子受体（EGFR）信号。结果:MTT检测显示FICZ通过上调半数最大抑制浓度（IC50）诱导PC-9及A549细胞对吉非替尼耐药，Western blot显示FICZ可导致PC-9及A549细胞EGFR、AKT磷酸化，而NAC可遏制A549细胞中的EGFR磷酸化并逆转吉非替尼耐药。共聚焦显微镜和流式细胞仪显示，FICZ诱导的AHR活化导致PC-9及A549细胞内ROS产生增加，并且可被NAC抑制。结论:活化的AHR可通过促进NSCLC细胞中的ROS产生和EGFR信号转导介导吉非替尼耐药，此过程可被NAC抑制。     

亚硒酸钠对肺癌干细胞侵袭和迁移的影响

目的:研究亚硒酸钠对肺癌干细胞侵袭和迁移的影响。方法:利用免疫磁珠细胞分选技术分选出肺癌干细胞,CCK-8实验检测不同浓度亚硒酸钠对肺癌干细胞活力的影响,Transwell小室法检测亚硒酸钠对肺癌干细胞侵袭能力的影响,细胞划痕法检测亚硒酸钠对肺癌干细胞迁移能力的影响,Western blot检测不同浓度亚硒酸钠对肺癌干细胞中SBP1及Ki67蛋白表达的影响。结果:成功分选出了纯度为82%的CD133+肺癌干细胞。CCK-8实验结果显示亚硒酸钠能够剂量依赖性地抑制肺癌干细胞的活力。Transwell小室法检测结果显示亚硒酸钠能够抑制肺癌干细胞的侵袭能力。细胞划痕实验结果显示亚硒酸钠能抑制肺癌干细胞的迁移能力。Western blot检测结果显示亚硒酸钠能够剂量依赖性地促进肺癌干细胞中SBP1的表达,抑制Ki67蛋白的表达。A549小鼠肺癌移植瘤结果显示,与控制组（注射生理盐水组）相比,瘤内注射亚硒酸钠能够显著抑制肿瘤的生长。结论:亚硒酸钠能够抑制肺癌干细胞的生长、侵袭和迁移,可能是治疗肺癌的潜在药物。     

miR-218-5p靶向下调LPAR3抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-218-5p通过调控LPAR3表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常宫颈细胞H8和4种宫颈癌细胞（SiHa、HeLa、MS751和HT-3）中miR-218-5p和LPAR3的表达。以HeLa细胞为后续研究对象，分别构建过表达miR-218-5p和敲减LPAR3的HeLa细胞株，CCK-8法检测细胞存活情况，Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力，Western blot检测细胞增殖相关蛋白CyclinD1、迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-218-5p和LPAR3的靶向调控关系。结果:与人正常宫颈细胞H8相比，4种宫颈癌细胞miR-218-5p的表达显著下调，LPAR3的表达显著上调。过表达miR-218-5p或敲减LPAR3均可抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力，抑制CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达。LPAR3是miR-218-5p的靶基因，miR-218-5p可负性调控LPAR3的表达。过表达LPAR3可逆转miR-218-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:miR-218-5p通过靶向下调LPAR3表达抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭，miR-218-5p/LPAR3分子轴有望成为宫颈癌的潜在治疗靶点。     

STIP1在脑胶质瘤组织中的表达及对胶质瘤细胞株增殖、凋亡、侵袭的影响

目的:检测磷酸化应激诱导蛋白1（stress-induced phosphoprotein 1，STIP1）在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异，探讨STIP1对胶质瘤细胞株U87、U251细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、免疫组化及蛋白印迹检测胶质瘤组织和正常脑组织中STIP1的表达；小干扰RNA（STIP1-siRNA）转染U87、U251细胞株后，使用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和Transwell小室观察细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。结果:STIP1在胶质瘤Ⅳ级组织中的表达明显高于正常脑组织，但在胶质瘤Ⅱ、Ⅲ级中的表达与正常脑组织无明显差异。U87、U251细胞株转染STIP1-siRNA后，细胞增殖和侵袭能力明显受到抑制，而细胞凋亡率明显上升。结论:STIP1在胶质母细胞瘤组织中高表达，下调STIP1可以抑制胶质瘤细胞株U87和U251的增殖，阻滞细胞周期，促进其细胞凋亡，并可抑制其侵袭力。     

HOTAIRM1靶向miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:研究长链非编码RNA HOTAIRM1（lncRNA HOTAIRM1）与微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的靶向关系及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法:荧光定量PCR（qPCR）检测HOTAIRM1和miR-129-5p在人正常脑组织和胶质瘤组织中的表达。建立抑制HOTAIRM1表达细胞株，研究其对U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。MTT法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭；蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）、上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平。生物学信息预测和双荧光素酶报告基因法分析HOTAIRM1和miR-129-5p之间的靶向关系。共转染si-HOTAIRM1和anti-miR-129-5p，观察抑制miR-129-5p表达对抑制HOTAIRM1表达诱导的U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。 结果:HOTAIRM1在胶质瘤组织中的表达明显上调（P<0.05），miR-129-5p表达下调（P<0.05）。抑制HOTAIRM1表达显著降低U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量（P<0.05），明显增加U251细胞凋亡率和p21、Bax、E-cadherin蛋白表达量（P<0.05）。miR-129-5p是HOTAIRM1的靶基因。上调或下调HOTAIRM1表达明显调控miR-129-5p表达（P<0.05）。抑制miR-129-5p表达逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、MMP-2、Bcl-2蛋白表达的抑制作用，并逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞p21、E-cadherin、Bax蛋白表达和细胞凋亡率的促进作用。 结论:lncRNA HOTAIRM1通过靶向miR-129-5p影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

氢气联合巨噬细胞对乳腺癌细胞生长的影响

目的:探究氢气联合巨噬细胞对乳腺癌细胞生长的影响及其机制。方法:CCK8法和流式细胞术检测癌细胞的活力及凋亡情况，ELISA检测巨噬细胞分泌的细胞因子TNF-α，IFN-γ，IL-10，Western blot检测FADD、TRAF2、caspase3的表达，流式细胞术和RT-PCR分析各组巨噬细胞标志物CCR7、CD206的表达情 况。结果:氢气联合巨噬细胞使乳腺癌细胞活力降低，凋亡增加；机制方面，氢气联合巨噬细胞增加了细胞因子TNF-α，IFN-γ的分泌，上调了凋亡通路中FADD、caspase3的表达，并且促进巨噬细胞向M1极化，抑制其向M2极化。结论:氢气联合巨噬细胞能抑制乳腺癌细胞生长。