前列腺素E2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 研究前列腺素E2(PGE2)对结肠癌SW480细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响及其可能的分子机制.方法 分别使用外源性PGE2及其受体EP1的拮抗剂SC19220作用于SW480细胞后,MTr法测定肿瘤细胞黏附能力,transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,RT-PCR及Western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白水平的改变.结果 外源性PGE2可以显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,PGE2作用于细胞后,黏附细胞A值由0.207±0.009增加至0.417±0.088,迁移细胞由6.33±0.33增加至43.33±0.88,侵袭细胞由3.67±0.34增加至26.33±0.89,差异均有统计学意义(P＜0.05).SC19220可抑制PGE2所诱导的SW480细胞黏附、迁移及侵袭,PGE2+SC19220组与PGE2组相比,黏附细胞A值由0.417±0.088下降至0.140±0.006,迁移细胞由43.33±0.88下降至28.00±0.58,侵袭细胞由26.33±0.89下降至5.67±0.33,差异均有统计学差异(P＜0.05).RT-PCR及Western blotting检测结果显示,PGE2作用后SW480细胞VEGFmRNA及蛋白水平表达增强,且表达量与PGE2浓度呈正相关.结论 PGE2可显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,其作用过程可能与VEGF表达上调相关.     

HBx通过上调前列腺素E2受体2的表达增强HL-7702肝细胞的侵袭能力

以HL-7702肝细胞为研究对象,探讨HBx的表达对EPs的影响以及与侵袭转移的相关性。方法:建立表达HBx的HL-7702人正常肝细胞（HL-7702/HBx）,采用HBx RNAi载体构建抑制HBx的HL-7702肝细胞株（HL-7702/HBx-siRNA）,检测抑制HBx前后细胞培养上清PGE2浓度的变化、细胞表达EPs mRNA和基质金属蛋白酶（MMPs）mRNA的变化,并进一步采用EP2-siRNA瞬时转染、Western-blot、明胶酶谱和Transwell小室等技术观察EP2表达的抑制对MMPs活性以及细胞侵袭和转移能力的影响。结果:与对照细胞相比,PGE2、EP2和MMP-2的mRNA相对表达值在HL-7702/HBx细胞明显增高（P<0.05）,分别为（123.9±9.9） pg·mL-1、（0.445±0.025） pg·mL-1和（0.226±0.016） pg·mL-1,在抑制HBx表达后则明显下调（P<0.05）,分别为（78.0±5.9） pg·mL-1、（0.336±0.007） pg·mL-1和（0.117±0.012） pg·mL-1;对照细胞HL-7702的EP2表达抑制前后,MMP2活性、细胞侵袭和移动能力变化不明显;而HL-7702/HBx细胞的EP2表达受抑制后,其MMP2活性和细胞侵袭能力则明显下降（P<0.05）,侵袭细胞数由（64.4±3.4）个/视野下降为（55.2±2.2）个/视野,细胞的移动能力变化不大。结论:HBx可以促进EP2表达和增加MMP2活性,并通过EP2上调HL-7702肝细胞的侵袭能力。抑制EP2表达可能对HBV感染的肝癌侵袭转移治疗研究具有潜在的应用价值。      

AP-2α基因转染对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响

目的 探讨AP-2α基因对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响.方法 构建PODNA3.1(+)-AP-2α真核表达载体,利用脂质体介导pcDNA3.1(+)-AP-2α和pcDNA3.1(+)转染5W480细胞,并以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR与Western blotting分别检测转染48 h后各组细胞中AP-2αmRNA与蛋白的表达情况;采用平板克隆、软琼脂克隆形成试验以及Transweil侵袭试验,分别检测各组细胞体外增生及侵袭能力.结果 SW480细胞内源性AP-2α蛋白表达缺失;转染AP-2α基因后,在SW480细胞中可检测到高水平的AP-2αmRNA及蛋白,细胞克隆形成率降低(P<0.05),软琼脂克隆体积小且数量少,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 转染AP-2α基因可以抑制人类结肠癌SW480细胞的体外恶性增生以及侵袭能力.     

中药夏枯草对结肠癌细胞FasL基因表达和侵袭能力的影响

目的:研究夏枯草对人结肠癌SW480细胞FasLmRNA表达及对其侵袭能力的影响,为中药抗肿瘤提供实验依据.方法: 根据MTT法得到夏枯草对SW480细胞的半数有效抑制浓度(IC50),确定药物作用浓度.SW480细胞分别经夏枯草不同浓度(0.5IC50、IC50)作用后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测夏枯草作用前后人结肠癌SW480细胞FasL mRNA的变化;应用Transwell细胞侵袭试验检测夏枯草对SW480细胞侵袭能力的影响.结果: 夏枯草处理后较处理前SW480细胞FasL mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01);而且FasL mRNA表达水平随夏枯草作用浓度增加显著上调,夏枯草不同浓度组比较均有显著性差异(P<0.01);随夏枯草作用浓度升高,SW480细胞侵袭能力明显增强,不同浓度组比较均有显著性差异(P<0.01).结论: 夏枯草在一定时间内均可上调人结肠癌SW480细胞FasL mRNA的表达,而且这种上调作用在一定范围内呈剂量依赖性,可使结肠癌细胞的侵袭能力增强.     

Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响。方法:根据CCK-8实验结果选择CoCl2和MK-2206的浓度,最后分成空白组、MK-2206组、CoCl2组、MK-2206+CoCl2组;Transwell小室实验检测四组细胞的迁移和侵袭能力;RT-PCR法检测各细胞组中Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达水平;Western blot技术检测各细胞组中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、HIF-1α蛋白表达的差异性情况。结果:CoCl2诱导的缺氧环境可以促进SW480细胞的侵袭、迁移(P＜0.05),同时能够促进HIF-1α的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),但是低浓度范围内的CoCl2对SW480细胞增殖活性无明显影响(P＞0.05);MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境中抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭、迁移能力(P＜0.05);MK-2206能在体外的常氧环境下抑制SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达(P＜0.05),缺氧环境无明显作用;同时MK-2206能够在常氧和缺氧环境中显著降低p-Akt、p-mTOR、HIF-1α的蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论:Akt抑制剂MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境下抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭能力,但缺氧环境可能会弱化MK-2206对SW480细胞迁移的抑制作用。     

地锦草乙醇提取物通过circRHOT1/miR-29a-3p轴抑制结直肠癌SW480 细胞的恶性生物学行为

目的：探讨地锦草乙醇提取物（EEEH）对人结直肠癌SW480细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法：体外培养SW480 细胞,实验分为 Con 组、EEEH-L 组、EEEH-M 组、EEEH-H 组、si-NC 组、si-circRHOT1 组、EEEH-H+pcDNA 组、EEEH-H+pcDNA-circRHOT1组,分别以si-NC、si-circRHOT1、pcDNA、pcDNA-circRHOT1转染SW480细胞,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、Transwell实验分别检测转染后各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力,qPCR 法检测转染后各组SW480细胞circRHOT1和miR-29a-3p的表达,WB法检测各组细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测circRHOT1与miR-29a-3p之间的靶向关系。结果：与Con组比较,EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组SW480细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达均明显降低（均P<0.05）,circRHOT1的表达均降低（均P<0.05）而miR-29a-3p的表达均升高（均P<0.05）且呈剂量依赖性;细胞的存活率、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数均减少（均P<0.05）。circRHOT1可靶向负调控miR-29a-3p的表达。敲减circRHOT1可抑制SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力 ,而过表达 circRHOT1 则可减弱 EEEH对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论：EEEH可通过调控circRHOT1/miR-29a-3p轴而抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

TRPV5 TRPV6对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

  目的  观察TRPV5和TRPV6蛋白表达水平对结肠癌SW480细胞内Ca2+水平及细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响。  方法  给予TRPV5、TRPV6通道激动剂1-25（OH）₂D₃及抑制剂CuCl₂作用结肠癌SW480细胞后,采用免疫组织化学法、Western blot及实时荧光定量PCR技术检测TRPV5、TRPV6蛋白及TRPV5、TRPV6 mRNA表达的变化。使用高速离子成像系统观察结肠癌SW480细胞内Ca2+水平的变化;通过MTT法、TUNEL法及划痕修复法观察结肠癌SW480细胞增殖凋亡及迁移的变化。  结果  1-25（OH）₂D₃明显上调结肠癌SW480细胞TRPV5、TRPV6 mRNA及蛋白表达水平,使结肠癌SW480细胞内Ca2+水平增加,促进结肠癌SW480细胞增殖、迁移及抑制其凋亡（P＜0.05）。CuCl₂明显下调结肠癌SW480细胞中TRPV5、TRPV6蛋白及mRNA表达,使结肠癌SW480细胞内Ca2+水平降低（P＜0.05）,抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移及促进细胞的凋亡（P＜0.05）。  结论  结肠癌SW480细胞中TRPV5和TRPV6蛋白表达水平的变化,能通过调控细胞内Ca2+水平影响细胞的增殖、迁移和凋亡等生物学行为。      

IL-17A通过NF-κB通路介导MMP-2/9表达促进结肠癌SW480细胞迁移和侵袭

目的:探讨IL-17A对结肠癌细胞株SW480侵袭、迁移的作用及其机制.方法:体外培养结肠癌SW480细胞,分为实验组(IL-17A50 ng/ml)及对照组(空白组).通过细胞划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting检测细胞MMP-2/9蛋白及PI3k/AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达水平.结果:经50 ng/ml的IL-17A处理后,(1)SW480细胞的迁移距离及穿膜细胞数目均明显增加[(2.49±0.18) vs (1.54±0.21) mm及(262.00±24.60)vs (92.00 ±31.16)个,均P＜0.05];(2) SW480细胞MMP-2/9蛋白水平明显上调[(0.41 ±0.05) vs (0.23 ±0.03)及(0.76±0.09) vs (0.25±0.04),均P＜0.05];(3) SW480细胞AKT磷酸化水平表达增加[(0.72±0.1)vs(0.28±0.04),P＜0.05],P65和P50蛋白表达水平明显升高[(0.78 ±0.10) vs (0.35 ±0.04)和(0.85±0.15) vs (0.44±0.06),均P＜0.05],而c-Rel、ReLB和P52蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论:IL-17A诱导结肠癌SW480细胞迁移和侵袭,其机制可能与激活PI3K/AKT/NF-κB转导通路、调节MMP-2/9蛋白表达有关.     

膜联蛋白A2对人结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响

目的:研究膜联蛋白A2(ANXA2)对人结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响.方法:采用siRNA技术沉默ANXA2在SW620细胞中的表达,实验分为干扰组、对照组和野生组,RT-PCR法检测各组ANXA2mRNA水平,Westem blot法检测各组ANXA2、纤维蛋白溶酶(PL)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,Transwell侵袭实验检测各组SW620细胞穿膜能力.结果:干扰组与对照组、野生组相比,ANXA2 mR-NA水平、ANXA2、PL、MMP-1、VEGF蛋白表达及SW620穿膜细胞数差异均有统计学意义(P＜0.05),而对照组和野生组相比上述各指标均无统计学差异.ANXA2蛋白和PL、MMP-1、VEGF蛋白水平、穿膜细胞数呈正相关(P＜0.05).结论:沉默ANXA2基因后可能通过下调PL、MMP-1及VEGF蛋白的表达,抑制SW620细胞侵袭迁移能力起到抗肿瘤作用.     

环状RNA circUGGT2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circUGGT2在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）中的表达及其对CRC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 收集粤北人民医院胃肠外科2018年9月至2019年3月45例手术切除的CRC组织及相应癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测组织及人正常结肠上皮细胞株NCM460和CRC细胞株HT29、HCT116、SW480、SW620中circUGGT2的表达水平。绘制受试者工作特征（ROC）曲线并计算曲线下面积（AUC）评估circUGGT2的诊断效能。将si-circUGGT2和si-NC分别转染至SW480细胞,采用CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果 与癌旁组织比较,circUGGT2在CRC组织中高表达（P<0.001）,且与患者肿瘤大小、浸润深度和TNM分期有关（均P<0.05）;circUGGT2诊断CRC的AUC为0.702。circUGGT2在4种CRC细胞中的表达水平均高于NCM460细胞（均P<0.001）,尤其在SW480细胞中的表达水平最高。与si-NC组比较,沉默circUGGT2后SW480细胞增殖速率和划痕愈合速率降低（均P<0.05）,克隆形成数目及迁移、侵袭细胞数明显减少（均P<0.05）。结论 circUGGT2在CRC中高表达,沉默circUGGT2可抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭。circUGGT2可能是CRC诊断和治疗的潜在分子靶点。     

鞘氨醇激酶1促进SW480细胞迁移机制探讨

目的 鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SK1)具有调控细胞迁移的重要作用,丝/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)参与其调控过程.本研究旨在探讨SK1对结肠癌细胞株SW480迁移和侵袭的影响及与AKT信号通路的关系.方法 以不同浓度12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇(phorbol 12-myristate-13-acetate,PMA)干预SW480细胞,观察细胞SK1、p-AKT基因和蛋白表达水平变化情况.采用Ttranswell法观察PMA和AKT抑制剂对SW480细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 CCK8实验显示,25、50、100 nmol/L PMA刺激的SW480细胞培养液吸光度(A)值分别为0.780±0.030、0.844±0.057和0.998±0.045,与空白对照组(A值0.631±0.051)比较均明显增加,F=93.48,P＜0.001;PMA可诱导细胞内SK1基因和蛋白表达水平明显增高;Transwell实验结果显示,100 nmol/L PMA增强SW480细胞迁移和侵袭(分别为169.8±10.82和89.6±8.44),较对照组(分别为63.6±8.67和39.6±6.12)明显增加,而AKT抑制剂AKTi1/2可减少PMA诱导的迁移和侵袭SW480细胞数量(分别为91.8±9.36和57.2±8.98);PMA增强SW480细胞SK1表达同时促进AKT蛋白磷酸化水平,而AKTi1/2可拮抗PMA的作用.结论 SK1可促进SW480细胞的迁移和侵袭能力,其机制与上调AKT信号通路有关.     

钙释放激活钙通道调节分子1促进结肠癌细胞系SW480的迁移和侵袭

  目的  探讨钙释放激活钙通道调节分子1（calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1）对SW480迁移和侵袭的影响及其机制。  方法  以ORAI1干扰慢病毒感染SW480细胞,用RT-qPCR和Western blot检测细胞中ORAI1mRNA和蛋白的表达,Transwell小室、黏附实验、血管形成及拟态分别检测细胞侵袭、迁移能力,同、异种细胞间黏附及血管生成能力,激光共聚焦显微镜检测细胞钙内流（store-operated Ca2+ entry,SOCE）,Western blot法检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-2、VEGF和E-cadherin蛋白的表达。  结果  SW480转染ORAI1干扰慢病毒72h后,可见明显的荧光表达;较空病毒组和（或）对照组,干扰组ORAI1的表达降低（P < 0.01）;侵袭和迁移能力减弱（P < 0.01）;同种黏附能力增强（P < 0.05）;异种黏附能力减弱（P < 0.05）;血管生成能力减弱（P < 0.01）;SOCE内流峰值降低（P < 0.05）;p-ERK1/2、MMP-2和VEGF的表达降低（P < 0.01）、E-cadherin表达增加（P < 0.01）。  结论  ORAI1可以促进SW480的迁移和侵袭,其机制可能与SOCE增加有关。      

缺氧及HIF-1α对结直肠癌上皮-间质转化及侵袭增殖的影响

目的 研究不同缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、锌指转录因子Snail及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在结直肠癌SW480细胞中的表达水平,以及它们对细胞的增殖凋亡和侵袭迁移力的影响,探讨三者在结直肠癌的缺氧及上皮间质转化中的作用及可能机制.方法 利用氯化钴(CoCl2)化学诱导细胞缺氧模型,实验分组:常氧组、低氧组和无氧组.采用MTT法检测结直肠癌SW480细胞的生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell小室法)检测细胞的侵袭迁移力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡及周期变化,RT-PCR及Western blot检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA与蛋白的表达.结果 MTT结果显示随CoCl2浓度的增加结直肠癌SW480细胞的增殖活性逐渐增加(P＜0.05);Transwell结果显示随缺氧程度的增加穿过基质膜和聚碳酸酯膜的细胞数逐渐增多,侵袭迁移率增加(P＜0.05);FCM检测结果显示与常氧组比较,无氧组和低氧组G0/G1期SW480细胞明显减少,G2/S期细胞明显增多,细胞凋亡率降低(P＜0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示低氧组、无氧组与常氧组比较,SW480细胞内HIF-1α和Snail mRNA与蛋白的表达增加,E-cadherin mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),且HIF 1 α和Snail的表达呈显著正相关.HIF-1α、Snail与E-cadherin的表达均呈显著负相关(P＜0.05).结论 缺氧及HIF-1α可促进结直肠癌SW480细胞株的体外生长增殖活性,抑制其凋亡,增强其体外侵袭迁移能力,其机制可能是缺氧诱导HIF-1α表达上调直接作用于SW480细胞产生,亦可能是缺氧或HIF-1α表达上调通过促进Snail表达,抑制E-cadherin表达,间接导致EMT的发生发展而产生.     

结肠癌来源外泌体通过HMGB1诱导中性粒细胞活化促进结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨结肠癌细胞来源外泌体在中性粒细胞和结肠癌细胞间的作用及其可能的作用机制.方法 体外培养中性粒细胞和结肠癌细胞SW480,分别用sh?NC和sh?HMGB1转染SW480细胞后分离相应外泌体SW480?exo、sh?NC?exo、sh?HMGB1?exo.各组外泌体分别处理中性粒细胞,同时设置PBS组;提取各组...