P-糖蛋白表达与肺癌顺铂耐药的研究进展

顺铂被广泛应用于肺癌的临床化疗,但耐药性的产生严重影响其疗效。顺铂耐药的机制尚不十分清楚。目前普遍认为P-糖蛋白（P-gp）的表达情况与顺铂耐药性相关。抑制p-gP的表达可克服顺铂耐药性,提高治疗疗效。     

沉默CXCR4的表达逆转肺癌细胞顺铂耐药

目的:探讨沉默CXCR4对肺癌细胞顺铂耐药的影响,并研究其分子作用机制。方法:利用RT-qPCR测定肺癌耐药（A549/DDP）及药物敏感细胞株（A549）中CXCR4 mRNA的表达水平;利用LipofectamineTM 2000将siRNA-CXCR4转染至肺癌耐药细胞株中,RT-qPCR及蛋白质印迹法（Western blot）验证siRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率;利用CCK-8法检测沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的增殖活性;利用流式细胞仪测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的凋亡率;利用MTT法测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性;利用Western blot实验测定沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR实验结果显示,肺癌耐药细胞株A549/DDP中CXCR4 mRNA的表达量显著高于药物敏感细胞株（P＜0.01）;体外转染siRNA-CXCR4可明显下调A549/DDP细胞株中CXCR4的表达（P＜0.001）;CCK-8实验结果显示,沉默CXCR4的表达抑制了A549/DDP细胞的增殖活性（P＜0.01）;流式细胞仪实验结果显示,沉默CXCR4的表达促进了A549/DDP细胞凋亡（P＜0.01）;MTT实验结果显示,沉默CXCR4的表达增加了A549/DDP细胞对顺铂的敏感性（P＜0.01）;Western blot实验结果显示,沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默CXCR4的表达抑制肺癌耐药细胞增殖、促进凋亡,逆转肺癌细胞顺铂耐药,CXCR4正向调控CYP1B1的表达,可能是CXCR4逆转肺癌细胞顺铂耐药的作用机制。     

AKT2通过调控p27表达逆转卵巢癌顺铂耐药

目的：探讨上皮性卵巢癌中蛋白激酶B beta（v-akt murine thymoma viral oncogene homolog2，AKT2）与p27在卵巢癌多细胞球体顺铂耐药中的作用。方法：三维培养获得人卵巢癌多细胞球体（multi—cellular spheroids，MCS）；Western印迹法分析p27及AKT2表达；构建AKT2干扰载体，脂质体法转染A2780细胞后三维培养形成多细胞球体，不同浓度顺铂处理后通过FCM法检测细胞凋亡，MTT法比较细胞对顺铂的敏感性。结果：Western印迹法结果提示，MCS中AKT2及p27的表达高于单层细胞；转染AKT2干扰载体（shRNA—AKT2）的MCS中AKT2、p27表达量较未转染MCS及转染空载体的MCS明显降低。流式细胞仪分解结果表示，不同浓度顺铂作用后，MCS凋亡率明显低于单层细胞；转染shRNA—AKT2的细胞球凋亡率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。MTT法示瞬时转染shRNA—AKT2的细胞球顺铂对细胞抑制率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。结论：干扰AKT2可降低p27的表达，从而逆转卵巢癌对顺铂的化疗耐药。     

Erastin联合顺铂诱导顺铂耐药鼻咽癌细胞发生铁死亡

摘 要：［目的］ 探究铁死亡激活剂Erastin联合顺铂（cisplatin，DDP）能否诱导鼻咽癌顺铂耐药细胞发生铁死亡。［方法］ CCK-8法检测鼻咽癌普通细胞株HNE-1、CEN2Z、HONE-1和顺铂耐药株HNE-1/DDP对DDP以及Erastin的敏感性，CCK-8法测定Erastin、DDP联合处理后HNE-1/DDP细胞活性变化，流式细胞学检测细胞死亡及细胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平，Fe2+和丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒检测细胞Fe2+水平和MDA水平，Western blot检测铁死亡相关蛋白表达。［结果］ HNE-1/DDP对DDP的敏感度远低于正常HNE-1细胞系，Erastin的IC50高达（45.89±6.89） μmol/L。流式细胞学结果显示Erastin或DDP单独处理HNE-1/DDP时，死亡率不超过30%，ROS水平增高不超过15%。Erastin联合DDP能使HNE-1/DDP细胞死亡率提高至89.69%±9.48%，ROS水平提高至18.72%±3.05%。联合处理还提高了细胞内Fe2+和MDA水平，降低了铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（recombinant glutathione peroxidase 4，GPX4）的表达，且铁死亡抑制剂Ferrostatin-1能逆转Erastin联合DDP所诱导的细胞死亡，抑制ROS、Fe2+以及MDA水平的增高。［结论］ Erastin联合DDP能通过降低GPX4表达诱导顺铂耐药株HNE-1/DDP铁死亡。     

长链非编码RNA FTH1P3靶向miR-218降低人肺癌顺铂耐药细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:研究长链非编码RNA铁蛋白重链1假基因3(ferritin heavy chain 1 pseudogene 3,FTH1P3)对人肺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株(A549/DDP)DDP化疗敏感性的影响,并探究其潜在的分子机制.方法:采用荧光定量PCR检测FTH1P3与miR-218在A549...     

冰片逆转小细胞肺癌顺铂耐药的研究

摘 要：［目的］ 评价冰片对小细胞肺癌（SCLC）顺铂（DDP）耐药的逆转作用及其对P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）和小凹蛋白-1 (Caveolin-1)表达的影响。［方法］ 利用前期建立的SCLC DDP耐药细胞株LTEP-P/DDP,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测冰片和/或DDP的抗肿瘤活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western blotting检测P-gp和Caveolin-1的表达。［结果］冰片联合DDP对LTEP-P/DDP-0.75 细胞的增殖抑制作用较单用DDP显著性增加（P<0.05）,耐药逆转指数为2.246。LTEP-P/DDP-0.75细胞经冰片联合DDP处理细胞后,较单用DDP处理组的G0/G1期和S期降低,G2/M期升高,差异有显著性（P<0.05）。冰片和DDP联合处理后,LTEP-P/DDP-0.75细胞凋亡显著性上升（P<0.05）,LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1相比LTEP-P细胞显著性上升（P<0.05）,冰片或DDP单独用药组Caveolin-1显著性变化,冰片联合联合DDP组相比对照组能显著性降低LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1表达（P<0.05）,而对P-gp无显著性抑制作用。［结论］ 冰片能在一定程度上逆转LTEP-P/DDP-0.75对DDP的耐药,其作用可能与抑制Caveolin-1表达有关。     

宫颈癌顺铂耐药研究进展

顺铂（DDP）作为第一个被发现的金属抗癌药物,是目前最有潜力和应用最广泛的抗肿瘤药物。顺铂在宫颈癌的治疗中尤为重要,目前已被推荐为同步放化疗的首选药物。但随着广泛的使用,顺铂的耐药性逐渐显露出来,并成为限制临床疗效和部分患者肿瘤治疗进展的主要原因之一。顺铂的耐药机制复杂,发生环节较多,但具体耐药机制尚不明确,目前按照顺铂耐药发生的环节可分为:①顺铂在血液循环过程中产生耐药;②顺铂通过细胞膜的流入或流出产生耐药;③顺铂在胞质中产生耐药;④顺铂与DNA结合后产生耐药。本文综述了宫颈癌顺铂耐药可能发生的四个环节及克服耐药常用的手段,为提高顺铂对宫颈癌的疗效提供依据。     

Aurora A调控活性氧对卵巢癌顺铂耐药的影响

背景与目的：极光激酶A（Aurora A kinase,Aurora A）属于丝/苏氨酸蛋白激酶家族中的一员,可促进卵巢癌的化疗抵抗。活性氧（reactive oxygen species,ROS）由机体正常代谢产生,参与细胞信号转导过程。肿瘤细胞由于代谢旺盛及细胞内氧化还原体系的失衡,ROS水平高于正常细胞。并且耐药细胞株中ROS水平降低,提示ROS在肿瘤耐药中发挥作用。该研究旨在探讨ROS在Aurora A介导顺铂化疗耐药中的作用。方法：采用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（2’, 7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA）法检测人卵巢癌细胞株A2780和顺铂耐药株A2780/CDDP中ROS的水平,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测顺铂的半数抑制浓度（50% inhibitory concentration,IC₅₀）;构建Aurora A过表达和沉默细胞株,检测细胞内ROS水平;加入ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）,检测顺铂的IC₅₀;采用蛋白［质］印迹法（Western blot）检测相关信号通路,探讨可能的分子机制。结果：顺铂耐药株中ROS水平低于对照细胞株。加入NAC降低细胞内ROS可增强细胞对顺铂的耐药性。Aurora A过表达,细胞内ROS水平下降,可增强细胞对顺铂的耐药;而Aurora A沉默后,细胞内ROS升高,则可提高细胞对顺铂的敏感性。Aurora A过表达,促进AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）的磷酸化及糖酵解。结论：Aurora A可能通过促进AMPK磷酸化及糖酵解过程,降低细胞内ROS水平,从而增强卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。     

非小细胞肺癌顺铂耐药相关基因生物信息学研究

目的：通过分析非小细胞肺癌顺铂敏感株及耐药株的基因芯片表达数据,筛选差异基因及关键通路,构建蛋白相互作用网络,探讨关键集群功能。方法:从GEO数据库获得基因芯片表达数据,利用GEO2R工具筛选差异基因,通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络,经DAVID富集得到相关特征基因与信号通路信息。结果：通过芯片分析共获得481个差异表达基因,相比于敏感细胞株,顺铂获得性耐药细胞株中有418个上调基因和63个下调基因。差异基因功能主要富集在piRNA代谢、DNA甲基化修饰、细胞有丝分裂及细胞周期进程等信号通路。蛋白复合物预测得到主要功能集群6个,分别与细胞趋化性、细胞角化性、piRNA代谢过程、细胞因子受体相互作用、细胞因子分泌调节及染色质沉默相关生物进程相关。结论:本研究利用生物信息学方法,发现顺铂耐药细胞株特征基因及信号通路,其中SAA1、KRT5、TDRD9、BCL2A1、CSF1R和HIST1H1A等显著上调基因及其功能集团可能是非小细胞肺癌顺铂耐药的潜在分子机制,为临床精准治疗提供新的理论依据。     

DNA损伤修复与肺癌顺铂耐药机制的研究进展

肺癌是目前世界上致死率最高的恶性肿瘤,化疗是治疗的主要手段之一,肺癌的化疗是以铂类为基础的联合化疗,其中,顺铂是有效并广泛应用的一线药物,但是由于耐药问题的存在使其疗效不尽如人意。顺铂是一种细胞周期非特异性细胞毒药物,其主要作用靶点是DNA,因此DNA损伤修复功能的异常是顺铂耐药的主要机制之一。本文主要综述了与肺癌顺铂耐药相关的DNA损伤修复异常,包括核苷酸切除修复异常、碱基错配修复异常、DNA双链断裂损伤修复异常及跨损伤修复。     

不同方式诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株的比较

目的 研究不同诱导方式建立的卵巢癌顺铂耐药细胞株的耐药机理。方法 采用大剂量冲击法和浓度梯度递增法建立卵巢癌顺铂耐药细胞株Skov3/CDDP-P和Skov3/CDDP-50。结果 Skov3/CDDP-P和Skov3/CDDP-50的耐药指数分别为3．7和48．6,伴有形态改变、生长减慢、细胞周期改变等。耐药细胞株的细胞内药物浓度降低,与多药耐药相关基因（MDR1）、多药耐药相关蛋白（MRP）和肺耐药蛋白（LRP）的表达增强有关。谷胱甘肽S转移酶（GST－π）的表达无明显变化,拓朴异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）活性轻度下降。不同诱导方式存在差异。结论 顺铂耐药涉及多个相关基因的表达,持续诱导方式容易产生耐药。     

奈达铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞凋亡的机制

目的探讨研究奈达铂（NDP）体外对人卵巢癌顺铂原发耐药细胞株SKOV3和继发耐药株SKOV3/DDP的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测体外不同时间不同浓度的NDP对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FCM)测定给药前后细胞凋亡率及周期分布变化;半定量PCR分析凋亡基因Bcl-2,Bax,caspase-3,caspase-9及反应肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的表达变化。结果NDP能明显抑制SKOV3及SKOV3/DDP生长,呈时间-剂量依赖性;流式结果显示随时间、浓度增加,SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡明显增加,S期细胞的比例增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax,caspase-3,caspase-9表达增加。结论NDP可抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡,细胞S期阻滞,下调Bcl-2及上调Bax,caspase-3,caspase-9的表达有关;同时可下调MMP-2的表达,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力。     

卵巢癌顺铂耐药分子生物学研究进展

 化疗耐药是有效治疗卵巢癌的重大障碍。卵巢癌耐药是多因素、多因子共同作用的结果,耐药相关基因的深入研究为从根本上逆转肿瘤耐药提供了新的思路。     

非小细胞肺癌组织ERCC1表达与顺铂化疗耐药关系的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中ERCC1表达水平与顺铂(DDP)化疗耐药的相关性。方法:应用免疫组化SP法检测82例NSCLC组织中ERCC1的表达并分析其与DDP化疗耐药的关系。结果:ERCC1表达水平与NSCLC患者年龄、性别、临床分期及组织学类型无关,P>0.05。ERCC1阴性表达组的化疗有效率为53.5%(23/43),而ERCC1阳性表达组的化疗有效率为17.9%(7/39),两组比较差异有统计学意义,χ2=4.76,P=0.04。结论:ERCC1在NSCLC组织中的表达水平与DDP化疗耐药有关。     

铂类耐药相关基因在卵巢癌顺铂耐药形成过程中表达量的动态变化

目的了解卵巢癌患者在铂类治疗过程中产生获得性耐药相关基因表达动态变化的情况,为临床预后的预测及个体化治疗奠定理论基础。方法采用Benjamini—Hochberg（BH）法对源于TCGA数据库（The Cancer Genome Atlas）的256例敏感和耐药患者的卵巢癌全基因表达谱数据进行差异表达基因筛选。采用DAVID软件中的KEGG模块对筛选出的差异基因进行通路富集,筛选出P〈0．05的通路,对筛选出的通路所包含的基因采用成组t检验找出差异显著的基因（P〈0．05）。对筛选出的基因采用COREMINE工具进行文本挖掘,找出与多药耐药及肿瘤耐药存在线性相关的基因,将其与患者预后进行分析,确定存在差异显著的基因。采用实时荧光定量PCR法检测所筛选出的基因在裸鼠诱导耐药模型不同给药阶段的表达变化情况。结果BH法共筛选出306个差异表达基因,其中上调基因110个,下调基因196个。DAVID软件的KEGG模块分别筛选出5条上调及4条下调通路,成组t检验筛选出有差异的基因共37个,其中上调基因18个,下调基因19个。COREMINE工具检索出与多药耐药及肿瘤耐药存在线性相关的上调基因为ITPA、IMPDH2、RPS7、PDE5A和PDE4D,下调基因为GNAS、CVFR、BUB3、PRKDC、RBL2、SMC1A、CALR、CCNE2及CHEK1。生存分析结果提示CALR及PRKDC基因的表达与患者生存时间有关,CALR和PRKDC基因高表达组的患者生存时间长于低表达组。qRT-PCR检测发现,CALR和PRKDC基因随顺铂注射次数增多,在SKOV3-GFP及SKOV3／DDPii肿瘤组织中的表达量逐渐降低。结论CALR与PRKDC基因可能与卵巢癌铂类耐药及患者的预后密切相关,且随着耐药的产生,CALR和PRKDC基因的表达量逐渐降低。     

重组凋亡素诱导人卵巢癌细胞顺铂耐药株凋亡

[目的]探讨凋亡素基因（VP3）在卵巢癌细胞株CoC1及CoC1细胞耐药亚株CoC1/DDP中的诱导凋亡情况。[方法]构建重组凋亡素真核表达载体pcDNA3.1-VP3。在体外将pcDNA3.1-VP3转染入卵巢癌细胞株CoC1及CoC1细胞耐药亚株CoC1/DDP中,RT-PCR检测凋亡素在细胞中的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡。[结果]RT-PCR证实VP3基因在CoC1及CoC1/DDP中存在并在转录水平表达。转染pcDNA3.1-VP3细胞凋亡率明显高于转染空质粒组（P〈0.01）,转染pcDNA3.1-VP3细胞凋亡率CoC1/DDP细胞明显高于CoC1细胞（P〈0.01）。[结论]凋亡素诱导人卵巢癌细胞CoC1和CoC1顺铂耐药亚株CoC1/DDP凋亡,且更易诱导CoC1顺铂耐药亚株CoC1/DDP细胞的凋亡。     

MiR-451靶向调控SIRT1通路对胃癌细胞增殖的作用机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-451靶向调控SIRT1通路对胃癌细胞增殖的作用机制研究。［方法］ 通过转染胃癌HepG2细胞实验进行分组,胃癌组、模拟物组和抑制物组,采用RT-PCR法检测HepG2细胞中miR-451、SIRT1 mRNA表达,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡,Western blot检测细胞中SIRT1蛋白水平,细胞克隆测定细胞存活率,裸鼠皮下成瘤实验检测小鼠肿瘤体积。［结果］模拟物组miR-451表达量高于其他两组,与抑制物组相比,胃癌组miR-451表达水平较高（t=8.651,P＜0.001）。胃癌组SIRT1表达高于模拟物组,与抑制物组相比,胃癌组和模拟物组SIRT1表达水平明显降低（t=6.362,P＜0.001）,三组比较差异有显著性（F=3.565,P＜0.001）。与胃癌组相比,模拟物组HepG2细胞凋亡明显增加,胃癌组和抑制物组细胞凋亡情况均弱于模拟物组,三组比较差异有显著性（?字2=9.797,P=0.007）。胃癌组和抑制物组HepG2细胞单克隆形成率有上升趋势,模拟物组明显下降,三组比较组间差异有显著性（F=6.031,P＜0.001）。模拟物组小鼠肿瘤体积较抑制物组明显变小,与胃癌组相比,抑制物组肿瘤体积增加,三组比较差异有显著性（F=9.967,P＜0.001）。［结论］ miR-451过表达可以抑制SIRT1通路相关蛋白活性,促进胃癌HepG2细胞凋亡,抑制其增殖和发展。     

MiR-124靶向调控PKM2基因表达抑制乳腺癌细胞的增殖和转移

摘 要：［目的］ 探讨miR-124对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和转移的影响。［方法］ 运用实时荧光定量PCR法、免疫印迹实验检测25例乳腺癌乳腺癌组织及对应癌旁组织中的miR-124、丙酮酸激酶同工酶（PKM2）相对表达量。将pre-miR-124、抗miR-124转染至乳腺癌MDA-MB231细胞中,同时设置阴性对照组,检测三组细胞中miR-124、PKM2基因及蛋白表达量。运用CCK-8法及克隆形成实验检测转染后的MDA-MB231细胞增殖和转移。［结果］ 乳腺癌组织中miR-124（0.92±0.24）的相对表达量显著性少于癌旁组织（1.55±0.28）,PKM2的相对表达量更高（0.69±0.18）。pre-miR-124转染MDA-MB231细胞呈现miR-124过表达（0.37±0.08）,且其可以反向调控PKM2基因（0.52±0.11）及蛋白表达量（0.19±0.04）,抑制细胞的增殖与转移能力。抗miR-124转染MDA-MB231细胞呈现miR-124抑制表达（0.06±0.03）,其PKM2基因（2.09±0.08）及蛋白表达量（0.47±0.10）显著性上升,促进细胞增殖与转移（P＜0.05）. ［结论］ miR-124可以通过下调PKM2基因的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和转移。     

顺铂诱导耐药蛋白BCRP与EHD2表达上调并在细胞表面的富集

  目的  建立顺铂耐受的人肺腺癌A549/DDP细胞株,研究EHD2（EH domain-containing protein-2）与肿瘤细胞药物耐受的潜在关系。  方法  以DDP为诱导剂,采用低浓度逐步增量诱导方法建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,采用MTT法测定药物敏感性,免疫印迹法检测耐药蛋白BCRP及EHD2蛋白的表达水平,免疫荧光方法检测BCRP及EHD2的细胞定位。  结果  成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为7.6;免疫印迹结果显示BCRP在耐药细胞系A549/DDP中的表达明显高于其亲本细胞A549,EHD2蛋白在耐药细胞系的表达略有增高;免疫荧光成像显示EHD2蛋白在细胞膜表面富集,并与BCRP耐药蛋白共定位。  结论  BCRP和EHD2在获得性耐药细胞中富集,并于细胞膜表面共定位,提示内吞蛋白EHD2可能调控耐药蛋白BCRP的膜稳定性,从而介导肿瘤细胞耐药。