乳腺癌上皮-间质转化后引发BCRP介导的多药耐药的研究

背景与目的:研究发现肿瘤的侵袭浸润和转移增强是上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)所致,而EMT的发生也与肿瘤细胞多药耐药现象的发生密切相关.本研究通过分析乳腺癌组织和细胞中EMT与乳腺癌耐药蛋白表达的相关性,探讨EMT对乳腺癌中乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein, BCRP)介导多药耐药的影响.方法:免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达:构建Snail真核表达载体pCDNA3.1-Snail,转染至MCF-7细胞,采用免疫荧光、Western blot、Real-time PCR检测转录抑制因子snail、上皮标志物E-钙粘素、间质标志物vimentin以及多药耐药蛋白BCRP的表达;MTT法检测细胞对米托蒽醌的耐药指数.结果:免疫组化结果显示乳腺癌组织中Snail、BCRP的表达呈显著相关:免疫荧光、Western blot、Real-time PCR显示与亲本MCF-7细胞相比,转染Snail后的MCF-7细胞中E-cadherin表达水平明显降低,而snail、vimentin和BCRP的表达水平明显增加;MTT结果显示细胞对米托蒽醌的耐药指数增加至9.93.结论:转染snail真核表达载体pCDNA3.1-snail可使乳腺癌MCF-7细胞发生EMT, 并导致细胞中BCRP表达增加,引发BCRP介导的多药耐药.     

乳腺癌的上皮间质转化与多药耐药

乳腺癌细胞的上皮问质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）由转化生长因子β家族（TGF—β）等多种细胞因子和信号通路参与,该现象的发生能够促进肿瘤细胞侵袭、转移和干细胞特性获得,诱导乳腺癌细胞对化疗、内分泌治疗和靶向药物治疗产生获得性耐药。其中,多药耐药（muhidrug resistance,MDR）现象的产生是导致乳腺癌治疗失败的重要原因,而PI3K／Akt信号通路是EMT与MDR的共同调控途径。因此,针对乳腺癌细胞EMT的相关研究可以帮助人们在肿瘤抗耐药治疗中找到新的策略。     

上皮间质转化与肿瘤耐药

肿瘤药物治疗过程中常常要面临肿瘤细胞耐药的问题。上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)在肿瘤耐药方面的作用为解决该问题提供了可能。该文围绕EMT基本特征、EMT与肿瘤耐药的关系、EMT在肿瘤耐药过程中机制的研究进展进行详细综述。     

上皮-间质转化与肺癌侵袭转移及耐药性的研究进展

侵袭转移和耐药是肺癌患者治疗失败的主要原因。最近研究表明,上皮-间质转化（EMT）在肺癌远处转移及化疗耐药的发生中扮演着非常重要的角色。因此,针对EMT的研究有助于肿瘤的预防和治疗。本文结合国内外最新报道,对EMT与肺癌侵袭转移及耐药性的研究进展作一综述。     

上皮间质转化在卵巢癌进展及化疗耐药中的研究进展

卵巢癌是致死性最高的妇科恶性肿瘤,居全球女性因癌症死亡原因第8位,其预后差的主要原因是就诊时已处于疾病的晚期,且迅速对化疗产生耐药。越来越多的证据表明,上皮间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）在卵巢癌的进展中发挥重要作用,并且促进化疗耐药。本文将重点探讨EMT在卵巢癌进展过程中各环节所发挥的作用,同时对EMT介导的不同类型的化疗耐药机制进行探讨。     

肺癌多药耐药生物逆转策略

肺癌的耐药性一直是影响其化疗效果的一大难题。耐药性的产生机制非常复杂，随着现代分子生物学技术的发展，不断有新的观点提出，并据此在逆转耐药方面提出许多新的干预方法，如生物逆转策略。这是解决肺癌耐药值得探究并有应用前景的策略。     

EMT经p38-MAPK调节乳腺癌MCF-7细胞P-gp介导的多药耐药

摘 要　目的：探讨乳腺癌细胞中上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与P-糖蛋白（P-glucoprotein, P-gp）介导的多药耐药（multidrug resistance, MDR）的关系及其可能的机制。方法：将携Snail基因的真核表达载体pcDNA-Snail转染人乳腺癌细胞MCF-7,用多柔比星（doxorubicin, DOX）诱导各组细胞耐药。免疫细胞荧光检测上皮标志物E-钙黏素（E-cadherin）、间质标志物波形蛋白（vimentin）以及P-gp的表达,MTT检测耐药细胞的增殖,RT-PCR检测Snail、MDR1、p38-MAPK mRNA的表达。结果：细胞免疫荧光显示,转染pcDNA-Snail载体后,MCF-7细胞发生EMT,E-cadherin表达显著降低,vimentin表达显著升高;P-gp在发生EMT的MCF-7细胞中表达显著升高。经DOX诱导,MCF-7/Snail细胞的耐药能力较MCF-7/DOX细胞显著增强（P<0.05）。RT-PCR显示,MCF-7细胞发生EMT后,p38-MAPK表达显著升高（P<0.05）,MDR1表达较亲本细胞明显升高（P<0.01）。结论：MCF-7细胞发生EMT后,可能通过p38-MAPK引发P-gp介导的MDR。     

肺癌多药耐药生物逆转策略

肺癌的耐药性一直是影响其化疗效果的一大难题。耐药性的产生机制非常复杂，随着现代分子生物学技术的发展，不断有新的观点提出，并据此在逆转耐药方面提出许多新的干预方法，如生物逆转策略。这是解决肺癌耐药值得探究并有应用前景的策略。     

Keap1/Nrf2/ARE信号通路介导非小细胞肺癌耐药机制的研究进展

近十年来,非小细胞肺癌基础及其转化性研究,从癌细胞驱动基因筛选及其靶向干预方面的研究,到肿瘤细胞微环境研究,正逐渐改变传统理念,也成为非小细胞肺癌研究最活跃的领域。组织缺氧与抗氧化系统是影响肿瘤微环境、改变肿瘤细胞药物敏感性的重要机制之一。Keap1/Nrf2/ARE信号转导通路是机体最重要的抗氧化应激系统之一。近年来,越来越多研究表明,Keap1/Nrf2/ARE信号通路与肿瘤细胞耐药有着密切的关系,调控该通路关键激酶磷酸化过程有望成为新的耐药干预靶点。     

ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

尼古丁诱导肺癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移

背景与目的我们的前期研究发现尼古丁能诱导肺癌细胞上皮间质转化。本研究的目的是探讨尼古丁诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）与肺癌侵袭之间的关系。方法应用不同浓度尼古丁处理肺腺癌A549细胞,应用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT相关分子标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA和蛋白表达水平,应用免疫荧光技术检测β-链蛋白（β-catenin）蛋白表达位置的变化,应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测尼古丁对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果尼古丁明显下调肺癌细胞株A549 E-cadherin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）,并具有浓度和时间依赖性;尼古丁明显上调肺癌细胞株A549 Vimentin mRNA和蛋白水平表达（P<0.01, P<0.01）;尼古丁诱导肺癌细胞株A549细胞β-catenin蛋白发生核转移;划痕实验和侵袭实验观察到尼古丁处理的肺癌细胞株A549细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P<0.01, P<0.01）。结论尼古丁能够诱导肺癌细胞发生EMT,并且促进肺癌细胞株A549细胞的体外侵袭潜能。     

三阴性乳腺癌细胞中上皮间质转化与EGFR单抗治疗效果的相关性

目的 研究三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer, TNBC）细胞株的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）水平与西妥昔单抗药敏性的相关性。方法 （1）运用免疫印记法比较TNBC细胞株中EGFR、波形蛋白（vimentin）以及E钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平。（2）通过CCK8试剂比较不同细胞株对西妥昔单抗的敏感度。（3）采用Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂恩替诺特（ENT）逆转MDA-MB231的EMT。（4）观察ENT联合西妥昔单抗对MDA-MB231细胞活性的抑制作用。结果 （1）MDA-MB468细胞中E-cadherin的表达水平明显高于MDA-MB436及MDAMB231细胞;vimentin的表达水平明显低于MDA-MB436及MDA-MB231。（2）MDA-MB468对西妥昔单抗的敏感度明显高于MDA-MB231及MDA-MB436。（3）MDA-MB231的EMT能被Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂ENT逆转。（4）ENT单药显著抑制MDA-MB231细胞的活性,ENT联合西妥昔单抗较ENT单药对细胞生长的抑制作用更加显著。结论 TNBC细胞中,EMT与EGFR单克隆抗体西妥昔单抗的疗效可能相关。联合Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂ENT以及西妥昔单抗治疗可能是治疗TNBC的新方法。     

上皮间质转化在血管生成拟态中的研究进展

As a new model of the microcirculation, tumor cell vasculogenic mimicry (VM) is an unfavorableprognostic factor for tumor patients. Recent studies have showed that epithelial-mesenchymal transition(EMT) plays an important role in VM formation. In this review, we present evidences for the participation ofnuclear factors which regulate EMT, stem cell characteristics of EMT cells and microenvironment changesinduced by EMT in VM. In addition, the relationship among VM, EMT, CSCs and microenvironment is alsodiscussed briefl y. With the signifi cant part that EMT plays in the formation of VM, a further development ofdrug for anti-VM formation and a deep-going study of the molecular mechanism of EMT are expected to lay asolid theoretical foundation for the strategies that treatment of tumor distance metastasis by targeting EMT forinhibiting VM formation.     

非小细胞肺癌上皮-间质转化与EGFR突变以及临床病理特征之间的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)上皮-间质转化(EMT)与表皮生长因子受体(EGFR)突变和临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化法检测NSCLC患者癌组织中E-钙黏素和波蛋白的表达情况。采用卡方检验和Logistic回归分析,探讨临床病理特征和EGFR基因型NSCLC中EMT的影响。结果62例NSCLC标本中,上皮表型35.48%(22/62)。EGFR突变NSCLC中,上皮表型显著高于野生型(77.78%vs18.18%;P<0.0001);女性显著高于男性(54.55%vs25%;P=0.02);腺癌高于其他病理类型(39.47%vs29.17%;P=0.4087);不吸烟者稍高于吸烟者(42.42%vs27.59%;P=0.2231);年龄<60岁和年龄≥60岁组差异无统计学意义(43.33%vs28.12%;P=0.211),早期肺癌与晚期肺癌组差异无统计学意义(38.24%vs32.12%;P=0.6178)。结论EGFR突变型、女性、非吸烟者、腺癌倾向于上皮表型,与EGFR酪氨酸激酶抑制剂疗效分布人群的临床特征相一致。     

多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌表达的研究

目的：研究多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌的表达情况及其两者关系。方法：应用单克隆抗体ＱＣＲＬ－１行ＬＳＡＢ免疫组化法研究６１例非小细胞肺癌组织中多药耐药相关蛋白表达水平。结果：肺癌组织中多药耐药相关蛋白表达的总阳性率为６８．９２％；癌旁正常肺组织呈阴性或弱阳性表达；高和中分化肺癌多药耐药相关蛋白表达的阳性率高于低分化癌（Ｐ＜０．００５）；Ⅰ－Ⅱ期肺癌多药耐药相关蛋白表达的阳性率高于Ⅲ－Ⅳ期者（Ｐ＜０．０１）。结论：表明多药耐药相关蛋白是非小细胞肺癌多药耐药的重要参与因素。     

乳腺癌干细胞上皮-间质转化标志物表达变化及意义

目的 探讨乳腺癌干细胞上皮．间质转化标志物表达变化及其临床意义。方法采用无血清悬浮培养法,从MCF-7细胞培养乳腺癌微球体细胞,应用流式细胞仪检测微球体细胞中CD44和CD24的表达,采用Westernblot方法检测微球体细胞中E-钙黏素、N-钙黏素、纤维连接蛋白、波形蛋白的表达水平,体外穿膜实验检测肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。结果乳腺微球体富集了CD44＋CD24-的乳腺癌干细胞,并能在含血清培养基中增殖分化。该微球体细胞的上皮标志物E-钙黏素表达水平下调,而间质标志物N-钙黏素、纤维连接蛋白、波形蛋白的表达水平上调,同时乳腺癌干细胞的迁移、侵袭能力显著增强。结论乳腺癌干细胞具有上皮-间质转化的特征,具有显著增强的迁移、侵袭能力。     

Nrf2 Overexpression Predicts Prognosis and 5-FU Resistance in Gastric Cancer

Objective: NF-E2-related factor 2 (Nrf2) is activated in several human malignancies. However, the role ofNrf2 in gastric cancer (GC) remains incompletely understood. In this study, we therefore analyzed associationsof Nrf2 expression status with clinical features and chemotherapeutic resistance in GC. Materials and Methods:A total of 186 samples from GC patients who underwent gastrectomy were used for prognostic assessment.A further 142 samples from GC cases who received first-line combination chemotherapy were applied forinvestigation of chemoresistance. The Nrf2 expression was evaluated by immunohistochemistry in GC samples,and its relationship with clinicopathological parameters and chemotherapy sensitivity was analyzed. The effectof Nrf2 gene silencing on chemotherapy resistance was also examined by cell viability assay in vivo. Results: Ofthe 186 patients with GC, 104/186 (55.9%) showed high expression for Nrf2. The overexpression of Nrf2 was anindependent predictor of overall survival [OS, hazard ratio (HR) 3.9; P=0.011] and disease-free survival (DFS,HR 4.3; P=0.002). The gene silencing of Nrf2 reduced resistance to cell death induced by 5-FU in GC cell lines.Conclusion: Our data show that Nrf2 is an independent prognostic factor in GC. Furthermore, Nrf2 confersresistance to chemotherapeutic drug 5-FU in GC cells. Taken together, Nrf2 is a potential prognostic markerand predictive for 5-FU resistance in GC.