康莱特对HL-60细胞诱导分化的研究

目的　探讨康莱特对HL 60细胞诱导分化的影响。方法　应用不同浓度康莱特作用对数生长期HL 60细胞 ,采用细胞计数法测HL 60细胞生长曲线 ,显微镜观察细胞形态 ,应用台盼蓝吞噬和硝基蓝四氮唑 (NBT )还原实验检测细胞分化程度。结果　 1mg/ml康莱特作用HL 60细胞培养第 6天 ,细胞计数 ( 10 .3± 1.1)× 10 5个 /ml ,较未加药组细胞计数 ( 2 0 .5± 3 .5 )× 10 5个/ml低 ,P <0 .0 5。 1mg/ml康莱特作用HL 60细胞 96h ,HL 60细胞台盼蓝吞噬率 ( 3 2 .0± 8.3 ) %较未加药组 ( 4 .0± 2 .7) %高 ,P<0 .0 5。HL 60细胞NBT阳性率 ( 5 0 .3± 5 .3 ) %较未加药组 ( 15 .0± 3 .7) %高 ,P <0 .0 5。结论　康莱特对HL 60细胞生长有抑制作用。康莱特可诱导HL 60细胞形态向成熟粒细胞转变 ,增强HL 60细胞对台盼蓝的吞噬功能及对NBT的还原能力。康莱特具有诱导HL 60细胞分化的作用     

巴西菇多糖诱导HL-60细胞分化的研究

目的研究巴西菇多糖诱导白血病细胞系HL-60细胞的分化作用并探讨其机制.方法采用ABC免疫染色法、硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验、流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测巴西菇多糖对HL-60细胞的诱导分化作用及其对细胞周期和癌基因表达的影响.结果巴西菇多糖0.6125g/L作用HL-60细胞4天后,CD33下降至1/3、CD11b升高至38.29%、CD15升高至56.02%,与对照组比较均有显著性差异(P＜0.001).药物作用后HL-60细胞NBT还原能力逐步增强,G2/M+S期细胞比例减少.结论巴西菇多糖可诱导HL-60细胞向成熟粒系分化:巴西菇多糖对HL-60细胞的诱导分化作用与其下调c-myc基同表达、阻滞细胞在G1期有关.     

HL-60细胞向单核系和粒系分化的比较蛋白质组学研究

背景与目的：已有研究发现NSC67657和全反式维甲酸可以诱导HL-60细胞分别向单核系和粒系分化。本研究比较分析不同诱导剂诱导HL-60细胞向单核系和粒系分化前后以及分化中的蛋白表达差异,发现与单核系和粒系分化有关的关键蛋白。方法：分别采用粒系分化诱导剂全反式维甲酸和单核系分化诱导剂NSC67657诱导HL-60细胞分化,MTT法检测细胞增殖情况：流式细胞技术分析细胞表面特异性分化抗原（CD11b／CD14）的表达,根据CD14表达情况计算细胞分化百分率;细胞化学染色对HL-60的两系分化进行验证。改良双向电泳分离技术对HL-60细胞全蛋白进行分离,PDQuest软件分析寻找差异蛋白点,基质辅助激光解吸-飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）对蛋白点进行分析,RT-PCR和免疫印迹对差异蛋白ICAT进行验证。结果：全反式维甲酸和NSC67657均抑制HL-60细胞增殖,并分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化。在2μmol／LATRA和10μmol／LNSC67657作用5d后．CD11b和CD14的表达均在90％以上,细胞化学染色支持细胞两系分化的结论。蛋白质组学分析表明,HL-60细胞分别向粒系和单核系分化后,有25个差异蛋白点的变化趋势在两系分化中是相同的,有10个差异蛋白点在单核系分化后表达有差异。有15个差异蛋白点在粒系分化后表达有差异：ICAT是其中差异蛋白之一,通过基因和蛋白水平验证．发现ICAT在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化过程中表达升高,而在粒系和非处理细胞中表达无显著性差异。结论：双向电泳／MOLDI-TOFMS对HL-60细胞分化前后细胞全蛋白进行分析．发现了一批与两系分化有关的蛋白分子．为关键蛋白的筛选及其功能研究提供了重要的启示。     

bcl-2反义寡核苷酸抑制HL-60细胞增殖的研究

目的研究bcl-2反义寡核苷酸在抑制HL-60细胞增殖和下调细胞内bcl-2蛋白表达水平的作用。方法将人工合成的bcl-2反义寡核苷酸片段与HL－60细胞共培养,在作用的第0天、1天、3天、5天通过细胞计数和锥虫蓝染色法检测细胞的生长、存活情况,同时通过免疫组化法（APAAP法）检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化情况。结果bcl-2正、反义寡核苷酸均可抑制HL-60细胞增殖,但bcl-2反义寡核苷酸的作用更为显著。bcl-2反义寡核苷酸可下调HL－60细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,而bcl-2正义寡核苷酸及对照无此作用。结论bcl-2反义寡核苷酸可以有效地抑制HL-60细胞的增殖和降低细胞内bcl-2的蛋白表达水平。     

曲古抑菌素A对HL-60细胞分化的影响

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病细胞HL-60分化的作用.方法 采用溴化四甲基偶氮唑蓝法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期;通过检测细胞分化特异性抗原CD11b的表达研究细胞分化作用;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测c-myc基因mRNA的表达.结果 经TSA作用后,细胞增殖受抑制,细胞周期阻滞在G0和G1期,P<0.01;TSA作用48 h后,细胞分化率达15.24%;c-myc表达随TSA作用时间延长而降低.结论 TSA对HL-60细胞具有抑制增殖和诱导分化作用.     

桂皮酸联合维生素C对HL-60的细胞诱导分化

目的　探讨桂皮酸和维生素C(V C)对人早幼粒白血病细胞 (HL 6 0 )的分化作用。方法　用2 .5mmol L桂皮酸和 0 .5mmol LV C单独和联合处理HL 6 0细胞后 ,观察细胞形态改变 ,测定细胞增殖速度、硝基四氮唑蓝 (NBT)还原反应、过氧化酶染色反应。结果　两者都能使HL 6 0细胞形态向成熟粒细胞转变 ,对细胞增殖有明显抑制作用 ,前者强后者弱 ;桂皮酸使细胞的NBT反应显著增强 (P <0 .0 1) ,过氧化酶染色为弱阳性或阴性 ;V C使NBT反应和染色反应改变不明显 (P <0 .0 5 ) ,两者联合作用 ,分化作用增强。结论　桂皮酸有很强诱导HL 6 0细胞分化的作用 ,v c的分化作用不明显 ,但有增强桂皮酸分化的作用。     

miR-146a对氢醌抑制HL-60细胞分化的调控作用

目的： 观察氢醌对HL-60细胞向单核细胞分化的影响,并初步探讨miR-146a的调控作用。方法：设miR-146a-5p 抑制剂和阴性对照处理的HL-60细胞,分别以不同浓度(0、0.5、1.0、2.5和5.0 μmol/L)的氢醌处理3 h后,接种于含豆蔻酰佛波醇(PMA)的培养基中,培养72 h诱导其分化。采用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-146a及其靶基因TRAF6的表达量,流式细胞术检测CD11b和CD14的表达,Western blot检测TRAF6蛋白及其下游调控因子IκBα蛋白的表达水平。结果：与对照组相比(0 μmol/L), 氢醌可抑制PMA诱导的HL-60细胞CD11b和CD14的表达,5.0 μmol/L的氢醌使其表达量分别减少44%和38% (P均<0.01);同时miR-146a的表达比对照组升高近2倍(P<0.01);TRAF6 mRNA的表达下降约40%,其蛋白表达下降74%(P均<0.01);磷酸化IκBα蛋白的表达减少约45%,IκBα总蛋白表达升高约73%(P均<0.01)。当抑制miR-146a的表达后,氢醌对TRAF6、IκBα和磷酸化IκBα蛋白表达的影响不明显。结论：miRNA-146a是氢醌影响HL-60细胞分化的调控因子之一。     

羟基喜树碱诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的 :探讨国产羟基喜树碱 (HCPT)对 HL - 6 0细胞的作用机制和规律。方法 :应用细胞形态学检查 ,DNA凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果 :HCPT 1mg/ L和 5 mg/ L作为 HL - 6 0细胞 4h细胞凋亡率分别为 5 0 .6 %和 6 8.6 %。光镜检查见细胞核固缩、碎裂 ;电镜检查见染色质向核周边凝集。 DNA电泳显示典型的梯状条带。当 HCPT浓度超过 5 mg/ L或作用超过 4h,细胞凋亡率无明显增加 ,出现饱和现象。HL - 6 0细胞经 HCPT作用后 ,S期细胞显著减少 ,G0 / G1 期细胞增加。结论 :HCPT诱导 HL - 6 0细胞出现凋亡并具有饱和效应 ,HCPT为 S期特异性药物。临床上 HCPT应与细胞周期非特异性药物联合用药。     

苦参碱诱导HL-60细胞株凋亡作用的实验研究

 目的　研究苦参碱（MAT）诱导HL-60细胞株凋亡的作用及其机制。方法　采用 CCK-8法检测不同浓度MAT对HL-60细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡以及线粒体跨膜电位的变化;分光光度法检测Caspase-9活性。结果　0.25～2.0 mg／ml MAT对HL-60细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（F＝67.83,P＜0.05）;MAT处理48 h后,细胞凋亡率明显增高,并呈剂量依赖性（t值分别为4.685、6.300、9.641、6.786,均P＜0.05）;1.0 mg／ml MAT处理后48 h内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低（F＝54.83,P＜0.05）,Caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性（F＝72.31,P＜0.05）。结论　MAT可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活Caspase-9而诱导HL-60细胞凋亡。     

γ-干扰素对姜黄素抑制HL-60细胞增殖的影响

目的：为研究在姜黄素作用下,基因重组干扰素γ（rh-ＩＦＮ－γ）对白血病细胞杀伤能 力的影响。方法：选用ＨＬ－６０细胞系,采用细胞培养、ＳＡＢＣ法测定Ｂrdu摄取率? 流式细胞仪检测及末端ＴdＴ酶标技术。结果：发现姜黄素抑制细胞增殖作用随浓度增加而逐渐增加,在２５umol/：浓度体外处理ＨＬ－６０细胞２４小时后,增殖抑制率为４３． ７５％±２．００％,ＩＦＮ－γ使这种作用明显提高,增殖抑制率增至８０％。进一步分     

维甲酸和维生素C对HL-60细胞诱导分化的研究

[目的]探讨全反式维甲酸(ATRT)和维生素C(V鄄C)对人早幼粒白血病细胞(HL鄄60)的分化作用。[方法]用1μmol/LATRT和0.5mmol/LV鄄C单独和联合处理HL鄄60细胞后,观察细胞形态改变,测定细胞增殖速度、硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应、过氧化酶染色反应。[结果]两者都能使HL鄄60细胞形态向成熟粒细胞转变,对细胞增殖有明显的抑制作用,前者强后者弱;维甲酸使细胞的NBT反应显著增强(P<0.01),过氧化酶染色为弱阳性或阴性;V鄄C对HL鄄60细胞也有NBT反应和染色反应,但改变不明显(P<0.05),两者联合作用,分化作用增强。[结论]维甲酸有很强的诱导HL鄄60细胞分化的作用,V鄄C的分化作用不明显,但有增强维甲酸分化的作用。     

维甲酸和桂皮酸诱导HL—60细胞分化的研究

目的 探讨维甲酸和桂皮酸联合对人早幼粒白血病细胞（HL－60）诱导分化作用。方法 用1μmol/L全反式维甲酸（ATRA）和2．5mmol/L桂皮酸单独和联合处理HL－60细胞后,观察细胞形态的改变,进行细胞增殖速度、硝基四氮唑蓝（NBT）还原反应、过氧化酶染色的测定。结果 ATRA和桂皮酸都能使HL－60细胞形态向成熟粒细胞转变,两者对HL－60细胞增殖都有明显抑制作用,都能使细胞的BNT还原反应显著增强（P＜0．01）。前者强于后者。过氧化酶染色两者均为弱阳性或阴性。两者联合作用能使分化作用增强,但未显示相加效应。结论 ATRA和桂皮酸都具有诱导HL－60细胞分化作用,前者优于后者,两者联合分化作用增强。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS、NF-kB和C-IAP2的变化

背景与目的:探讨As2O3(arsenic trioxide,ATO)对HL-60细胞凋亡过程中细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、NF-kB(nuclear factor kappa B).及GIAP2(cellular inhibitor of apoptosis proteins 2)的影响.材料与方法:以7.5 umol L As2O3单独应用及与500 umol L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-Lcysteine,NAC)联合作用于HL-60细胞12、24 h后,流式细胞术检测HL-60细胞ROS的产生量;Western blot法检测NF-kB P65核蛋白的变化情况;半定量RT-PCR法检测C-IAP2的相对表达量.结果:7.5 umol L的As2O3作用HL-60细胞12、24 h后细胞内ROS的生成增加,与阴性对照比较,差异具有统计学意义(P<0.05).NF-kB P65核蛋白的相对含量分别为49.3%±4.4%和23.1%±2.1%,C-IAP2的相对表达分别为72.9%±5.8%和59.3%±4.4%,较对照组均明显降低(P<0.05).500 umol L NAC和7.5 umol L As2O3共同作用HL-60细胞12、24 h后细胞ROS生成量相对减少,与AS2O3单独作用组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);NF-kB P65核蛋白的相对含量分别为65.4%±4.9%和37.1%±3.4%,C-IAP2的相对表达量分别为81.1%±5.8%和73.7%±4.9%.较As2O3单独作用组均明显增加(P<0.05).结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中,细胞内ROS生成增加,抑制NF-kB活性,同时下调其靶基因C-IAP2等的表达;NAC能阻断As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS的生成,部分阻断了NF-kB活性的抑制.     

抗原致敏树突状细胞诱导CTLs杀伤HL-60细胞作用研究

 目的　探讨树突状细胞 (DC)在体外诱导针对白血病细胞的CTLs杀伤活性。方法　用IL 4和GM CSF培养正常人外周血DC ,以HL 6 0细胞裂解液致敏DC ,再与淋巴细胞共孵育 ,激活T淋巴细胞 ,用LDH释放法测定致敏DC诱导杀伤性细胞对HL 6 0细胞的杀伤活性。结果　外周血单个核细胞经体外扩增培养出可见树突状形状的DC ,流式细胞仪检测细胞表面CD1α及CD86表达阳性 ,CD14表达阴性。混合淋巴细胞反应 (MLR)观察DC刺激的异体淋巴细胞增殖明显较对照组高 ,两者比较有显著性差异 (n =15 ,P <0 .0 1)。在效靶比为 2 0∶1时 ,抗原致敏的DC诱导的杀伤性T细胞对HL 6 0细胞的杀伤率是 39.9%± 2 1.5 % ,直接以抗原刺激的T细胞的杀伤率是 2 6 .3%± 15 .6 %。两组比较差异有非常显著性 (n =16 ,P <0 .0 0 1)。效靶比为 2∶1时 ,抗原致敏的DC诱导的杀伤性T细胞对靶细胞就有明显的杀伤作用 ,随着效靶比增加 ,杀伤作用增强。实验组和对照组不同效靶比杀伤率比较 ,差异有非常显著性 (n =16 ,P <0 .0 0 1)。结论　DC...     

紫草素衍生物SK36对白血病HL-60细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨紫草素衍生物5,8-二甲基-2-β-羟基-异戊酰紫草素(5,8-dimethyl-2-β-hydroxy-isovaleryl shikonin,SK36)对人白血病细胞株HL-60增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:CCK-8法检测SK36对HL-60细胞的增殖抑制作用;光学显微镜下观察细胞形态的变化;AnnexinⅤ /PI 双标记法检测细胞凋亡率;FCM法检测caspase-3活性;JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位.结果:SK36能明显抑制HL-60细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;在光学显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化;FCM法检测结果显示,SK36作用HL-60细胞24和48 h时的细胞凋亡率分别为(55.55±2.88)%和(72.12±14.50)%,明显高于对照组;caspase-3活性增加,线粒体跨膜电位发生崩塌,且随着时间的延长其效应更加明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:SK36在体外可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡 .     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：探讨bcl-2反义寡核苷酸诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡。方法：将人工合成的bcl-2反义寡聚脱氧苷酸片段与ＨＬ－６０,细胞共培养,在作用的第０天、３天、５天通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。结果：bcl-2反这寡核苷酸可下调ＨＬ－６０细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,同时可诱导细胞凋亡,而bcl-2反义寡核苷酸及对照无此作用。     

拓扑替康抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡机制与c-myc的关系

目的探讨拓扑替康（TPT）抑制白血病细胞的作用机制。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法,检测TPT作用后c—myc mRNA及其蛋白的表达情况。结果0．15μmol／L TPT作用HL-60细胞12h后,HL-60细胞c—myc mRNA表达为0．17±0．03,与空白对照组的1．11±0．25相比明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。HL-60细胞c—myc蛋白表达阳性细胞百分率为19．67％,较空白对照组的68．33％明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论拓扑替康抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡可能是通过c—myc途径起作用的。     

小剂量As2O3体外诱导HL-60细胞发生非终末分化分子机制的研究

目的探讨增强子结合蛋白C／EBPs在小剂量三氧化二砷（As2O3）诱导HL-60细胞发生非终末分化中的作用。方法采用瑞式染色观察细胞形态，WSTl实验测定细胞增殖变化，测定和分析细胞周期，NBT还原实验测定细胞分化状态，RT-PCR方法检测C／EBPct和C／EBPε的mRNA表达。结果HL-60细胞经全反式维甲酸（ATRA）作用24h后，随着细胞分化的发生，C／EBPε mRNA的表达明显增加，C／EBPα mRNA的表达降低。HL-60细胞经As2O3作用24h后，C／EBPα mRNA的表达降低，C／EBPε mRNA的表达轻微增加。结论经As2O3和ATRA诱导后不同分化状态HL-60细胞，C／EBPα mRNA的表达降低，二者差异无显著意义；C／EBPε的表达差异较大（P〈0．05），二者差异有显著意义。小剂量As2O3诱导HL-60细胞发生非终末分化可能是由于C／EBPε不能持续表达升高引起的。     

羟基磷灰石纳米粒子对HL-60细胞增殖抑制作用的研究

目的:探讨羟基磷灰石(HAP)纳米粒子对HL60细胞的生长抑制作用。方法:采用体外细胞培养和四甲基氮唑蓝(MTT)测定等方法。将不同浓度的HAP纳米粒子(0001~002)mg/mL分别加入HL60细胞培养液中,置37℃、5%CO2培养48h。结果:1)不同浓度HAP对HL60细胞增殖均可产生影响,在倒置显微镜下,可见全部测定孔细胞增殖均较对照孔低下,且呈明显量效关系。2)不同浓度HAP对HL60细胞生长抑制率呈明显正相关性,在浓度为10、50、100、150、200时,抑制率相应为1680、3920、5360、6420、7500。结论:HAP纳米粒子明显抑制HL60细胞生长,具有细胞毒和基因毒作用。HAP纳米粒子对白血病及肿瘤的治疗将具有良好的开发应用前景。     

用BrdU作探针检测RA对HL-60细胞的诱导分化作用

用溴脱氧尿嘧啶核苷(Erdu)作探针标记人早幼粒白血病细胞株HL-60,并用抗Brdu的单克隆抗体(Anti-Brdu)和免疫组化法追踪观察HL-60细胞在全反式维甲酸(RetinoiolAcid,RA)作用下走向分化成熟的可能性。实验发现,经RA处理前,Brdu标记细胞均为早幼粒细胞,经RA处理5天后,Brdu标记细胞中有21％以上分化成熟为杆状核,分叶核粒细胞。由于这些细胞已处于终末分化期,不再进行DNA合成,故细胞中的Brdu是在细胞分化早期掺入的,从而直接证明HL-60细胞可在RA作用下走向分化成熟。