马钱子碱对乳腺癌骨转移相关因子表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨马钱子碱对乳腺癌骨转移相关因子的影响。［方法］ 建立裸鼠乳腺癌骨转移的模型,并用马钱子碱干预后用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组肿瘤组织中骨转移相关因子MMP-2、CXCR4、RANKL、OPG mRNA表达量。［结果］ 马钱子碱经腹腔给药的半数致死量（Medial lethal dose,LD50）为69mg/kg。根据LD50的1/10、1/20和1/40的量,设三个剂量组：高剂量组6.90mg/kg1、中剂量组3.45mg/kg和低剂量组1.73mg/kg,同时与空白对照组比较。马钱子碱各剂量组MMP-2,CXCR4,RANKL mRNA的表达量随着马钱子碱剂量的增加逐渐下降（P＜0.05）,而OPG mRNA的表达量则随着马钱子碱剂量的增加逐渐增加（P＜0.05）。［结论］ 马钱子碱可以抑制乳腺癌骨转移,主要以调节MMP-2、CXCR4、RANKL、OPG等骨转移相关因子的表达为主要手段。     

辛伐他汀在裸鼠模型中对乳腺癌骨转移的影响

目的 观察辛伐他汀在裸鼠模型中对乳腺癌骨转移的作用.方法采用完全随机分组方法 将60只裸鼠分为3组,每组20只,裸鼠左心腔注射乳腺癌骨转移细胞株(MDA-MB-231),7d后,分别皮下注射辛伐他汀、生理盐水及无任何处理(2次/周,19 d).应用图像分析软件评估骨转移瘤的面积.随后处死裸鼠,用放射免疫法检测骨转移癌髓腔内甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)浓度;应用骨密度检测软件进行组织形态学分析,计数骨转移灶每毫米癌组织与临近骨小梁之间破骨细胞的数量.计量资料比较采用方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与生理盐水组和无处理组相比,注射辛伐他汀的裸鼠骨转移癌面积明显减小(0.51±0.18 mm2 vs 2.13±1.24 mm2 vs 2.29±1.22 mm2;F=15.600,P=0.002; F=15.673,P=0.001),骨转移癌周围髓腔内PTHrP浓度明显降低(0.98±0.20 pmol/L vs 2.11±0.31 pmol/L vs 1.99±0.29 pmol/L;F=61.469,P＜0.001;F=58.274,P＜0.001),并且其转移灶破骨细胞的数量明显减少(4.00±1.73个/mm vs 11.40 ±4.93个/mm vs 10.91±3.87个/mm;F=17.820,P=0.001,F=17.184,P=0.002).结论 辛伐他汀能够降低乳腺癌细胞PTHrP的分泌,从而抑制乳腺癌细胞在骨内生长及其对骨质的破坏.     

BSP和PTHrP的联合检测对乳腺癌骨转移临床意义的研究

目的:探讨骨唾液蛋白(BSP)和甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)的联合检测对乳腺癌骨转移的临床意义.方法:乳腺癌87例患者,分为骨转移组40例和无骨转移组47例.应用免疫组织化学法检测石蜡包埋标本BSP和PTHrP的表达.结果:BSP和PTHrP在骨转移组的阳性表达均明显高于无骨转移组(x2值分别为8.47和10.49,P均<0.01),且强阳性表达也均高于后者(x2值分别为9.18和11.05,P均<0.05);同时两者在骨转移组的阳性表达与无转移组和骨外转移组之间比较,差异有统计学意义(P<0.01),而后两组间阳性表达差异无统计学意义(P>0.05).Cox比例风险回归模型分析结果发现,乳腺癌组织中BSP和PTHrP的高表达是预测骨转移的主要危险因素(P<0.01),其相对危险度分别为1.293和1.348.Log-rank生存曲线分析结果显示,在乳腺癌患者中BSP和PTHrP高表达者的累积生存概率均明显低于BSP和PTHrP阴性表达组,P<0.05.结论:BSP和PTHrP的过表达是早期预测乳腺癌骨转移的良好标志,并可作为评估乳腺患者的一项重要的预后因子.     

马钱子碱对SGC-7901裸鼠移植瘤模型抑瘤作用的研究

目的:研究马钱子碱(brucine)对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤模型的抗肿瘤作用.方法:选取BALB/cnu裸小鼠,建立人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤模型.以不同剂量马钱子碱(1、2和4 mg/kg)作用于模型动物,通过观察肿瘤体积和质量的变化来研究马钱子的抗肿瘤作用.结果:在实验终点,马钱子碱各剂量组(1、2和4 mg/kg)的平均体质量均高于生理盐水组,差异有统计学意义,P值分别为0.024 6、0.041 8和0.036 2.马钱子碱2和4mg/kg剂量组肿瘤体积与生理盐水组相比差异均有统计学毒义(P=0.048 6;P=0.012 1),抑瘤率(肿瘤体积)分别为33.8％和49.8％.马钱子碱2和4 mg/kg剂量组肿瘤质量与生理盐水组相比差异均有统计学意义(P=0.013 2;P=0.011 3),抑瘤率(肿瘤质量)分别为37.9％和40.7％.结论:马钱于碱能够改善移植瘤裸鼠体质量剧减状况,抑制人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤的生长.     

不同剂量塞来昔布对人肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用及机制研究

目的:研究不同剂量COX-2抑制剂对人肺癌裸鼠移植瘤生长、survivin表达和微血管生成的影响.方法:将人肺癌A549细胞接种于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,然后随机分为4组:对照组、塞来昔布低剂量(25 mg·kg-1·d-1 )组、塞来昔布中剂量(50 mg·kg-1 ·d-1 )组、塞来昔布高剂量(100 mg·kg-1·d-1 )组.每周测量肿瘤体积,给药42 d后牺牲裸鼠,切取移植瘤组织,检测COX-2、 survivin 、VEGF表达和微血管密度(microvessel density,MVD).结果:塞来昔布低剂量组、中剂量组和高剂量组的抑瘤率分别为34.60%、49.40%和59.71%,与对照组比较,塞来昔布各治疗组肿瘤生长缓慢,差异有统计学意义( P <0.05).免疫组织化学染色和RT-PCR结果分析显示:与对照组比较,塞来昔布各治疗组COX-2 、survivin的表达水平均明显降低( P <0.05),并且抑制程度呈明显的药物剂量依赖性.低剂量塞来昔布可明显抑制VEGF mRNA表达和肺癌移植瘤微血管生成,其抑制作用并未随用药剂量的增加而增强.结论:不同剂量的塞来昔布均能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长和survivin的表达,其抑制作用呈明显的用药剂量依赖性,survivin可能参与了塞来昔布抑制肺癌生成的过程.低剂量塞来昔布可抑制人肺癌裸鼠移植瘤微血管生成,可能对防止肿瘤转移起到重要作用.     

乳腺癌血清VEGF水平与癌组织中VEGF和COX-2表达及微血管密度的关系

目的探讨乳腺癌患者血清血管内皮生长因子(sVEGF)水平与乳腺癌血管生成的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测68例乳腺癌、35例乳腺良性病变和20例健康女性的sVEGF水平,免疫组化S-P法检测相应乳腺癌组织中VEGF、环氧合酶-2(COX-2)及微血管密度(MVD)表达水平,并分析sVEGF水平与VEGF、COX-2及MVD表达的关系。结果(1)健康女性组、乳腺良性病变组和乳腺癌组sVEGF浓度中位数分别为105.93、150.82和306.51 pg/ml,乳腺癌组明显高于健康女性组。(2)乳腺癌组VEGF和COX-2表达阳性率分别为67.6%和44.1%,乳腺良性病变组VEGF和COX-2表达阳性率分别为42.9%和11.4%,两组间差异有统计学意义(P值分别为0.015和0.002)。(3)乳腺癌患者sVEGF水平与癌组织中VEGF、COX-2及MVD表达均呈正相关。(4)乳腺癌患者中,VEGF表达阳性组COX-2阳性率(65.21%)明显高于VEGF表达阴性组(18.18%); COX-2表达阳性组MVD(22.94±5.51)明显高于COX-2表达阴性组(10.30±4.42)。结论乳腺癌患者sVEGF水平明显增高于健康女性,并与癌组织中VEGF、COX-2及MVD表达呈正相关。     

COX-2及VEGF蛋白在大鼠乳腺癌骨移植瘤中的表达及意义

背景与目的:随着对生物学预后因子研究的不断深入,乳腺癌预后指标的联合检测和应用,能更有效、准确地估计患者的预后,并有助于指导乳腺癌的个体化治疗.本研旨在探讨究环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白对大鼠乳腺癌骨转移发生、发展的意义.方法:建立大鼠乳腺癌骨移植模型,观察正常组织及建模后肿瘤组织影像学、组织学变化,并检测COX-2、VEG蛋白表达.结果:随着建模时间的延长,胫骨X线摄片及组织学显示肿瘤细胞向外侵蚀破坏骨皮质逐渐加强,COX-2、VEGF蛋白在肿瘤组织中表达的程度也逐渐增强,在正常组织及建模后第7、14和21天光密度值反映的表达量分别为9164±258、1 694±497、4 304±890和7111±1069;930±268、1944±396、3226±819和47464±1032,两两比较差别均有显著的统计学意义(P<0.01).结论:乳腺癌局部高表达COX-2蛋白可促进肿瘤细胞增殖,并通过上调VEGF蛋白水平,促进大鼠乳腺骨转移癌的发生和发展.     

大黄素抑制人肝癌HepG2细胞血管生成作用及其机制研究

目的 大黄素可促进人肝癌HepG2细胞的凋亡,然而其是否可抑制肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)血管生成及其机制罕见报道.本研究探讨大黄素对人肝癌HepG2细胞血管生成以及缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1a,HIF-1d)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,以及大黄素体内抗肝癌机制.方法 采用体内鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验,实验随机分为阴性对照组(生理盐水)、大黄素低剂量组(10 μmol/L)、大黄素高剂量(20 μmol/L)和阳性对照组(0.15 mg/mL地塞米松),每组各10只,每24 h每组追加同样等量药物,共72 h,观察大黄素对CAM血管生成的抑制作用.体外培养HepG2细胞,以氯化钴(CoCl2)模拟化学缺氧,设立缺氧未处理组[阴性对照组(生理盐水)]、缺氧大黄素低剂量组(10 μmol/L)、缺氧大黄素高剂量组(20 μmol/L)和缺氧阳性对照组[10 μmol/L 5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)],每组设6个复孔,处理24 h.采用小管形成实验,观察大黄素对HepG2细胞相对小管数目的影响,免疫细胞化学分析检测HIF-1α和VEGF阳性细胞的表达,Real-Time PCR分析检测HIF-1α mRNA和VEGF mRNA的表达.采用Graphpad 5.0软件进行描述性统计,组间比较采用one-way-ANOWA和Bonferroni检验.结果 CAM实验显示,实验组新生血管数目明显减少,与阴性照组比较,差异有统计学意义,F=13.374,P=0.002.阴性对照组新生血管数目为(31.47±1.81)个.给药后CAM血管生成减少,大黄素低剂量组、高剂量组和地塞米松组分别为(19.48±0.66)、(10.33±1.04)和(9.89±0.57)个,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.041、0.004和0.003;大黄素低剂量组和高剂量组与地塞米松组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.539和1.000.小管形成实验显示,实验组相对小管数目明显减少,与阴性照组比较,差异有统计学意义,F=21.529,P＜0.001.阴性对照组相对小管数目为(100.00±0.00)％.给药后,相对小管数目明显减少,大黄素低剂量、高剂量组和阳性对照组分别为(65.85±12.67)％、(46.94±8.34)％和(41.77±7.53)％,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.049、0.001和＜0.001;大黄素低剂量组和高级剂量组与阳性对照组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.104和0.069.免疫细胞化学分析显示,大黄素低剂量组、高剂量组和阳性对照组HIF-1α和VEGF阳性细胞显著减少.Real-Time PCR分析显示,实验组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA表达降低,与阴性照组比较,差异有统计学意义(F=31.908,P＜0.001;F=25.146,P＜0.001).阴性对照组HepG2细胞HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.92±0.15和0.95±0.15;大黄素低剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.45±0.07和0.51±0.08,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.021和0.013;大黄素高剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.32±0.05和0.40±0.07,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为＜0.001和0.001;阳性对照组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.30±0.04和0.34±0.05,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值均＜0.001;大黄素低剂量组、高剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达与阳性对照组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.663、0.362、0.443和1.000.结论 大黄素可能通过抑制HIF-1d mRNA的表达,从而降低VEGF mRNA的表达来抑制HepG2细胞新生血管的形成.     

塞来昔布抑制裸鼠乳腺癌骨转移实验研究

目的探讨塞来昔布(西乐葆)作为血管抑制剂对乳腺癌骨转移的形成及生长的影响。方法建立裸鼠乳腺癌骨转移模型。将12只乳腺癌骨转移裸鼠随机分成两组,对照组隔日腹腔注射生理盐水;西乐葆组隔日腹腔注射西乐葆30mg/kg;30天后处死。检测血清碱性磷酸酶,采用免疫组化和图像分析系统测定血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤微血管密度(MVD),光镜下观察各组肿瘤组织,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡。结果西乐葆组肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤组织中的VEGF和MVD与对照组比较显著降低,抑瘤率为50.5%,凋亡指数上升,血清碱性磷酸酶下降。结论西乐葆能明显抑制裸鼠乳腺癌骨转移瘤的形成及新生血管形成。     

抑制CXCR4活性对乳腺癌骨转移影响的体内外研究

目的:应用特异性抑制剂AMD3100抑制人乳腺癌骨高转移MDA-MB-231SA-rfp细胞中CXCR4的活性,探讨CX-CR4在乳腺癌细胞体内、外增殖和迁移中的作用和机制。方法:CCK8法和Transwell法检测AMD3100对MDA-MB-231SA-rfp细胞体外增殖和迁移能力的影响。构建MDA-MB-231SA-rfp细胞骨转移裸鼠模型,以不同质量浓度的AMD3100处理后,X线影像观察骨转移情况,进一步利用MicroPET进行半定量分析,并应用H-E染色检测骨转移灶的定位。Western blotting法检测AMD3100对MDA-MB-231SA-rfp细胞和移植瘤转移灶组织中CXCR4蛋白表达的影响。结果:AMD3100能明显抑制MDA-MB-231SA-rfp细胞在SDF-1刺激下的增殖和迁移(P<0.05),较高质量浓度(2 000 ng/ml)的AMD3100效果更明显(P<0.01)。成功构建MDA-MB-231SA-rfp细胞裸鼠乳腺癌转移模型,不同质量浓度AMD3100处理后,小鼠下肢骨骨质破坏程度降低;MicroPET分析发现,对照组、低剂量AMD3100组、高剂量AMD3100组SUVmax值分别为9.44±0.53、5.70±0.25、2.18±0.47(P<0.01);组织病理检测证实为乳腺癌骨转移灶。Western blotting结果显示,AMD3100作用前后MDA-MB-231SA-rfp细胞和骨转移灶标本中CXCR4蛋白表达无明显变化。结论:AMD3100降低CXCR4的活性能抑制乳腺癌MDA-MB-231SA-rfp细胞体外增殖和迁移能力,并能抑制裸鼠体内乳腺癌骨转移灶的形成。