子宫内膜癌组织中PTEN基因突变及蛋白表达的检测

背景与目的:肿瘤抑制基因———第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen,PTEN)被称为子宫内膜的看家基因。但有关PTEN基因在子宫内膜癌发生发展中的确切作用尚不清楚。本研究旨在检测子宫内膜癌组织中PTEN基因的突变及蛋白表达情况。方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerasechainreaction-singlestranconformationpolymorphism,PCR-SSCP)和DNA序列分析法,检测52例子宫内膜癌组织和10例正常子宫内膜组织中PTEN基因第5和第8外显子的突变;免疫组织化学法检测PTEN蛋白的表达,并结合临床病理特征进行分析。结果:子宫内膜癌组织的PTEN基因突变率和蛋白缺失率分别为25%和60%,高于正常子宫内膜组织(0%),差异有显著性(P<0.05)。病理学分级为G1、G2及肌层浸润深度<1/2的组织的PTEN基因突变率高于病理学分级为G3及肌层浸润深度≥1/2者,而病理学分级为G1、G2组织的PTEN蛋白表达缺失率低于病理学分级为G3者,差异有显著性(P<0.05)。PTEN基因突变率和蛋白表达缺失率在子宫内膜样腺癌和其它组织类型之间比较,差异有显著性(P<0.05),而在不同手术分期之间差异无显著性(P>0.05)。结论:PTEN基因突变和蛋白阳性表达常发生在病理学分级较低的子宫内膜癌病例     

子宫内膜癌中PTEN蛋白、P-AKT蛋白的表达及意义

目的:检测子宫内膜癌组织中PTEN蛋白及P-AKT蛋白表达并探讨其意义.方法:采用免疫组织化学法检测66例子宫内膜癌、28例正常子宫内膜组织中PTEN蛋白及P-AKT的表达.结果:子宫内膜癌组织中PTEN蛋白为缺失表达,高于正常子宫内膜组织(P＜0.05),而且PTEN表达在G1级肿瘤高于G2、G3级(P＜0.05),PTEN蛋白缺失率与肿瘤组织类型有关(P＜0.05),与肌层浸润、淋巴结转移及病理分期无明显关系(P＞0.05).子宫内膜癌组织中P-AKT蛋白表达为高表达,P-AKT的表达与肿瘤组织学分级、病理学分期、有无淋巴结转移以及肿瘤浸润子宫肌层深度显著相关(P＜0.05),其表达与组织学类型无关(P＞0.05).P-AKT与PTEN的表达呈明显负相关.结论:PTEN表达缺失与临床病理参数无关,蛋白表达缺失常发生细胞分化较差的子宫内膜癌.PTEN蛋白表达缺失与P-AKT表达水平有关.     

雌激素受体亚型在子宫内膜癌发生中的作用

[目的]比较雌激素受体两种亚型α和β及Ki67在子宫内膜癌患者中的表达,探讨雌激素受体亚型在子宫内膜癌发生和发展中的作用。[方法]应用免疫组化技术及医学图像分析仪检测子宫内膜单纯性增生(56例)、复杂性增生(37例)、不典型增生(86例)及子宫内膜癌(68例)组织中ERα、ERβ及Ki67的阳性细胞百分率及灰度值,分析相应抗体的表达量。[结果]①与子宫内膜单纯性增生患者比较,复杂性增生、不典型增生及子宫内膜癌患者ERα阳性率及灰度值无明显性改变(P>0.05);②子宫内膜复杂性增生患者的ERβ的阳性率(62.16%)高于轻、中度不典型增生患者(54.9%)(P=0.031),而后者又高于早期内膜癌患者(32.0%)(P=0.049),ERβ的灰度值在复杂性增生患者中(69.49±112.52)也高于轻、中度不典型增生(67.23±124.07)及早期内膜癌患者(33.26±96.56)(P=0.025,P=0.001);③重度不典型增生周围组织(62.86%)及Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期内膜癌癌旁组织(48.0%,50.0%)中ERβ的阳性率表达水平高于相应病变组织(48.57%,32.0%,38.89%)(P=0.023,P=0.001,P=0.001);④Ki67的表达水平与ERβ的表达呈负相关(rs=-0.458,P=0.001),与ERα表达无关(rs=-0.043,P=0.506)。[结论]提示在子宫内膜癌发生的不同病理阶段ERβ表达量的是逐渐降低的,推测ERβ的表达降低与子宫内膜癌的发生有关。     

子宫内膜癌PTEN基因突变、mRNA和蛋白表达的探讨

PTEN 基因是1997 年由Steck 等三个研究小组分别发现并命名的第一个具有磷酸酯酶活性的抑癌基因, 又称MMAC1 /TEP1^[1] , 现已在多种肿瘤中发现该基因不同形式的异常, 但关于子宫内膜癌组织中PTEN 基因的改变缺乏系统研究。     

子宫内膜癌组织中血管内皮生长因子与雌激素受体的表达及相关性探讨

目的：探讨子宫内膜癌组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和雌激素受体(estrogen receptor，ER)的表达、意义及两者的关系。方法：用免疫组化法检测30例正常子宫内膜、30例子宫内膜增生和50例子宫内膜癌中VEGF和ER的表达。结果：子宫内膜癌中VEGF表达强阳性率为64．0％(32／50)，明显高于正常内膜和增生内膜，两者阳性率均为0(0／30)，P值均为0．0025；而ER表达阳性率为82．0％(41／50)，明显低于正常内膜和增生内膜，两者阳性率均为100．0％(30／30)，P值均为0．031。非内膜样癌中ER表达阳性率为50．0％(6／12)，显著低于内膜样癌92．1％(35／38)，P=0．044；G3级内膜癌中ER表达阳性率为50．0％(5／10)，明显低于G1 95．2％(20／21)和G2级84．2％(16／19)，P值分别为0．045和0．039；Ⅲ期内膜癌ER表达阳性率为42．9％(3／7)，明显低于Ⅰ期93．8％(30／32)和Ⅱ期，72．7％(8／11)，P值分别为0．029和0．049。G3级内膜癌中VEGF表达阳性率为100．0％(10／10)，明显高于G1级76．2％(16／21)和G2级84．2％(16／19)，P值分别为0．048和0．049；内膜癌中VEGF表达与组织学类型及手术-病理分期差异无统计学意义，P=0．26。子宫内膜癌中VEGF表达与ER表达成负相关关系，r=-0．4216，tr=3．9705，P=0．0051。结论：ER表达与内膜癌发生和预后有关，VEGF表达可能与子宫内膜癌的发生及生长旺盛有关。内膜癌中ER表达可能通过调节VEGF表达而影响肿瘤的生物学特性。     

ER、PTEN在不同类型子宫内膜组织中的表达及意义

目的 检测ER、PTEN在不同类型子宫内膜腺上皮细胞中的表达.方法采用免疫组化检测ER、PTEN的表达.结果⑴ER的表达:在正常子宫内膜腺上皮细胞增生期显著高于分泌期(P＜0.01).增殖症中显著高于正常宫内膜(P＜0.05),而内膜癌中明显低于增殖症和正常宫内膜(P＜0.05).在增殖症中:单纯＞复杂＞不典(均P＜0.05).内膜样腺癌中:＜50岁和≥50岁年龄组、＞1/2和≤1/2肌层浸润组和不同的手术病理分期间ER的表达均无显著性差异(P＞0.05).而在高、中和低分化程度之间均有显著性差异(均P＜0.05);⑵PTEN的表达:在增生期和分泌期无差异(P＞0.05).不典与单纯、不典与复杂相比均有显著性差异(均P＜0.01).内膜样腺癌中:PTEN表达在＜50岁和≥50岁组,不同分化程度的癌组织,不同肌层浸润深度和不同分期之间均无显著性差异(P＞0.05);⑶ER、PTEN在不典型增生和子宫内膜样癌组织中表达均无相关性(r=0.315,r＝0.422,P＞0.05);结论⑴ER参与了正常宫内膜的变化,ER表达降低与内膜样癌的发生有一定关系,且ER表达减少与癌细胞恶性程度增加有关,故可以作为病理诊断的一项指标;⑵PTEN表达降低促使了癌前病变的发生,可能是引起内膜细胞癌变的机制之一,但是PTEN表达与临床病理学特征关系不大;⑶雌激素对PTEN的表达影响不大.     

子宫内膜癌组织中血管内皮生长因子与雌激素受体的表达及相关性探讨

目的:探讨子宫内膜癌组织中血管内皮生长因子( vascular endothelial growth fac tor, VEGF)和雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达、意义及两者的关系。方法:用免疫组化法检测30 例正常子宫内膜、30 例子宫内膜增生和50例子宫内膜癌中VEGF和ER的表达。结果:子宫内膜癌中VEGF表达强阳性率为64. 0%(32/50),明显高于正常内膜和增生内膜,两者阳性率均为0 (0/30),P 值均为0 .002 5;而ER表达阳性率为82. 0%(41/50),明显低于正常内膜和增生内膜,两者阳性率均为100 .0%(30/30),P 值均为0 .031。非内膜样癌中ER表达阳性率为50 0%(6/12),显著低于内膜样癌92. 1% (35/38),P= 0 .044; G3级内膜癌中ER表达阳性率为50. 0%(5/10),明显低于G1. 95 2% (20/21)和G2 级84 .2%(16/19),P 值分别为0. 045 和0 .039;Ⅲ期内膜癌ER表达阳性率为42 .9%(3/7),明显低于Ⅰ期93 .8%(30/32)和Ⅱ期,72. 7% (8/11),P值分别为0.. 029 和0 049。G3 级内膜癌中VEGF表达阳性率为100. 0%(10/10),明显高于G1 级76. 2% ( 16/21 ) 和G2 级84 .2%(16/19 ),P值分别为0 048和0 049;内膜癌中VEGF表达与组织学类型及手术病理分期差异无统计学意义,P= 0. 26。子宫内膜癌中VEGF 表达与ER 表达成负相关关系,r=-0 .421 6,tr=-3 .970 5,P=0.005 1。     

服用他莫西芬发生子宫内膜癌的临床特点及雌激素受体表达

目的:研究因乳腺癌服用他莫西芬(tamoxifen,TAM)而发生子宫内膜癌的临床特征及雌激素受体的表达,并探讨其发病机制。方法:回顾性分析33例因乳腺癌服用他莫西芬发生子宫内膜癌患者的临床资料,设为研究组(TAMET组),将同期普通子宫内膜癌患者50例设为对照组(ET组)。免疫组化法检测癌组织雌激素受体ERα、ERβ的表达。结果:TAMET组多为高分化腺癌,组织学分化好,病理分期早;绝经前期2组ERα、ERβ表达差异无统计学意义,绝经期TAMET组ERα、ERβ表达高于ET组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:绝经期2组内膜癌的发生机制不同,TAM可能主要是ERβ参与TAMET的形成。     

子宫内膜癌及其癌前病变组织中PTEN基因突变的研究

目的:研究抑癌基因PTEN在子宫内膜癌及其癌前病变组织中的突变,并探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系。方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法检测60例子宫内膜癌、32例子宫内膜癌前病变(复杂型增生12例和不典型增生20例)和20例正常子宫内膜癌组织中PTEN基因的突变情况。结果:子宫内膜癌、子宫内膜癌前病变和正常子宫内膜组织中PTEN基因的突变率分别为36·67%(22/60)、9·38%(3/32)和0(0/20),三者之间差异有统计学意义,P<0·05。统计分析表明PTEN基因突变与子宫内膜癌的组织学分级、组织病理类型和肌层浸润深度有关,P<0·05。子宫内膜癌组织中,PTEN基因突变率在G1~G2级、浅肌层浸润分别高于G3级、深肌层浸润的子宫内膜癌。结论:PTEN基因突变主要发生在组织学分化好、肌层浸润浅的子宫内膜癌中。PTEN基因突变可能是子宫内膜癌发生过程中的早期分子事件。     

子宫内膜癌中EGFR蛋白的表达及EGFR基因突变

目的:研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在子宫内膜癌组织中的表达及其基因突变情况。方法:取江西省肿瘤医院及南昌大学第二附属医院2007年1月至2011年4月期间的子宫内膜石蜡包埋组织104例,其中子宫内膜癌组织56例、非典型增生子宫内膜组织18例、正常子宫内膜组织30例,利用免疫组化检测上述各组织中EGFR蛋白的表达,PCR法扩增子宫内膜癌或正常子宫内膜组织中EGFR基因外显子19、21序列并测序检测其突变情况。结果:子宫内膜癌组织中EGFR的阳性表达率高于正常子宫内膜[73.2%(41/56)vs 30.0%(9/30),P<0.01]及非典型增生子宫内膜[73.2%(41/56)vs 44.4%(8/18),P<0.05]。进一步分析表明:G3级子宫内膜癌中EGFR的阳性表达率明显高于G1级[81.8%(9/11)vs 66.7%(12/18),P<0.01]及G2级[81.8%(9/11)vs 74.1%(20/27),P<0.05],在肌层浸润>1/2组中的阳性表达率也明显高于肌层浸润≤1/2组[86.8%(33/38)vs 44.4%(8/18),P<0.01]。但EGFR的表达与子宫内膜癌的FIGO分期、有无淋巴结转移无明显相关性。发现1例子宫内膜癌组织中,EGFR基因外显子19有G2281A突变,而外显子21无突变。结论:EGFR的阳性表达率与子宫内膜癌的组织学分级及肌层浸润深度有关,子宫内膜癌组中存在EGFR外显子19的G2281A点突变。     

胃癌中PTEN突变在其蛋白异常表达中的作用

背景与目的：胃癌组织中PTEN蛋白表达缺失率较高，本文旨在探讨胃癌组织中PTEN基因突变在其蛋白异常表达中的作用。方法：应用PCR—SSCP—DNA测序和免疫组织化学技术检测53例胃癌组织中PTEN基因突变及其蛋白表达水平的改变。结果：53例胃癌组织中共检测到5例PTEN基因突变，突变率仅为9．4％，低于PTEN蛋白表达缺失率（34．0％）。此5例突变阳性胃癌组织中的PTEN蛋白表达情况为4例阴性、1例弱阳性。结论：基因突变是胃癌组织中PTEN蛋白异常表达的原因之一，突变以外的其他异常改变可能在这一过程中发挥了更为重要的作用。     

The relationship between microsatellite instability and PTEN gene mutations in endometrial cancer

Microsatellite instability (MSI) and mutations in the PTEN gene are among the molecular alterations involved in endometrial carcinogenesis. There is conflicting information regarding to their role in this type of tumor. For this reason, we have studied both molecular lesions in a large population-based series of 205 patients with sporadic endometrial cancer. MSI was found in 41 (20.0%) of the tumors and PTEN mutations were found in 74 (36.1%). There were differences in genotype between tumors with and without MSI. Tumors with MSI showed both a higher frequency of PTEN mutations (58.5% vs. 30.4%) (p=0.002, Fisher's exact test) and a higher number of insertions or deletions (I/D) of one nucleotide within the mononucleotide tracts of the PTEN gene (45.8% vs. 11.4% out of all I/D, p=0.005). Conversely, G:C to A:T transitions in CpG dinucleotides were found mostly in microsatellite stable tumors (57.7% vs. 18.2% out of all single-base substitutions, p=0.037). Overall, 67.6% of tumors with mutated PTEN exhibited multiple mutations or allelic imbalance (AI). Multiple PTEN mutations in the same tumor were more frequent in tumors with MSI (60% vs. 25.7%); by contrast the presence of AI accompanying PTEN mutation was higher in microsatellite stable tumors (74.3% vs. 40%) (p=0.028). In addition, patients with both genetic alterations were diagnosed at more advanced stage of progression (54.2% for MSI vs. 20.0% for MSS, p=0.006), and exhibited a worse prognosis (hazard ratio [95% confidence interval]: 3.0 [1.1-13.1], p=0.034, log-rank test) than patients with only the PTEN gene mutated. Our data suggest that the DNA mismatch repair system status influences: (i) both the frequency and the mutational spectrum of PTEN; (ii) the nature of one of the hits that inactivate this tumor-suppressor gene; and (iii) the clinical condition and behavior of the patients.     

PTEN和K-ras与子宫内膜癌关系的研究进展

目的:总结近年来国内外关于PTEN、K-ras在子宫内膜癌中表达及相互关系的研究进展。方法:应用PubMed及CNKI全文数据库检索系统,以"子宫内膜癌、PTEN和K-ras"为关键词,检索1988-01-2011-06的相关文献,共检索到英文文献457篇,中文文献176篇。文献纳入标准:1)PTEN及K-ras的生物学特性及作用机制;2)PTEN、K-ras分别在子宫内膜癌中的表达;3)PTEN和K-ras在子宫内膜癌中的共同表达。根据纳入标准符合分析文献26篇。结果:在子宫内膜癌组织中存在PTEN的表达缺失,而且在子宫内膜癌中PTEN突变率(23.5%～55.0%)高。PTEN缺失或突变诱导了细胞持续增殖和恶性转化,促进肿瘤的形成。K-ras的突变往往发生于子宫内膜癌的早期,K-ras基因的表达与其组织学分级及临床分期有关,组织学分级越差、临床分期越晚,K-ras基因的阳性表达率越高。结论:PTEN和K-ras同属于子宫内膜癌的早期分子事件,在子宫内膜癌发生、发展过程中起着协同效应。     

Loss of PTEN expression is an independent predictor of favourable survival in endometrial carcinomas

Background:

We and others previously reported the prognostic significance of PTEN mutational status on favourable survival in endometrial carcinomas. Here, we demonstrate that loss of PTEN expression in immunohistochemistry is an independent prognostic marker for favourable survival in endometrial carcinomas.

Methods:

We conducted immunohistochemical analyses of PTEN, PIK3CA, phosphorylated Akt (p-Akt), and p27 in primary endometrial carcinomas from 221 patients. Mutation of PTEN was analysed further.

Results:

Expression of PTEN was lost in 56 patients (25%), and PIK3CA was overexpressed in 159 patients (72%). Overexpression of PIK3CA was associated with p-Akt overexpression (P<0.001), which was in turn associated with loss of nuclear p27 expression (P=0.028). Loss of PTEN expression was found to be associated with endometrioid histology (P=0.03), and was inversely associated with the presence of lymphovascular space invasion (P=0.03). Univariate and multivariate survival analyses revealed that factors of PTEN loss, age <70, histological grade 1, early International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) stage, and absence of lymphovascular invasion were independent prognostic indicators for better overall survival (P=0.03, 0.04, 0.01, <0.001, and 0.03, respectively). The subset analysis showed a stronger tendency of PTEN loss towards favourable survival in advanced-stage (III and IV) disease than in early-stage (I and II) disease (P=0.05 vs 0.14). Moreover, our mutational analysis demonstrated that PTEN expression loss was associated with PTEN-truncating mutations (P=0.03).

Conclusion:

The current observations further support the prognostic significance of PTEN aberration on favourable outcome in endometrial carcinomas, providing useful implications for the individualised management of the disease.     

A point mutation in the human estrogen receptor gene is associated with the expression of an abnormal estrogen receptor mRNA containing a 69 novel nucleotide insertion

A novel ER-like mRNA containing a 69 nucleotideinsertion precisely between exon 5 and 6 sequenceswas previously identified in human breast cancer biopsysamples. Data are presented which suggest that the69 nucleotide sequence is normally present in intron5 of the human estrogen receptor gene. Theregion corresponding to and surrounding this 69 nucleotidesequence was cloned and the nucleotide sequence determined.Cloning and sequencing of the corresponding region ingenomic DNA isolated from a breast tumor expressingthe 69 nucleotide inserted ER mRNA, revealed anAG point mutation immediately 3 to the69 nucleotide sequence. This point mutation resulted inthe generation of a consensus splice donor site.A consensus splice acceptor site sequence is normallypresent immediately 5 to the 69 nucleotide sequence.These data are consistent with the 69 nucleotidesequence being recognized as an exon by thesplicing machinery, and resulting in processing of amature ER mRNA containing the 69 nucleotide insert.     

子宫内膜癌组织辣椒素受体TRPV1表达临床意义探讨

目的 辣椒素受体瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)参与了多种肿瘤的生理和病理过程,但TRPV1在子宫内膜癌组织中的表达鲜见报道.本研究旨在观察子宫内膜癌组织及细胞中TRPV1的表达情况,并探讨其意义.方法 收集河北医科大学第二医院2009-11-02-2015-08-31子宫内膜癌组织蜡块73例.对照组选取正常增殖期宫内膜10例;子宫内膜单纯或复杂性增生10例;子宫内膜非典型增生10例.免疫组化SP法测定TRPV1在不同类型子宫内膜癌组织中的表达,蛋白质印迹法检测人子宫内膜癌细胞系ISHIKAWA和HEC-1A的中TRPV1表达情况.结果 免疫组化结果显示,TRPV1在子宫内膜癌组织的阳性表达率为42.5%(31/73),较正常内膜表达率100%(10/10)明显降低,χ2=31.583,P<0.001.其中Ⅰ型子宫内膜癌组织的阳性表达率为73.5%(25/34),高于Ⅱ型子宫内膜癌的表达率15.4%(6/39),Z=-5.669,P<0.001.蛋白质印迹法结果显示,ER高表达的ISHIKAWA癌细胞系表达TRPV1蛋白,而ER低表达的HEC-1A癌细胞系未检测到TRPV1蛋白表达.结论 Ⅰ型子宫内膜癌的发生发展可能有TRPV1参与,Ⅱ型子宫内膜癌的发生可能与TRPV1的丢失有关.子宫内膜癌中TRPV1的表达水平可能与ER的表达相关联.     

人脑胶质瘤中PTEN基因突变和蛋白表达的研究

目的 :研究人脑胶质瘤中PTEN蛋白表达和PTEN基因突变情况。方法 :应用免疫组化技术和聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR SSCP)技术 ,检测 10 2例人脑胶质瘤中PTEN蛋白表达及PTEN基因突变。结果 :PTEN阳性染色主要定位于细胞质中。 10 2例中PTEN蛋白表达 5 5 / 10 2(5 3 9% ) ,高分化组 (Ⅰ级和Ⅱ级 ) 32 / 39(82 1% )与低分化组 (Ⅲ级和Ⅳ级 ) 2 3/ 6 3(36 5 % )之间差异有极显著意义 ,P <0 0 1;4 2例胶质母细胞瘤中共有 11例发生PTEN基因突变 ,突变率为 2 6 % (11/ 4 2 ) ;6 0例其他胶质瘤中仅 1例发生突变 ,胶质母细胞瘤突变率显著高于其他胶质瘤 ,χ2 =11 6 2 ,P <0 0 1。结论 :PTEN基因突变或缺失在人脑胶质瘤的发生发展中起重要作用 ,与肿瘤恶性分化程度密切相关