miR-4465调控EZH2的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨miR-4465通过调控EZH2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测胃癌组织和细胞系中miR-4465的表达水平;在MKN45细胞中过表达miR-4465或沉默EZH2,采用CCK-8和Transwell检测MKN45细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;Western blotting检测EZH2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-4465与EZH2的相互作用。结果:与癌旁组织相比,miR-4465在胃癌组织中的表达降低,在胃癌细胞系（MCC-803、SGC7901、MKN45）中的表达水平显著低于人永生化胃细胞RGM-1,且在MKN45细胞系中的表达低于其他细胞。过表达miR-4465明显抑制MKN45细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）;双荧光素酶报告基因结果证实,miR-4465直接靶向作用于EZH2的3'-UTR;进一步实验证明,同时沉默miR-4465和EZH2能够恢复沉默EZH2对MKN45细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的抑制作用。结论:miR-4465通过靶向下调EZH2的表达抑制胃癌细胞生物学行为,miR-4465可能是胃癌治疗的分子靶标。     

lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）-uc003uxs在缺氧诱导胃癌侵袭和转移中的作用。方法:三个胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MKN28分别经常氧和缺氧孵育 24 h ,提取3例配对的胃癌细胞总RNA,利用高通量lncRNA芯片比较它们之间的表达谱差异,初步筛选与缺氧诱导胃癌侵袭转移相关的关键分子。RT-PCR法检测 lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞（相对于常氧诱导的胃癌细胞）以及20对胃癌组织（相对于癌旁组织）中的表达水平。通过慢病毒转染,稳定下调SGC7901和MKN28细胞中lncRNA-uc003uxs的表达。通过Transwell迁移和侵袭实验以及裸鼠尾静脉注射内脏转移实验检测lncRNA-uc003uxs下调后对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果:高通量芯片分析结果显示:与常氧诱导的胃癌细胞相比,缺氧诱导的胃癌细胞 SGC7901、MKN45和MKN28中有84个共同上调的lncRNA分子以及70个共同下调的lncRNA分子,而多重筛选策略则提示:lncRNA-uc003uxs可能是缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子之一。RT-PCR结果表明:lncRNA-uc003uxs在缺氧诱导的胃癌细胞SGC7901、MKN45和MKN28中显著上调,其在胃癌组织中的表达水平也显著高于癌旁组织。Transwell实验结果显示:缺氧能够显著增加SGC7901和MKN28细胞的迁移和侵袭能力,而下调lncRNA-uc003uxs的表达后,两种细胞的迁移和侵袭能力明显下降。此外,裸鼠尾静脉内脏转移实验也证实lncRNA-uc003uxs的下调抑制了胃癌细胞SGC7901的体内肝肺转移能力。结论:利用高通量芯片筛选,在胃癌细胞中发现了一系列缺氧相关的lncRNA分子。临床标本分析及功能缺失试验证实:lncRNA-uc003uxs是一个缺氧诱导胃癌侵袭转移的关键lncRNA分子。     

miR-9-5p靶向FGF9抑制胃癌细胞迁移侵袭的作用机制

目的:探讨miR-9-5p在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞株SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭影响的作用机制。方法:real-time PCR和Western blot检测癌旁组织、胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p和FGF9的表达；Transwell小室检测过表达miR-9-5p或敲除FGF9对SGC7901和AGS细胞迁移和侵袭能力的影响；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-9-5p和FGF9的靶向关系；将转染后的SGC7901细胞分为对照（NC）组和实验（miR-9-5p）组接种于裸鼠右侧腋窝皮下，观察记录裸鼠成瘤情况并绘制生长曲线。结果:与癌旁组织相比，胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p表达下调、FGF9表达上调（P＜0.05）；过表达miR-9-5p或敲除FGF9能抑制SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验表明miR-9-5p能调控FGF9表达；miR-9-5p组细胞成瘤速度较NC组慢（P＜0.05），肿瘤体积及重量小（P＜0.05）。结论:miR-9-5p在胃癌组织中表达下调，过表达miR-9-5p可抑制FGF9表达，从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，减缓肿瘤生长。     

miR-302c在胃癌中表达及对胃癌细胞侵袭和迁移影响的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-302c对人胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。［方法］ 实时荧光定量PCR法检测miR-302c在胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的表达情况。在SGC7901和AGS细胞中分别转染miR-302c mimic和inhibitor后,Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染后环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)的变化情况。［结果］与永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-302c在胃癌细胞系SGC7901、MKN28、N87、MKN45和AGS中表达降低。转染 mimic和inhibitor后,miR-302c在SGC7901和AGS中表达分别明显上调和下调(P＜0.001)。Transwell实验发现,上调miR-302c后,SGC7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低,而下调miR-302c后,AGS细胞的侵袭和迁移能力明显增强。进一步研究发现,miR-302c可抑制CREB1的表达。功能挽救实验证明CREB1可部分恢复miR-302c上调对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用。［结论］ miR-302c抑制胃癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能是通过直接靶向CREB1。     

miR-1284过表达对人胃癌SGC-7901细胞基因表达谱及侵袭转移的影响

背景与目的：人胃癌组织微小RNA表达谱芯片筛选研究报道miR-1284与胃癌淋巴结转移有关,但其在胃癌中的具体作用鲜见报道。该研究探讨miR-1284过表达对人胃癌SGC-7901细胞基因表达谱及侵袭转移的影响。方法：以慢病毒介导miR-1284过表达转染胃癌SGC-7901细胞为实验组(LV-miR-1284组),转染空载体慢病毒载体的细胞为阴性对照组(LV-NC-GFP组),未转染慢病毒载体的细胞为空白组(Control组)。采用荧光定量PCR检测各组细胞miR-1284的表达,芯片检测各组细胞差异表达基因,生物信息学预测miR-1284的靶基因,Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力,裸鼠皮下移植瘤模型检测各组细胞转移能力。结果：PCR结果显示,与LV-NC-GFP组和Control组比较,LV-miR-1284组细胞miR-1284表达明显增高;芯片结果显示,LV-miR-1284组有20个基因表达显著上调,17个基因表达显著下调;生物信息学预测miR-1284的靶基因有138个基因;Transwell侵袭实验结果显示,LV-miR-1284组侵袭细胞数为70.00±2.37,其细胞侵袭能力较LV-NCGFP组(168.67±4.55)和Control组(170.33±3.08)明显减弱;体内裸鼠实验结果显示,LV-miR-1284组肝脏转移率为14.29%,其细胞转移能力较LV-NC-GFP组(85.71%)和Control组(85.71%)明显减弱。结论：miR-1284过表达能抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移,其机制可能与调控SUMO1、JUN基因表达有关。     

人COX-2基因反义真核表达载体对胃癌转移的影响

目的：在成功构建人COX-2基因反义真核表达载体的基础上,研究COX-2基因对人胃癌细胞株SGC-7901转移能力的影响。方法：实验分为COX-2基因反义真核表达载体转染的人胃癌细胞株SGC-7901转染组、COX-2抑制剂SC236处理组（SGC-7901细胞培养基内含100μmol/L SC236）和对照组（SGC-7901细胞）,并分别采用细胞体外侵袭实验,内皮细胞体外迁移实验,观察各组细胞体外转移的情况。采用裸鼠皮下移植瘤抑制实验,用转染和未转染的SGC-7901细胞按每毫升5×10~7个的细胞悬液分别注射于BALB/C-nu/nu无胸腺裸鼠背部皮下,SC236处理组按3mg/（kg·d）剂量于接种SCC-7901细胞10min后,由尾静脉注射,隔日1次。各组6周后处死动物,观察皮下移植瘤的生长情况。并用Western blot法检测各组细胞VEGF及MMP-2蛋白的表达。结果：体外侵袭实验、促内皮细胞体外迁移实验结果显示,与对照组相比,转染组和SC236处理组迁移的肿瘤细胞和内皮细胞均减少（P〈0.01）;裸鼠皮下移植抑制实验结果显示,转染组和SC236处理组荷瘤鼠移植瘤的生长受到抑制;Western blot结果显示,转染组和SC236处理组细胞VEGF及MMP-2蛋白的表达下降。结论：反义COX-2基因能抑制SCG-7901细胞的转移能力,其机制可能与其抑制肿瘤的血管生成、减少MMP-2的表达有关。     

lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴调控胃癌SGC7901 细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探究lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴对胃癌（GC）SGC7901 细胞侵袭、迁移及上皮间质转化（EMT）的调控作用。方法：收集2014 年4 月至2017 年5 月武汉商职医院普外科手术切除的GC组织（非坏死部分）和配对癌旁组织（距肿瘤组织>5 cm）标本38 例,同时选取正常胃上皮细胞GES1 及GC细胞系SGC7901、HGC27、BGC823、MKN45 和MKN28。qPCR实验检测MALAT1、miR-141-3p 在GC组织和细胞系中的表达水平,CCK-8 和Transwell 实验检测敲降MALAT1 对SGC7901 细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 实验检测ZEB1、E-cadherin、N-cadherin 和Vimentin 的表达情况。双荧光酶素报告基因验证MALAT1、miR-141-3p 和ZEB1 的靶向关系,CCK-8 和Transwell 实验检测MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴对SGC7901 细胞生物学行为的影响。结果：MALAT1 在GC组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。敲降MALAT1 显著抑制了SGC7901 细胞增殖、迁移、侵袭及EMT（P<0.05 或P<0.01）;MALAT1 与miR-141-3p、miR-141-3p 与ZEB1 均具有直接靶向关系;进一步研究表明,同时过表达miR-141-3p 和MALAT1 或ZEB1 能够逆转miR-141-3p 对SGC7901 细胞生物学行为的抑制作用。结论：MALAT1通过靶向下调miR-141-3p 对ZEB1 的抑制作用,进而促进SGC7901 细胞侵袭、迁移及EMT。     

miR-153-3p通过靶向FZD3调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭与迁移

目的：探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：收集2018年5月至2020年6 月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上 皮细胞 GES-1,qPCR 法检测 miR-153-3p 在胃癌组织与细胞中的表达水平。将 miR-153-3p mimic 及 mimic 对照序列转染至 SGC7901细胞,用CCK-8、克隆形成、流式细胞术、TUNEL、Transwell和划痕愈合实验分别检测上调miR-153-3p对SGC7901细胞 增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。构建裸鼠SGC7901细胞移植瘤模型,观察miR-153-3p对肿瘤生长的影响。通过生物信息学数 据库和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-153-3p与FZD3靶向关系,WB法检测miR-153-3p对FZD3蛋白及Wnt/β-catenin 通路相关蛋白表达的影响。结果：miR-153-3p在胃癌组织和细胞中表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞（均P<0.01）,以SGC7901细胞中表达水平最低。上调 miR-153-3p 显著抑制 SGC7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并提高细胞凋亡率 （均P<0.01）,同时上调细胞中E-cadherin表达而下调N-cadherin、MMP2和MMP9表达（均P<0.01）。在体内实验表明,静脉注射 miR-153-3p mimic显著降低移植瘤体积和瘤组织中Ki-67表达而上调P57表达（均P<0.01）。机制分析表明 ,miR-153-3p 靶向 结合FZD3基因的3′UTR区域,上调 miR-153-3p 会抑制FZD3表达并上调β-catenin、TCF-4和cyclin D1水平（均P<0.01）。结论： miR-153-3p靶向FZD3并通过Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移。     

过表达miR-129-5p通过靶向MAPK1抑制宫颈癌HeLa细胞恶性生物行为

[摘要] 目的：探讨miR-129-5p 对宫颈癌HeLa细胞侵袭、迁移和EMT的作用及其机制。方法：选取宫颈癌HeLa细胞,利用生物信息学预测软件筛选miR-129-5p 的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-129-5p 和MAPK1 的靶向关系。将miR-129-5p mimic、miR-129-5p inhibitor 和pcDNA-MAPK1 单独或联合转染到HeLa细胞,用qPCR检测HeLa细胞中miR-129-5p 和MAPK1 的表达水平,用Transwell、划痕愈合实验分别检测HeLa 细胞的侵袭、迁移能力,WB检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、MAPK1、STAT3 和Bcl-xL的表达。构建裸鼠HeLa细胞皮下移植瘤模型,观察miR-129-5p 过表达对移植瘤生长的影响,WB检测移植瘤组织中EMT及MAPK1 通路相关蛋白的表达。结果：miR-129-5p 与MAPK1 在3’UTR区存在结合位点,过表达miR-129-5p 靶向抑制MAPK1（P<0.01）。与对照组相比,miR-129-5p mimic 组侵袭细胞数目减少（P<0.01）,划痕愈合率降低（均P<0.01）;细胞中Ecadherin表达上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3 和Bcl-xL 表达下调（均P<0.01）;共转染MAPK1 可逆转上述现象。成功建立裸鼠HeLa 细胞移植瘤模型,与对照组相比,miR-128-3p mimic 组肿瘤质量减轻（P<0.01）;瘤组织中E-cadherin 表达水平上调而N-cadherin、MAPK1、STAT3 和Bcl-xL 的表达下调（均P<0.01）。结论：过表达miR-129-5p 通过靶向MAPK1 抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭、迁移和EMT。     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

LncRNA-MALAT1在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨LncRNA-MALAT1对缺氧诱导胃癌侵袭转移的影响。方法:RT-PCR检测胃癌组织标本和胃癌细胞株中MALAT1的表达;通过基因重组方法构建MALAT1的siRNA载体,并感染人SGC7901及MKN45胃癌细胞,RT-PCR验证siRNA干扰有效;Transwell实验研究其对胃癌细胞SGC7901及MKN45侵袭转移能力的影响。结果:MALAT1在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达高于癌旁组织和胃正常上皮细胞;缺氧能够促进SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力,而下调MALAT1能够明显抑制缺氧条件下SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力。结论:MALAT1在促进胃癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用,为胃癌靶向治疗提供理论依据。     

胃癌细胞uPA表达与腹膜种植潜能的相关性研究

目的探讨不同胃癌细胞系尿激酶型血浆纤溶酶原激活因子(uPA)的表达及其与腹膜种植能力的关系。方法采用半定量RT-PCR、Western blot和ELISA方法,比较不同胃癌细胞系(AGS、SGC7901、MKN45和MKN28)uPA表达和uPA活性的差异。将胃癌细胞直接注入裸鼠腹腔,建立腹膜种植模型,通过观察裸鼠生存时间等方法,比较不同胃癌细胞系的腹膜种植潜能。结果uPA表达以SGC7901细胞最高,uPA活性以MKN45细胞最高,AGS细胞uPA表达和活性均最低。AGS未发生腹膜种植肿瘤;SGC7901和MKN45均出现大小不等的腹膜种植肿瘤;MKN28出现伴有血性腹水且大小相似的腹膜种植肿瘤;但MKN45最早形成腹膜种植肿瘤,并且该组裸鼠的生存时间最短。结论各株胃癌细胞的uPA表达在转录和翻译水平相一致,但uPA的表达量和uPA活性大小有明显差异,并且这二者与腹膜种植能力呈正相关。     

胃癌转移相关miRNA的差异表达谱及miR-218的生物学分析

目的 探讨胃癌转移相关微小RNA（miRNA）的差异表达情况并进行miR-218的生物学分析。方法 采用实时荧光定量PCR（qPCR）及miRNA芯片法检测低转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-NM、MKN28-NM）与高转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-M、MKN28-M）间miRNA的差异表达。提取不同转移潜能胃癌细胞系和10例胃癌冰冻组织及相应的转移淋巴结中的总RNA,利用qPCR检测miR-218在不同细胞及组织中的表达情况。结果 对不同转移潜能的胃癌细胞亚系进行芯片检测发现,与SGC7901-NM细胞比较,SGC7901-M 细胞有47个分子表达下调,15个分子表达上调。与MKN28-NM细胞比较,MKN28-M细胞有41个分子表达下调,83个分子表达上调。在SGC7901-M及MKN28-M细胞中,34个分子表达均出现下降,11个分子表达均出现上升。对不同转移潜能的胃癌细胞亚系以及人永生化正常胃黏膜细胞系GES进行检测可以发现,4种不同转移潜能的胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于正常胃黏膜细胞系GES,差异有统计学意义（P＜0.05）,且在高转移潜能胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于低转移潜能胃癌细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）。胃癌转移淋巴结中miR-218的表达水平为0.23±0.02,低于胃癌原发灶的1.09±0.05,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃癌转移相关miRNA会出现差异表达情况,高转移潜能胃癌细胞中的miR-218表达水平上调可能与胃癌转移存在一定关系。     

缺氧对胃癌细胞 BMPR -1A 表达及其侵袭和迁移能力的影响

目的：检测胃癌细胞中BMPR-1A在常氧和缺氧条件下的表达;探讨两种不同条件下BMPR-1A的不同表达对胃癌细胞侵袭和迁移的影响.方法：常氧条件下（氧气浓度20%）常规培养胃癌细胞SGC7901和MKN28;缺氧条件下（氧气浓度1%）用二氧化碳/氧气/氮气三气培养箱培养胃癌细胞SGC7901和MKN28 24小时.分别用蛋白质免疫印迹（Western blot）和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）的方法在蛋白水平和mRNA水平测定BMPR-1A的表达,以明确BMPR-1A在常氧与缺氧两种不同条件下的差异性表达;同时以Transwell实验检测在常氧和缺氧条件下由于BMPR-1A的差异性表达对胃癌细胞SGC7901和MKN28侵袭和迁移的影响.结果：缺氧条件下刺激胃癌细胞24h后,无论是在蛋白水平还是mRNA水平,BMPR-1A表达明显下降;Transwell实验结果也显示胃癌细胞接受缺氧刺激后其侵袭和迁移能力显著增强.结论：缺氧有增加胃癌细胞侵袭和迁移的能力,该作用机制可能与缺氧导致BMPR-1A的表达下降有关.     

胃癌细胞株中GnT-V表达水平的检测

目的检测正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株GnT-V的mRNA和蛋白质的表达水平。方法体外培养胃癌细胞株BGC823、SGC7901、MKN45和正常胃黏膜细胞株GES-1,应用RT-PCR、Real-time PCR、Westem blot等技术检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞GnT-V mRNA和蛋白质表达的水平。结果检测显示3株胃癌细胞（BGC823、SGC7901、MKN45）均表达CmT-V mRNA,其中BGC823、SGC7901呈高表达,MKN45则低表达GnT-V（P〈0．05）。各细胞相对正常对照组GnT-V的相对表达倍数分别为18．25,13．36,9．25。Western blot结果显示3株胃癌细胞均不同程度的GnT-V蛋白表达,而正常对照组不表达GnT-V蛋白。结论胃癌细胞不同程度表达GnT-V,各细胞中以BGC823表达量最高,SGC7901表达量居中,MKN45呈低表达,提示GnT-V可能对于胃癌的发生发展有一定的影响。     

Gab2通过调节EMT促进胃癌的侵袭转移

目的 探讨Gab2在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭转移能力的影响与机制。方法 采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织中Gab2、E-cadherin、N-cadherin及MMP-9的表达并分析其与淋巴结转移的关系。应用小RNA干扰技术,转染SGC7901细胞株,RT-PCR法检测瞬时转染后Gab2基因表达情况,体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化,Western blot法检测各蛋白的表达。结果 胃癌组织中Gab2的表达水平与淋巴结转移显著相关（P=0.002）,与E-cadherin的表达负相关（r=-0.693, P=0.000）,而与N-cadherin和MMP-9的表达水平正相关（r=0.407, P=0.021; r=0.335, P=0.017）。小RNA干扰技术降低Gab2蛋白的表达后SGC7901细胞侵袭转移能力降低,同时E-cadherin表达增多,N-cadherin和MMP-9蛋白表达降低。结论 Gab2可能通过调节EMT在胃癌侵袭转移中发挥重要作用。