miR-21通过靶基因ZNF326调控乳腺癌细胞侵袭、迁移的分子机制研究

目的:探讨微小RNA-21（miR-21）靶向锌指蛋白326(ZNF326)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。方法:采用qRT-PCR与Western blot法检测乳腺癌细胞株HCC70、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468与正常细胞株HBL-100中miR-21与ZNF326的表达。以miR-21表达量最高的乳腺癌HCC70细胞为研究对象，分为NC组、anti-miR-con组、anti-miR-21组、pcDNA-control组、pcDNA-ZNF326组；共转染分组为anti-miR-21+si-con组、anti-miR-21+si-ZNF326组。MTT法检测细胞增殖能力，Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。双荧光素酶报告基因系统验证miR-21与ZNF326的靶向调控关系。Western blot法检测CDK1、MMP-2蛋白的表达。结果:与正常细胞株HBL-100相比，乳腺癌细胞株HCC70、MDA-MB-231、BT549、MDA-MB-468中miR-21高表达，ZNF326 mRNA及蛋白表达水平均显著下降；分别与anti-miR-con组、pcDNA-control组比较，anti-miR-21组与pcDNA-ZNF326组HCC70细胞增殖能力显著下降，细胞迁移及侵袭能力明显降低，CDK1、MMP-2的表达水平明显降低；双荧光素酶实验结果表明miR-21能靶向结合ZNF326的3' UTR并调控其表达；与anti-miR-21+si-con组相比，anti-miR-21+si-ZNF326组HCC70细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显增强，促进CDK1、MMP-2表达。结论:miR-21可靶向抑制ZNF326基因的表达，进而促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

shRNA对乳腺癌细胞VEGF-C表达的抑制作用

目的:观察RNA干扰技术对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响.方法:制备针对VEGF-C的三种小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),分别是siRNAa、siRNAb、siRNAc,筛选靶向基因最有效siRNA,据此设计短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)寡核苷酸链,构建pGenesil-1/VEGF-C重组质粒表达载体.利用脂质体将此质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR、免疫组织化学染色法和Westem blot方法检测VEGF-C的变化情况,利用Quantity One软件对RT-PCR、Western blot图像进行半定量分析,用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件测量并分析免疫组织化学染色法结果.结果:RT-PCR结果显示siRNAa、b、c对MDA-MB-231均有抑制作用,与空白对照组、脂质体组的差异性显著(P＜0.05),siRNAa抑制率最高(72.41%).利用针对siRNAa合成的shRNA与质粒pGenesil-1构建表达裁体pGenesil-1/VEGF-C,酶切鉴定及测序结果均表明构建成功.将其转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,RT-PCR、免疫组织化学染色法和Western blot方法检测均表明VEGF-C的表达明显受到抑制(P＜0.05).结论:shRNA RNA干扰技术可以有效沉默人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中VEGF-C的表达,提示该技术可能是抑制乳腺癌淋巴管生成的有效手段.     

靶向EGFR基因的shRNA抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖的研究

目的探讨EGFR基因对胰腺癌PANC-1细胞的增殖抑制作用。方法构建针对EGFR序列特异性shRNA的表达载体,用脂质体转染胰腺癌PANC-1细胞。采用RT-PCR、Western blot检测EGFR mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;克隆形成实验检测细胞增殖。结果靶向EGFR的序列特异性shRNA明显抑制EGFR mRNA和蛋白的表达,EGFR mRNA和蛋白的抑制率分别为72.1％和67.6％;G1期细胞增多、S期细胞减少(P<0.05);细胞凋亡增加(P<0.05);克隆形成减少(P<0.05)。结论靶向EGFR的序列特异性shRNA能明显抑制胰腺癌细胞增殖、促进凋亡。     

shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响

目的:探讨shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C基因表达的影响.方法:制备针对EIF4E的三种小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),分别是siRNA1、siRNA2、siRNA3,筛选沉默最有效的siRNA,据此设计短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)寡核苷酸链,与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接,构建pGPU6/GFP/Neo-EIF4E重组质粒,经酶切鉴定后利用脂质体LipofectamineTM2000将鉴定正确的重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学法检测EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达情况.结果:RT-PCR结果显示siRA1、siRNA2、siRNA3对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E基因表达均有抑制作用,与空白对照组、阴性对照组、脂质体组比较差异显著(P<0.05),尤以siRNA3抑制率最高达71.2%.利用针对siRNA3合成的shRNA与质粒载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接构建的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E,酶切鉴定表明构建成功,并稳定转染MDA-MB-231细胞,平均转染效率为80%.RT-PCR、Western blot结果显示,稳定转染重组质粒后MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05),抑制率分别为79.00%、67.90%(EIF4E)和77.01%、62.94%(VEGF-C).免疫细胞化学染色法显示重组质粒组EIF4E及VEGF-C蛋白表达均受到明显抑制(P<0.05).结论:靶向EIF4E的shRNA不仅能有效沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中EIF4E的表达,且能抑制VEGF-C的表达,提示EIF4E可能参与诱导乳腺癌细胞VEGF-C的表达,而EIF4E-shRNA可能成为抑制乳腺癌淋巴管生成的一种新的有效手段.     

三氧化二砷抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞生长及其机制的研究

背景与目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌MDA-MB-468细胞的生长抑制作用及其对syk表达的影响.材料与方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度As2O3作用MDA-MB-468细胞不同时间后,对细胞增殖的抑制作用;显微镜观察细胞的形态变化;As2O3作用细胞后用流式细胞术检测细胞周期及Syk蛋白表达变化;RT-PCR检测syk mRNA的表达变化.结果:As2O3可显著抑制MDA-MB-468细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);As2O3,可使细胞周期阻滞在S+G2/M期;候选抑癌基因syk在乳腺癌MDA-MB-468细胞中表达,经As2O3作用后,MDA-MB-468细胞syk mRNA和Syk蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论:As2O3可能通过上调候选抑癌基因syk的表达,抑制MDA-MB-468细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用.     

趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞体外侵袭和定向肺转移的影响

目的 利用RNA干扰技术下调趋化性细胞因子受体CXCR4基因的表达,探讨其沉默对乳腺癌细胞体外侵袭及肺转移潜能的影响.方法 设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(shRNA),将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久细胞克隆.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测shRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响.利用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力.二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖状况.通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射方法,构建肺转移模型,检测CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞肺转移能力的影响.结果 成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体,稳定转染CXCR4-shRNA的乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调(29.5%±3.8%比69.7%±2.6%,15.4%±1.1%比39.0%±2.4%;均P<0.01),体外侵袭能力减弱,增殖速度减慢,肺转移能力下降.结论 以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,降低人乳腺癌细胞体外侵袭、增殖以及肺转移的能力.CXCR4是乳腺癌侵袭和转移过程中的重要调控因子.     

B7-H3沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学功能的影响

目的:探讨B7-H3沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化及生物学行为的影响。方法:通过脂质体Lipofectamine TM 2000转染B7-H3 siRNA干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3到乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选后获得B7-H3沉默细胞株MDA-MB-231-ShB7-H3,利用qRT-PCR及Western blot分别检测对照组(WT)、无关干涉组(ShNC)和B7-H3干涉组(ShB7-H3)细胞中B7-H3、EMT标志分子mRNA及蛋白表达水平;利用Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;利用MTT细胞增殖实验评价各组细胞增殖情况。结果:通过qRT-PCR和Western blot证实B7-H3沉默表达的MDA-MB-231细胞株构建成功;与对照组细胞相比,B7-H3沉默表达抑制MDA-MB-231细胞EMT进程,上皮细胞标志分子E-cadherin和ZO-1表达上调,而间质细胞标志分子vimentin和αSMA表达下调;Transwell实验及MTT细胞增殖实验结果表明B7-H3沉默抑制MDA-MB-231细胞迁移、侵袭及增殖能力。结论:我们的研究结果强调了B7-H3在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的重要作用,并提示B7-H3与乳腺癌细胞EMT、转移密切相关,并为以B7-H3为靶点的乳腺癌转移治疗提供初步的实验及理论基础。     

内源性谷氨酰胺合成酶对C6胶质瘤细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的建立稳定高表达和靶向干扰谷氨酰胺合成酶（GS）细胞株观察GS对C6胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法将已构建的GS- pEGFP-N3、GS-shRNA真核表达载体和空载体pEGFP-N3通过脂质体介导分别转染C6胶质瘤细胞株,G418持续筛选并用Western blot鉴定,MTS法和克隆形成实验观察GS对C6胶质瘤细胞增殖的影响,用MTS黏附实验、划痕损伤实验和transwell侵袭实验检测GS对细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响。结果Western blot证实过表达细胞株有超量GS蛋白表达,而shRNA细胞株未检测到GS信号;GS过表达细胞增殖、克隆形成能力和侵袭性显著降低而黏附能力显著增强;shRNA细胞增殖和克隆形成能力无显著性变化,黏附能力显著降低,而侵袭性显著增强。结论成功建立GS稳定高表达和靶向干扰C6胶质瘤细胞株,并证实GS表达水平影响胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

CNTN1基因对乳腺癌细胞株Hs578T增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的：研究CNTN1基因对乳腺癌细胞株Hs578T细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。方法：将前期构建的稳定表达pEGFP－N1－CNTN1的Hs578T细胞系,采用MTT、流式细胞仪技术、平板克隆实验及Transwell实验检测pEGFP－N1－CNTN1对Hs578T细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。结果：与空白组及对照组相比,过表达CNTN1基因的Hs578T细胞增殖能力、克隆形成、迁移及侵袭能力增强（P＜0．05）。结论：CNTN1基因能够增强Hs578T细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。     

胰岛素样生长因子1型受体短发夹RNA抑制乳腺癌增殖和迁移能力的体外实验研究

目的 应用短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）抑制乳腺癌MDA—MB-231细胞胰岛素样生长因子1型受体（type I insulin—like growth factor receptor,IGF-1R）的表达,探讨IGF～1R对乳腺癌体外增殖和迁移的作用。方法构建携带有绿色荧光蛋白报告基因的IGF-1R shRNA质粒载体,脂质体介导转染MDAMB-231细胞,通过倒置荧光显微镜检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖能力,体外迁移实验检测细胞迁移能力。细胞增殖实验结果的组间比较采用重复测量方差分析和多元方差分析,RT—PCR定量结果和迁移实验结果的组间比较采用单因素方差分析。结果成功构建IGF-1RshRNA质粒载体,转染效率为55％～60％。IGF-1R shRNA转染MDA—MB-231细胞后,MDA—MB-231细胞IGF-1R mRNA与蛋白表达水平显著下降;细胞体外增殖和迁移能力受到显著抑制（P均〈O．05）。结论IGF-1R shRNA表达质粒可以有效抑制MDA—MB-231细胞IGF-1R的表达,显著抑制乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力。     

RNA干扰抑制MTA 1的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨通过RNA干扰技术抑制MTA1的表达及对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和细胞周期的影响。方法:建立3种稳定表达靶向MTA1的shRNA的MDA-MB-231细胞系。通过反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法验证基因表达的抑制效果;采用细胞计数法及噻唑蓝(thiazolylblue,MTT)法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期。结果:MTA1基因被抑制后,其mRNA表达明显下降,RT-PCR结果显示,稳定转染3种重组质粒后,MTA1mRNA水平较对照组分别下调了70.07%、82.40%和63.44%;同时,MDA-MB-231细胞的生长明显受抑制,与对照组细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低;MTT分析示细胞增殖下降,流式细胞分析示细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:在MDA-MB-231细胞中,抑制MTA1的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞;利用RNA干扰技术抑制MTA1的表达可能会成为一种有效的乳腺癌基因治疗手段。     

Survivin shRNA干扰对食管癌细胞CDK4 mRNA表达的影响

目的： 以shRNA抑制食管癌ECA109细胞内Survivin的表达,探讨Survivin shRNA干扰对CDK4基因表达的影响。方法：ECA109细胞分为Survivin shRNA干扰组、质粒对照组和空白细胞组,采用RNA干扰技术沉默ECA109细胞株中Survivin基因的表达,RT-PCR检测各组细胞中Survivin和CDK4 mRNA的表达,Western blot方法检测各组细胞Survivin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果：与质粒对照组及空白细胞组比较,Survivin shRNA干扰组细胞Survivin mRNA及蛋白表达下调,CDK4 mRNA表达明显降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05);Survivin shRNA干扰组G2期延长,G2期细胞比例增加,细胞G2期增殖阻滞。结论：Survivin基因可能在转录水平对CDK4具有调控作用,其具体调控机制有待进一步研究。     

shRNA介导的Y-盒结合蛋白-1表达沉默抑制神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的体内成瘤能力

目的:观察shRNA介导的Y-盒结合蛋白-1(YB-1)表达沉默对神经母细胞瘤细胞体内成瘤能力的影响.方法:构建针对YB-1的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,利用LipofectamineTM2000脂质体转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞.Western blot技术检测干扰后YB-1蛋白表达水平变化.平板克隆形成实验检测YB-1蛋白受抑是否影响细胞凋亡.通过测量肿瘤体积和重量评估YB-1蛋白受抑对裸鼠体内成瘤的影响.HE染色和TUNEL实验评估干扰对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响.结果:Western blot技术检测无效转染组(NC组)与对照组(SH-SY5Y组)相比,YB-1表达量无显著差异,而转染组(YB-1 shRNA组)与SH-SY5Y组相比,YB-1表达水平明显下降.克隆形成实验显示NC组细胞克隆形成能力与SH-SY5Y组细胞相比未发生显著变化(P>0.05),而与SH-SY5Y组相比,YB-1 shRNA组克隆形成能力显著下降(P<0.01).裸鼠成瘤统计分析结果显示,SH-SY5Y组的平均肿瘤体积和平均肿瘤重量明显高于YB-1 shRNA组(P<0.01),NC组肿瘤体积与重量与SH-SY5Y组相比无明显差异(P>0.05).HE染色和TUNEL染色发现SH-SY5Y组和NC组细胞与YB-1 shRNA组相比分裂活跃,凋亡细胞较少.结论:shRNA介导的YB-1表达沉默抑制细胞生长,诱导凋亡,显著抑制神经母细胞瘤的体内成瘤能力.     

shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞增殖活性的影响

背景与目的：CXCR4足趋化细胞因子SDF—l（基质细胞衍生因子-1）的受体：CXCR4／SDF-1轴在肿瘤侵袭，转移中具有重要作用．阻断CXCR4／SDF-1轴，有可能成为一个新的肿瘤治疗标靶，本研究拟探讨shR-NA—CXCR4对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA—MB-231，MDA．MB435s细胞增殖活性的影响。方法：通过质粒shRNA—CXCR4沉默CXCR4基因后．RT—PCR，Weslernblot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表达；MTT．流式细胞仪检洲它们的增殖结果：质粒shRNA—CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞后能明显抑制其CXCR4基因的tuRNA（MDA—MB-23l：实验组CXCR4／GAPDH为0．152．空白组和阴性对照组分圳为0．40及0．45．MDA-MB-435s：实验组为0．198，空白对照组和阴性对朋组分别为0．690及0．775，MCF-7：实验组为0．089，空白对照组和阴性对照组分别为0．327及0．313）及蛋白表达水平（MDA—MB-231：实验组CXCR4／β-actin为0．153，空白组和阴性对照组分圳为0．829及0．878，MDA—MB-435s：实验组为0．173，空白对照组和阴性对照组分别为0．877及0．906，MCF-7：实验组为0．177，空白对照组和阴性对照组分别为0．911及0．874）（P〈0．05）；MTT显示能明显抑制3株人乳腺癌细胞的增殖（P〈0．05）；流式细胞仪显示3株人乳腺癌细胞S期细胞数量明显减少（P〈0．05），将更多的细胞阻滞在G0／G1朗（P〈0．05）结论：shRNA—CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细咆生长和增殖一可能是治疗乳腺癌的一个潜在治疗耙点。     

两位点短发卡状RNA诱导AKT2基因沉默在卵巢癌细胞紫杉醇敏感性中的应用研究

目的：探讨AKT2基因在肿瘤细胞对紫杉醇敏感性中的作用。方法：分别构建2个针对同一AKT2基因不同位点的短发卡状RNA（shRNA）载体，转染人卵巢癌细胞A2780、SKOV3，荧光显微镜观察细胞内荧光蛋白的表达及转染效率，运用RT—PCR、蛋白质免疫印迹（western blotting）方法比较单独转染的抑制瘤和共转染对AKT2表达的沉默效率；抑制AKT2表达后，流式细胞仪（FACS）检测肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性。结果：构建的2种shRNA表达载体均可抑制AKT2mRNA和蛋白的表达，共转染的抑制率明显高于分别单独转染的抑制率（P〈0．05）；FACS结果显示，共转染沉默AKT2基因后，细胞凋亡率明显增加（P〈0．05）。结论：共转染针对AKT2基因不同位点的2个shRNA真核表达载体，对AKT2基因的抑制效率高于单独转染1个载体；抑制卵巢癌细胞中AKT2基因表达，能增强其对紫杉醇的敏感性。     

shRNA干扰RACK1表达增强口腔鳞癌细胞放射敏感性的研究

目的 探讨下调RACK1基因表达对口腔鳞癌细胞生长及放射敏感性的影响。方法 构建RACK1基因的shRNA载体,通过脂质体转染技术将其转入口腔鳞癌HSC-3细胞,G418筛选得到稳定转染细胞。荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞中RACK1mRNA和RACK1蛋白表达水平;CCK8实验检测细胞生长能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;克隆形成实验检测下调RACK1表达联合X射线照射对细胞增殖能力的影响。构建裸鼠移植瘤模型,观察下调RACK1基因表达联合X射线照射对口腔鳞癌的生长抑制作用。结果 RT-PCR和Western blot结果显示转染后HSC-3细胞RACK1mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),RACK1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK8实验结果显示下调RACK1表达可抑制HSC-3细胞生长(P<0.05),联合X射线照射使细胞凋亡率明显升高(P<0.05),外侵袭穿透细胞数显著减少(P<0.05)。克隆形成实验结果显示shRACK1组的存活分数低于对照组,放射增敏比为1.37(D0值比)。裸鼠移植瘤实验显示shRACK1组照射后瘤体生长缓慢,瘤体体积减小幅度低于对照组(P<0.05),瘤体质量低于对照组(P<0.05)。结论 下调RACK1表达可以增强口腔鳞癌细胞的放射敏感性,为提高口腔鳞癌放射敏感性研究提供新思路。     

下调ALK2对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2，下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达，研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组，空载病毒（RFP）作为感染对照，并设空白对照组，通过倒置荧光显微镜观察和RT-PCR检测病毒在MDA-MB-468细胞中的表达水平，通过MTT、平板集落形成、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果:倒置荧光显微镜观察显示Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞的荧光效率高；RT-PCR证实Ad-siALK2感染的MDA-MB-468细胞ALK2的mRNA表达显著下降；MTT法、平板集落形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验证实MDA-MB-468细胞Ad-siALK2组相比对照组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低（P<0.05），穿膜细胞数也明显减少（P<0.05）。结论:下调ALK2表达后可以在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移与侵袭，为后续实验研究奠定了基础。     

干扰赖氨酰氧化酶基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响

目的探讨抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响及其机制。方法将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为实验组(RNAi组)、阴性对照组(Mock组)和空白对照组(Con组);设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞。以荧光定量PCR检测LOX mRNA及增殖因子Ki-67、cyclinD1的表达;Western blot法检测LOX基因蛋白的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验观察各组细胞生长及增殖情况。结果转染LOX-RNAi-LV后,MDA-MB-231细胞中LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞生长、增殖能力明显减弱,细胞集落形成率明显降低,相关增殖因子Ki-67和cyclin D1 mRNA的表达均明显下降(P<0.05)。结论转染LOX-RNAi-LV可有效干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中LOX mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的生长、增殖,其作用机制可能与下调Ki-67、cyclinD1的表达有关。