喷他脒增强K562细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡敏感性

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种理想的抗肿瘤药物，但许多肿瘤细胞常对TRAIL。诱导凋亡耐受。本研究探讨了喷他脒增强白血病K562细胞对TRAIL。诱导凋亡敏感性方法：利用光镜彤态学和Annexin V FITC／PI双标记凋亡细胞的流式细胞仪（FACS）测定两种方法观察喷他脒预处胛K562细胞并继用TRAIL后凋亡的发生，应用蛋白印迹方法观察此过程中半胱氯酸一天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3，-8和聚ADP核糖聚合酶（PARP）等3种蛋白的蛋白剪切与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）蛋白表达的改变，结果：在10μg／ml喷他脒作用K562细胞20h，K562细胞未发生凋亡，继用200ng／ml TRAIL。作用4h后，光镜和Annexin V FITC／PI双标记流式细胞仪方法均观察到细胞发生明显凋亡，井出现了Caspase-3，-8和PARP蛋白剪切．两者单独作用则无明显细胞凋亡发生．另外，喷他脒明显降低了XlAP表达结论：喷他眯联合TRAIL可能成为肿瘤治疗的一种新策略。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人骨肉瘤的作用

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对人骨肉瘤的作用,以及此作用与TRAIL受体（TRAILR）在人骨肉瘤中表达的相关性。方法应用原位杂交、Western blot方法检测人骨肉瘤细胞系MG-63及新鲜骨肉瘤组织块中TRAILR的表达;将在大肠杆菌中表达的TRAIL纯化后用于MG-63及新鲜骨肉瘤组织块,同法处理人白血病细胞株Jurkat作为阳性对照。MTT法检测细胞毒作用;流式细胞术检测凋亡,光镜下观察形态学变化,计数细胞,绘制生长曲线,测定细胞倍增时间。结果人骨肉瘤中死亡受体DR4、DR5呈高表达而诱惑受体DcR1、DcR2呈低表达,但TRAIL抑制人骨肉瘤细胞增殖而不能诱导其凋亡,MG-63在TRAIL作用下变肥大且呈编织排列。结论人骨肉瘤细胞对TRAIL耐受与其诱惑受体表达无关,TRAIL能改变体外培养的人骨肉瘤细胞形态及增殖动力学。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

目的　探讨TRAILR在肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)中的表达及其临床意义。方法　采用原位杂交方法检测了 6 0例肝癌组织、两种肝癌细胞株以及 2 0例正常肝组织中TRAILR的表达 ,并结合临床资料进行分析。结果　 6 0例肝癌组织及 2 0例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织DR表达量。 5 4例肝癌组织不表达诱捕受体DcR1( 90 % ) ,2 5例肝癌组织不表达DcR2 ( 41.7% ) ,而 2 0例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达 ,两者间有显著差异性。两种肝癌细胞株中均检测到DR5、DR4、DcR2的表达 ,但DcR1表达缺失。HCC组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分级有关 ,低分化的肿瘤DR表达减少 (P <0 .0 1) ,Ⅲ /Ⅳ期肿瘤DR的表达显著低于Ⅰ/Ⅱ级DR表达 (P <0 .0 5 )。DR的表达与病人的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤的大小以及是否转移无关。肿瘤细胞耐药株DR表达降低。结论　HCC普遍存在TRAILR的表达 ,并存在受体类型的表达差异。DcR1的表达大多缺失有利于TRAIL治疗HCC。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对胰腺癌细胞抗肿瘤作用的研究

Objective To investigate the antitumor effect of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)gene transfection mediated by adenovirus into human pancreatic carcinoma cell line Panc-1, and the mechanisms involved in this effect. Methods TRAIL gene was transfected into pancreatic cancer cell line Panc-1 by an adenovirus vector (Ad-TRAIL).Level of TRAIL mRNA expression was determined using RT-PCR, and TRAIL protein synthesis was evaluated with Western blot. Cell-growth activities were determined by MTT assay. The bystander effect was observed by co-culturing the Panc-1cells with the transfected TRAIL gene at different ratios. Apoptosis in pancreatic cancer cells was detected by flow cytometry.Procaspase-8 and procaspase-3 were determined by Western blot. Results The stable overexpression of TRAIL was detected in Panc-1 cells transfected by Ad-TRAIL. Ad-TRAIL significantly inhibited of cell viability of Panc-1 cells. Furthermore,co-culture of cancer cells transfected with TRAIL with that nontransfected resulted in the cell death of both cells by bystander effect. Moreover, the percentage of apoptotic cells was significantly higher in the Ad-TRAIL-treatment group compared to the control groups (P ＜ 0.01). And there was a diminished amount of procaspase-8 and procaspase-3 after infection with Ad-TRAIL. Conclusion The overexpression of TRAIL gene in Panc-1 cells by Ad-TRAIL exerts its antitumor effects, and themechanisms involved in this effect may be proapoptosis and bystander effect.     

姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用。方法:CCK-8法测定Cur、TRAIL及Cur联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,流式细胞技术测定细胞周期及凋亡率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3表达水平的变化。结果:与对照组比较,Cur联合TRAIL组能显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.05),呈时间依赖性,且使PC-3细胞阻滞于G2/M期比例明显增多(P<0.05)。镜下可见联合应用Cur和TRAIL处理的PC-3细胞凋亡形态改变明显,凋亡率较对照组高(P<0.05),凋亡蛋白caspase-3表达也增强。结论:Cur与TRAIL联用可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的研究

方法 采用原位杂交方法检测肝癌组织、肝癌细胞株以及正常肝组织中TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL蛋白处理肝癌细胞株Hep2和SMMC7721,应用流式细胞仪和原位末端标记,观察经药物处理前后该细胞株的凋亡发生率。结果 60例肝癌组织及20例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织。54例(90．0％)肝癌组织不表达诱捕受体DcR1,25例(41．7％)肝癌组织不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达,不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达,两者间差异有显著性。两种肝癌细胞株中均可检测到DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。肝癌组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分期有关,低分化的肿瘤DR表达减少(P＜0．01),Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR表达显著低于I、Ⅱ期(P＜0．05)。DR表达与患者的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。结论 肝细胞肝癌普遍存在TRAILR的表达,并存在受体类型的表达差异。但单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体与肝癌

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及受体能在肝癌细胞中特异性地表达,并通过死亡受体特异性地诱导肿瘤细胞凋亡;TRAIL联合放疗、化疗能有效地克服肿瘤细胞的TRAIL耐受,促进肿瘤细胞凋亡,同时TRAIL的基因治疗在抗肿瘤临床治疗上已得到广泛的应用.     

乳腺癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐受的分子机制

0引言 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)是淋巴细胞分泌的一种能诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子,但是由于TNF对正常细胞也有同样的细胞毒性,因而限制了TNF的临床应用.1996年Pitti等[1]研究发现另外一种能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的TNF家族成员,这个成员就是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL),由于TRAIL具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡能力而对大部分正常细胞毒性非常低,因而使用TRAIL进行肿瘤治疗引起广泛的关注.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肿瘤细胞PRDXs表达影响的观察

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肿瘤细胞中过氧化氧化还原蛋白(PRDXs)表达的影响及其机制。方法:选取肿瘤细胞,设立对照组和TRAIL处理组;用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测PRDXs在各种肿瘤细胞中的表达;用PCR法克隆PRDX4启动子,用萤光素酶含量测定其含量。结果:与对照组相比,TRAIL处理组中PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5和PRDX6mRNA及蛋白表达差异无统计学意义,P>0.05;PRDX4mRNA和蛋白的表达显著降低,P<0.01;放线菌素D处理8h时,TRAIL处理组与对照组中PRDX4mRNA降解近50%,差异无统计学意义,P>0.05;TRAIL显著降低pPRDX4/-979的活性呈剂量依赖方式。结论:TRAIL在转录水平上下调肿瘤细胞中PRDX4基因的表达,对PRDX4mRNA的稳定性没有影响。     

顺铂通过促进死亡受体4在脂筏内聚集增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胃癌MGC803细胞凋亡的作用

目的 探讨顺铂影响胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的机制.方法 以顺铂和TRAIL单独及联合作用MGC803细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8和caspase-3的蛋白表达,免疫荧光显微技术观察脂筏和死亡受体4(DR4)的分布.以50 mg/L的制霉菌素预处理MGC803细胞1 h,之后加入顺铂和TRAIL,观察细胞凋亡的变化.结果 100 μg/L TRAIL作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(8.51±3.45)%,细胞凋亡率为(3.26±0.89)%.8.49 mg/L顺铂作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(52.58±4.57)%,细胞凋亡率为(23.10±3.41)%.100 μg/L TRAIL和8.49 mg/L顺铂联合作用时,细胞增殖抑制率提高至(76.43±5.35)%,细胞凋亡率提高到(42.56±4.11)%,均高于相同浓度顺铂和TRAIL单独作用组(P＜0.05).同时检测到caspase-8和caspase-3的裂解.TRAIL未引起明显的脂筏和DR4聚集,而顺铂明显促进了DR4在聚集脂筏内的定位.50 mg/L制霉菌素处理MGC803细胞24 h,细胞凋亡率为(3.66±0.52)%.经制霉菌素预处理后,顺铂作用下MGC803细胞的凋亡率为(22.76±2.97)%,与未经制霉菌素预处理组[(25.74±3.28)%]差异无统计学意义(P=0.248);而顺铂和TRAIL联合作用下细胞凋亡率为(31.52±3.99)%,与未经制霉菌素预处理组[(43.16±4.26)%]差异有统计学意义(P＜0.001).结论 顺铂通过促进死亡受体在脂筏聚集增强了TRAIL诱导的胃癌MGC803细胞凋亡.

Abstract：

Objective Gastric cancer cells are insensitive to tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). To sensitize gastric cancer cells to TRAIL, we treated gastric cancer MGC803 cells with TRAIL and cisplatin. Methods Cell proliferation was measured using MTT assay. Cell apoptosis was determined by flow cytometry. Expression of proteins was analyzed by Western blot. The distribution of lipid rafts and death receptors was analyzed by immunofluorescence microscopy. MGC803 cells were pretreated with 50 mg/L nystatin for 1 h, and followed by the treatment of cisplatin and TRAIL. Results 100 μg/L TRAIL resulted in (8.51±3.45)% inhibition of cell proliferation and caused (3.26±0.89)% cell apoptosis in MGC803 cells. Compared with the treatment with cisplatin alone, treatment with TRAIL (100 μg/L) and cisplatin (8.49 mg/L, IC50 dose of 24 h) led to a dramatic increase in both inhibition of cell proliferation [(52.58±4.57)% vs. (76.43±5.35)%, P＜0.05]and cell apoptosis [(23. 10±3. 41)% vs. (42.56±4.11)%, P＜0.05]. Moreover, cleavage of caspase-8 and caspase-3 was detected. TRAIL (100 μg/L) did not induce obvious lipid rafts aggregation and death receptor 4 (DR4) clustering, while cisplatin (8.49 mg/L) significantly promoted the localization of DR4 in aggregated lipid rafts. Pretreatment with 50 mg/L nystatin, a cholesterol-sequestering agent, triggered (3.66±0.52)% cell apoptosis after 24 h. Pretreatment with nystatin for 1 h before the addition of 8.49 mg/L cisplatin for 24 h caused a decreased tendency to cell apoptosis [(25.74±3.28)% vs. (22.76±2.97)%]. While, pretreatment with nystatin before the addition of cisplatin and TRAIL, the proportion of apoptotic cells decreased from (43. 16±4.26)% to (31.52 ± 3.99)% (P＜0.05). Conclusion Cisplatin enhances TRAIL-induced apoptosis in gastric cancer MGC803 cells through clustering death receptors into lipid rafts.     

锌指蛋白KLF4在K562细胞株中的表达和作用

 目的　研究锌指蛋白KLF4在慢性粒细胞白血病细胞株K562中的表达,探讨KLF4在其中的作用。方法　采用RT-PCR及蛋白印迹法检测KLF4 mRNA、KLF4蛋白在K562细胞株和健康人单个核细胞中的表达。结果　KLF4在K562细胞株中表达,KLF4 mRNA表达量为0.02±0.01,与其在健康人单个核细胞中的表达0.43±0.03比较,差异有统计学意义。KLF4蛋白在K562细胞株中的表达也明显低于正常对照组。结论　KLF4在K562细胞株中呈低表达,提示KLF4可能具有肿瘤抑制因子作用,但其对白血病的增生、凋亡及耐药机制需要进一步研究。     

氯化镧对人白血病细胞系K562生长的影响

 目的 了解稀土氯化镧（LaCl3）对白血病细胞系K562生长和凋亡的影响,为临床应用LaCl3治疗白血病提供理论依据。方法 用MTT法鉴定LaCl3对K562细胞生长增生的影响;显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞术及TUNEL法鉴定细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期的变化。半固体琼脂糖培养法观察LaCl3对正常骨髓细胞形成粒－巨噬细胞集落的影响。结果 在所研究的浓度范围内,随着LaCl3浓度升高,K562细胞生长抑制率增高、凋亡率增加,呈剂量依赖性关系。随着作用时间延长,1 mmol／L LaCl3对细胞的抑制率增高、凋亡率增加,呈时间依赖性关系;K562细胞G0／G1期细胞百分率升高而S期细胞百分率下降。0.1及0.5 mmol／L LaCl3显示出对正常骨髓祖细胞有轻度刺激增生效果,而较高浓度（1.5～2.0 mmol／L）,正常骨髓祖细胞形成集落数下降且含有较多巨噬细胞,集落细胞形态正常,没有显示凋亡形态。结论 在所研究浓度范围内,稀土LaCl3能抑制K562细胞生长并且诱导细胞凋亡,呈剂量及时间依赖性关系;但对正常骨髓造血细胞的影响还有待于进一步研究。     

HnRNP E2诱骗RNA对白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制

背景与目的:BCR/ABL诱导多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-bindingproteinE2,hnRNPE2]的异常表达在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)急变中起着重要作用。本研究探讨hnRNPE2诱骗RNA(decoyRNA)对人白血病细胞K562增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:构建能转录出hnRNPE2诱骗RNA的质粒载体,将其经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达的细胞,台盼蓝法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,并用RT-PCR和Westernblot方法检测下游CCAAT增强子结合蛋白!(CCAAT/enhancer-bindingprotein!,C/EBPα)和c-myc的表达。结果:稳定表达诱骗RNA的K562细胞增殖受抑,增殖抑制率为(62.73±12.92)%;细胞周期阻滞于S期[稳定表达诱骗RNA细胞组(55.59±4.67)%,对照组(44.70±4.21)%,P<0.05];C/EBPαmRNA无改变,但在蛋白水平42ku-C/EBPα表达升高了(49.72±5.58)%;c-mycmRNA下降了(58.27±7.23)%,蛋白水平降低了(57.26±6.52)%。结论:hnRNPE2诱骗RNA能抑制K562细胞的增殖,其机制可能与诱骗RNA阻断hnRNPE2和C/EBPαmRNA的结合后,引起42ku-C/EBPα表达升高有关。     

TRAIL及其受体在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体TRAIL-R2和TRAIL-R4在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测79例NSCLC患者与80例正常人血清中TRAIL的表达水平,采用免疫组织化学法检测42例NSCLC组织及配对癌旁正常组织中TRAIL-R2和TRAIL-R4的表达水平.分析TRAIL、TRAIL-R2、TRAIL-R4与NSCLC患者临床病理特征的关系.结果 TRAIL在NSCLC患者血清中的表达明显低于正常人[(994.3±293.0) ng/ml∶(1 141.7 ±266.1) ng/ml],差异具有统计学意义(t=3.29,P=0.00).TRAIL的表达与NSCLC患者的临床分期(F=2.28,P=0.00)、分化程度(t=5.76,P=0.00)相关.TRAIL-R2在NSCLC组织中的阳性表达率为73.8％ (31/42),明显低于正常组织中的阳性表达率100.0％ (42/42)(x2=3.88,P=0.05),TRAIL-R2的表达与NSCLC患者的临床分期(x2=27.89,P=0.00)、分化程度(x2=9.50,P=0.00)相关.TRAIL-R4在NSCLC组织中的阳性表达率为81.0％ (34/42),明显高于正常组织中的阳性表达率50.0％(21/42)(x2=7.34,P=0.01),TRAIL-R4的表达与NSCLC患者的临床分期(x2=17.82,P=0.00)、分化程度(x2=4.47,P=0.03)相关.在NSCLC组织中,TRAIL-R4与TRAIL-R2的表达呈负相关(r=-0.67,P=0.01).结论 在NSCLC中,TRAIL、TRAIL-R2表达减少,TRAIL-R4表达增多,三者可能促进了NSCLC的发生发展,可为NSCLC临床治疗提供靶点.     

靶向激活蛋白激酶PKR对白血病K562细胞增殖的影响及机制

背景与目的:由t(9;22)(q34;q11)导致的bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中起着重要的作用.本研究运用CML特异的bcr/abl融合基因的mRNA与外源重组反义RNA形成双链RNA (double strand RNA,dsRNA)能激活双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)的策略,研究其对白血病K562细胞增殖的影响及可能的机制.方法:将dsRNA类似物聚肌苷酸-聚胞啶酸(Polyriboinosinic Polyribocytidylic Acid,polyIC)、含ber/abl融合基因序列40bp的逆转录病毒载体RV-40AS、RV-40AS 2-氨基嘌呤(2-aminopurine,2AP)和含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的逆转录病毒载体RV-GFP作用于K562细胞,并以ECV304细胞作对照细胞株.通过细胞计数、MTT法和半固体集落形成实验检测其对细胞生长增殖的影响,用流式细胞仪检测处理前后细胞周期的变化,用Western blot法检测细胞内PKR、磷酸化PKR(phosphated PKR,p-PKR)、真核翻译启始因子2α(eukaryotic initiation factor-2α,eIF2α)、磷酸化eIF2α(phosphated eIF2α,p-eIF2α)蛋白表达的变化,用3H-亮氨酸掺入实验检测细胞总蛋白合成水平的变化.结果:polyIC对K562细胞和ECV304细胞生长和增殖均具有非特异性抑制作用.而RV-40AS仅对K562细胞具有特异性的抑制效应.PKR抑制剂能阻断RV-40AS对K562 细胞的抑制效应.polyIC和RV-40AS作用K562细胞24 h 后,S期细胞减少[polyIC组(37.26±2.35)%,未处理组(58.53±5.42)%,P＜0.05;RV-40AS组(31.48±3.65)%,未处理组(58.53±5.42)%,P＜0.05],G0/G1期细胞增多[pdylC组(50.97±2.18)%,未处理组(36.44±4.20)%,P＜0.05;RV-40AS组(57.47±3.61)%, 未处理组(36.44±4.20)%,P＜0.05].polyIC处理K562细胞组、ECV304细胞组以及RV-40AS处理K562细胞组的p-PKR和p-eIF2α蛋白表达显著上调,且总蛋白合成水平下降[RV-40AS处理的K562细胞组(3.5±1.9)cpm/ng,未处理组(26.8±2.6)cpm/ng,P＜0.05].结论:外源重组反义RNA与bcr/abl融合基因的mRNA形成的dsRNA可通过激活PKR而抑制K562细胞的生长增殖,其机制是通过活化的PKR使蛋白合成启始因子eIF2a磷酸化,从而阻断细胞内蛋白合成的启动,及阻止细胞周期进程来实现.     

槲皮素对K562细胞生长及血管内皮生长因子分泌的影响

 目的 探讨槲皮素对K562细胞的形态、血管内皮生长因子（VEGF）的表达影响。方法 以K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright染色法;AnnecxinⅤ标记检测细胞凋亡率;VEGF表达采用ELISA法。结果 经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;槲皮素处理后K562细胞凋亡率明显增加;槲皮素处理后K562细胞显著降低VEGF的表达。结论 槲皮素在体外能抑制白血病细胞K562生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF。     

Infrequent mutation of TRAIL receptor 2 (TRAIL-R2/DR5) in transitional cell carcinoma of the bladder with 8p21 loss of heterozygosity

Loss of heterozygosity (LOH) on 8p is a frequent event in many cancers and is often associated with more aggressive disease. Tumour necrosis factor-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) receptor 2 (TRAIL-R2) also known as TNFRSF10B (tumour necrosis factor receptor (TNFR) super family 10b) or KILLER/DR5, a member of the TNFR family, is a promising candidate tumour suppressor gene at 8p21-22. Mutations in this gene have been identified in non-small cell lung cancer, head and neck cancer, breast cancer and non-Hodgkin's lymphoma. We carried out mutation analysis of TRAIL-R2 in bladder cancer cell lines and in primary bladder tumours. One novel protein truncating mutation was identified in a bladder cancer cell line. Our results suggest that if TRAIL-R2 is the target of LOH events in these cancers, inactivation of the remaining allele is by a mechanism other than mutation.     

维生素E琥珀酸酯增强DR5抗体对Raji和K562细胞的凋亡作用

探讨VES增强抗DR5单抗mDRA-6诱导白血病细胞凋亡作用及可能机制。方法：MTT法检测VES及mDRA-6对白血病细胞Raji和K562细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染分析白血病细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR5表达;免疫印迹技术检测细胞DR5蛋白表达。结果：MTT检测表明,浓度为10 μg/mL的mDRA-6作用12 h,Raji及K562细胞死亡率分别为21.98%和5.23%,而5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L的VES分别与mDRA-6共同作用于Raji或K562细胞,Raji细胞死亡率分别增加至24.67%（P>0.05）、35.65%（P<0.01）和40.22%（P<0.01）,K562细胞死亡率分别增加至6.00%（P>0.05）、7.89%（P<0.01）、8.67%（P<0.01）。AnnexinⅤ/PI双染检测2 μg/mL的mDRA-6单独作用Raji及K562细胞12 h,细胞凋亡率分别为20.79%和7.74%,2 μg/mL的mDRA-6与10 μmol/L的VES共同作用Raji及K562细胞12 h,细胞凋亡率分别增至43.18%和16.99%。Raji和K562细胞表面DR5自然表达分别为42.35%和14.92%;10 μmol/L的VES作用Raji、K562细胞12 h后,细胞膜DR5表达率分别增加至70.08%和16.38%。免疫印迹技术检测显示,不同浓度的VES均可增加Raji和K562细胞DR5蛋白表达。结论：VES增强mDRA-6对白血病细胞系Raji和K562细胞的凋亡诱导作用,可能是VES增加了Raji和K652细胞膜DR5表达及细胞DR5蛋白表达所致。     

人类前列腺凋亡反应因子4基因真核表达载体的构建及其在K562细胞中的表达

 目的　构建带有绿色荧光蛋白的人类前列腺凋亡反应因子4（Par-4）基因真核表达载体pIRES2-EGFP／Par-4,并转染K562细胞。方法　以 pDNR／Par-4质粒为模板,PCR扩增Par-4基因,T-A 克隆,亚克隆至pIRES2-EGFP上,并对重组表达载体进行酶切、测序鉴定。采用Superfect转染试剂转染K562细胞。提取细胞总蛋白,Western blotting检测Par-4表达。结果　经限制性酶切鉴定及测序分析证实pIRES2-EGFP／Par-4载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的K562细胞有绿色荧光蛋白的表达,Western blotting证实转染细胞中存在Par-4蛋白的表达。结论　pIRES2-EGFP/Par-4表达载体构建成功,并在K562细胞内成功表达。     

苦参碱对K562细胞株端粒酶活性和细胞周期的影响

目的为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂,探讨了苦参碱对Ｋ５６２细胞的诱导分化作用及其机制。方法采用ＰＣＲＥｌｉｓａ方法检测苦参碱作用前后端粒酶活性的改变,以流示细胞仪分析细胞周期的改变。结果苦参碱作用后的Ｋ５６２细胞,其端粒酶活性明显受抑,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著降低。结论苦参碱对Ｋ５６２细胞有诱导分化作用,其机制可能与抑制端粒酶活性、阻止细胞周期的进程有关。