低毫安(10mA)电化学治疗对人乳腺癌细胞耐药性的逆转作用

目的:研究低毫安(10mA)电化学治疗对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株(MCF-7/ADR)多药耐药(MDR)性的逆转作用及其机制.方法:用MTT法测定电化学治疗对细胞的生长抑制作用,荧光分光光度法检测细胞内阿霉素(ADR)的浓度,流式细胞术检测细胞p-糖蛋白(P-gp)的表达.结果:低毫安电化学治疗(0.1C-2C)能不同程度降低ADR对MCF-7/ADR细胞的IC5o;2C的电化学治疗能显著提高ADR在MCF-7/ADR细胞内的浓度,降低MCF-7/ADR细胞P-gp的表达.结论:电化学治疗能逆转MCF-7/ADR细胞的MDR,其机理可能是抑制了P-gp的功能表达,增加了细胞内ADR的积累.     

PHⅡ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外杀伤活性和逆转耐药作用

背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)是恶性乳腺癌化疗失败的主要原因,而ABC转运蛋白家族的P-glycoprotein(P-gp)高表达是MDR的主要机制之一.因此研制能抑制P-gp表达及其功能的新型抗癌药是目前研究的热点.本研究旨在研究PH Ⅱ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外抗瘤活性及逆转耐药的作用.方法:采用MTT法检测PHⅡ-7、多柔比星(adriamycin,ADR)及二者联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7和耐药细胞株MCF-7/ADR的IC50值;采用流式细胞仪测定PH Ⅱ-7对MCF-7及MCF-7/ADR细胞凋亡的诱导作用;采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR方法检测PHⅡ-7对多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)表达水平的影响;通过流式细胞仪观察PHⅡ-7处理前后,MCF-7/ADR细胞内Rhodamine123浓度的改变,分析PHⅡ-7对p-gp外排功能的影响.结果:PH Ⅱ-7对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有生长抑制作用,IC50值分别为(6.07±0.85)和(5.51±1.22)μmol/L;低浓度PHⅡ-7与ADR联合应用能增强其细胞毒作用,二者具有协同作用.PHⅡ-7可诱导MCF-7和MCF-7/ADR细胞凋亡;在诱导凋亡过程中,PHⅡ-7可降低MCF-7/ADR细胞内mdrl基因的表达,抑制p-gp外排功能.结论:PHⅡ-7可诱导MCF-7/ADR凋亡,并具有对MCF-7相同的体外杀伤活性.PHⅡ-7可通过抑制P-gp的表达和功能逆转MCF-7/ADR耐药性.     

FG020327逆转肿瘤多药耐药性的作用及其机制

背景与目的肿瘤细胞过量表达P鄄糖蛋白穴P-glycoprotein.P-gp雪导致多药耐药穴multidrug resistance,MDR雪是目前肿瘤化疗的一大障碍,使用多药耐药逆转剂与抗癌药物联合化疗是克服临床多药耐药的重要方法。本研究对一种新的多芳基取代咪唑化合物FG020327的体外逆转活性及其逆转机制进行了探讨。方法以MTT法检测FG020327对多药耐药肿瘤细胞MCF-7/ADR及KBv200的耐药逆转活性;以荧光分光光度计法检测FG020327对MCF-7/ADR细胞内抗癌药物阿霉素累积的影响;以罗丹明蓄积实验检测该化合物对P-gp功能的影响。结果FG020327在体外具有较强的逆转活性,在5μmol/L浓度下使多药耐药细胞KBv200对长春新碱的敏感性增加44.9倍,逆转活性是公认的强逆转剂维拉帕米的3倍熏但它对敏感株对抗癌药物的敏感性基本无影响。2.5、5和10μmol/L的FG020327使MCF-7/ADR细胞中阿霉素的累积分别增加2.3、2.7和3.7倍,但是在敏感株MCF鄄7细胞却观察不到阿霉素累积的增加。FG020327浓度依赖性增加KBv200细胞内的罗丹明蓄积,但对敏感株KB细胞内的罗丹明蓄积无影响。结论FG020327具有较强的体外逆转MDR的活性,它可能通过抑制P鄄gp功能及增加MDR细胞内抗癌药物的累积逆转MDR。     

槲皮素对人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR~(+/+))多药耐药基因mdr1及P-gp蛋白表达的影响

背景与目的:探讨槲皮素对人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)多药耐药基因mdr1及P-gp蛋白表达的影响.材料与方法:经槲皮素干预B-MD-C1(ADR+/+)细胞后,RT-PCR法检测细胞多药耐药基因mdr 1表达的变化;免疫组织化学法检测多药耐药蛋白P-gp表达的变化;共聚焦激光扫描显微镜检测耐药细胞及相应敏感细胞内阿霉素(ADM)的分布情况;MTT法检测槲皮素作用后B-MD-C1(ADR+/+)细胞对化疗敏感性的变化. 结果:经不同浓度槲皮素干预后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞多药耐药基因mdr 1及相应蛋白P-gp表达水平下调(P<0.05);槲皮素干预后,能恢复ADM在B-MD-C1(ADR+/+)细胞内的分布,增加细胞内ADM浓度,从而逆转细胞的耐药性(P<0.05).结论:槲皮素逆转B-MD-CI(ADR+/+)细胞多药耐药性,该作用可能与下调细胞多药耐药基因mdr 1及其编码蛋白P-gp的表达有关.     

阿帕替尼逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性的作用及其机制

目的 探讨阿帕替尼对人乳腺癌化疗多药耐药性的逆转作用及其机制。方法 不同浓度的阿帕替尼作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7及MCF-7/ADR细胞48 h,MTT法检测阿帕替尼对两种细胞的细胞毒性;低毒浓度的阿帕替尼与化疗药物紫杉醇及阿霉素联用,探讨阿帕替尼对两种细胞化疗耐药性的影响;采用流式细胞术检测阿帕替尼对罗丹明123在MCF-7及MCF-7/ADR细胞内蓄积的影响;采用Pgp-Glo? Assay Systems试剂盒观察阿帕替尼对多药耐药相关蛋白P-gp的ATPase活性的影响;采用Western blot法检测阿帕替尼对P-gp表达及AKT磷酸化的影响。结果 阿帕替尼可浓度依赖性地逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞对紫杉醇及阿霉素的多药耐药性（P<0.05）、增加罗丹明123在MCF-7/ADR细胞内的蓄积（P<0.05）及激活P-gp转运体的ATPase活性（P<0.05）,而对P-gp的表达没有影响;此外,阿帕替尼不改变AKT的磷酸化水平。结论 阿帕替尼可能通过抑制P-gp转运体的外排功能逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性。     

MDR1及MDR3短发夹RNA逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药的实验研究

目的 研究靶向多药耐药(MDR)1及MDR3基因的短发夹RNA(shRNA)在逆转人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr耐药中的作用.方法 真核质粒介导的针对MDR1及MDR3基因的shRNA转染细胞,空载体转染作为对照.Annexin-Ⅴ和PI双标法、流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化分别检测细胞凋亡、细胞内阿霉素蓄积、细胞增殖活性及对阿霉素的IC50、MDR1及MDR3 mRNA及P-糖蛋白(P-gp)表达.结果 转染后,MDR1组及MDR3组MCF-7/Adr细胞凋亡率分别为30.21%±1.65%和22.07%±2.17%,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.01);MCF-7/Adr细胞内的阿霉素积聚浓度显著增加;MCF-7/Adr细胞存活率显著下降,MCF-7/Adr细胞对阿霉素IC50显著降低;相对于空载体转染组,MCF-7/Adr细胞中MDR1和MDR3 mRNA最高分别下降89.5%±0.8%和85.1%±1.2%,mRNA下降水平与孵育时间有关;P-gp表达明显降低,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 shRNA可特异性地沉默MDR1及MDR3基因的表达,逆转P-gp介导的乳腺癌细胞阿霉素耐药,而MDR1的这种作用更为显著.     

Ad-p53逆转乳腺癌细胞株多药耐药性及其对P-gp、TOPOⅡ和GST-π表达的影响

背景与目的肿瘤细胞对抗癌药物产生耐受性是化疗失败的主要原因,突变型p53基因与肿瘤多药耐药密切相关.本研究旨在探讨腺病毒介导的p53基因(Ad-p53)对人乳腺癌多柔比星(阿霉素)耐药细胞株MCF-7/Adr多药耐药的逆转作用及其对耐药相关蛋白P-gp、TOPOⅡ和GST-π表达的影响.方法以人乳腺癌MCF-7细胞及其多柔比星耐药株MCF-7/Adr为实验对象,cck-8法观察Ad-p53对多药耐药的逆转作用,Western blot检测P-gp、TOPOⅡ和GST-π蛋白表达的变化.结果50 MOI Ad-p53能使多柔比星对MCF-7/Adr细胞IC50由(4.54±0.91) μg/ml降到(0.26±0.11) μg/ml,逆转耐药倍数为18.1倍(P〈0.001);P-gp、GST-π蛋白表达量下降,TOPOⅡ未见明显变化.结论Ad-p53能够逆转MCF-7/Adr多药耐药,下调P-gp和GST-π表达.     

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体通过P-糖蛋白逆转乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药性的分子机制

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic broblast growth factor,bFGF mAb)通过P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)对人乳腺癌多柔比星(adriamycin,ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转机制。方法:CCK-8(cell counting kit-8)法检测bFGF mAb对MCF-7/ADM细胞增殖的影响及其对化疗药物耐药的逆转作用;bFGF mAb作用后,FCM检测MCF-7/ADM细胞的细胞周期、P-gp的表达及细胞内罗丹明(rhodamine,Rho)123的荧光强度,实时荧光定量PCR检测MCF-7/ADM细胞中MDR1和碱性成纤维细胞生长因子(basic broblast growth factor,bFGF)mRNA的表达。结果:1μg/mL bFGF mAb对MCF-7和MCF-7/ADM细胞的抑制率分别为(19.87±1.05)%和(27.34±2.79)%,差异有统计学意义(P<0.01)。bFGF mAb可有效逆转MCF-7/ADM细胞对ADM、吉西他滨(gemcitabine,GEM)和奥沙利泊(oxaliplatin,OXA)的耐药性,逆转指数分别为4.46、4.25和2.18。bFGF mAb作用MCF-7/ADM细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,P-gp表达下调,细胞内Rho123的荧光强度增强,MDR1和bFGF mRNA的表达下调,与未作用组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:bFGF mAb能抑制MCF-7/ADM细胞增殖并逆转其MDR,该作用机制可能与bFGF mAb下调MDR1/P-gp表达、抑制P-gp功能以及增加细胞内化疗药物浓度有关。     

中药昆布对B-MD-C1(ADR+/+)耐药细胞逆转作用的体外研究

背景与目的:研究昆布提取物(thallus laminariae PE,TLPE)在体外对耐药细胞B-MD-C1(ADR +/+)的逆转作用,深入探讨TLPE逆转肿瘤多药耐药的机制.材料与方法:MTF法检测昆布提取物对耐药细胞B-MDC1(ADR +/+)的逆转作用,采用免疫细胞化学方法及流式细胞术检测P-gp蛋白表达的变化.用RT-PCR法检测TLPE作用前后B-MD-C1(ADR +/+)细胞中多药耐药基因(MDR1)的表达水平.结果:昆布提取物在体外对B-MD-C1(ADR +/+)有逆转作用,逆转倍数为4.65;免疫细胞化学方法显示,TLPE作用后,B-MD-C1(ADR +/+)细胞P-gp的表达降低;流式细胞术结果显示,TLPE处理后细胞的荧光表达量降低,且与TLPE浓度呈依赖性;RT-PCR结果表明,TLPE可以使B-MD-C1(ADR +/+)细胞的MDR1 mRNA表达减弱.结论:昆布提取物具有逆转B-MD-C1(ADR +/+)的作用,其逆转作用与降低P-gp的表达有关,具有临床应用前景.     

脉冲磁场逆转乳腺癌细胞多药耐药性的作用研究

目的：研究脉冲磁场（Pulsed Magnetic Fields，PMF）对乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR的逆转作用。方法：采用MTT实验方法，分别检测不同频率及不同磁场强度条件照射下的MCF-7／ADR细胞的耐药倍数和逆转倍数。用流式细胞术检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中Rh123药物蓄积量变化。用流式免疫荧光技术检测膜经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞膜表面P-糖蛋白（P-gP）和多药耐药相关蛋白（MRP1）表达情况。采用半定量RT—PCR（逆转录-聚合酶链反应）检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中MDR1和MRP1基因表达情况。建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR裸鼠移植瘤模型，通过测量肿瘤体积及重量观察PMF对肿瘤细胞的体内逆转作用。结果：脉冲磁场能有效逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR对阿霉素产生的耐药性（P〈0．01），其中110Hz，40mT照射条件逆转效果最好，可达5倍左右；脉冲磁场能提高罗丹明123在细胞内的蓄积量，其中110Hz，40mT照射奈件下可有效提升20％左右药物蓄积量；细胞经脉冲磁场照射后，膜表面耐药蛋白P糖蛋白表达量明显下降，MRP1蛋白表达量变化不明显；编码上述两种耐药蛋白的耐药基因表达量均明显下降；此外，脉冲磁场联合阿霉素可有效逆转裸鼠移植瘤的生长增值（P〈0．01）。结论：PMF具有逆转体外和体内乳腺癌细胞多药耐药性的作用。     

Anxa2和P-gp蛋白相互作用对多药耐药乳腺癌细胞迁移与侵袭影响的研究

目的:探讨Anxa2和P-gp蛋白相互作用对多药耐药乳腺癌细胞迁移与侵袭的影响.方法:采用小干扰RNA技术下调人多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中P-gp的表达,并筛选稳定的单克隆细胞株;利用噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell实验研究P-gp的表达对MCF-7及其耐药细胞MCF-7/ADR的增殖、迁移和侵袭能力的影响;利用免疫沉淀和免疫荧光分析多药耐药细胞中Anxa2和P-gp的相互关系.结果:蛋白印迹法检测发现,Anxa2和P-gp在耐药乳腺癌细胞中均高表达;MCF-7/ADR与其亲本细胞MCF-7相比,迁移和侵袭能力明显增强;MCF-7/ADR细胞中P-gp的表达被抑制后,其迁移和侵袭能力显著下降,并且差异有统计学意义,P＜0.05.免疫沉淀证实,Anxa2和P-gp之间存在相互作用;免疫荧光发现,Anxa2和P-gp在细胞膜上存在很好的共定位.结论:降低P-gp的表达可以明显抑制耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的迁移和侵袭能力,Anxa2和P-gp之间存在较好的共定位和相互作用.提示Anxa2和P-gp的相互作用有可能对增强多药耐药乳腺癌细胞的侵袭转移能力起到一个重要的作用.     

乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist的表达与EMT现象的实验研究

目的：观察乳腺癌多药耐药细胞MCF-7／ADR中Twist表达及上皮-间质转化现象．探讨其与MCF-7／ADR侵袭转移能力增强的相关性。方法：分别以RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物（Strept avidin biotin complex，SABC）免疫组织化学方法和Western blot法检测乳腺癌细胞系MCF-7及其多药耐药株MCF-7／ADR中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙粘素（E—cadherin）和间质性标记基因N-钙粘素（N—cadherin）表达的改变情况。结果：亲本细胞MCF-7中E—cadherin mRNA的表达和蛋白水平的表达均为阳性，Twist和N—cadherin表达阴性；多药耐药株MCF-7／ADR中E—cadherin mRNA和蛋白表达缺失，而在亲本细胞MCF-7中不表达的Twist和N—cadherin表达阳性。结论：在多药耐药乳腺癌细胞MCF-7／ADR中．其侵袭力增强可能与Twist介导的EMT发生有关。     

siRNA逆转乳腺癌细胞系MCF-7/ADR耐药

背景与目的：肿瘤的多药耐药性常导致乳腺癌化疗失败,多约耐药基因1(multidrug resistance 1、mdr1)编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein．P-gP)过度表达是重要的耐药机制。本研充拟探讨siRNA抑制耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADR mdr1基因表达的可行性。方法：选择耐阿毒素人乳腺癌细胞系MCF-7／ADR技其敏感细胞系MCF-7作为研究对象,将预先设计的siRNA包装入质粒载体,然后转化质粒刮大肠杆菌中,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF-7／ADR细胞中,潮霉素筛选,流式细胞仪检测P-gP的表达率,实时定量PCR俭测,mdr1基因的表达率,并对转染后的细胞作阿霉素耐药实验。结果：流式细胞仪榆测结果显示,MCF-7／ADR细胞经特异性siRNA作用后,P-gP的表达率由99．8％下降到12．3％：实时相对定量PCR检测结果显示．MCF-7／ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由25．22增加到30．64．阿霉素耐药实验显示,转染siRNA的MCF-7／ADR细胞IC50为0．51μmol／L,而术转染组的IC50为17．88μmol／L。结论：siRNA能引发人乳腺癌多耐药细胞系MCF-7／ADR内mdr1基因沉默,从而为siRNA作为一种可能的治疗手段提供了理论依据。     

GCS在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及与P-gP的关系

目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及其与P-糖蛋白（P-gP）的关系。方法采用MTT法检测多柔比星（阿霉素）对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／Adr和敏感株MCF-7的抑制率和IC50。以GCS抑制剂D，L-threo-1-phenyl-2-decanoyl—amino-3-morpholino-1-propanol（PDMP）预处理MCF-7／Adr后检测抑制率和IC50。运用流式细胞术（FCM）检测人MCF-7及MCF-7／Adr中GCS、P-gp的表达，以PDMP预处理细胞后检测GCS、P-gP的表达。FCM法检测细胞中ADM的荧光强度。结果MCF-7／Adr对MCF-7的耐药倍数为22．7倍，PDMP作用后阿霉素对MCF-7／Adr的抑制率升高，IC50下降（P〈0．05）。MCF-7／Adr中GCS和P-gp的表达均高于MCF-7，PDMP使MCF-7／Adr中GCS表达下降（P〈0．05），对P—gp表达无明显影响（P〉0．05）。FCM检测显示PDMP可使阿霉素在MCF-7内潴留增多。结论GCS在MCF-7／Adr多药耐药中起重要作用，PDMP能影响P-gP功能，GCS与P-gP有-定关系。     

ZD6474 reverses multidrug resistance by directly inhibiting the function of P-glycoprotein

P-glycoprotein (P-gp) pumps multiple types of drugs out of the cell, using energy generated from ATP, and confers multidrug resistance (MDR) on cancer cells. ZD6474 is an orally active, selective inhibitor of the vascular endothelial growth factor receptor, epidermal growth factor receptor, and rearranged during transfection tyrosine kinases. This study was designed to examine whether ZD6474 reverses P-gp-mediated MDR in cancer cells. Here, we show that clinically achievable levels of ZD6474 reverse P-gp-mediated MDR of the P-gp-overexpressing cell lines derived from breast cancer, MCF-7/adriamycin (ADR), and human oral epidermoid carcinoma, KBV200 to ADR, docetaxel, and vinorelbine. This ability to reverse the P-gp-mediated resistance is comparable to that of another frequently used reversal agent known as verapamil. ZD6474 itself moderately inhibits the proliferation of both MCF-7 and MCF-7/ADR cells with almost equal activity, but its inhibitory effect is not altered by co-incubation with verapamil, suggesting that ZD6474 may not be a substrate of P-gp. In addition, ZD6474 increases the intracellular accumulation of the P-gp substrate, rhodamine-123, and ADR, by enhancing the uptake and/or decreasing the efflux of these compounds in resistant cells. Further studies show that ZD6474 stimulates ATPase activity in a dose-dependent manner, which is required for the proper function of P-gp. In contrast, ZD6474 does not inhibit the expression level of P-gp. Our results suggest that ZD6474 is capable of reversing MDR in cancer cells by directly inhibiting the function of P-gp, a finding that may have clinical implications for ZD6474.     

Reversing adriamycin resistance of human breast cancer cells by hyperthermia combined with Interferon alpha and Verapamil

One of the major obstacles related to chemotherapy is resistance against anticancer drugs, including Adriamycin (ADM). The purpose of the present work is to investigate the reversal effects on ADM resistance by hyperthermia (42.5 degrees C) combined with two reversal agents (Interferon alpha and Verapamil) in MCF-7/ADR (ADM-resistant MCF-7 breast cancer cell line), and its relevant molecular mechanism of action. The cell survival rate and ADM IC50 of different experiment groups were measured by MTT test. The quantitative expression of MDR1 gene in cells was detected by Real-time PCR, and the expression of P-glycoprotein (P-gp) on the cells surface and the intracellular ADM accumulation was detected by flow cytometry (FCM). The ADM IC50 of the MCF-7/ADR cells decreased 830-fold after combined with Interferon alpha (IFN-alpha) and Verapamil (VRP). Although there was no distinction in the mRNA expression of MDR1, the P-gp on the MCF-7/ADR cell membrane was significantly reduced and the cellular ADM uptake increased markedly as compared to pretreatment. Our results suggeste that hyperthermia induces a considerably reversal activity against ADM resistance synergizing other reversal agents (IFN-alpha and VRP). The reversal mechanism needs further study. However, these features of hyperthermia may be exploited in clinical cancer chemotherapy.