Flt3配体抗肿瘤作用研究进展

Ｆｌｔ３配体（ＦＬ）是一种能够刺激早期造血的细胞因子。ＦＬ可促进体内树突状细胞、自然杀伤细胞、细胞毒Ｔ淋巴细胞的增殖、分化和成熟,从而具有重要的抗肿瘤免疫治疗作用。对乳腺癌、纤维母细胞肉瘤、肝癌、淋巴瘤等肿瘤的体内、外实验亦证实ＦＬ对肿瘤生长的抑制作用。本文就ＦＬ的主要生物学特性、抗肿瘤作用机制及其在体应用研究近况作一综述。     

CD40L+肺癌细胞抗原负载DC诱导同源肺癌免疫

目的：探讨CD40L+肺癌细胞抗原负载由人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）诱导的DC对同源肺癌的免疫增强作用及其机制。方法：常规方法从正常成人外周血中分离PBMC、诱导分化成DC,以重组载体pDNA3.1-CD40L+转染A549肺癌细胞,制备已转染肺癌细胞抗原对DC进行负载刺激,通过流式细胞术检测DC的CD83、CD86及HLA-DR分子表达,ELISA法检测DC的IL-12分泌水平,再以MTT法检测DC对同源T淋巴细胞增殖状态以及A549肺癌细胞增殖影响,并与空载转染的A549细胞抗原诱导DC的相同功能进行对比。结果：将PBMC成功诱导分化出成熟的DC。重组CD40L诱导组DC的CD83、CD86及HLA-DR分子表达水平明显高于空载组\[(4.78±1.5）% vs （3.38±1.5）%、（9.79±5.27）% vs （5.53±2.17）%和 （11.84±8.31）% vs （537±5.48）%,均P<0.05\];IL-12分泌水平也高于空载组和未转染组（P<0.05)。CD40L+DC可促进T淋巴细胞的增殖(P<0.05),并导致同源T细胞对肺癌A549细胞增殖的抑制作用强于对照组、未转染组和空载组（P<0.05）。结论： CD40L转染肺癌细胞抗原诱导成熟的DC可以增强同源肺癌细胞的特异免疫能力。     

转染外源性Fas配体基因的正常骨髓CD34+细胞诱导U937细胞凋亡的实验研究

目的:观察转染外源性FasL的CD34 细胞对白血病细胞系U937的凋亡诱导作用,探讨通过向CD34 细胞转染FasL以增强移植后GVL效应的可能性.方法:免疫磁珠法分选骨髓CD34 细胞并进行体外扩增培养;FasL基因逆转录病毒途径转染CD34 细胞,并与白血病细胞U937混合培养,加入或不加入柔红霉素、阿糖胞苷,借助TUNEL、流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果:逆转录病毒上清转染后48～72h,流式细胞仪检测24.2%±2.4?34 细胞表达FasL(P＜0.01)(未转染的CD34 细胞FasL阳性率为7.6%±1.1%).未转染或转染外源FasL的CD34 细胞与白血病细胞U937以1:1的比例混合培养18h后,细胞凋亡率分别为5.0%±1.3%、10.8%±0.6%(P＜0.01);FasL CD34 DNR或FasL CD34 Arac作用后,细胞凋亡率分别为13.4%±1.0%(P＜0.05)、17.95%±1.3%(P＜0.01).结论:表达外源性FasL的骨髓CD34 细胞可诱导白血病细胞U937凋亡.提示植入转染外源性FasL基因的骨髓CD34 细胞可增强BMT后的GVL效应.     

人Flt3配体基因的克隆及在Hela细胞中的表达

目的：克隆人Flt3配体（FL）基因．检测其在Hela细胞中转录及表达蛋白的活性。方法：Trizol法提取K562细胞总RNA，经RT-巢式PCR得到FL的cDNA，PCR产物亚克隆入pGEM-T栽体测序，构建pcDNA3／hFL。经Lipofectamine2000介导转入Hela细胞．RT-PCR法检测转染细胞中hFL基因的转录．ELISA法检测培养上清中hFL的含量．增殖和促生存实验鏊定hFL的活性。结果：所得FL基因序列正确。转染后的Hela细胞能转录FL基因．上清中hFL蛋白含量为56．8ng／ml／l．hFL能促Raji细胞生存及抑制凋亡（P〈0.01），促进HL-60细胞增殖（P〈0.05）。结论：构建的pcDNA3／hFL质粒在Hela细胞表达系统中能够有效转录．表达的hFL蛋白具有生物学活性。     

CD40配基化对乳腺癌细胞株M231药物敏感性的影响

目的研究CD40配基化对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响. 方法乳腺癌细胞株MDA-MB-231与γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)和碱性纤维母细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)共同孵育18 h后,间接荧光标记流式细胞仪分析表面CD40和CD40L的表达,并与CD40激发型单克隆抗体、多柔比星及两者联合共同培养72 h,MTT法测定细胞增殖,PI、Annexin V标记和流式细胞仪分析细胞凋亡.结果M231细胞表达CD40分子[(57.3±4.6)%],但无CD40L表达,IFN-γ可上调M231细胞CD40分子的表达[(88.5±5.6)%],两者差异有统计学意义,P=0.023;与CD40激发型单抗作用后,M231细胞体外生长受抑制,P=0.014;与抗肿瘤药物联合应用,其作用更为显著,P=0.006 7,CD40配基化通过促进M231细胞的凋亡和死亡发挥作用.结论IFN-γ和CD40配基化提高多柔比星的抗肿瘤效应.     

晚期胃癌免疫检查点PD-1/PD-L1抑制剂联合治疗的研究进展

胃癌是最为常见的恶性肿瘤之一，在中国其发病率和死亡率均较高，大多数胃癌初诊即已为晚期，预后较差，目前治疗现状仍不理想。免疫逃逸是肿瘤发生发展的一主要机制，细胞程序性死亡受体-1（programmed death-1，PD-1）及细胞程序性死亡配体（programmed death-ligand 1，PD-L1）是导致免疫逃逸的重要分子，PD-1与PD-L1结合是肿瘤细胞免疫逃逸的重要发病机制之一，特异性阻断二者结合，可达到杀灭肿瘤细胞的目的。PD-1/PD-L1抑制剂可明显改善晚期胃癌患者预后，并且PD-1/PD-L1抑制剂联合化疗、靶向治疗、放疗等可进一步提高疗效。本文就PD-1/PD-L1抑制剂联合治疗在晚期胃癌中的治疗进展进行综述。      

TRAIL对胶质瘤化疗敏感性影响的研究

目的：探讨TRAIL对胶质瘤化疗敏感性的影响及其诱导细胞凋亡的原理。方法：人脑胶质瘤U251细胞株培养成功后，应用MTT法检测TRAIL和VM26作用于U251细胞后的生存率，DNA片段化分析凋亡后DNA的裂解，并以流式细胞仪检测各组凋亡率。结果：亚毒剂量的TRAIL、VM26及联合作用组致胶质瘤细胞凋亡率分别为19％、15％和60％。单独应用组与联合组之间差异有统计学意义，P=0．004。TRAIL组和联合作用组均出现了典型的DNA片段化阶梯状条带现象。结论：TRAIL能显著增强人U251胶质瘤细胞对VM26的敏感性。     

多发性骨髓瘤患者外周血moDC分泌APRIL和BAFF临床意义的研究

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单个核细胞来源树突状细胞(moDC)分泌的B细胞活化因子(BAFF)和增殖诱导配体(A-PRIL)的特点,明确树突状细胞(DC)在MM发病中所起的作用。方法:选取初诊(初诊组)MM患者18例(Ⅱ期8例,Ⅲ期10例),动态研究(动态组)MM患者8例,10名健康者为正常对照。ELISA法检测外周血清及moDC经LPS活化后上清的BAFF、APRIL含量,荧光实时定量PCR(RQ-PCR)测定活化后moDC BAFF、APRIL的表达。结果:MM患者外周血清及moDC培养上清BAFF、APRIL水平,moDC的BAFF、APRIL相对表达量除移植后外,各组均高于对照组;初诊组中Ⅲ期高于Ⅱ期,动态组中治疗前高于治疗后有效期以及自身造血干细胞移植后(移植后),有效期高于移植后。相关分析示,MM患者血清、moDC培养上清BAFF、APRIL,moDC的BAFF、APRILmRNA相对表达量之间分别有正相关关系。结论:DC分泌的APRIL和BAFF与MM发病及病情进展有密切关系,DC可能通过分泌APRIL、BAFF起重要作用。     

Entinostat影响NK细胞对非小细胞肺癌杀伤作用的体外研究

  目的  观察Entinostat对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞A549和HCC-827表面NKG2D配体表达的影响，比较经Entinostat处理前后A549和HCC-827细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性。  方法  通过MTT法检测Entinostat对A549和HCC-827细胞增殖的影响，流式细胞术检测NKG2D配体表达的变化，RT-PCR检测配体在mRNA水平的变化，并用ELISA检测细胞培养上清中可溶性MICA的含量。乳酸脱氢酶释放实验检测Entinostat作用后的A549和HCC-827细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性。  结果  Entinostat对A549和HCC-827细胞的生长抑制作用具有时间-剂量依赖性。以0.5、1 μmol/L Entinostat诱导A549和HCC-827细胞48h后，细胞表面NKG2D配体表达水平升高，MICA和MICB的mRNA转录水平升高。1 μmol/L Entinostat提高了A549细胞培养上清中可溶性MICA表达水平。0.5、1 μmol/L Entinostat增强了HCC-827细胞对NK细胞杀伤作用的敏感性。  结论  Entinostat通过上调NSCLC NKG2D配体的表达，提高NK细胞对NSCLC的杀伤作用，为探讨NSCLC的治疗提供了新的方法和理论依据。      

鸦胆子油乳诱导白血病K562细胞凋亡及分子机制的实验研究

目的研究鸦胆子油乳诱导白血病细胞的凋亡及其机制。方法MTT法检测鸦胆子油乳对K562细胞增殖的抑制率；细胞形态及流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡；FCM法检测凋亡相关基因Fas和Fas-L表达水平的改变。结果鸦胆子油乳可抑制K562细胞的增殖并呈时间-剂量-效应关系,IC_(50)为187μg/ml；K562细胞表现为典型的凋亡形态；125、250、500μg/ml鸦胆子油乳作用24、48、72h的细胞凋亡率均高于对照组(P＜0．01)；500μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,Fas阳性细胞率高于对照组(P＜0．01),而Fas-L的表达无明显改变。结论鸦胆子油乳在体外可诱导K562细胞凋亡,上调Fas表达可能是其诱导凋亡的机制之一。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对胰腺癌细胞抗肿瘤作用的研究

Objective To investigate the antitumor effect of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)gene transfection mediated by adenovirus into human pancreatic carcinoma cell line Panc-1, and the mechanisms involved in this effect. Methods TRAIL gene was transfected into pancreatic cancer cell line Panc-1 by an adenovirus vector (Ad-TRAIL).Level of TRAIL mRNA expression was determined using RT-PCR, and TRAIL protein synthesis was evaluated with Western blot. Cell-growth activities were determined by MTT assay. The bystander effect was observed by co-culturing the Panc-1cells with the transfected TRAIL gene at different ratios. Apoptosis in pancreatic cancer cells was detected by flow cytometry.Procaspase-8 and procaspase-3 were determined by Western blot. Results The stable overexpression of TRAIL was detected in Panc-1 cells transfected by Ad-TRAIL. Ad-TRAIL significantly inhibited of cell viability of Panc-1 cells. Furthermore,co-culture of cancer cells transfected with TRAIL with that nontransfected resulted in the cell death of both cells by bystander effect. Moreover, the percentage of apoptotic cells was significantly higher in the Ad-TRAIL-treatment group compared to the control groups (P ＜ 0.01). And there was a diminished amount of procaspase-8 and procaspase-3 after infection with Ad-TRAIL. Conclusion The overexpression of TRAIL gene in Panc-1 cells by Ad-TRAIL exerts its antitumor effects, and themechanisms involved in this effect may be proapoptosis and bystander effect.     

细胞凋亡的调控机制

细胞凋亡（apoptosis），亦称程序性细胞死亡（programmed cell death），是生物体细胞受基因精确调控的主动消亡过程，是多细胞有机体调控机体发育、维持内环境稳定的重要机制。细胞凋亡涉及到细胞内许多复杂的生化过程，包含了复杂的调控机制，有多种分子参与、多重信号转导通路介导其调控。本文结合细胞凋亡调控机制的最新研究进展，对配体结合死亡受体的机制、bel-2家族蛋白的作用、easpase的活化、抑制以及对抑制的解除在凋亡调控中的重要作用做一综述。     

鸦胆子油乳诱导白血病K562细胞凋亡及分子机制的实验研究

目的研究鸦胆子油乳诱导白血病细胞的凋亡及其机制。方法MTT法检测鸦胆子油乳对K562细胞增殖的抑制率；细胞形态及流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡；FCM法检测凋亡相关基因Fas和Fas-L表达水平的改变。结果鸦胆子油乳可抑制K562细胞的增殖并呈时间-剂量-效应关系,IC_(50)为187μg/ml；K562细胞表现为典型的凋亡形态；125、250、500μg/ml鸦胆子油乳作用24、48、72h的细胞凋亡率均高于对照组(P＜0．01)；500μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,Fas阳性细胞率高于对照组(P＜0．01),而Fas-L的表达无明显改变。结论鸦胆子油乳在体外可诱导K562细胞凋亡,上调Fas表达可能是其诱导凋亡的机制之一。     

4-1BBL修饰小鼠结肠癌疫苗体外诱导抗肿瘤免疫反应的研究

背景与目的:研究4-1BBL(4-1BB Ligand,即CD137配体)转基因小鼠结肠癌细胞瘤苗体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes,CTL)特异性杀伤活性及刺激淋巴细胞产生细胞因子的作用.材料与方法:采用脂质体介导法将真核表达质粒pMKITneo/4-1BBL导入小鼠结肠癌colon26细胞,经G418筛选后获得4-1BBL高表达克隆,用丝裂霉素C(MMC)处理后,制成肿瘤细胞瘤苗,与经体外诱导的同系小鼠CTL共同培养,测定对CTL特异性杀伤活性及对脾细胞产生细胞因子(IL-2、IL.-4和IFN-γ)的影响.结果:转染4-1BBL的colon26细胞高表达4-1BBL蛋白,将该细胞经MMC处理后制成的瘤苗,与野生型colon26细胞相比,对CTL特异性杀伤亲本肿瘤细胞的作用明显增强(P＜0.01),但CTL对非亲本肿瘤细胞的杀伤作用无明显影响(P＞0.05);该瘤苗在体外能显著增强脾细胞分泌细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)的能力(P＜0.01).结论:4-1BBL转基因小鼠结肠癌细胞瘤苗能有效诱导抗结肠癌免疫反应.     

结肠癌细胞系Colo205细胞膜表面表达血小板和T细胞活化抗原1？…

目的 对血小板和Ｔ细胞活化抗原１（ＰＴＡ１）配体的表达做初步鉴定。方法 首先克隆ＰＴＡ１胞膜外区基因片段、构建ＰＴＡ１／Ｉｇ融合蛋白表达载体,制备ＰＴＡ１／Ｉｇ融合蛋白。通过粘附实验及组化实验证实ＰＴＡ１配体的分布。结果 ＰＴＡ１／Ｉｇ能特异性结合于Ｃｏｌｏ２０５细胞表面,并能阻断活化Ｊｕｒｋａｔ细胞对Ｃｏｌｏ２０５细胞的粘附。结论 证实结肠癌细胞系Ｃｏｌｏ２０５表达ＰＴＡ１配体,为今后进一步了解     

死亡分子Fas/CD95与细胞凋亡

Fas(APO-1/CD95)是神经生长因子受体（NGFR）/肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族成员之一,在多种细胞中表达,由于Fas信号途径在细胞凋亡中起重要作用,因此近年来此途径日益成为人们的研究热点。当Fas与其配体（FasL)或竞争性抗体（FasmAb)结合后,可通过细胞毒效应、Fas死亡结构域相关蛋白（FADD）和半胱氨酸蛋白酶（caspases)及其他机制诱导细胞凋亡。     

circSMARCA5通过CCL5富集Treg细胞促进非小细胞肺癌细胞的增殖

目的：检测circSMRCA5在非小细胞肺癌（NSCLC）组织和细胞中的表达,以及其在NSCLC发生发展中的潜在功能和机制。方法：用qPCR 法检测circSMARCA5在NSCLC 组织中的表达。使用慢病毒转染法将circSMARCA5过表达质粒和对照质粒pLC5分别转染人肺癌A549 和H1975 细胞。采用qPCR法检测稳定转染细胞中circSMARCA5的表达水平。通过CCK-8、克隆形成、细胞周期和异种移植瘤实验检测circSMARCA5 过表达对A549 和H1975 细胞生物学行为的影响。通过转录组测序、KEGG和GO富集分析,确定circSMARCA5可能的靶基因。分别构建circSMARCA5过表达A549、Lewis 细胞BABL/c 裸鼠和免疫正常的C57 小鼠皮下移植瘤模型,观察circSMARCA5对裸鼠皮下移植瘤生长的影响,流式细胞术检测对Lewis 细胞移植瘤组织中Treg 细胞水平的影响。结果：circSMARCA5在NSCLC 组织中呈高表达（P<0.01）。过表达circSMARCA5可以在体外促进NSCLC 细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）。体内实验中,circSMARCA5 可以促进裸鼠皮下移植瘤的生长（P<0.01）。机制上,经KEGG 和GO 富集分析,确定C-C 趋化因子配体5（CCL5）为circSMARCA5 的下游靶基因。过表达circSMARCA5 组A549 和H1975 细胞中CCL5 的表达量增加（均P<0.05）。circSMARCA5 介导的CCL5 上调促进了免疫正常的C57 小鼠皮下移植瘤的生长。C57 小鼠皮下移植瘤制备成的单细胞悬液行流式细胞术检测显示,circSMARCA5过表达组的Treg 细胞比例高于对照组[（3.1±0.5）% vs （1.0±0.1）%,P<0.05]。结论：circSMARCA5在NSCLC组织中呈高表达,其可能通过CCL5将Treg 细胞招募到肿瘤中,导致肿瘤的免疫逃逸,促进NSCLC的进展。     

Flt3配体在生物治疗中应用的研究进展

Flt3配体（Flt3　ligand，FL）是一种与造血调控有关的早期造血生长因子。FL与造血干细胞表面的Fm样酪氨酸激酶受体3结合，激活造血前体细胞，促进其增殖；与其他细胞因子联合应用，可显著提高造血效应。研究还证实，FL作为一种免疫佐剂，单独或者联合其他细胞因子能在体内外扩增树突状细胞（dendritic　cells，DCs），促进其发育、成熟。树突状细胞是免疫系统中一类重要的专职抗原提呈细胞，能够摄取外来抗原，与自身的MHC形成复合物，提呈给T细胞，显著刺激抗原特异性T细胞反应，在肿瘤免疫治疗中发挥重要作用。和T细胞不同，NK细胞不需要抗原提呈细胞的作用，通过分泌干扰素等细胞因子能够直接杀伤肿瘤细胞；FL联合其他细胞因子能够诱导NK前体细胞（pro—NKcell）的扩增和增殖，进而增强机体的抗肿瘤能力。目前FL已经被应用于造血系统疾病、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、肝脏肿瘤、神经系统肿瘤等疾病的基础或临床研究。此外，在抗感染、抗宿主移植以及自身免疫反应疾病等方面FL也有较好的作用。随着研究的不断深入，FL显示出了优越的生物学效应，展示了其在生物治疗领域中的广阔前景。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体与肺癌治疗

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近年新发现的一种凋亡诱导配体,可以激活多信号传导途径诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有杀伤作用.TRAIL能诱导肺肿瘤细胞发生凋亡而对正常细胞没有毒性,这为肺癌的治疗提供了新的途径.