二十二碳六烯酸复合物的体内外抑瘤作用及其机制

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)复合物的抗癌作用及其作用机制.方法 建立H22小鼠肝癌细胞的移植瘤动物模型,观察DHA复合物的体内抑瘤作用,采用体外细胞培养的方法 ,观察DHA复合物对宫颈癌HeLa细胞和胶质瘤U251细胞的体外抑瘤作用.采用电镜和荧光显微镜观察细胞形态的变化.Western blot法测定移植瘤组织中caspase-3蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HeLa细胞和U251细胞中Bel-2和Bax mRNA的表达.结果 DHA复合物对小鼠H22细胞移植瘤有明显的抑瘤作用,其低、中、高剂量组的抑瘤率分别为37.62%、48.55%和58.63%.在体外,随着剂量的增加,DHA复合物对HeLa细胞和U251的生长抑制率逐渐增高,Hela细胞的IC50为0.9814 μg/ml,U251细胞的IC50为0.3746 μg/ml.DHA复合物处理后,移植瘤细胞的细胞核呈分叶状,可见大小不等、致密的凋亡小体;HeLa细胞的细胞核内可见致密浓染的黄绿色荧光和碎片,分布在核周边,呈肾形或者半月形,核固缩,趋于碎裂.与CMC组比较,DHA复合物能明显促进caspase-3蛋白的表达,且DHA复合物剂最越高,caspase-3蛋白的表达升高越明显.DHA复合物能下调U251细胞中Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax mRNA的表达,与CMC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 DHA复合物在体内外对多种肿瘤细胞有抑制作用,其抑瘤作用可能是通过抑制Bcl-2的表达、促进Bax和caspase-3的表达实现的.     

二十二碳六烯酸复合物的体内外抑瘤作用及其机制

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)复合物的抗癌作用及其作用机制.方法 建立H22小鼠肝癌细胞的移植瘤动物模型,观察DHA复合物的体内抑瘤作用,采用体外细胞培养的方法 ,观察DHA复合物对宫颈癌HeLa细胞和胶质瘤U251细胞的体外抑瘤作用.采用电镜和荧光显微镜观察细胞形态的变化.Western blot法测定移植瘤组织中caspase-3蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HeLa细胞和U251细胞中Bel-2和Bax mRNA的表达.结果 DHA复合物对小鼠H22细胞移植瘤有明显的抑瘤作用,其低、中、高剂量组的抑瘤率分别为37.62%、48.55%和58.63%.在体外,随着剂量的增加,DHA复合物对HeLa细胞和U251的生长抑制率逐渐增高,Hela细胞的IC50为0.9814 μg/ml,U251细胞的IC50为0.3746 μg/ml.DHA复合物处理后,移植瘤细胞的细胞核呈分叶状,可见大小不等、致密的凋亡小体;HeLa细胞的细胞核内可见致密浓染的黄绿色荧光和碎片,分布在核周边,呈肾形或者半月形,核固缩,趋于碎裂.与CMC组比较,DHA复合物能明显促进caspase-3蛋白的表达,且DHA复合物剂最越高,caspase-3蛋白的表达升高越明显.DHA复合物能下调U251细胞中Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax mRNA的表达,与CMC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 DHA复合物在体内外对多种肿瘤细胞有抑制作用,其抑瘤作用可能是通过抑制Bcl-2的表达、促进Bax和caspase-3的表达实现的.     

五倍子酸对H22肝癌细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的 观察五倍子酸(trihydroxybenzoic acid,TBA)对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法 建立移植性H22肝癌细胞荷瘤小鼠模型,每组10只,TBA高、中、低剂量组TBA溶液0.50g/kg、0.25g/kg、0.13g/kg灌胃给药;对照组0.5%羧甲基纤维素钠溶液0.2mL/10g灌胃给药;阳性对照组CTX 20mg/kg腹腔注射,每天固定时间给药一次,连续给药10d。观察各组小鼠实体瘤重,计算抑瘤率,HE染色检测肿瘤组织细胞形态变化。结果 TBA 0.50g/kg、0.25g/kg和0.13g/kg组小鼠平均瘤重不同程度下降,其中TBA 0.25g/kg组平均瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),TBA三组抑瘤率分别为24.83%、45.52%和15.86%。结论 TBA灌胃给药可以不同程度抑制H22肿瘤的生长。     

淫羊藿苷体内抑瘤作用及其机制

目的：探讨淫羊藿苷（icariin，ICA）对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及其机制。方法：肝癌细胞株H22右腋皮下接种C57BIM6小鼠，建立小鼠体内荷移植瘤模型。接种H22细胞后24h，用高、中、低不同剂量（9、4．5、2．25mg／ml）的ICA和环磷酰胺（cyclophosphamide，Cy）（30mg／kg）进行局部注射治疗，待荷瘤对照组肿瘤长至1g左右，各组小鼠称重，处死。留自凝血，取血清检测TNF—α；依次取脾脏及肿瘤组织称重；取1／2脾脏和肿瘤组织制成单细胞悬液，剩余的用10％中性甲醛溶液固定，做病理切片和H—E染色以及TUNEL实验；脾单细胞悬液用流式细胞术（FACS）检测CD3、CD4、CD8、DX5等抗原分子的表达；肿瘤单细胞悬液用AnnexinV／PI双染检测肿瘤细胞的早期与晚期凋亡情况，同时取适量的瘤细胞用70％乙醇固定以FACS检测肿瘤细胞周期各时相的分布情况。结果：Cy治疗组抑瘤率为67．16％，ICA高、中、低剂量治疗组抑瘤率分别为24．63％、32．84％、5．22％。AnnexinV／PI双染结果表明，Cy治疗组与ICA治疗组早期凋亡细胞率均高于荷瘤对照组[Cy组为（9．11±1．584）％，ICA组为（7．14±1．376）％，荷瘤对照组为（3．6±2．38）％]。TUNEL结果显示，ICA治疗组凋亡指数为（5．35±0．73）％，显著高于荷瘤对照组中的凋亡指数[（1．03±1．17）％]（P〈0．01）。正常小鼠血清中未检测到TNF—α的存在，而ICA治疗组及Cy治疗组中检测到微量TNF-α。病理检测表明，ICA中、高剂量组肿瘤组织中出现较多的灶状及小片状坏死，包膜处及肿瘤边缘可见瘤细胞坏死，包膜及肿瘤组织中可见少量的炎细胞（淋巴细胞与单核细胞）浸润。结论：ICA有显著的抑瘤作用，可能通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。     

壳寡糖对体内外肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨

目的　探讨壳寡糖对体内外肝癌细胞生长的抑制作用及其相关机制。方法　体外实验采用噻唑蓝（ＭＴＴ）法检测壳寡糖对肝癌ＳＭＭＣ-７７２１细胞生长的影响,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,ＲＴ-ＰＣＲ方法检测Ｂｃｌ-２ｍＲＮＡ的表达。体内实验观察壳寡糖对肝癌Ｈ２２移植瘤生长的影响,免疫组化检测肿瘤组织Ｂｃｌ-２蛋白的表达。结果　体外实验表明,壳寡糖能抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡,其作用随剂量增加而增强;壳寡糖４ｍｇ／ｍｌ的细胞增殖抑制率为２３.８２％,壳寡糖２ｍｇ／ｍｌ的凋亡率为１５.２８％,与对照组比较,差异均有统计学意义（Ｐ＜０.０１）;壳寡糖能下调肝癌细胞中Ｂｃｌ-２ｍＲＮＡ的表达。体内实验显示,壳寡糖能抑制小鼠肝癌Ｈ２２移植瘤的生长,高剂量组３００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）的抑瘤率为３３.１３％,并可明显下调肿瘤组织中Ｂｃｌ-２蛋白的表达。结论　壳寡糖在体内外均具有抑制肝癌细胞增殖及诱导肝癌细胞凋亡的作用,其促凋亡的机制可能与下调Ｂｃｌ-２的表达有关。     

蝎毒抗癌多肽对H22细胞株体内、体外的抑瘤作用

目的 观察蝎毒抗癌多肽（APBMV）对小鼠肝癌（H22）实体瘤及瘤细胞的抑制作用。方法 应用MTT法检测APBMV对H22瘤细胞的毒性作用；通过小鼠H22实体瘤模型，观察APBMV对肿瘤生长的抑制作用及对小鼠外周血白细胞（WBC）数和脾脏指数（SI）的影响。结果 APBMV对H22细胞具有一定的毒性作用，但剂量效应关系不明显（P＞0．05）。APBMV能明显抑制小鼠H22肿瘤的生长，抑制率最高可达40．30％（P＜0．01），带瘤小鼠外周血WBC和SI无明显变化或略高于对照组，而阳性对照5－Fu组小鼠WBC和SI均明显下降（P＜0．01）。结论 APBMV是东亚钳蝎蝎毒中的1种低毒有效的抗肿瘤成分，能抑制小鼠肝癌的生长。     

姜黄水提液抗氧化与抑瘤作用的初步研究

背景与目的:观察姜黄水提液对荷H22肝癌小鼠实体瘤的抑制作用及其对荷瘤鼠体内抗氧化能力的影响.材料与方法:建立移植性H22肝癌小鼠实体瘤的模型,灌胃给药,观察姜黄水提液及纯姜黄素给药后各处理组小鼠实体瘤重,肝重,脾重以及GSH、SOD的变化情况.结果:纯姜黄素组抑瘤率为37.97%,姜黄水提液各剂量组未见抑瘤作用.姜黄水提液与纯姜黄素均使荷瘤鼠体内GSH和SOD水平升高,两者效果相似.结论:中药姜黄水提液对H22肝癌小鼠实体瘤抑制作用不明显;但是姜黄水提液和纯姜黄素均能提高实验小鼠体内的GSH和SOD的水平,有良好的提高体内抗氧化能力作用.     

扶正中药体内外抑瘤作用研究

龙华医院肿瘤科从1968年以来收治晚期原发性肺癌病人采用“扶正培本”为主的方法治疗,在缓解和延长生存期,免疫指标的调整等方面取得了良好疗效。为了进一步探讨扶正中药的抑瘤效率和抑瘤机理,我们作了实验动物体内外抑瘤研究和机理分析,现报告如下:     

甘草多糖的体内抑瘤作用及其机制的研究

目的：探讨甘草多糖对于S-180荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制作用及其机制。方法：Balb/c小鼠接种S-180肉瘤瘤株后，分别给予甘草多糖和对照药物12天，然后处死。将荷瘤小鼠的肿瘤取出称重，并进行比较；免疫组织化学方法和HE染色对肿瘤中的bcl-2、p53和bax蛋白进行比较分析。结果：给予甘草多糖的小鼠的肿瘤明显小于对照组，而对照组的bcl-2和p53蛋白的表达率明显高于甘草多糖的小鼠组，bax蛋白的表达率则低于后。结论：甘草多糖对于S-180肿瘤具有抑制作用，并有可能影响bcl-2、p53及bax基因蛋白的表达。     

北方鹅血对小鼠移植瘤抑瘤作用的初步实验研究

目的研究鹅血对小鼠移植瘤抑瘤作用.方法通过鹅血对昆明纯系小鼠移植瘤S180、H22抑瘤作用,计算抑瘤率及鹅血对移植小鼠体重的影响.结果不同剂量的鹅血对H22、S180移植瘤前后小鼠体重与对照组相比无差异(P＞0.05).抑瘤作用显著(P＜0.05、P＜0.02、P＜0.01).S180抑瘤率分别为51.59%、46.69%、45.05%、37.54%.H22抑瘤率分别为:63.18%、62.63%、41.2%、40.86%、33.56%.结论初步实验证明生鹅血对S180、H22移植瘤抑瘤作用显著,无毒性反应.     

地锦草水提液对H22荷瘤小鼠生长抑制及其机制探讨

目的：研究地锦草对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用并探讨其对肿瘤组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3,MMP-3）蛋白表达的影响。方法：建立H22荷瘤小鼠模型,随机分为模型对照组、地锦草264mg／（kg·d）高剂量组、地锦草132mg／（kg·d）中剂量组、地锦草66mg／（kg·d）低剂量组和环磷酰胺组50mg／（kg·d）。灌胃给药14d后处死小鼠,剥离瘤组织,测量肿瘤体积大小。采用HE染色其形态学变化;免疫组化法观察肿瘤组织VEGF和MMP-3蛋白表达情况。结果：地锦草高剂量组的肿瘤体积为（3．125±1．711）mm2,模型对照组为（5．081±1．936）mm2;地锦草高剂量组肿瘤质量为（1．784±1．765）g,模型对照组为（4．418±2．720）g。与模型组比较,地锦草高剂量组肿瘤体积明显缩小,t=2．184,P=0．037;且其瘤质量减轻,t=2．145,P=0．041。地锦草和环磷酰胺组小鼠瘤体组织切片可见癌细胞聚积成巢,肿瘤细胞数量减少,多处组织坏死,瘤体与周围组织界限清楚,且未侵犯周围组织。免疫组化结果显示,模型组VEGF和MMP=3蛋白表达增强。地锦草高剂量组VEGF蛋白表达（0．160±0．004）下降,与模型对照组（0．228±0．020）比较差异有统计学意义,t=5．011,P〈0．001。地锦草高、中、低剂量组MMP=3蛋白表达分别为0．316±0．062、0．303±0．057和0．302±0．058,与模型组比较差异均有统计学意义,t值分别为6．322、6．845和6．534,P值均〈0．001。各组肿瘤组织的VEGF与MMP3蛋白表达无直接相关性,r=0．069,P=0．709。结论：地锦草可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抑制H22荷瘤小鼠的肿瘤组织VEGF和MMP-3蛋白的表达有关。     

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的:探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法:采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果:姜黄素浓度在(15~35)μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在(1.25~5)μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加(P<0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低(P<0.05),Caspase-3 mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。     

Apoptosis-inducing effect of Jinke on Molt-4 cells and its mechanism

Objective: To investigate the apoptosis-inducing effect of Jinke on Molt-4 cells and its possible mechanism.Methods: The Molt-4 cells were treated with different concentrations of Jinke and then cultured for necessary time.The Annexin-V / PI method was used to detect the apoptosis rate.The cell cycle was analyzed by DNA content with flow cytometry.Double parameters analysis of cyclins/ DNA was performed to detect the expression of cyclin E.API method was used to confirm the cell cycle-specific apoptosis.The expressions of Bcl-2 and Bax were detected by western blot.Results: 24 h after the treatment of 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 and 3.0 mg/mL Jinke, the apoptosis rate of Molt-4 cells was evaluated in a concentration-dependent manner, from 5.2% of the control group to 41.0% of the 3.0 mg/mL Jinke group.When the Molt-4 cells were cultured with 1.5 mg/mL Jinke, the apoptosis rate was evaluated in a time-dependent manner.DNA content analysis showed that G0/G1 phase of Molt-4 cells increased in a time-dependent manner.The expression of cyclin E increased gradually.API assay showed the apoptosis cells were almost in G0/G1 phase.Western blot showed the Bcl-2 was down-regulated and the Bax was up-regulated.Conclusion: Jinke could induce G1 phase-specific apoptosis in Molt-4 cells in time- and concentration-dependent manners involving G1 phase arrest.The mechanism of apoptosis inducing effect may be related to the upregulation of Bax and the down-regulation of Bci-2.     

洛铂体外诱导人结肠癌细胞株LOVO细胞凋亡及其作用机制的研究

背景与目的:化疗是结肠癌主要的治疗手段,含铂类药物的联合化疗方案延长了患者的生存期,但不良反应却很明显,尤其是奥沙利铂所致的外周神经病变较常见,并且FOLFOX4方案还容易引起耐药,因此有必要寻找一种疗效类似或优于奥沙利铂、不良反应小、对耐药肿瘤有效、水溶性好及稳定的新型铂类药物.本研究探讨洛铂体外诱导人结肠癌细胞株LOVO细胞凋亡及其作用机制,为洛铂的临床应用提供理论依据.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度(500、1000和2 000 μmol/L)的洛铂作用LOV0细胞24 h的生长抑制率;Annexin V-FITC检测法检测人结肠癌细胞株LOV0细胞凋亡的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达变化.结果:洛铂体外能抑制人结肠癌细胞株LOV0细胞的增殖,且呈剂量依赖性(P＜0.05);Annexin V-FITC检测显示,洛铂能诱导LOV0细胞凋亡,实验组的总凋亡率与对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05),且细胞的早期凋亡呈剂量依赖性,洛铂诱导细胞凋亡的阈值为1 000 μ mol/L;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3显示,与对照组相比,实验组Bax和Caspase-3的表达明显增加,而Bcl-2的表达明显减少,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:洛铂能诱导体外培养的LOVO细胞凋亡,其作用机制可能是抑制LOVO细胞Bcl-2表达,激活Bax表达.洛铂介导的凋亡途径可能与线粒体通路Bcl-2(bax)-Caspase信号传导有关.     

蝎毒联合眼镜蛇毒体外抗胃癌细胞BGC-803及作用机制的研究

目的:探讨蝎毒（scorpid poison）与眼镜蛇毒（cobra venom）联合应用对胃癌细胞BGC-803凋亡的影响及作用机制。方法:用蝎毒和（或）眼镜蛇毒处理体外传代培养的胃癌细胞株BGC-803。荧光显微镜下观察细胞增殖变化、进行活细胞计数及计算细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR观察凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。结果:蝎毒与眼镜蛇毒联合应用相对于单用蝎毒或眼镜蛇毒可显著提高胃癌细胞凋亡率、抗凋亡基因Bcl-2表达明显下降（P<0.05）。随着蝎毒和眼镜蛇毒合用浓度的增高,胃癌细胞凋亡率增加、抗凋亡基因Bcl-2表达下降更明显（P<0.05）。同一药物浓度作用24h与48h相比,亦有明显差异（P<0.05）。结论:蝎毒与眼镜蛇毒联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,并具有浓度和时间依赖性,其机制可能与增强诱导胃癌细胞凋亡及调控凋亡相关基因Bcl-2的表达有关。     

二乙酰二脱水卫矛醇在体内外的抗瘤作用及其机制

目的：观察二乙酰二脱水卫柔醇（ｄｉａｃｅｔｙｌｄｉａｎｈｙｄｒｏｇａｌａｃｔｉｔｏｌ,ＤＡＤＡＧ）在体内外的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡的关系。方法：建立小鼠脑内接种艾氏腹水癌模型,观察ＤＡＤＡＧ体内抗瘤作用;ＭＴＴ法观察ＤＡＤＡＧ对人早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０和人红白血病细胞株Ｋ５６２的生长抑制作用,ＤＮＡ电泳和流式细胞仪分析ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：ＤＡＤＡＧ１０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ,每天１次,连续给药７天,可显著延长小鼠中位生存时间;对ＨＬ－６０和Ｋ５６２均有生长抑制作用,药物作用７２ｈ的ＩＣ５０分别为３．７ｍｇ／Ｌ和２５．５ｍｇ／Ｌ;作用ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带,ＤＮＡ直方图出现亚Ｇ１峰。结论：ＤＡＤＡＧ抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡有关。     

Vandetanib对人卵巢癌细胞抑制作用机制探讨

目的探讨Vandetanib对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测体外不同时间不同浓度的Vandetanib对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测药物对细胞凋亡及其周期分布变化;采用蛋白质印迹法分析凋亡基因Bcl-2、Bax及反映肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的蛋白表达变化。结果与对照组相比,Vandetanib能明显抑制SKOV3和SKOV3/DDP生长,呈时间-剂量依赖性,IC50值均呈明显减小趋势。32μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP 72h后,抑制率分别为（43.21±0.92）%和（56.74±1.09）%,64μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP72h后,抑制率分别为（55.37±1.21）%和（79.20±0.39）%,耐药株SKOV3/DDP的抑制率明显高于敏感株SKOV3,差异有统计学意义,P〈0.05。流式细胞术结果显示,随时间浓度的增加,两种细胞凋亡明显增加,G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少,差异有统计学意义,P〈0.05。蛋白印迹法结果显示,药物作用于SKOV3细胞株Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax表达无明显变化;药物作用于SKOV3/DDP细胞株Bcl-2表达减少,Bax表达增加,耐药株不表达MMP-2。结论 Vandetanib对两种细胞株生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,可以诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G1期,其机制与下调Bcl-2/Bax、MMP-2表达有关,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力。