科罗索酸对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究科罗索酸（corosolic acid）对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法:使用不同浓度的科罗索酸处理K562细胞,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响,分光光度法检测对Caspase-3/7,-8,-9活性的影响。结果:科罗索酸能显著抑制白血病K562细胞的增殖,并且这种抑制作用随着科罗索酸浓度升高和培养时间延长而显著增强。科罗索酸处理后的K562细胞中,处于G0/G1期的细胞比率明显升高（P＜0.05）,S期和G2/M期的细胞明显减少（P＜0.05）,凋亡细胞明显增多（P＜0.05）,Caspase-3/7,-8和-9的活性明显增强。结论:科罗索酸能抑制白血病K562细胞的增殖,促进其凋亡,这一效应可能与Caspase活性的增强有关。     

重组人类核心蛋白聚糖对白血病K562细胞增殖的影响

 【摘要】　目的　观察重组人类核心蛋白聚糖（rhDCN）对白血病 K562细胞生长抑制、凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法　通过Lipofectamine 2000脂质体介导转染对数生长期的白血病K562细胞,实验分组为0.9 % NaCl溶液组、pcDNA3.1（+）／K562组、pcDNA3.1（+）-DCN／K562组和脂质体组。经瑞特染色观察转染后细胞形态的改变,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白bcl-xl、Mcl-1及Bax的表达。结果　pcDNA3.1（+）-DCN／K562组瑞特染色呈现典型的凋亡形态学改变。MTT结果显示,pcDNA3.1（+）-DCN／K562组转染24 h细胞增殖抑制率为（16.14±1.08）%,转染48 h为（14.07±1.01）%,转染72 h为（20.29±1.19）%,明显高于对应时间点其他组增殖抑制率,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。FCM检测结果显示,pcDNA3.1（+）-DCN／K562组凋亡率为（20.15±1.31）%、细胞的G0／G1期细胞百分率为（51.15±0.57）%,与其他各组比较增加明显,差异有统计学意义（均P＜0.05）。Western blot结果显示,pcDNA3.1（+）-DCN／K562组与其他各组比较bcl-xl、Mcl-1蛋白表达减低,Bax蛋白表达升高。结论　rhDCN重组质粒可有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,rhDCN对细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-xl、Mcl-1、Bax的影响可能是其发挥作用的机制。     

Livin反义寡核苷酸对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Livin反义寡核苷酸（ASODN）对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响。方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN）,脂质体介导转染K562细胞后,采用四甲基偶氮唑盐光吸收法（MTT）检测细胞增殖,AnnexinV—FITC法检测细胞的凋亡,反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LivinmRNA的表达。结果LivinASODN在终浓度为600nmol／L作用K562细胞48h时,能明显抑制其增殖细胞增殖咖制率（IR）为（52．99±2．67）％],降低LivinmRNA的表达[ODR为（59．75±3．24）％],K562细胞凋亡率显著增加f（36．89±1．08）％]（P〈0．01）,而Lip—MSODN组、Lip对照组与细胞对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LivinASODN可下调Livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞凋亡。     

Apolloon反义寡核苷酸对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Apollon反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响。方法设计合成特异性的Apollon硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（missense oligonucleotide,MSODN）,脂质体介导转染K562细胞后,采用MTT法检测K562细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞的凋亡。结果Apollon反义寡核苷酸对K562细胞的生长抑制呈浓度-时间依赖性。Apollon ASODN在终浓度为600 nmol/L作用K562细胞时,能明显抑制其增殖,K562细胞凋亡率显著增加（P<0.01）。结论Apollon 反义寡核苷酸可下调Apollon基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞凋亡。     

bcl—xL在姜黄素诱导K562细胞凋亡中的作用及机制

目的:探讨bcl-xL基因在姜黄素诱导K562细胞凋亡过程前后的表达情况及其作用机制.方法:不同浓度的姜黄素作用于K562细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析姜黄素作用前后胃癌细胞中bcl-xL的表达.结果:姜黄素能显著抑制体外培养的K562细胞生长并呈量效和时效关系.流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加.RT-PCR和Western blot结果提示经姜黄素作用后,bcl-xL表达下降.结论:姜黄素能抑制K562细胞的生长并促进其凋亡,其发生与bcl-xL有关.     

姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响

目的： 研究姜黄素对人永生化表皮HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。方法：通过免疫细胞化学法和免疫印迹检测姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。结果：免疫细胞化学染色结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达增强。Western blot检测结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达上调。结论：姜黄素诱导HaCaT细胞凋亡过程中伴随着抑凋亡基因bcl-2表达的抑制和促凋亡基因p53、Bax和Fas基因的激活。由此证明姜黄素通过多种凋亡相关基因的调控,激活凋亡信号传导途径,诱使细胞凋亡。     

γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响

[目的] 研究γ-干扰素对冬凌草甲素抑制白血病K562细胞增殖的影响。[方法] 以浓度1000U／ml的γ-干扰素与不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，观察细胞生长状态的变化。MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。[结果] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用可显著抑制K562细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并降低K562细胞端粒酶活性，其作用呈现出明显的量-效与时-效关系。[结论] γ-干扰素与冬凌草甲素联合应用对白血病K562细胞具有明显的增殖抑制作用，降低细胞端粒酶活性足诱导细胞发生凋亡。可能是其重要作用机制之一。     

泛素异肽酶抑制剂Ⅰ抑制人类白血病K562细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的 探讨泛素异肽酶抑制剂Ⅰ对人类白血病K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 K562细胞经不同浓度的泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测其对K562细胞增殖的抑制作用,AnnexinV FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录-定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测bcl-2、bax和凋亡特异性酶Caspase-3表达水平.结果 泛素异肽酶抑制剂Ⅰ能抑制K562细胞的增殖,随作用时间的延长和浓度的增加抑制作用增强.经100 nmol/L泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理72 h,K562细胞早期凋亡率为（15.4±1.3）％,与对照组的（4.1±0.9）％相比明显上升（P＜0.01）.用100 nmol/L的泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理K562细胞72 h后,Caspase-3和bax mRNA表达增高,bcl-2表达降低,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 泛素异肽酶抑制剂Ⅰ对K562细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,提示其可能用于治疗白血病.     

辛伐他汀引起的Ras-ERK途径改变对K562细胞增殖和凋亡的调节

目的 探讨辛伐他汀作用K562细胞后的Ras-细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路分子水平的变化,以说明辛伐他汀通过引起Ras-ERK信号通路分子水平的变化参与K562细胞细胞增殖和细胞凋亡的调节.方法 体外用辛伐他汀处理慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用逆转录聚合酶链反应检测Ras-ERK信号通路分子在转录水平的变化.结果 辛伐他汀能抑制K562细胞的增殖,使K562细胞停滞在G_0-G_1期,明显诱导K562细胞凋亡,Ras-ERK信号通路的大多数分子在转录水平出现差异表达.结论 辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的Ras-ERK信号通路抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

PTD4-GFP-Apoptin 融合蛋白对白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究 PTD4-GFP-Apoptin 融合蛋白对不同类型白血病细胞的增殖抑制及诱导凋亡效应。方法用基因工程技术构建含有 PTD4-GFP-Apoptin 目的基因的重组载体,表达 PTD4-GFP-Apoptin融合蛋白,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测其对白血病细胞增殖的影响,用流式细胞术（FCM）检测其对白血病细胞凋亡的影响。结果 PTD4-GFP-Apoptin 对不同类型的白血病细胞都有不同程度的增殖抑制效应,且抑制效应与作用的时间和浓度呈正相关;PTD4-GFP-Apoptin 对急性髓系白血病细胞株HL-60有诱导凋亡作用,其凋亡率与 PBS 对照组细胞相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PTD4能够携带大分子蛋白质穿过细胞膜,PTD4-GFP-Apoptin 在体外对多种白血病细胞有抑制增殖的作用;Apoptin 可诱导白血病细胞凋亡,而正常细胞不受影响,可能成为临床治疗白血病的新型药物。     

Cyclin D1基因沉默对K562细胞增殖及凋亡的影响

[目的]利用RNA干扰（RNAi）技术观测其对白血病K562细胞cyelin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒．通过壳聚糖介导转染K562细胞，Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化；集落形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclinD1基因的shRNA表达质粒（pshRNA-419和pshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyelin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；细胞阻滞于G0／G1期，细胞凋亡明显。而m—pshRNA-790质粒并无上述生物学效应：[结论]cyclinD1基因表达下调可抑制K562细胞生长影响细胞周期分布并诱导细胞凋亡提示，因可能是白血病治疗的一个有效靶点。     

姜黄素诱导白血病细胞凋亡相关分子机制的研究进展

姜黄素是从姜科姜黄素属植物中提取的一种多酚类化合物,具有抗感染、抗氧化、抗肿瘤等药理作用.姜黄素的抗肿瘤作用日益受到人们的重视,其对多种肿瘤细胞的产生、增殖及转移均有抑制作用.文章综述近年来姜黄素诱导白血病细胞凋亡的相关分子机制.     

BH3模拟物S1诱导人类白血病细胞株K562凋亡的作用机制

 【摘要】　  目的　以人类白血病细胞株K562为研究对象,探讨BH3模拟物S1 诱导人类白血病细胞凋亡的机制。方法　通过XTT法检测S1 作用下K562细胞的生存率; S1作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率;分光光度法检测Caspase-3、-8、-9激活;免疫共沉淀检测S1作用后bax、bak释放情况。结果　与对照组相比S1能够以时间和浓度依赖的方式诱导K562细胞凋亡,24 h的IC50值为13.5 μmol／L;流式细胞术结果显示,S1 处理12 h后K562细胞出现大量早期凋亡,时间延长至24 h后,晚期凋亡比例显著增加;S1通过激活Caspase-3、-9而不是Caspase-8诱导K562细胞通过内源凋亡通路进行凋亡;免疫共沉淀实验检测5 μmol／L的S1处理8 h后K562细胞中的抗凋亡蛋白bcl-2和mcl-1受到S1的拮抗,促凋亡蛋白bax和bak分别从抗凋亡蛋白bcl-2和mcl-1上得到释放。结论　S1可能通过拮抗bcl-2、mcl-1蛋白释放bax、bak诱导人类白血病细胞凋亡。     

微小RNA-27 a对黑色素瘤WM239细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨微小RNA-27a（ miR-27a）模拟物和抑制物转染黑色素瘤WM239细胞后对细胞增殖和凋亡的影响。方法将miR-27a模拟物、抑制物及其阴性对照转染WM239细胞,荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测相应的微小RNA,四甲基偶氮唑盐（ MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果细胞转染效率为80%~90%。转染miR-27a模拟物后,细胞内miR-27a表达量明显上升（2-△△CT值为26.98±0.01）,与正常对照组相比差异有统计学意义（ t＝－1123.67,P＝0.00）;转染miR-27a抑制物后,细胞中miR-27a的表达量下降（2-△△CT值为0.96±0.02）,与正常对照组相比差异无统计学意义（t＝4.04,P＝0.06）。转染miR-27a模拟物后,细胞增殖受到明显抑制,与正常对照组相比差异具有统计学意义[72 h吸光度（0.45±0.02）∶（0.72±0.01）,F＝129.56,P﹤0.05]。miR-27a模拟物组G0-G1期的细胞比例升高[（74.83±1.46）∶（63.73±1.25）,F＝30.33,P﹤0.05],S期和G2-M期细胞比例减少[（21.33±1.75）∶（27.50±1.25）,F＝14.98,P﹤0.05;（3.90±1.31）∶（8.80±2.10）,F＝3.66,P﹤0.05];模拟物组细胞凋亡率与正常对照组相比明显增加[（29.67±0.91）%∶（1.44±0.85）%, F＝530.90,P﹤0.01];而抑制物组对细胞周期和凋亡无明显作用。结论 miR-27a抑制黑色素瘤细胞增殖,具有抑瘤作用,这与其促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0-G1期相关。     

榄香烯乳区域动脉灌注对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

目的：观察中药提取物榄香烯乳术前区域动脉灌注对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法：应用末端转移酶介导的脱氧核苷酸末端标记法（TUNEL法）和增殖细胞核抗原（PCNA）、凋亡抑制基因蛋白（bcl－2）免疫组化检测方法,观察术前榄香烯乳治疗组14例和Ⅰ期手术组17例乳腺癌标本的凋亡指数,增殖指数和bcl－2蛋白表达强度的差异。结果：榄香烯乳治疗组凋亡指数（7．97±1．50）明显高于Ⅰ期手术对照组（2．26±0．49）;bcl－2蛋白表达（分值0．50±0．67）明显低于对照组（1．38±0．87）,P值均＜0．01;榄香烯乳治疗组增殖细胞核抗原指数（44．54±9．99）与对照组（42．80±6．78）差异无显著性,P＞0．05;14例术前榄香烯乳治疗组等级相关分析凋亡指数与bcl－2分值呈中度负相关（rs＝－0．508）。结论：乳腺癌患者术前区域动脉灌注榄香烯乳可降低乳腺癌细胞bcl－2基因蛋白的表达,诱导乳腺癌细胞凋亡。     

反义ras基因增强足叶乙甙对白血病K562细胞的诱导凋亡作用

目的 研究ras p21蛋白在bcr-abl p210蛋白抗凋亡信号传导通路中的作用。方法 应用逆转录病毒载体pLXSN将反义N－ras1 cDNA转导到K562细胞系中后，通过足叶乙甙对细胞进行诱导凋亡。结果 转导反义N－ras1 cDNA的K562细胞内N－ras p21表达下降。反义N－ras转民细胞较对照细胞K562易发生凋亡，对药物的敏感性显著增高。结论 ras p21蛋白是bcr-abl p210蛋白介导抗凋亡信号的重要的下游蛋白，阻断该蛋白的功能有可能成为治疗人类慢性髓性白血病的1个选择点。     

靶向激活蛋白激酶PKR对白血病K562细胞增殖的影响及机制

背景与目的:由t(9;22)(q34;q11)导致的bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中起着重要的作用.本研究运用CML特异的bcr/abl融合基因的mRNA与外源重组反义RNA形成双链RNA (double strand RNA,dsRNA)能激活双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)的策略,研究其对白血病K562细胞增殖的影响及可能的机制.方法:将dsRNA类似物聚肌苷酸-聚胞啶酸(Polyriboinosinic Polyribocytidylic Acid,polyIC)、含ber/abl融合基因序列40bp的逆转录病毒载体RV-40AS、RV-40AS 2-氨基嘌呤(2-aminopurine,2AP)和含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的逆转录病毒载体RV-GFP作用于K562细胞,并以ECV304细胞作对照细胞株.通过细胞计数、MTT法和半固体集落形成实验检测其对细胞生长增殖的影响,用流式细胞仪检测处理前后细胞周期的变化,用Western blot法检测细胞内PKR、磷酸化PKR(phosphated PKR,p-PKR)、真核翻译启始因子2α(eukaryotic initiation factor-2α,eIF2α)、磷酸化eIF2α(phosphated eIF2α,p-eIF2α)蛋白表达的变化,用3H-亮氨酸掺入实验检测细胞总蛋白合成水平的变化.结果:polyIC对K562细胞和ECV304细胞生长和增殖均具有非特异性抑制作用.而RV-40AS仅对K562细胞具有特异性的抑制效应.PKR抑制剂能阻断RV-40AS对K562 细胞的抑制效应.polyIC和RV-40AS作用K562细胞24 h 后,S期细胞减少[polyIC组(37.26±2.35)%,未处理组(58.53±5.42)%,P＜0.05;RV-40AS组(31.48±3.65)%,未处理组(58.53±5.42)%,P＜0.05],G0/G1期细胞增多[pdylC组(50.97±2.18)%,未处理组(36.44±4.20)%,P＜0.05;RV-40AS组(57.47±3.61)%, 未处理组(36.44±4.20)%,P＜0.05].polyIC处理K562细胞组、ECV304细胞组以及RV-40AS处理K562细胞组的p-PKR和p-eIF2α蛋白表达显著上调,且总蛋白合成水平下降[RV-40AS处理的K562细胞组(3.5±1.9)cpm/ng,未处理组(26.8±2.6)cpm/ng,P＜0.05].结论:外源重组反义RNA与bcr/abl融合基因的mRNA形成的dsRNA可通过激活PKR而抑制K562细胞的生长增殖,其机制是通过活化的PKR使蛋白合成启始因子eIF2a磷酸化,从而阻断细胞内蛋白合成的启动,及阻止细胞周期进程来实现.     

苦参碱诱导K562白血病细胞分化和凋亡的实验研究

目的：研究苦参碱的抗肿瘤作用。方法：以人红白血病细胞株Ｋ５６２为研究对象,通过形态学观察和细胞化学染色了解不同浓度的苦参碱对肿瘤细胞的诱导分化作用。并利用程序性细胞死亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果：０．１ｇ／Ｌ苦参碱能够诱导Ｋ５６２白血病细胞分化,形态学上类似中幼红和晚幼红细胞,联苯胺染色阳性率由１％￣２％上升至７％,细胞化学染色显示糖原由阴性转为强阳性且阳性率为１００％;１．０ｇ／Ｌ苦     

辛伐他汀联合阿糖胞苷对K562细胞增殖与凋亡的影响

 目的　探讨辛伐他汀（SV）联合阿糖胞苷（Ara-C）对K562 细胞增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度SV和Ara-C单用或者联合处理K562细胞,对照组为K562细胞。药物作用24、48、72 h后收集细胞,分别观察各组细胞形态,采用MTT法检测不同组别细胞的生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率、细胞坏死比例。结果　SV联合Ara-C组与单药组相比细胞形态明显有核固缩现象,且可见凋亡小体形成,并且随着处理时间的增加,抑制率也增大。其中15 μmol／L SV联合20 μmol／L Ara-C的细胞抑制作用最为显著,72 h细胞抑制率为（72±1）%,明显高于15 μmol／L SV组的（45±2）%和20 μmol／L Ara-C组的（44±0）%（P＜0.01）,表现为协同抑制作用（24、48 h金氏Q值为1.24和1.19）。流式细胞术检测发现20、15和 10 μmol／L SV组K562细胞早期凋亡率AnnexinV明显高于对照K562细胞（P＜0.01）,而且随着时间延长和剂量的增大早期凋亡率也增加（P＜0.05）。20和15 μmol／L SV组早期凋亡率均高于10 μmol／L SV组,而前两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。晚期凋亡细胞率（PI）各组中差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论　SV 体外抑制K562细胞增殖及诱导细胞凋亡,SV 与Ara-C具有协同作用,增加了K562细胞对化疗药物的敏感性。15 μmol／L 可能为SV体外最佳作用浓度。