Nultin-3联合顺铂对口腔鳞状细胞癌细胞的抑制作用及机制研究

目的 探讨MDM2抑制剂Nultin-3联合顺铂对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的抑制作用及其机制。方法 将人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞分为对照组、顺铂组、Nultin-3组及Nultin-3联合顺铂组(联合组), 采用噻唑蓝(MTT)法分别检测各组Tca8113细胞处理48 h后的增殖率;采用蛋白质印迹法检测各组细胞MDM2、p53及凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 联合组处理后口腔鳞状细胞癌Tca8133细胞的增殖率明显低于其它各组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。联合组Caspase-9、Caspase-3及p53蛋白的相对表达量明显高于顺铂组和Nultin-3组(P＜0.05);此外, 联合组MDM2蛋白的相对表达量显著低于顺铂组和Nultin-3组(P＜0.05)。结论 Nultin-3联合顺铂作用于口腔鳞癌细胞Tca8113时具有协同增效作用。Nultin-3通过调控MDM2-p53信号通路并上调促凋亡蛋白Caspase-9及Caspase-3的表达水平, 以达到增强顺铂抑制口腔鳞状细胞癌的作用, 从而为相关临床研究及治疗提供坚实的理论基础。     

131I联合甲磺酸阿帕替尼对难治性甲状腺癌细胞的抑制作用及机制研究

目的 探讨¹³¹I联合血管生成抑制剂甲磺酸阿帕替尼对难治性甲状腺癌细胞的抑制作用及其机制。方法 将难治性甲状腺癌细胞分为对照组、¹³¹I组、阿帕替尼组及¹³¹I联合阿帕替尼治疗组(联合组),使用噻唑蓝(MTT)法检测各组肿瘤细胞治疗24 h、48 h后的增殖率;采用免疫荧光方法及蛋白印迹法检测各组细胞凋亡蛋白Caspase-3和血管生成蛋白VEGF的表达。结果 联合组处理后细胞的增殖率明显低于其它各组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。联合组Caspase-3蛋白的表达含量明显高于其它各组(P＜0.01),联合组VEGF蛋白的相对表达量显著低于其它各组(P＜0.01)。结论 ¹³¹I联合甲磺酸阿帕替尼作用于难治性甲状腺癌细胞时具有协同增效作用,¹³¹I联合甲磺酸阿帕替尼通过上调促凋亡蛋白Caspase-3,下调VEGF的表达水平以达到增强¹³¹I抑制难治性甲状腺癌的增殖作用,从而为难治性甲状腺癌的临床治疗提供较好的策略。     

异烟肼通过ROS/Caspase-3信号通路诱导L-02细胞凋亡及槲皮素的保护作用

目的：探讨ROS/Caspase-3信号通路在异烟肼（INH）诱导人正常肝细胞（L-02细胞）凋亡中的作用及槲皮素的保护效应。方法：将L-02细胞随机分为对照组、INH组（10 mmol/L INH）、25 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和25 μmol/L槲皮素）、50 μmol/L槲皮素组（10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）。各组均处理24 h后,应用MTT法检测L-02细胞存活率,分光光度法检测细胞上清液中LDH活性,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡率;制备L-02细胞线粒体,利用DCFH-DA和Rho-123荧光探针检测活性氧（ROS）水平及线粒体膜电位（△Ψm）,应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果：与对照组比较,INH组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,与INH组比较,50 μmol/L槲皮素处理组细胞存活率明显增加（P < 0.01）;INH组细胞LDH活性、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较对照组显著升高（P < 0.01）,25和50 μmol/L槲皮素组细胞LDH活力、细胞凋亡率、线粒体ROS水平较INH组明显降低（P < 0.05或P < 0.01）,且50 μmol/L槲皮素组作用更显著;INH组细胞线粒体△Ψm较对照组显著降低（P < 0.01）,25和50 μmol/L槲皮素组细胞线粒体△Ψm较INH组明显升高（P < 0.05或P < 0.01）,50 μmol/L槲皮素组的作用更加明显;与对照组比较,INH组细胞Caspase-3蛋白表达显著增加（P < 0.01）,与INH组比较,25和50 μmol/L槲皮素组细胞Caspase-3蛋白表达明显减少（P < 0.05或P < 0.01）,且50 μmol/L槲皮素组作用更明显。结论：INH可以诱导L-02细胞发生凋亡,ROS/Caspase-3信号通路参与了其凋亡的过程;槲皮素对INH诱导的细胞凋亡具有保护效应,机制可能与其减少ROS释放,抑制ROS/Caspase-3信号通路有关。     

甘草提取物的有效部位诱导人宫颈癌HeLa细胞株凋亡及对凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响

目的 研究甘草提取物的有效部位(GL)体外诱导HeLa细胞凋亡情况及对Caspase家族蛋白表达的调控,进一步阐明GL的抑癌机制。方法 将25 μg/mL的GL作用于HeLa细胞24 h后,采取MTT比色法,吖啶橙/溴乙锭荧光双染法,透射电子显微镜法,观察GL诱导HeLa细胞凋亡情况,并采用Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示,GL可以有效抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量-时间相关性。AO/EB双染色及透射电镜观察发现GL作用HeLa细胞24 h后,可见大量早期凋亡细胞。Western blot测定结果显示,药物组Pro-caspase-9蛋白表达量与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);Cleaved-caspase-3蛋白表达量高于对照组。结论 GL能够促进Caspase-3、Caspase-9酶原活化,具有体外诱导HeLa细胞凋亡的作用。     

丙泊酚经HIF-1α信号通路对头颈鳞状细胞癌SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的 探讨丙泊酚经HIF-1α信号通路对头颈鳞状细胞癌SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法 体外培养SCC-74细胞,丙泊酚低剂量组、丙泊酚中剂量组和丙泊酚高剂量组分别给予终浓度为2.5、10、20 μg/mL的丙泊酚,对照组给予等量DMEM培养液,继续培养48 h后收获细胞,检测SCC-74细胞增殖、凋亡与侵袭情况,同时检测SCC-74细胞中Akt、p-Akt、HIF-1α、Fas、FasL、Bcl-2、Bax蛋白和mRNA水平。结果 与对照组比较,各丙泊酚剂量组SCC-74细胞增殖率和侵袭数降低,细胞凋亡率增加(P＜0.05);与对照组比较,各丙泊酚剂量组SCC-74细胞中p-Akt蛋白、Bcl-2蛋白和mRNA水平降低,HIF-1α、Fas、FasL和Bax蛋白和mRNA水平增高,呈剂量依赖性(P＜0.05)。各组SCC-74细胞中Akt蛋白和mRNA水平无统计学差异(P＞0.05)。结论 丙泊酚通过激活HIF-1α信号通路,抑制SCC-74细胞增殖和侵袭,促进SCC-74细胞凋亡。     

棕榈酸在体外通过促进凋亡作用抑制宫颈癌Hela细胞增殖的研究

目的 探讨体外棕榈酸(Palmitic acid,PA)抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡作用及其部分机制。方法 体外培养的宫颈癌HeLa细胞分为对照组(不加药)、PA处理组(分别加入PA 25、50、100μg/mL处理),CCK-8法检测各组HeLa细胞增殖情况,Transwell试验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测不同浓度PA处理后细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3的表达,PA处理后的HaLa细胞用膜联蛋白V/碘化丙啶双标,随后用流式细胞仪检测其凋亡情况。结果 与对照组比较,PA处理HeLa细胞后增殖抑制率逐渐增高(P＜0.05);PA处理后,HaLa细胞的迁移与侵袭能力显著下降(P＜0.05);同时,PA处理HeLa细胞后,随着PA浓度增高,Bcl-2基因表达逐渐降低,而Bax和Cleaved-caspase-3基因表达逐渐增强与流式细胞仪检测结果相符合,HeLa细胞的凋亡率随着PA浓度增高逐渐增高(P＜0.05)。结论 PA体外可抑制HeLa细胞增殖,减少其迁移与侵袭水平,并诱导其凋亡,其机制可能与调节HeLa细胞Bcl-2家族有关。     

miRNA-409-3p表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响

目的 探讨微小RNA-409-3p(miRNA-409-3p)表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响。方法 将HeLa细胞分为正常对照组、NC对照组和miRNA-409-3p mimic组,RT-PCR法检测不同宫颈组织及转染miRNA-409-3p mimic后各组细胞中miRNA-409-3p mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测Fip200、LC3、Caspase-3蛋白的表达。结果 宫颈癌组织中miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平显著低于正常宫颈组织和癌旁组织(P＜0.05);通过转染miRNA-409-3p mimic后,miRNA-409-3p mimic组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组显著上调(P＜0.05),NC对照组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组无统计学差异(P＞0.05)。miRNA-409-3p mimic组HeLa细胞增殖率较正常对照组和NC对照组显著降低(P＜0.05)。给予顺铂干预后,miRNA-409-3p mimic组细胞增殖显著被抑制(P＜0.05);同时,miRNA-409-3p mimic组细胞中Fip200蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著低于正常对照组和NC对照组(P＜0.05)。结论 miRNA-409-3p在宫颈癌组织中低表达,可能与宫颈癌的发生发展有关,上调miRNA-409-3p水平可以抑制HeLa细胞增殖,增加HeLa细胞对顺铂的敏感性。     

微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞凋亡及对Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响

目的：研究微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞活力及凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响,为探讨其诱导凋亡的途径提供依据。方法：分别用不同浓度（1、3.75、7.5、15、30、50 μg/mL）微囊藻毒素-LR处理人正常食管上皮HEEC细胞24 h,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,计算半数抑制浓度（IC₅₀）以确定后续实验的MC-LR浓度。进一步用0、6、12、24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞,采用PI-Annexin V双染法检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,3.75~50 μg/mL的微囊藻毒素-LR均可使人正常食管上皮细胞活力降低（P均 < 0.01）,测定得出IC₅₀为24 μg/mL。因此,选择6、12和24 μg/mL的MC-LR用于后续实验。用6~24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞24 h后,细胞凋亡率升高（P < 0.05或P < 0.01）,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达增加（P均 < 0.01）。结论：微囊藻毒素-LR可以诱导人正常食管上皮细胞凋亡,且可能与细胞凋亡相关的信号分子Caspase-3和Caspase-9的激活有关。     

过表达CLPTM1L降低95-D肺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的 研究CLPTM1L基因与肺癌细胞对吉西他滨敏感性的关系,并探讨其潜在的作用机制。方法 构建针对CLPTM1L基因的过表达慢病毒,并感染肺癌95-D细胞,将细胞分为CLPTM1L过表达组和对照组;采用CCK-8法检测吉西他滨处理后过表达组和对照组细胞增殖的变化;采用荧光定量PCR、Western blot和免疫化学发光法检测CLPTM1L基因和蛋白变化;采用生物荧光法检测Caspase-3/7和Caspase-9活性的变化;采用Western blot检测p-4E-BP1蛋白变化。结果 CLPTM1L过表达慢病毒感染95-D细胞后,CLPTM1L过表达组的CLPTM1L基因水平(P=0.036)和蛋白表达(P＜0.01)均高于对照组;与对照组相比,吉西他滨处理后CLPTM1L过表达组细胞增殖显著上升(P＜0.01);Caspase活性检测显示,CLPTM1L过表达组Caspase-3/7和Caspase-9活性较对照组明显下降(P＜0.01);Western blot检测显示,CLPTM1L过表达组4E-BP1的磷酸化水平与对照组比较显著增高(P＜0.01)。结论 CLPTM1L过表达可降低肺癌细胞对吉西他滨的敏感性,其机制可能是增加了4E-BP1的磷酸化水平。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合紫杉醇抑制宫颈癌细胞增殖的体外实验

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合紫杉醇对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制效果及其机制。方法：设置空白对照组、紫杉醇（10 nmol/L）、SAHA（10 μmol/L）、紫杉醇（10 nmol/L）+SAHA（10 μmol/L）联合组，采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测各组HeLa细胞的生长抑制率，计算紫杉醇对HeLa细胞的IC₅₀。RT-PCR法检测各组HeLa细胞中抑癌基因p27 mRNA的相对表达，Western blot检测HeLa细胞乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的表达。结果：紫杉醇、SAHA、紫杉醇+SAHA联合组处理HeLa细胞24 h的相对抑制率分别为25.93%±5.32%、46.38%±3.66%、54.27%±4.02%，联合组抑制率与紫杉醇组相比明显升高，差异具有统计学意义（P < 0.01）；48 h的抑制率分别为29.12%±3.09%、65.26%±3.03%、77.02%±3.86%，联合组抑制率最强，显著高于SAHA组和紫杉醇组（P < 0.01）。经SAHA预处理后紫杉醇对HeLa细胞的IC₅₀较单独紫杉醇组均显著下降（P < 0.05或P < 0.01）。紫杉醇组、SAHA组、紫杉醇+SAHA联合组细胞中p27 mRNA的相对表达量分别为5.845±0.548、0.978±0.117和10.601±0.673，乙酰化组蛋白H4（Ac-H4）的相对表达分别为0.878±0.068、1.148±0.018、1.282±0.033，联合组中表达量均显著高于SAHA组和紫杉醇组（P均 < 0.01）。结论：SAHA联合紫杉醇在体外能显著抑制宫颈癌细胞HeLa的增殖，增强组蛋白乙酰化水平，诱导抑癌基因的表达。     

恩度联合放疗对移植瘤HIF-1α及GLUT-1表达的影响

目的观察抗血管生成药物恩度联合放疗对乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)的影响,并对其联合作用机制进行探讨。方法 建立Lewis肺癌移植瘤模型,将32只成瘤小鼠随机分为4组,分别为空白对照组、Endostar组(ES组)、放射治疗组(RT组)及Endostar+放射治疗组(ES+RT组)。从治疗当天开始,测量肿瘤最长直径(a)及最短直径(b),绘制肿瘤生长曲线,用Western blot方法对各处理组肿瘤组织中HIF-1α及GLUT-1的表达情况进行检测。结果 (1)在对小鼠的肿瘤生长抑制情况方面,ES+RT组与空白对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05),ES+RT组和ES组之间差异有统计学意义(P＜0.05);(2)以空白对照组为参照,ES组、RT组、ES+RT组GLTU-1蛋白的表达呈下降趋势,差异均具有统计学意义(P＜0.05);ES+RT组下降最明显,分别与ES组、RT组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05);(3)以空白对照组为参照,ES组、RT组、ES+RT组的HIF-1α蛋白表达量均下降明显,与空白对照组比较,RT组、ES+RT组差异具有统计学意义(P＜0.05),RT组与ES+RT组之间的差异具有统计学意义(P＜0.05);(4)HIF-1α与GLTU-1表达呈正相关(P＜0.01)。结论 恩度联合放疗能够抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长,通过抑制HIF-1α和GLTU-1蛋白的表达,改善肿瘤组织内乏氧状况和酸性微环境,可能是放疗增敏作用的机制之一。     

瑞戈非尼联合哌立福辛诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨瑞戈非尼联合哌立福辛(AKT抑制剂)对人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。 方法 不同浓度瑞戈非尼(1、5、10、15、20、25 μmol/L)处理肝癌细胞后,通过CCK-8检测其细胞存活率;再设置不同浓度瑞戈非尼(0、5、10、20 μmol/L)处理肝癌细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡;用免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9的表达情况;设置哌立福辛组(10 μmol/L)、瑞戈非尼组(20 μmol/L)及双药联合组(哌立福辛10 μmol/L联合瑞戈非尼20 μmol/L),检测细胞凋亡及相关蛋白表达变化。 结果 从5 μmol/L浓度起,瑞戈非尼可剂量依赖性的抑制肝癌细胞增殖(P＜0.05);Bcl-2及p-AKT表达下调,Bax、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9表达上调(P＜0.05);瑞戈非尼和哌立福辛双药联合应用后,细胞凋亡率、Bax表达量明显增加(P＜0.05),Bcl-2、p-AKT表达量下降程度均较单独应用哌立福辛及瑞戈非尼明显(P＜0.05)。 结论 瑞戈非尼通过增加p21、p27、Bax、caspase-8、caspase-9的表达,减少Bcl-2、p-AKT的表达,来诱导肝癌细胞凋亡,并且瑞戈非尼与哌立福辛双药联合应用后,明显增加肝癌细胞凋亡率,为药物治疗肝癌提供新的理论基础和思路。     

紫云英苷通过抑制HIF-1α诱导的糖酵解途径发挥抗卵巢肿细胞作用的研究

目的 探讨紫云英苷在2 D及3 D细胞培养条件下对人卵巢癌OVCAR-8细胞的增殖作用及其可能机制。方法 采用CCK-8试剂盒检测紫云英苷在2 D培养水平对OVCAR-8细胞增殖活力的作用;采用3 D细胞增殖活性检测试剂盒检测紫云英苷在3 D培养水平对OVCAR-8细胞增殖活力的作用;采用划痕实验检测紫云英苷对OVCAR-8细胞迁移能力的作用;采用凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平;采用Western blot法在2 D及3 D培养条件下检测紫云英苷对OVCAR-8细胞细胞凋亡相关蛋白Bcl2(B-cell lymphoma 2)、Bax(Bcl-2-associated X protein)和cleaved-caspase-3以及糖酵解相关蛋白Glut(Glucose transporter)1、Glut3、HK2(Hexokinase 2)、PDK(Pyruvate dehydrogenase lipoamide kinase)1、PDK3以及HIF(Hypoxia-inducible factor)-1α的蛋白表达水平的影响;采用ELISA试剂盒检测HK2活性。结果 4~100 μmol/L紫云英苷在2 D培养条件下对OVCAR-8细胞增殖均有抑制作用, 且呈剂量-时间依赖效应关系(P＜0.05);紫云英苷可在3 D培养条件下明显抑制OVCAR-8细胞增殖(P＜0.05);同时, 紫云英苷可明显抑制OVCAR-8细胞迁移能力。此外, 紫云英苷处理后细胞凋亡水平明显增高, 且紫云英苷处理在2 D及3 D培养条件下均可抑制Bcl2、Glut1、Glut3、HK2、PDK1和PDK3蛋白的表达, 增加Bax及cleaved-caspase-3蛋白水平并抑制3 D培养诱导的HIF-1α的蛋白表达, 此外, 紫云英苷在2 D 培养条件下可抑制HK2活性, 均呈一定的剂量依赖效应关系(P＜0.05)。结论 紫云英苷在2 D及3 D培养条件下对卵巢癌OVCAR-8细胞增殖均具有抑制作用。且可能通过抑制HIF-1α诱导的糖酵解通路以及激活线粒体凋亡通路。     

多烯磷脂酰胆碱在裸鼠模型中逆转胃癌细胞奥沙利铂耐药的作用及机制研究

目的 探讨多烯磷脂酰胆碱(PPC)在裸鼠模型中对人胃腺癌耐奥沙利铂细胞株(SGC-7901/L-OHP)的逆转耐药的作用及其机制。方法 用继发性耐药细胞株SGC-7901/L-OHP建立裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分为4组,空白对照组、多烯磷脂酰胆碱(PPC)组、奥沙利铂(L-OHP)组及奥沙利铂联合多烯磷脂酰胆碱(L-OHP+PPC)组,连续给药14天。21天后处死裸鼠,剥离肿瘤组织,记录肿瘤体积和抑瘤率,对切除的肿瘤组织分别提取肿瘤组织的RNA和蛋白,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测TLR4、Nanog及ABCF2表达水平。结果 加药处理后,与空白对照组相比,L-OHP组及L-OHP+PPC组移植瘤细胞的增殖均受到抑制(P＜0.001),两药联合有交互作用(P=0.008);L-OHP+PPC组的体积抑瘤率高于空白对照组(P＜0.001)及L-OHP组(P＜0.001)。L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的mRNA表达较空白对照组低,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001);L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的mRNA表达较L-OHP组低,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001)。两药联合对TLR4/Nanog/ABCF2的mRNA表达均有交互作用,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001)。L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的蛋白表达较空白对照组低,差异有统计学意义(TLR4:P=0.006;Nanog:P=0.017;ABCF2:P=0.014);L-OHP+PPC组TLR4/Nanog/ABCF2的蛋白表达较L-OHP组低,差异有统计学意义(TLR4:P＜0.001;Nanog:P＜0.001;ABCF2:P＜0.001)。两药联合对TLR4/Nanog/ABCF2的蛋白表达均有交互作用,差异有统计学意义(TLR4:P=0.014;Nanog:P=0.01;ABCF2:P=0.015)。结论 多烯磷脂酰胆碱在裸鼠模型中对人胃癌耐奥沙利铂细胞株(SGC-7901/L-OHP)有逆转耐药的作用,可能通过影响TLR4、Nanog、ABCF2表达逆转人胃癌耐药细胞的耐药作用。     

长链非编码RNA HCP5通过调控凋亡通路促进三阴性乳腺癌的研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)HCP5在三阴性乳腺癌中的作用及其机制。方法 通过qPCR分析HCP5在乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞系中的mRNA含量,RNA Scope方法分析HCP5在乳腺组织和癌组织中的表达;通过CCK-8实验和细胞存活/死亡实验分析敲低HCP5对三阴性乳腺癌细胞增殖能力的影响;裸鼠体内实验分析敲低HCP5对三阴性乳腺癌细胞成瘤能力的影响;抗体芯片技术分析敲低HCP5影响凋亡通路中BIRC3和Caspase-3蛋白的表达。结果 与正常乳腺细胞和其他类型乳腺癌细胞相比,HCP5在三阴性乳腺癌细胞系中表达上调(P＜0.05),与正常乳腺组织和其他亚型乳腺癌组织相比,HCP5在三阴性乳腺癌组织中表达上调(P＜0.05);与对照组相比,HCP5敲低组三阴性乳腺癌细胞增殖减少、凋亡增加,且原位移植瘤的生长受到抑制(P＜0.01);敲低HCP5引起凋亡通路中凋亡抑制因子BIRC3表达量降低、Caspase-3表达增加,差异具有统计学意义(P＜0.05),对MAPK信号通路蛋白的影响组间差异无统计学意义。结论 lncRNA HCP5通过调控细胞凋亡途径促进三阴性乳腺癌的恶性进展。     

ABL2在肺癌中的作用及机制研究

目的 探究ABL2在肺癌中的作用及其机制。方法 采用Realtime PCR方法检测ABL2在肺癌组织和癌旁组织中的表达情况。然后建立稳定低表达ABL2的肺腺癌A549细胞株;通过MTT、细胞迁移和克隆形成实验检测细胞增殖和迁移能力的变化情况;Western blot检测EMT、凋亡和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果 肺癌组织中ABL2的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.001)。在A549细胞系中沉默ABL2后,与对照组相比,48 h后细胞的迁移能力减弱(P＜0.001),从第3天开始细胞的生长速度开始明显减缓(P＜0.05),15天后形成的平均克隆数也减少(P＜0.01)。Western blot结果显示,沉默ABL2后上皮细胞标志物E-cadherin表达升高(P＜0.001),间质细胞标志物N-cadherin(P＜0.001)、Vimentin(P＜0.01)及Snail(P＜0.001)表达降低。凋亡相关蛋白Bcl-XL表达下降(P＜0.01),BAX表达上调(P＜0.001)。PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K P110(P＜0.05)、AKT(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)蛋白的表达都明显降低。结论 沉默ABL2基因能够通过PI3K/AKT信号通路促进细胞凋亡,抑制肺癌细胞的增殖和迁移。     

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的：探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3（RBMS3-AS3）对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法：培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞，实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平，Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RBMS3）蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组（细胞正常培养）、si-RBMS3-AS3组（转染RBMS3-AS3小干扰RNA）、阴性序列组（转染乱序无意义阴性序列）、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组（共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA）和si-RBMS3-AS3+阴性序列组（共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列），四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell检测细胞侵袭能力，Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果：宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05），而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）。与对照组或阴性序列组相比，si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低（P < 0.05），细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05）。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较，si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高（P < 0.05），细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭，并促进细胞凋亡，这可能与上调RBMS3表达有关。