淫羊藿甙诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的:采用淫羊藿苷icarrin(ICA,从朝鲜淫羊藿中提取的中药单体),作用于人急性早幼粒白血病细胞HL-60,较系统地对ICA诱导肿瘤细胞凋亡进行了观察,为ICA的开发应用提供实验依据.方法:采用电镜、流式细胞术、DNA片段化检测、RT-PCR等技术进行研究.结果:ICA在体外诱导HL-60细胞凋亡,呈典型的细胞凋亡形态学和生化特征,并具有时间剂量依赖性.ICA诱导肿瘤细胞凋亡的同时,下调相关基因bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平.结论:ICA体外诱导HL-60细胞凋亡,其机理可能与下调bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平密切相关.     

淫羊藿甙对人急性早幼粒白血病细胞分化的影响

目的　为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂 ,探讨了淫羊藿甙 ( icariin,ICA)的诱导分化作用及其机制。方法　选用从朝鲜淫羊藿中提取的单体成分 ICA,采用四唑氮蓝 ( NBT)还原试验 ,12 5I-标记的环磷酸腺苷 ( c AMP)和环磷酸鸟苷 ( c GMP)双抗体分离技术以及扫描电镜技术 ,观察了 ICA对人急性早幼粒白血病细胞 ( HL- 60 )分化的影响。结果　ICA( 0 .1g/ L)作用后的 HL- 60细胞 ,NBT还原能力明显增强 ,细胞内 c AMP/ c GMP比值升高 ,细胞膜表面发生明显变化 ,出现较多的皱褶和球状突起。结论　ICA对 HL- 60细胞有诱导分化作用 ,其机制可能与升高细胞内 c AMP/ c GMP比值有关。     

铜皮石斛水提液诱导HL-60细胞凋亡的研究(英)

目的:探讨铜皮石斛水提液的抗癌活性及其诱导急性白血病细胞凋亡的发生机制。方法:运用MTT方法检测铜皮石斛对体外肿瘤细胞的细胞毒作用;应用光镜、电镜,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪和蛋白印迹免疫法观察它诱导的HL-60细胞的凋亡模式。结果:HL-60细胞在铜皮石斛水提液作用下发生细胞凋亡,凋亡细胞表现为细胞固缩、核染色质凝聚,并出现凋亡小体。铜皮石斛水提液(内含干药6.25mg/ml)作用24～72h,细胞DNA裂解片段呈现典型的梯度条带。凋亡抑制基因bcl-2的表达在药物(6.25mg/ml)作用6～12h时增高,24h后开始下降。结论:铜皮石斛的抗癌活性与诱导细胞凋亡有关。     

淫羊藿甙对HL-60细胞诱导分化作用的研究

淫羊藿又名仙灵脾，为历代常用的补益中药。为小蘖科多年生草本植物。采用的淫羊藿甙是从朝鲜淫羊藿中提取的单体成份，为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂，研究了淫羊藿甙对人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)的诱导分化作用。结果如下：     

淫羊藿苷对急性早幼粒白血病细胞体内外效应的研究

目的 :探讨淫羊藿苷 (ICA)对急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用。方法 :采用ICA与全反式维甲酸 (ATRA)对比试验 ,观察ICA在体外及小鼠体内对白血病细胞增殖分化的影响。结果 :ICA在体内外对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用 ,且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论 :ICA具有明显的抗白血病细胞作用     

淫羊藿苷对急性早幼粒白血病细胞体内外效应的研究

目的：探讨淫羊藿苷（ICA）对急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用。方法：采用ICA与全反式维甲酸（ATRA）对比试验,观察ICA在体外及小鼠体内对白血病细胞增殖分化的影响。结果：ICA在体内外对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用。且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论：ICA具有明显的抗白血病细胞作用。     

三羟基苯甲酸诱导HL-60细胞凋亡的实验性研究

目的 观察3,4,5-三羟基苯甲酸对HL-60细胞的增殖抑制及诱导其凋亡的作用。方法 MTT法检测3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/mL TBA对HL-60细胞生长的抑制作用,吖啶橙荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡;结果 TBA显著抑制HL-60细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。18.7μg/mL TBA作用HL-60细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂、染色质凝集等凋亡形态改变,HL-60细胞凋亡率为(28.24±5.24)%、与对照组(2.53±0.56)%比较差异有显著性意义(P＜0.05)。结论 TBA可能通过诱导HL-60细胞凋亡抑制其生长。     

HoxB1质粒转染对视黄酸诱导的 HL-60细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞内HoxB1表达、视黄酸(RA)代谢与细胞凋亡的相互关系.方法:采用脂质体介导的质粒转染和反转录-PCR等实验技术方法做有关分析检测.结果:2.5×10-7mol/L全反式RA(ATRA)处理HL-60细胞3天,HPLC分析显示,HoxB1的高表达可明显抑制HL-60细胞ATAR代谢;使ATRA增殖抑制作用减弱;野生型HL-60细胞有较强bcl-2表达,ATRA处理抑制未转染细胞bcl-2表达,但单纯HoxB1转染、HoxB1转染+IFNα均能增强bcl-2表达.结论:HoxB1转染HL-60细胞ATRA代谢明显受抑,ATRA增殖抑制作用及凋亡诱导作用减弱.     

淫羊藿甙对急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨淫羊藿甙（ICA）对急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的影响。方法：采用ICA与全反式维甲酸（AT-RA）对比试验。观察ICA对白血病细胞端粒酶活性及增殖分化的影响。结果：ICA可明显抑制端粒酶活性，对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用。且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论：ICA具有抑制急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的作用。     

HL-60细胞淫羊藿甙诱导后信号传导因子表达变化与意义

目的检测急性早幼粒白血病细胞HL-60经过淫羊藿甙(ICA)诱导后信号传导与转录激活因子(STAT1、STAT3)和有丝分裂原激活蛋白激酶(p38MAPK、p42MAPK)表达变化在分化中的作用。方法建立ICA诱导分化模型,用瑞氏染色观察细胞形态,MTT实验测定细胞增殖的变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,RT-PCR方法检测STAT1、STAT3、p38MAPK、p42MAPK 的mRNA的表达。结果 HL-60细胞经ICA作用24 h后,随着细胞增殖降低和分化的发生, p42MAPK的mRNA表达增加,STAT3的mRNA表达降低,STAT1和p38MAPK的mRNA未见明显的表达。结论 p42MAPK和STAT3与ICA诱导HL-60细胞分化有关,而p38MAPK和STAT1则与ICA诱导HL-60细胞分化无关。     

全反式维甲酸对HL-60细胞分化和凋亡的影响

背景与目的：用全反式维甲酸(all trans retinoid acid,ATRA)治疗早幼粒细胞性白血病(premyeloid leukemia,M3)在肿瘤治疗史上是一个重要里程碑。已有研究表明,ATRA治疗白血病的机理是诱导白血病细胞向成熟细胞方向分化,然而人们对分化的肿瘤细胞最终去向还不完全清楚。本实验进一步探讨ATRA诱导HL-60细胞分化和凋亡的关系。方法：以分化诱导剂ATRA(终浓度为10μmol／L)作用不同时间的HL-60细胞为检测对象,应用流式细胞仪分析细胞表面的分化标志物及细胞周期;经碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色后,激光共聚焦显微镜下对已分化细胞进行形态学确认;应用流式细胞仪检测药物诱导后不同时间点的细胞凋亡。结果：(1)随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞体积逐渐增大,在72h后,被诱导细胞开始表达分化标志物CD11b并出现细胞核型的变化;(2)在药物诱导96h后,细胞开始出现了凋亡峰,而在药物诱导72h后脱药培养8h,则可以出现高于96h的凋亡峰。结论：ATRA并不能诱导HL-60细胞完成终端分化,但是该药可以诱导白血病细胞向成熟方向分化,而且已分化的肿瘤细胞易于发生凋亡。     

淫羊藿苷抗肿瘤作用的研究进展

淫羊藿苷是淫羊藿的主要单体成分,具有调节内分泌、改善心血管功能、增加免疫活性及抗肿瘤等多种作用.以往有大量相关文献研究其在上述方面的作用,并证实了强大的药理作用.淫羊藿苷抗肿瘤作用主要集中于抑制肿瘤细胞增殖、诱导分化、促进凋亡及增加机体免疫力两个方面.     

曲古霉素A和淫羊藿甙诱导HL-60细胞分化过程中nm23和c-myc及G-CSF表达变化的研究

目的:研究曲古抑菌素A(TSA)、淫羊藿甙(ICA)诱导急性非淋巴细胞白血病HL-60细胞株分化过程中nm23基因的表达变化及其作用机制.方法:通过MTT试验检测HL-60增殖分化变化,观察细胞形态,分析表面标志和硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应,观察HL-60细胞分化水平变化情况;通过流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR检测nm23-H1、nm23-H2、G-CSF、c-myc基因表达的变化.结果:HL-60细胞经TSA、ICA作用后增殖受抑制,24、48和72h抑制率分别为(12.73±1.17)%、(38.15±3.32)%和(58.45±3.06)%,向成熟粒细胞系分化,细胞被阻滞在G1期,nm23、c-myc基因的表达下调,G-CSF基因表达上调.结论:HL-60细胞分化过程中c-myc基因的表达下调,G-CSF基因表达上调与下调nm23基因的表达有关.     

榄香烯诱导HL-60细胞程序死亡

药物学研究表明诱导肿瘤细胞程序死亡／凋亡(apoptosis)可能是许多化疗药物杀伤肿瘤细胞的机制之一，细胞凋亡与细胞坏死有本质区别，凋亡的特征有质膜保持完整性，核染色质固缩，内源性核酸内切酶激活将染色质DNA降解成寡聚核小体，电泳带谱表现为特征性梯状带。榄香烯(elemene)系我国自行研制的抗癌新药。     

HL-60细胞淫羊藿甙诱导后信号传导因子表达变化与意义

目的检测急性早幼粒白血病细胞HL-60经过淫羊藿甙（ICA）诱导后信号传导与转录激活因子（STAT1、STAT3）和有丝分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK、p42MAPK）表达变化在分化中的作用。方法建立ICA诱导分化模型，用瑞氏染色观察细胞形态，MTF实验测定细胞增殖的变化，NBT还原实验测定细胞分化状态，RT-PCR方法检测STATI、STAT3、p38MAPK、p42MAPK的mRNA的表达。结果HL-60细胞经ICA作用24h后，随着细胞增殖降低和分化的发生，p42MAPK的mRNA表达增加，STAT3的mRNA表达降低，STAT1和p38MAPK的mRNA未见明显的表达。结论p42MAPK和STAT3与ICA诱导HL-60细胞分化有关，而p38MAPK和STAT1则与ICA诱导HL-60细胞分化无关。     

人高转移肺癌细胞表型的去恶化研究

我们的前期研究发现,中药单体淫羊藿甙(ICA)具有一定的抗肿瘤作用,是一种新型的生物反应调节剂和诱导分化剂.本实验中,我们选用淫羊藿甙作用于人高转移肺癌细胞PG,采用多件检测手段对肿瘤细胞恶性表型逆转的多个方面进行了较深入的研究,进一步揭示淫羊藿甙的抗肿瘤作用及其调控机制.分别采用MTT法、放免法、流式细胞术、粘附实验及运动、侵袭实验检测了ICA处理后PG细胞增殖能力,细胞内cAMP,cGMP水平,细胞周期,细胞的粘附性及运动、侵袭能力等方面的变化.结果发现,1.与对照组相比,200μg/mlICA对PG细胞有较弱的增殖抑制作用;2.与对照组相比,200μg/mlICA作用于PG细胞24h后,细胞内cAMP水平升高(P<0.05),cGMP水平降低(P<0.01),cAMP/cGMP比值明显升高(P<0.01);3.流式细胞仪检测扫描图显示,与对照组相比,ICA处理24h后,G0/G1期细胞增多,而S期     

全反式维甲酸诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察全反式维甲酸(A11一trans retinoic acid，ATRA)诱导人卵巢癌细胞CAOV3产生凋亡。方法：应用扫描电镜、透射电镜、DNA断裂分析及流式细胞术观察ATRA诱导人卵巢癌细胞CAOV3凋亡。结果：ATRA作用后电镜下细胞逐渐变圆，细胞表面微绒毛消失，核染色质更加致密，浓缩分块，胞质中有空泡形成，细胞表面出泡，脱落形成膜包裹的凋亡小体。流式细胞术不同浓度ATRA对CAOV3细胞凋亡作用的结果显示在DNA直方图上均出现低于G1期二倍体DNA含量的亚二倍体峰，随药物浓度增加，亚二倍体细胞从10^-8mol／L ATRA时的18．7％增加到10^-6mol／L的37．4％；10^-6mol／LATRA作用24h即诱导CAOV3细胞产生典型的梯形DNA条带(DNAlallder)，大小约180bp的整数倍递增，随ATRA作用时间延长而逐渐加强；结论：ATRA可以诱导卵巢癌细胞产生细胞凋亡，呈时间和浓度依赖性。     

全反式维甲酸对人肺癌细胞诱导凋亡的作用

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对肺癌细胞生长的影响及其凋亡作用.方法:应用MTT法检测ATRA对体外培养人肺癌细胞株细胞A549的抑制率,光镜及透射电镜、流式细胞仪等检测ATRA对A549细胞诱导凋亡的作用.结果: 不同浓度的ATRA对A549细胞的增殖均有抑制作用,且量效关系明显.但大剂量主要导致细胞死亡,以10-5mol*L-1的ATRA作用效果最好,经10-5mol*L-1 ATRA作用7d后,A549细胞增殖抑制率达到60%.光镜及透射电镜下可见细胞恶性表型向正常表型发生逆转,并可观察到凋亡小体.流式细胞仪分析结果显示,ATRA处理组细胞周期延迟,G1期比例明显升高,S、G2期比例下降.结论:ATRA可抑制肺癌细胞的增殖,并诱导癌细胞凋亡.     

苯丙氨酸解氨酶诱导人白血病HL-60细胞凋亡的初步研究

目的：研究笨丙氨酸解氨酶(L-Dhenvlalanine ammonia—lvase，PAL)对白血病HL-60细胞生长的抑制作用，探讨其作用机制。方法：应用MTT比色法观察PAI．对HL-60细胞的生长抑制作用．应用倒置显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果：PAL与HL-60细胞共育时，能明显抑制细胞生长，半数抑制浓度(IC50)为3．02U／mL；细胞呈典型的凋亡形态学改变，细胞皱缩，染色质凝集，沿核膜内侧分布，可见新月形；细胞DNA裂解成180～200bp及其倍数的片段．电泳得到特有的梯形条带，凋亡率与PAL剂量和作用时间呈依赖关系。结论：PAL能抑制HL-60细胞的生长，诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

西米特酸诱导人急性白血病HL-60细胞凋亡作用及其机制初探

背景与目的:西米特酸是从我国南海分布广泛的黄色海绵Rhabdastrella sp.中发现的一种异臭椿三萜类化合物.前期研究表明,西米特酸可抑制多种肿瘤细胞的增殖且较安全.本研究探讨西米特酸对人急性白血病细胞HL-60凋亡的影响,及其可能的促凋亡机制.方法:MTT法检测不同浓度西米特酸作用后HL-60细胞的增殖情况,琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带,荧光显微镜观察细胞形态学变化.Western blot法检测西米特酸作用后,细胞中Caspase-3、Poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)、Bcl-2、Bax、P73蛋白变化;基因芯片检测凋亡相关基因的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对一些凋亡相关基因进行验证.结果:不同浓度西米特酸作用72 h可抑制HL-60细胞的增殖,IC50为(0.64±0.21) μg/ml.1 μg/ml西米特酸处理36 h后,HL-60细胞出现核染色质浓集和DNA梯形条带,并且Caspase-3和PARP出现明显的断裂片段.凋亡相关基因芯片检测发现,P73、JunD、TNFAIP3、GADD45A、PPP1R15A等基因表达增强,MAP2K5、IGF2R等基因表达降低.RT-PCR法检测发现P73、JunD表达上调,MAP2K5、IGF2R表达下调.Western blot法进一步检测发现P73蛋白表达增高,而Bcl-2和Bax蛋白无明显改变.结论:西米特酸可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能与P73、JunD等基因表达上调和MAP2K5、IGF2R等基因表达下调有关.